实验性肝纤维化过程中明胶酶A基因表达的动态变化

肝纤维化的实质是Ⅰ，Ⅲ型为主胶原纤维等细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）合成与降解失衡，导致在ＥＣＭ肝内过度沉积而形成的．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）是一族参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶，目前为止该家族至少已有２０个成员，肝内发现了８种．其中明胶酶Ａ（ＭＭＰ２），即Ⅳ型胶原酶，主要参与基底膜Ⅳ型胶原的代谢，与肝纤维化的发生发展紧密相关［１］．为了了解肝纤维化过程中ｍｍｐ２基因变化，我们应用四氯化碳（ＣＣｌ４）中毒性方法…     

基质金属蛋白酶表达与调控

肝纤维化是肝脏慢性损伤后细胞外基质（ｅｘｔｒａ－ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）数量增加和／或成分改变，目前认为，ＥＣＭ在肝脏累积是其合成和降解失去平衡的结果，因此研究ＥＣＭ降解及其调控日益受到人们重视［１］。Ｉｒｅｄａｌｅ等［２］发现肝纤维化，甚至肝硬化有ＥＣＭ降解发生逆转的可能，基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）是 ＥＣＭ降解的主要酶系，为防治肝纤维化提出了新的策略，本文就这方面的进展作一综述。１ ＭＭＰｓ与ＥＣＭ降解 ＭＭＰｓ是一类锌或钙依赖…     

鼠肝纤维化基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族依赖Ｚｎ离子而降解各种细胞外基质的蛋白酶．肝内主要基质金属蛋白酶ＭＭＰ１,ＭＭＰ２和组织金属蛋白酶抑制因子１（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１,ＴＩＭＰ１）表达不平衡与肝纤维化的发生发展紧密相关．１　材料和方法清洁型Ｗｉｓｔａｒ♂大鼠１４０只,分肝纤维化模型组和正常对照组各７０只．两组动物按预定处死时间点各分为７个亚组．应用４０％（Ｖ／Ｖ）ＣＣｌ４纯花生油溶液予肝纤维…     

逆转录定量PCR检测实验性肝纤维化组织中金属蛋白酶抑制因子-1的表达

肝纤维化是Ⅰ,Ⅲ型胶原为主的细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）成分过度沉积导致的病理性疾病．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族依赖Ｚｎ离子降解ＥＣＭ成分的水解蛋白．目前为止该家族肝内发现８个成员,它们的抑制因子１（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１,ＴＩＭＰ１）可以抑制其活化和活性,因此,ＴＩＭＰ１与肝纤维化的发生发展紧密相关．我们应用大鼠ＣＣｌ４肝纤维化模型,通过逆转录定量ＰＣ…     

转化生长因子β1对Ito细胞作用的分子机制

肝纤维化是所有慢性肝病向肝硬变发展的必经病理过程,其特点是细胞外基质（ＥＣＭ）的异常增多、沉积．ＥＣＭ的主要成分有胶原和弹性蛋白等纤维性蛋白质、非胶原糖蛋白及蛋白多糖．特别以Ⅰ,Ⅲ型胶原、糖蛋白及蛋白多糖增多明显．现已证明,Ｉｔｏ细胞是细胞外基质的主要细胞学来源［１］．因此,Ｉｔｏ细胞已成为肝纤维化研究的热点．许多因素参与Ｉｔｏ细胞的调控,其中转化生长因子β（主要是ＴＧＦβ１）是主要的调控作用因素之一［２］．Ｉｔｏ细胞又名贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌ）、肝脏星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓ…     

贮脂细胞和肝细胞胶原合成能力的比较

目的为明确肝纤维化过程中细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）的细胞来源以及贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌ，ＦＳＣ）和肝细胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ，ＨＣ）在肝纤维化胶原合成中的作用．方法用胶原酶和链霉蛋白酶Ｅ消化大鼠肝脏，结合密度梯度离心法分离培养大鼠ＨＣ和ＦＳＣ，在此基础上，用３Ｈ脯氨酸掺入结合胶原酶消化法和斑点杂交法，观察ＨＣ和ＦＳＣ胶原的合成及Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原基因的表达．结果发现体外培养的ＦＳＣ合成胶原的能力较ＨＣ强，约为ＨＣ的两倍（Ｐ＜００５）；ＦＳＣ胶原基因表达的水平同样较ＨＣ高（Ｐ＜００５）．结论ＦＳＣ在ＥＣＭ胶原合成中起主要作用，但ＨＣ的作用也不容忽视．     

实验性肝纤维化过程中间质胶原酶表达的研究

肝纤维化是多种慢性肝损伤的不良结局,为慢性肝病向肝硬变发展的病理过程．其实质是Ⅰ,Ⅲ为主的胶原纤维等细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）合成与降解失衡,导致在ＥＣＭ肝内过度沉积而形成的．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶,目前为止该家族至少已有２０个成员,肝内发现了８种,其中间质胶原酶（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ,ｍｍｐ１ｉｎｈｕｍａｎ,ｍｍｐ１３ｉｎｒａｔ）主要参与Ⅰ,…     

缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性调节的影响

目的 研究缺氧对ＨＳＣ基质金属蛋白酶Ⅱ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－２,ＭＭＰ－２）表达及活性调节的影响。方法 大鼠ＨＳＣ体外原代培养,以免疫细胞化学及ＥＬＩＳＡ法分别检测细胞内ＭＭＰ－２及基质金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（Ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｏｒｅｉｎａｓｅ－２,ＴＩＭＰ－２）的表达,和培养上清流中两者的相对量,并以酶图法测培养上清液ＭＭＰ－     

维生素E硒对肝星状细胞中金属蛋白酶1组织抑制剂mRNA表达的影响

目的：研究维生素Ｅ（Ｖｉｔ Ｅ）和不同剂量硒（Ｓｅ）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ中金属蛋白酶组织抑制剂（ＴＬＭＰ－１）ｍＲＮＡ表达的影响，从分子水平揭示ＶｉｔＥ和Ｓｅ对肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：用４０％ＣＣＬ４制备大鼠肝纤维化模型，并在饲料中补充ＶｉｔＥ和不同剂量的Ｓｅ进行营养干预。应用ＨＥ常规染色和Ｍａｓｓｏｎ三色胶原染色对肝组织切片行组织病理学检查；应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－Ｐ     

肝星状细胞凋亡与肝纤维化

近十年来对肝纤维化形成的机理研究取得了令人鼓舞的进展。越来越多的临床及实验证据表明,肝纤维化是可以逆转的［１］,这一观点逐渐被广泛接受。肝星状细胞（ｈｏｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ）的激活是肝纤维化形成的中心环节［２］,ＨＳＣ在肝纤维化逆转过程中的作用也成为研究热点之一。Ｂｕｒｔ［３］认为,肝纤维化逆转时ＨＳＣ的减少是由于激活状态的ＨＳＣ转化为静止状态。但最新的研究表明,肝纤维化恢复期,激活状态的ＨＳＣ减少主要通过凋亡机制,而不是表型的转化［４］。几位学者分别对ＨＳＣ凋亡的机制进行…     

TIMPs与肝纤维化

肝纤维化的主要病理变化就是ＥＣＭ (细胞外基质 ,ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｒｍａｔｒｉｘ)在肝脏中过多沉积。肝脏ＥＣＭ的代谢主要由ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶 ,ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｐｒｏ ｔｅａｓｅ)及其抑制因子ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶的组织抑制因子 ,ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｐｒｏｔｅａｓｅ)所调节 ,ＭＭＰｓ促进ＥＣＭ的降解 ,而ＴＩＭＰｓ通过抑制ＭＭＰｓ,阻止ＥＣＭ的降解 ,从而形成或促进肝纤维化。肝脏受损后 ,一方面ＥＣＭ合成增多 ,另一方面ＴＩＭＰｓ表达上调 ,发挥对ＭＭＰｓ的普遍抑制作用 ,使Ｅ…     

金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

近年来 ,随着医学分子生物学的发展 ,肝纤维化发病机制研究有了较大进步。目前认为肝纤维化发生不仅是由于肝内的细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ ｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )合成过多 ,而且与ＥＣＭ降解水平有着密切关系。在肝内参与ＥＣＭ降解的主要是一组名为基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＭＭＰｓ)的酶系 ,其特异性抑制物———金属蛋白酶组织抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＴＩＭＰｓ)可对该酶系活性产生抑制作用。二者与肝内ＥＣＭ…     

系膜增殖性肾炎白细胞介素6表达与细胞外基质产生的研究

系膜细胞增生、细胞外基质（ＥＣＭ）聚积和扩张是系膜增殖性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）发生发展的重要病理基础［１］。研究表明,系膜细胞可分泌具有生物活性的白细胞介素６（ＩＬ６）,ＩＬ６又可促进系膜细胞生长［２］。人类ＭｓＰＧＮ中ＩＬ６的表达及其与ＥＣ...     

花生四烯酸和亚油酸刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞增殖的影响

近年来研究发现,在各种致病因素作用下,脂肪肝与肝纤维化常相继发生或同时存在,肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ）的激活增殖在其发生中有重要的作用。目前国内外有关必需脂肪酸对ＨＳＣ的增殖影响所见报道极少。本文观察了必需脂肪酸花生四烯酸（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄ）和亚油酸（ｌｉｎｏｌｅｉｃａｃｉｄ）及其刺激的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞（ＫＣ）培养的上清液（Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍ,ＫＣＣＭ）对ＨＳＣ增殖的影响,以探讨必需脂肪酸在脂肪肝肝纤维化中…     

金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外生长侵袭与细胞外基质的相关性

目的探讨金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ２）基因转染后胃癌细胞的体内外侵袭能力的改变及胶原与胶原酶的变化规律．方法将人全长ＴＩＭＰ２ｃＤＮＡ基因构建于改构的逆转录病毒载体ｐＬＭＴ，经基因转染法导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，Ｇ４１８筛选获阳性细胞．利用裸鼠肾包膜下移植模型，采用免疫组化和原位杂交方法，观察肿瘤发展过程中的不同时期ＴＩＭＰｓ／ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）ｍＲＮＡ，Ⅳ型胶原表达的情况．结果随着肿瘤移植后时间的延长，瘤细胞侵袭基底膜处Ⅳ型胶原缺失，瘤巢周围ＭＭＰｓ含量丰富．通过体外实验，观察到ＳＧＣ７９０１Ｔ２细胞ＴＩＭＰ２ｍＲＮＡ及蛋白活性均高于母系ＳＧＣ７９０１细胞，ＴＩＭＰ２可抑制基质金属蛋白酶的活性，减弱肿瘤细胞的侵袭体内外移动速度．结论ＭＭＰｓ的高表达是肿瘤细胞侵袭的关键因素，而ＴＩＭＰ２基因是恶性肿瘤侵袭和转移的负调控因子．     

维生素E对白介素-2作用的大鼠贮脂细胞增殖及胶原合成的影响

动物实验研究表明,维生素Ｅ具有抗肝纤维化作用［１］,但具体机制不明。目前研究认为,贮脂细胞在肝纤维化形成中起关键作用。为探讨维生素Ｅ抗肝纤维化的细胞学机制,我们以白介素２作为刺激因素研究了维生素Ｅ对大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成的作用。材料与方法一、材料（一）实验动物：雄性ＳＤ大鼠,体重５５０ｇ,南京铁道医学院实验动物中心提供。　　（二）主要试剂：链酶蛋白酶：Ｍｅｒｃｋ公司产品;Ⅳ型胶原酶：Ｓｉｇｍａ公司产品;Ｍｅｔｒｉｚａｍｉｄｅ：ＧＩＢＣＯ公司产品;维生素Ｅ：厦门鱼肝油厂产品;３Ｈ胸腺嘧啶核…     

免疫性肝纤维化中肝组织基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1的表达

正常肝脏细胞外基质的合成和溶解维持着动态平衡 ,基质金属蛋白酶 1(ＭＭＰ 1)及金属蛋白酶抑制因子 1(ＴＩＭＰ 1)起着重要的调节作用 ,当二者比例失调时 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原降解减少而沉积[1,2 ] ,形成肝纤维化。我们应用ＥＬＩＳＡ方法在大鼠免疫性肝纤维化形成的不同时期同步测定ＭＭＰ 1、ＴＩＭＰ 1的蛋白表达 ,旨在进一步了解二者的动态变化及其作用。一、材料和方法1.主要试剂 :2 0 %人白蛋白 (ＨＳＡ ,ＡｒｍｏｕｒＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉ ｃａｌＣｏｍｐａｎｙ ,ＵＳＡ) ;ＭＭＰ 1及ＴＩＭＰ 1测定 (ＥＬＩＳＡ)试剂盒 (ＴＰＩＩｎＣ…     

肝纤维化过程中肝星状细胞的研究进展

肝星状细胞 (ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ ;以前称为贮脂细胞、Ｉｔｏ细胞等 )位于肝窦Ｄｉｓｓｅ间隙内 ,在肝损伤过程中被激活经表型转化而成为肌成纤维细胞 (ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｅｒ,ＭＦＢ) ,产生大量细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )促进肝纤维化的形成 ,是肝纤维化形成的中心环节。一、ＨＳＣ的活化(一 )ＨＳＣ活化的启动与持续ＨＳＣ的活化是由静止的ＨＳＣ向ＭＦＢ转化的过程。涉及到细胞—细胞间、间质—细胞间相互作用。有学者提出了三步级联活化模式 ,把ＨＳＣ活化分…     

氧化应激在肝星状细胞活化中的作用

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复应答反应，其病理中心环节是肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ　ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）由静止状态转变为活化状态，成为肝纤维化形成的细胞学基础。ＨＳＣ的活化具体表现在：（１）细胞体积增大，伸出伪足，含维生素Ａ的脂滴减少，表型向肌成纤维细胞样细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌ）转化。（２）细胞获得增殖能力。（３）纤维化能力增强，大量生成细胞外基质。（４）表达平滑肌细胞骨架蛋白如α－平滑Ｌ动蛋白。许多因素如炎性因子、细胞外基质的改变、生长因子以…     

四氯化碳肝纤维化大鼠储脂细胞表皮生长因子受体的变化

目的：研究四氯化碳（ＣＣｌ_４）所致实验性肝纤维化大鼠肝脏储脂细胞（ＦＳＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）的变化,探讨ＥＧＦ－Ｒ在ＦＳＣ激活中的作用。方法：~（１２５）Ｉ标记ＥＧＦ,放射配体结合分析测定正常和ＣＣｌ４肝纤维化大鼠肝脏原代ＦＳＣ的ＥＧＦ－Ｒ　结果：ＣＣｌ４肝纤维化大鼠肝脏ＦＳＣ数量（６．７１× １０~±５．３２ × １０~７）较正常大鼠（２．６３×１０~７±１．０４×１０~７）显著增多（Ｐ＜０．０５）;正常与 ＣＣｌ_４肝纤维化大鼠ＦＳＣ的ＥＧＦ－Ｒ最大结合位点数（ＲＴ）、解离常数（ｋＤ）分别为：２．２２ ×１０~３ｓｉｔｅｓ／ｃｅｌｌ,４．０９ × １０~(－１０）Ｍ和９．２７× １０~３ｓｉｔｅｓ／ｃｅｌｌ,３．２６× １０~(－１０）Ｍ。肝纤维化时ＥＧＦ－Ｒ明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论：ＣＣｌ_４引起肝纤维化时ＦＳＣ增殖,同时ＥＧＦ－Ｒ的表达增加。