应用双向电泳对rds和C3B鼠视网膜蛋白质组的初步研究

目的：应用蛋白质组分析技术,分离rds鼠视网膜中与视网膜色素变性（RP）相关的特异表达蛋白质。方法：分别取不同时期的rds鼠和正常C3B鼠视网膜,用双用电泳（2－DE）技术,对比、分析其表达蛋白质点的差异,寻找rds鼠视网膜中与色素变性相关的蛋白质。结果：用化学裂解法结合超声波粉碎,可以裂解视网膜神经组织,使其大部分蛋白质得到溶解,采用载体两性电解质PH梯度等电聚焦为第一向,垂直板SDS－PAGE为第二向分离视网膜蛋白质,得到蛋白质组表达谱。37d的rds鼠和C3B鼠视网膜蛋白质组成有较大的差异,有些蛋白质仅在rds小鼠或正常小鼠视网膜中表达,有些蛋白质在rds小鼠视膜中表达降低或升高,整体上视网膜表素变性鼠的蛋白质较正常鼠表达减少。结论双向电泳可以有效分离、显示视网膜特异表达蛋白质。通过双向电泳,我们发现rds鼠视网膜蛋白质表达与正常鼠相比有质和量的差异。     

细胞因子Ⅱ在遗传性视网膜色素变性的转基因小鼠视网膜的表达研究

目的 探讨细胞因子Ⅱ(ealpain Ⅱ)在视网膜色素变性过程中表达的变化。以此窥视遗传性视网膜色素变性的转基因小鼠(rds小鼠)发病的某些可能因素。方法 以C3B小鼠为对照，选择不同生长时期的rds小鼠的视网膜组织，用免疫组化方法检测CalpainlI在不同生长阶段的小鼠模型视网膜中的是否表达及表达情况。结果 1周即可见CalpainlI在rds小鼠视网膜神经节细胞层的表达，2周左右内核层也见表达，4周后外核层也开始出现由强至弱的ealpainⅡ强阳性表达，最终至全部视网膜剩余组织中均可见ealpainⅡ的表达。结论 只有高钙才能激活ealpainⅡ的表达，研究中ealpainⅡ参与了rds小鼠视网膜细胞的变性死亡。因此，高钙是rds小鼠视网膜变性的一个可能因素。     

压力及维生素B1作用下视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达

目的:探讨压力及压力加维生素B1联合作用下SD大鼠视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达情况。方法:新生SD大鼠视网膜神经细胞体外培养,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况,细胞分单纯加压组、实验加压组(加入维生素B1)及未加压对照组,于加压后2 d(培养第9~10天)行苔盼兰染色检查计数细胞成活率,p53免疫组化检查并提取细胞总RNA,用逆转录聚合酶链反应法检测p53、MDM2及Ref1基因的表达。结果:单纯压力组p53／MDM2基因的表达较正常未加压组增强,Ref1基因表达无增强;而维生素B1作用后的加压组,其p53／MDM2基因的表达较单纯加压组明显减弱。结论:压力作用下视网膜神经细胞的损害有凋亡机制参与,维生素B1对压力作用下视网膜神经细胞具有保护作用。     

川芎嗪对视网膜色素变性小鼠干预作用的机制

目的:观察川芎嗪对视网膜色素变性rds小鼠的干预作用和机制。 方法:rds新生小鼠 84只，随机分为实验组和对照组，每组42只小鼠。实验组小鼠从出生时开始，腹腔注射盐酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取实验组和对照组小鼠眼球，立即经10%中性甲醛固定，常规病理切片。另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定，电子显微镜观察。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标 记技术(TUNEL)方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡，用免疫组织化学方法测定bcl-2在视网膜的表达。 结果:病理观察结果显示，经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器细胞核层数与未用药的对照组相比较，明显增加（P＜0.01）。电子显微镜观察结果显示，川芎嗪可减缓rds小鼠光感受器细胞和视网膜外段盘膜部位线粒体的病变，减少盘膜和外界膜的破坏。rds小鼠经盐酸川芎嗪治疗后3、7、14、21、28、35 d，光感受器细胞凋 亡率比对照组明显减少（P＜0.01）；治疗后3、7、14、21、28、35 d时，bcl -2在视网膜光感受器细胞及光感受器细胞内外段的表达明显增强（P＜0.05） 。 结论:盐酸川芎嗪可延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的减少，其作用机制可能是通过上调视网膜 外核层及光感受器细胞内外段bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。     

Spatio—temporate Expression of P53,Bcl—2 and Fas in the Retina of RD,a

Purpose: To investigate the expression status of p53, Fas and bcl-2 in the developmentof retinal degeneration in C3H, rd and rds mice.Methods: Expression of p53, Fas and bcl-2 in the retina of rd,rds and C3H mice as wellas in normal C3B mice in different periods was examined by immunohistochemicaltechnique.Results: The expression of Fas and p53 was not detected in normal C3B mice. Fas andp53 were expressed in the ganglionic layer in the early stage and then in the innernuclear layer, while the scale and intense increased in the ganglionic layer. There is nodifference of bcl-2 expression between the normal mice and mice with retinaldegeneration.Conclusion: Fas and p53 may be involved in the retinal cell death in rd, rds, and C3B,but bcl-2 may not. It is unknown why p53 and Fas appeared first in ganglion layer butnot in the outer nuclear layer where retinal cells death was noticed in early stage. EyeScience 2000; 16: 158 ~ 162.     

遗传性视网膜变性动物模型感光细胞节段早期变化的形态学研究

目的：了解遗传性视网膜变性的感光细胞节段在出生后早期发生的形态学变化，为临床诊治提供参考信息。方法：取出生后不同时间的retinal degeneration(rd)、retinaldegenerationslow(rds)小鼠及正常对照小鼠视网膜，经光镜、扫描电镜和透射电镜观察感光细胞节段的形态发生发育和结构变化过程，比较其在各型的动态变化和各型间的形态学差异。结果：rd鼠节段变性发生早，生后1周时开始出出节段变短，线粒体变性改变多见；2周时节段层变薄，内节段结构不完整，外节膜盘变形、排列紊乱；3周时节段层近消失。rds鼠外节段不发育，变性发生晚，2周时内节段变短；3周时明显变短；4周时细胞器减少、内节段变形。结论：感光细胞节段的变性改变与其基因型相关，不同遗传背景的视网膜变性有着不同的表型。     

视网膜色素变性rds小鼠生后5周内视网膜外核层细胞光镜和电镜观察

目的观察遗传性视网膜色素变性rds小鼠在出生后5周内视网膜外核层细胞的光镜和超微结构变化，为进一步应用rds小鼠进行实验研究提供数据。方法rds新生鼠42只，在0d、3d、7d、14d、21d、28d、35d分别取11个眼球，立即经体积分数10％中性甲醛固定，光学显微镜下观察眼球水平位视网膜赤道部外核层细胞的厚度；另取1个眼球经体积分数2．5％戊二醛溶液固定，电镜观察外核层细胞及其盘膜。结果光镜观查结果显示：0d、3d视网膜的外核层和内核层未分开；7d的rds小鼠外核层和内核层已能区分，外核层光感受器细胞层数为（9．55±0．69）层；14d稍有增加为（10．09±0．70）层；21d后逐渐减少，为（9．00±0．63）层；28d为（8．27±0．65）层；35d为（7．91±0．70）层。电镜结果显示，rds小鼠视网膜的外核层细胞从出生后第14天凋亡细胞增加；第21天盘膜初步形成，但部分被破坏；线粒体在出生当天、第3天和7天丰富，第14天破坏较重；外界膜从第14天发展为不连续；从7d开始，视网膜色素上皮层出现多层和吞噬泡增多。结论rds小鼠从21d后视网膜外核层细胞逐渐减少，视网膜光感受器细胞外段的线粒体和外界膜破坏逐渐加重。这一结果为进一步开展rds小鼠的研究提供了科学依据。     

米诺环素对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞的保护作用

目的 观察米诺环素对视网膜色素变性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP过程的影响。方法 40只新生rd小鼠随机分为10组，5组为实验组，5组为对照组，每组4只小鼠。实验组，出生后每日腹腔注射米诺环素22.5 mg/kg；对照组，出生后每日腹腔注射生理盐水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各处死一组实验组和对照组小鼠，取眼球做组织学观察并行凋亡细胞检测，并对两组视网膜光感受器细胞数、外核层厚度以及凋亡细胞数目进行统计分析。结果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器细胞开始凋亡，14 d达高峰，28 d光感受器细胞完全消失；（2）出生后7 d实验组光感受器细胞数目和外核层厚度与对照组比较差异无统计学意义；（3）出生后14、21 d实验组光感受器细胞数目和外核层厚度多于对照组相应时间点，差异有统计学意义（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d实验组外核层凋亡细胞数目少于对照组相应时间点，差异有统计学意义（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。结论 米诺环素在rd小鼠RP早期可以延缓光感受器细胞丢失，但不能完全阻止RP的发生。     

快速退变性视网膜组织内CD45分子的动态表达特点

目的探讨不同时期正常和变性视网膜内CD45动态表达特点。方法分别取生后（postnatal，PN）0、1、2、3、4周龄C57BL／6和rd小鼠各8只，处死后，立即摘出眼球，制备冰冻切片，进行免疫荧光染色，荧光显微镜观察摄片，图像分析软件进行半定量分析。结果C57BL／6小鼠PN旬周龄时视网膜下腔（subretinal space，SRS）内CIM5不表达，以后逐渐增加，PN-3、4周龄时趋于稳定；rd小鼠SRS内CD45表达强度从PN-O周龄开始增加，PN-2周龄达到高峰，以后开始减少，PN-4周龄不表达；rd小鼠PN-2周龄时SRS内CD45表达强度高于正常组，PN-3、4周龄低于正常组。C57BL／6小鼠PN-0周龄时内丛状层（inner plexiform layer，IPL）内CD45表达强度开始减少至PN-1周龄，PN-3周龄表达强度开始增高至PN-4周龄；rd小鼠PN-1周龄时IPL内CD45表达强度开始增加直至PN-4周龄；各周龄彪小鼠IPL内CD45表达强度均低于正常组。结论正常小鼠视网膜CD45的表达与发育过程有关。视网膜变性不同时期，小胶质细胞等抗原呈递细胞活化，从内层视网膜移行到SRS。     

Determination of the location of the fovea on the fundus

PURPOSE: To evaluate whether the distance between optic nerve head and fovea in healthy eyes determined by scanning laser ophthalmoscope may facilitate estimation of the location of the fovea relative to the optic disc in patients with macular disease. METHODS: The angular distance was measured, in horizontal and vertical directions, between the center of the optic nerve head and the fovea in 104 eyes of 104 healthy probands. For additional evaluation of intraindividual variation in 70 of these persons the contralateral eye was measured as well. RESULTS: The distance between the optic disc and the fovea differed vertically more than horizontally (-1.5 +/- 0.9 degrees [-3.65 to +0.65 degrees ] vs. 15.5 +/- 1.1 degrees [13.0-17.9 degrees ]). There was a mean angle between the fovea and the center of the optic disc versus the horizon of -5.6 +/- 3.3 degrees. The intraindividual difference between right and left eyes was markedly lower, with average angles being 0.2 +/- 1.3 degrees vertically and 0.0 +/- 1.1 degrees horizontally. CONCLUSIONS: The distance between the optic nerve head and the fovea does not allow for a meaningful determination of the location of the fovea in eyes in which morphologic changes have occurred. The angle of rotation of the fovea relatively to the center of the optic nerve head is relatively stable. Therefore, the size of a central scotoma can be determined by movement of the blind spot according to the change of the preferred retinal locus (PRL). In addition, the knowledge of the location of the fovea enables determination of the position in the contralateral eye of the same patient.