平菇双相培养基用于结核杆菌培养的研究

目的　以平菇浸出液为基础成分,研制培养结核分支杆菌的一种新型双相培养基。方法 经用H₃₇R_v基础试验及对351份临床标本用酸性罗氏培养基对照。结果 两种培养基总阳性数为172份(49%),其中平菇双相培养基166份(+),阳性检出率为47.3%。酸性罗氏培养基144份(+),阳性检出率为41.03%。分别占总阳性数的96.51%和83.72%,并且大多数结核杆菌在平菇双相培养基上的初生长时间明显快于酸性罗氏培养基时间。结论 结果表明平菇双相培养基成分来源丰富,价格低廉,制作方便,操作简单,适合于我国广大基层医院和结核院所使用。     

结核分枝杆菌快速培养方法的建立及临床应用初步观察

目的 观察结核分枝杆菌在自制培养基上的生长情况，建立快速培养方法。方法将改良罗氏培养基的成分进行改进，自制5种培养基，每种3支，每支接种菌量10-3mg，观察结核分枝杆菌标准株生长情况。并以第5号培养基3种成分不同浓度做正交叉实验，得出最佳浓度。收集临床标本，在自制培养基上培养观察。结果 结核分枝杆菌标准株在5种自制培养基上，菌落开始生长天数及典型菌落出现天数均比改良罗氏培养基短，两者差异均具有显著性（P〈O．01）。第5号培养基以25％牛肉浸液，20％当归浸液，20％党参浸液的浓度最佳，结核分枝杆菌标准株接种后第3～5d开始生长，第7～9d出现典型的“菜花状”菌落。临床标本接种在改良罗氏及自制培养基上，阳性分离率差异无显著性（f—O．09，P〉O．05），两种培养基上典型菌落形成的平均天数差异有显著性（f一6．828，P〈O．001）。结论 结核分枝杆菌标准株在自制第5号培养基上生长快，培养时间短，为该菌培养提供了一种新的快速培养基，在临床上有一定的实用价值，值得进一步研究、推广。     

分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的应用研究

目的 评价分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的价值,探讨其在我国基层实验室应用的可行性。方法采取多中心试验方法,在我国3个省的3个地市级结核病诊疗机构连续纳入2014年10月至2015年10月期间的初诊肺结核可疑症状者2320例,其中15例因分枝杆菌改良罗氏培养基(简称“罗氏培养基”)和分枝杆菌双相罗氏培养基(简称“双相培养基”)中的1种或2种培养污染或结果缺失,对两种培养基培养结果进行比较时不计入分析。每例患者留取3份痰标本(即时痰、夜间痰、晨痰)进行萋-尼染色法涂片镜检(简称“涂片”),并选取2份性状好的痰标本同时进行罗氏培养基培养、双相培养基培养。使用SPSS 24.0软件,采用配对χ²检验比较两种培养基的阳性检出率,以P<0.05为差异有统计学意义;分别以罗氏培养基培养结果、临床诊断为标准对双相培养基的检测效能进行评价;采用Wilcoxon秩和检验对罗氏培养基与双相培养基检出时间的差异进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果罗氏培养基和双相培养基两种培养方法阳性检出率分别为19.65%(453/2305)和22.00%(507/2305),差异有统计学意义(χ²=22.091,P=0.000);以罗氏培养基培养结果为标准,双相培养基的敏感度为91.39%(414/453),特异度为94.98%(1759/1852),一致率为94.27%(2173/2305);以临床诊断为标准,罗氏培养基和双相培养基的ROC曲线下面积分别为0.694(95%CI:0.672~0.715)、 0.707(95%CI:0.685~0.728);罗氏培养基报阳时间中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为28(21,34)d,双相培养基报阳时间M(Q₁,Q₃)为18(14,24)d,差异有统计学意义(Z=15.114,P=0.000)。结论双相培养基较罗氏培养基具有更高的阳性检出率,诊断价值较高,报阳时间明显缩短,是一种可以作为结核病临床诊断的参考方法,在我国基层实验室有一定推广应用价值。     

骨关节结核各类标本进行结核分枝杆菌培养与PCR检测的阳性率结果分析

目的 比较骨关节结核病灶中脓液、干酪、肉芽及死骨组织的结核分枝杆菌培养阳性率,及结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960（简称“MGIT 960”）培养、改良罗氏培养基培养、PCR检测的联合阳性率.方法 2011年6月至2012年5月首都医科大学附属北京胸科医院收治的经病理明确诊断为骨关节结核的患者50例,通过手术获取病灶中的脓液（50份）、干酪（42份）、肉芽（48份）及死骨组织标本（43份）,分别进行结核分枝杆菌MGIT 960培养及改良罗氏培养基培养,比较4种组织标本的培养阳性率,计算2种培养方法的联合阳性率;对脓液标本单独通过PCR方法进行了阳性率检测;计算脓液标本3种方法的联合阳性率.结果 4种标本MGIT 960培养的阳性率依次为：死骨组织（41.9％,18/43）＞脓液（40.0％,20/50）＞肉芽（33.3％,16/48）=干酪（33.3 ％,14/42）;4种标本改良罗氏培养阳性率依次为：肉芽（20.8％,10/48）＞脓液（20.0％,10/50）＞死骨组织（16.3 ％,7/43）＞干酪（14.3％,6/42）;脓液的PCR检测阳性率为48.0％（24/50）.MGIT 960和改良罗氏培养2种结核分枝杆菌培养方法的联合阳性率为50.0％（25/50）,而PCR检测、MGIT960和改良罗氏培养3种方法的联合阳性率为68.0（34/50）.结论 骨关节结核患者,应尽可能选择多种标本以提高培养阳性率.MGIT 960培养可以作为首选的细菌学诊断方法,但如果再联合使用改良罗氏培养和PCR扩增技术,能够进一步提高检出阳性率.     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing,SAT）在结核病患者的痰液、体液及病灶组织等标本中检测结核分枝杆菌的价值.方法 收集在广州市胸科医院就诊的疑似结核病患者的痰液734份、体液标本94份（包括68份胸腔积液、21份脑脊液、5份关节积液,以下统称“体液”）及病灶组织标本76份,共计904份标本.同时采用SAT法、改良罗氏培养法进行检测,培养阳性者进行基因芯片菌种鉴定.SAT法与改良罗氏培养法结果不相符的标本,用结核分枝杆菌聚合酶链（polymerase chain reaction technology for Mycobacterium tuberculosis,PCR-TB）荧光诊断试剂盒进行检测.采用x2检验比较SAT法与改良罗氏培养法对结核病患者的阳性检出率.结果 以改良罗氏培养结果为金标准,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为90.20％（230/255）、92.48％（443/479）、91.69％（673/734）;94.74％（18/19）、81.33％（61/75）、84.04％（79/94）;100.00％（14/14）、77.42％（48/62）、81.58％（62/76）.以扩大金标准（培养＋PCR法）比对,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为96.30％（260/270）、99.35％（461/464）、98.23％（721/734）;96.97％（32/33）、100.00％（61/61）、98.94％（93/94）;100.00％（27/27）、97.96％（48/49）、98.68％（75/76）.改良罗氏培养法和SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的阳性检出率分别为34.74％（255/734）和36.24％（266/734）、20.21％（19/94）和34.04％（32/94）、18.42％（14/76）和36.84％（28/76）;痰标本两者的阳性率比较,差异没有统计学意义（x2=0.36,P＞0.05）.体液与病灶组织标本中,SAT法较改良罗氏培养法的阳性率高出13.83％和18.42％,差异有统计学意义（x2值分别为4.55、6.44,P值均＜0.05）.结论 SAT法检测痰液、体液及病灶组织标本中的结核分枝杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,可提高结核分枝杆菌的检出率.     

BacT／Alert 3D系统与罗氏培养基分离分枝杆菌的比较

目的评价BacT／Alert 3D系统从临床标本中分离分枝杆菌的价值。方法收集从2004年12月至2005年4月的临床标本共416份，每份标本接种BacT／Alert 3D系统的同时接种两支改良罗氏培养基和涂片作荧光染色。结果416份临床标本中，共分离出144株分枝杆菌，分离率为34．6％。BacT／Alert 3D系统分离130株，分离率为31．3％，罗氏培养基分离出126株，分离率为30．3％。BacT／Alert 3D系统平均阳性报告时间为是19．9d，罗氏培养基平均阳性报告时间为26．4d。BacT／Alert 3D系统的污染率为3．6％，罗氏培养培养基的污染率为5．8％。结论BacT／Alert 3D系统和罗氏培养基联合检测有助于提高检出率和降低污染率。     

上海市某结核病定点医院结核病房空气样本中分枝杆菌的检测

目的 了解上海市某结核病定点医院结核病房空气中的分枝杆菌污染情况及潜在传染性。 方法 采用液体撞击式微生物气溶胶采样器（FA-1型撞击式空气微生物采样器）采集该医院22间结核病房中空气样本134份,均在痰涂片抗酸杆菌阳性（＋~＋＋＋＋）患者床边采集。每间病房均有4张床位,每间病房的空间布局相同,但患者组成情况不完全相同。经氢氧化钠-N-乙酰-L-半胱氨酸(NALC-NaOH)前处理,分别采用罗氏培养、BacT/ALERT 3D全自动快速培养进行分枝杆菌分离培养,并对培养阳性样本采用DNA序列分析的方法进行菌型鉴定。两种分离培养方法对医院空气样本中分枝杆菌分离率的比较采用配对卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 134份结核病房涂阳患者床边采集到的空气样本中有3份分枝杆菌分离培养阳性,经DNA序列分析证实分别为结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌。BacT/ALERT 3D培养阳性3份,经DNA序列分析证实分别为结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌,污染2份,阳性检出率为2.3%（3/132）。罗氏培养阳性2份,经DNA序列分析证实分别为胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌,污染1份,阳性检出率为1.5%(2/133)。经配对卡方检验,两种分离培养方法对医院空气样本中分枝杆菌分离率差异无统计学意义（χ²=0.00,P>0.05）。 结论 该医院结核病房痰涂片抗酸杆菌阳性患者床边所采集的空气样本中可分离到分枝杆菌,虽然目前尚无法判断这些菌株是否由于就诊患者传播所致,但是定期监测医院内空气质量是预防与控制医院内感染的一项重要措施。     

快速培养法对结核病诊断的评价:拉丁美洲的一个多中心研究

地点：拉丁美洲的结核病（TB）诊断实验室。 目的：薄层琼脂（thin-layer agar,TLA）和罗氏培养（Lowenstein-Jensen,LJ）对结核病诊断的对比评价。设计：6个实验室Ⅱ期前瞻性研究．临床诊断的TB病人样本包括痰标本和肺外结核的标本．呼吸道标本用NaOH／NALC去污；根据推荐的操作程序对所有标本进行离心，萋尼氏法进行抗酸菌（AFB）染色，用LJ和TLA法培养检查。计算两种培养基的敏感度和似然比、生长检测时间和污染率． 结果：总共研究了1118份临床标本．所有AFB阳性标本培养后均检出结核分枝杆菌，AFB阴性标本中，LJ检出率为3．2％，TLA为4．4％。TLA和LJ的敏感性分别为92．6％（95％CI：87．9-95．9）和84．7％（95％CI：78．8-89．0）。阳性和阴性LR相似．TLA和LJ的污染率分别为5．1％和3．0％．TLA和LJ对培养阳性的检出平均时间分别为11．5天（95％CI：9．3-15．0）和30．5天（95％CI：26．9-39．0）（P〈0．0001）。 结论：参加研究实验室的不同特点、疾病流行情况和标本处理的不同并不影响TLA和LJ的总体效果，建议不同实验室使用这种方法，因它具有可靠性和可行性。     

体液标本经消化液处理在结核病发现中应用评价

目的了解消化液处理标本抗酸染色在提高结核分枝杆菌检出率方面的价值。方法以BACTECMGIT960检出阳性样本为参照,消化液处理标本抗酸染色比较直接涂片抗酸染色和L—J培养这两种方法,对消化液处理标本抗酸染色的阳性检出率做出评价。结果MGIT960检出的阳性样本共635例,经消化液处理直接涂片的阳性检出率为48．03％（305／635）,与直接涂片抗酸染色阳性检出率（62．20％（395／635））比较,两者无统计学差异;较L—J培养管87．55％（556／635）的阳性检出率,两者有显著的统计学差异。结论消化液处珲后的抗酸涂片并不比多次直接涂片抗酸染色对结核分枝杆菌的阳性检出率高。     

BACTEC MGIT-960临床应用与结果分析

目的探讨BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术在结核病中的应用价值。方法用BACTEC MGIT-960对不同种类的标本进行分离培养及药敏试验．并与改良罗氏培养基法对比。结果BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术初代分离阳性时问平均为8．9天．药敏平均时间为7．1天。2152份各类标本总阳性率为29．23％．其中痰标本阳性率为31．22％。617株结核分枝杆菌的总耐药率为52．19％，其中初始耐药率为41．77％，获得性耐药率为74．24％，耐多药率(MDR)为17．02％。结论BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术是目前一种比较理想的快速检测结核菌的方法。     

骨关节结核脓液结核分枝杆菌培养结果分析

７５例骨关节结核患者脓液用改良罗氏法及ＢＡＣＴＥＣ法行结核杆菌培养,并将培养结果与抗结核化疗时间及临床特征进行对比,结果：２阳性者２３例（３０．７％）,其中改良罗氏法阳性１０例（１３．３％）,ＢＡＣＴＥＣ法阳性２１例（２８．０％）,涂片阳性１６例（２１．３％）,涂阳培阴８例（１０．７％）,化疗时间越长,培养阳性率越低。涂阳培阴现象可能与疾病预后有关。     

发展中国家使用固体和液体培养基进行结核分枝杆菌培养的费用和成本效益研究

背景：发展中国家已经提出通过开展结核分枝杆菌（以下简称结核分枝杆菌）培养来加强结核病（TB）控制工作。目的：研究赞比亚国家结核病参比实验室自制的和商业生产的改良罗氏培养基（HLJ和CLJ）,以及自动和手工的液体培养基（AMGIT和MMGIT）费用和成本效益。方法：费用是从供应商的角度根据每月平均结核分枝杆菌培养标本量来进行估算的。成本效益的估计是建立在研究期间收益。结果：4种培养方法,每个标本培养成本相当（均在28-32美元之间）。发现1个结核分枝杆菌阳性样本,使用手动液体培养MMGIT、自动液体培养AMGIT、商业生产的改良罗氏培养CLJ和实验室自制的改良罗氏培养HLJ,成本分别为197美元,202美元,312美元和340美元。4种培养方法,当培养标本量达到最大时,发现1个结核分枝杆菌阳性样本成本均高于95美元。当仅对涂片阴性的样本进行检测时,应用手动液体培养MMGIT确定1个额外的结核分枝杆菌阳性样本需要487美元,其他方法价格更高。结论：基于成本效益的理由,液体培养基相比传统的固体培养基更好,特别是液体培养基的产量大大高于传统罗氏培养基。结果表明：总体上,结核分枝杆菌培养成本较高,将培养扩展到标本量较低的基层防治机构可能会导致更高的成本。     

临床分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平菌的应用价值探讨

目的 探讨分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）的临床应用价值,以期为临床依R菌早期发现提供帮助。 方法 采用临床典型依R菌株在罗氏（L-J）培养基上的最佳生长利福平药物浓度100μg/ml（简称“L-J R100”）,建立临床依R菌初代筛检模式,即在临床分枝杆菌BD960快速分离培养中,平行接种L-J R100 管和罗氏空白对照管（L-J对照）培养;按照其模式对重庆市公共卫生医疗救治中心2011年3月7日至2012年2月15日期间共5362份临床标本平行培养结果进行统计分析（实验结果录入瑞美检验网络LIS系统）。 结果BD960、L-J R100和L-J对照管3种方法平行培养的总阳性检出率为43.92% (2355株/5362份),其中BD960阳性检出率39.56%（2121株/5362份）,L-J对照管阳性检出率25.57%（1371株/5362份）。BD960阴性但L-J对照管培养阳性者234份;L-J R100阳性703株,占检出阳性的29.85%(703株/2355株）;发现有依R菌现象的258株（合计221例,其中重复出现依R菌现象2次的33例、3次的1例、4次的3例,另外有14株L-J R100阳性而对照为阴性的绝对依赖株）,占L-J对照管阳性的18.82%（258株/1371株）,占L-J R100阳性的36.70%（258株/703株）。 结论 临床分枝杆菌培养中同步筛检依R菌能分离到绝对依赖株,可提早为临床提示分离阳性株是否为利福平依赖菌或耐药菌;同时可提高分枝杆菌培养阳性检出率;其方法简单易行,有较好的临床应用价值。     

Tween80培养基对分支杆菌临床分离培养的实验研究

本文应用Ｔｗｅｅｎ８０培养基和改良罗氏培养基，对临床３９０份标本作分离培养结核分支杆菌比较。结果表明在结核菌生长速度，生长量，阳性率等方面，Ｔｗｅｅｎ８０培养基均优于改良罗氏培养基，对提高涂阴标本培阳率尤为显著（Ｐ＜０．０１），并有利于部分劣势生长的分支干菌发育。     

Tween80培养基对分支杆菌临床分离培养的实验研究

本文应用Ｔｗｅｅｎ８０培养基和改良罗氏培养基，对临床３９０份标本作分离培养结核分支杆菌比较。结果表明在结核菌生长速度、生长量、阳性率等方面，Ｔｗｅｅｎ８０培养基均优于改良罗氏培养基，对提高涂阴标本培阳率尤为显著（Ｐ＜Ｏ．０１），并有利于部分劣势生长的分支干菌发育。     

PCR与DIBT检测脑脊液结核分支杆菌的价值

应用ＰＣＲ法扩增结核杆菌ＤＮＡ重复序列１２３ｂｐ片段；用酶斑免疫结合技术检测结核分支杆菌抗原成分。结果：结核性脑膜炎患者脑脊液的两项检测阳性率分别为８１％（４３／５３）和７３．５％（３９／５３）。疾病早期ＰＣＲ阳性检出率高于ＤＩＢＴ，中晚期二者有阳性交叉现象。     

两种固体培养基培养结核杆菌的比较

为提高结核菌培养阳性率,缩短培养时间,我科在1978年对本院门诊和住院病人的300份临床标本同时接种两种固体培养基进行比较。自1979年即使用上述两种培养基作结核菌常规培养,至1982年3月共培养了临床标本1192份。现将结果报告如下: 材料和方法一、培养基 1. 罗～琴氏培养基; 2.加入0.1％丙酮酸钠、0.25％葡萄糖,去甘油的改良罗氏培养基(下简称丙酮酸钠培养基)。二、标本来源 1.300份标本来源:本院结核病人痰258份,尿9份,胸水2份,胆汁1份。 2.1192份常规标本来源:本院结核病人痰1131份,尿42份,胸水9份,脓4份,便4份,脑脊液2份。     

发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价

目的评估发光二极管荧光显微镜实验室诊断结核分枝杆菌的能力。方法收集409份痰标本,以固体罗氏培养为金标准,比较发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜在敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及检出时间上的差异,并比较技术人员对几种方法的评价。结果罗氏培养阳性的175份痰标本中,普通光学显微镜法112份为阳性,普通荧光显微镜法121份为阳性,发光二极管荧光显微镜法130份为阳性,敏感性分别为64．0％、69．1％、74．3％;罗氏培养阴性的234份痰标本中,普通光学显微镜法233份为阴性,荧光显微镜法227份为阴性,发光二极管荧光显微镜法227份为阴性,特异性分别为99．6％、97．0％,97．0％。χ^2检验统计结果表明,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜检测结果差异显著（P〈0．001）。普通光学显微镜、普通荧光显微镜和发光二极管荧光显微镜读片所用的平均时间分别为186．7秒、75．1秒、72,2秒,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜在读片时间上显著差异,与普通荧光显微镜差异不明显（P〈0．05）。参与研究的技术员评价发光二极管荧光显微镜较其他两种方法易接受。结论发光二极管荧光显微镜法较普通光学显微镜法及普通荧光显微镜在检查效果及检出时间上存在明显优势,对技术人员的亲和性最好,具有推广使用的价值。     

PCR与DIBT检测脑脊液结核分支杆菌的价值

应用ＰＣＲ法扩增结核杆菌ＤＮＡ重复序列１２３ｂｐ片段；用酶斑免疫结合技术（ＤｏｔＩｍｍｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅ，ＤＩＢＴ）检测结核分支杆菌抗原成分。结果：结核性脑膜炎患者脑脊液的两项检测阳性率分别为８１％（４３／５３）和７３．５％（３９／５３）。疾病早期ＰＣＲ阳性检出率高于ＤＩＢＴ，中晚期二者有阳性交叉现象。     

矽肺结核及矽肺患者结核分支杆菌L型致病情况研究

目的 探讨研究矽肺结核及矽肺患者结核分支杆菌L型致病情况的价值。方法 对矽肺结核组和矽肺组患者,分别进行痰结核分支杆菌和痰结发支杆菌L型培养,并对结果进行对照观察。结果 矽肺结核组60例痰结核分支杆菌培养阳性6例,阳性率10％（同时出现结核分支杆菌L型培养阳性5例,占83％）;痰结核分支杆菌L型培养阳性28例（其中I期矽肺结核L型菌检出率为33％、Ⅱ期为7％、Ⅲ期100％）,阳性率47％（P＜0．01）矽肺组30例无一例结核分支杆菌阳性,结核分支杆菌L型阳性3例,占10％。结论 结核分支杆菌L型培养方便快速,能提高结核分支杆菌的检出率,对矽肺结核的早期诊断及减少矽肺结核复发的漏、误诊有肯定的价值、随着矽肺期别的上升,结核分支杆菌L型的检出率明显增高。