人肝癌组织GGT基因甲基化状态与酶蛋白异常表达关系的研究

目的探讨肝癌发生过程中γ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）的表达及其改变机制。方法将肝癌、癌旁及远癌组织总ＧＧＴ和ＲＮＡ纯化，观察总ＧＧＴ、膜结台和可溶性ＧＧＴ的表达，并以逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＧＧＴ非编码区基因片段，分析Ｍ３位点的甲基化状态。结果肝癌、癌旁和远癌组总ＲＮＡ浓度呈明显的梯度升高趋势（Ｐ＜０．０５）；癌组织总ＧＧＴ、膜结合和可溶性ＧＧＴ均高于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０５）；在癌、癌旁和远癌组织中，特定基因片段的扩增检出率分别为１００％，８５％和７５０／０，Ｍ３位点低甲基化频率分别为７５％，５５％和５０％。结论肝癌组织中ＧＧＴ呈异常表达与基因低甲基化状态有关，分析ＧＧＴ基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

原发性肝癌患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒基因的PCR检测

用逆转录－聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清及肝癌和癌旁肝组织中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，以ＰＣＲ－双脱氧末端终止法测定了ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果显示，血清和肝组织中ＨＧＶＲＮＡ的检出率分别为１９．４％（１３／６７）和２５．７％（９／３５），且ＨＧＶＲＮＡ在肝癌组织呼吕旁肝组织中同时存在，血清和肝组织中ＨＧＶ ＲＮＡ检测结果的符合率为８５％；５′非编码区（５     

转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强

目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用,是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,血清ＴＧＦβ１水平,以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,提取总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％,对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明,ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．     

胃癌与多肿瘤抑制基因甲基化的研究

目的：探讨抑癌基因ＭＴＳ１　５’端ＣｐＧ岛异常甲基化与原发性胃癌发病机制之间的关系。方法ＰＣＲ－甲基化检测法研究３１例胃癌标本和１９例正常胃组织中ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化情况。结果：有３５．５％（１１／３１）的胃癌标本和５．３％（１／１９）正常胃组织出现ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化,两者之间有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化是其在原发性胃癌中的主要灭活机制,与胃癌的发生发展密切相关。     

HCV 5′NCR和结构蛋白编码序列的克隆及对PA317细胞的转染

目的进一步研究丙型肝炎病毒５′ＮＣＲ对结构蛋白编码基因的表达调控。方法以拼接好的ＨＣＶ５′ＮＣＲ，Ｃ，Ｅ１和Ｅ２／ＮＳ１区基因共长２５４７个核苷酸片段克隆于逆转录病毒载体ＬＮＳＸ得重组体ｐＬＨＣ２５４７，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及核苷酸序列分析等方法对重组体进行鉴定。通过磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法把经鉴定的重组体转染入ＰＡ３１７细胞，用Ｇ４１８进行克隆筛选，以ＮＩＨ３Ｔ３细胞测其病毒滴度。提取转染细胞ＤＮＡ及培养上清ＲＮＡ分别用ＰＣＲ和逆转录ＰＣＲ进行鉴定。结果培养上清的病毒滴度为２×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，ＰＣＲ及逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分别可以从转染的细胞ＤＮＡ及培养上清中扩增出ＨＣＶ的基因片段。结论目的基因已整合到细胞的基因组中并得以表达     

肝癌组织中丙型和乙型肝炎病毒基因状况研究

采用逆转录巢式ＰＣＲ技术检测了５１例ＨＣＣ患者的肝癌及癌周肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正负链，同时以巢式ＰＣＲ技术检测了这些组织中的ＨＢＶＤＮＡ。结果，１１．８％（６／５１）检出组织中ＨＣＶＲＮＡ正链：其中５例在癌周肝组织，２例在癌组织中检测出ＨＣＶＲＮＡ负链，由于负链ＲＮＡ为ＨＣＶ的复制中间体，不释放到细胞外，其检出ＨＣＶ感染与ＨＣＣ关系的研究提供了进一步的病因证据，组织中ＨＢＶＤＮＡ检出率高达９２．２     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒基因负链的研究

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒基因负链的研究查文章，等．中华医学杂志，１９９４，７４：２０５运用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）等方法检测了５例丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）阳性患者的肝癌、癌旁组织和周围血清中ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，其中男４例，女１例...     

静脉毒瘾者84例HGV感染状况

目的调查庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在静脉毒瘾者中的感染状况。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测８４例静脉毒瘾者血浆标本。ＨＧＶＲＮＡ经热变性法提取后逆转录为ｃＤＮＡ，在ＨＧＶ５′非编码区（５′ＮＣＲ）设计两对引物进行巢式扩增，产物为２３８ｂｐ，并经限制性内切酶ＨｐａⅡ鉴定扩增产物来自ＨＧＶ。结果８４例中有１５例为ＨＧＶＲＮＡ阳性，阳性率为１７．９％。ＨＧＶＲＮＡ阳性病例中１１例合并丙型肝炎病毒感染（１１／１５）。结论静脉毒瘾者是ＨＧＶ感染的高危人群；不洁注射是获得ＨＧＶ感染的重要途径。     

原发性肝癌患者血清中庚型肝炎病毒核酸的检测分析

为了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在原发性肝癌患者中的感染状况，本文对１４５例原发性肝癌患者血清进行了分析。应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增庚型肝炎病毒基因，采用蛋白酶Ｋ裂解法提取血清中ＨＧＶ－ＲＮＡ，逆转录为ｃＤＮＡ后进行巢式扩增，获得２３８ｂｐ的特异性片段。用此方法对１４５例原发性肝癌（ＨＣＣ）患者血清标本进行检测，结果发现２１例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性（１４．５％），均为男性患者。     

肝组织谷氨酰转移酶mRNA亚型的测定及其意义

目的 探讨谷氨酰转移酶（ＧＧＴ）ｍＲＮＡ亚型转化与原发性肝癌（ＨＣＣ）发生的关系。方法 以ＲＴ—ＰＣＲ方法检测正常肝组织、非癌肝病肝组织、肝癌组织、癌旁组织、远癌组织及肝转移癌癌周组织的三种ＧＧＴｍＲＮＡ亚型（Ｆ Ｈ、Ｐ亚型）、结果 正常肝组织主要的ＧＧＴ ｍＲＮＡ类型为Ｆ亚型，非癌肝病肝组织及肝转移癌癌周组织的各ＧＧＴ ｍＲＮＡ亚型与正常肝组织相似，肝癌组织、癌旁组织及远癌组织ＧＧＴ ｍＲＮＡ—Ｈ亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝病肝组织（９６．２％与０和２０．７％，ｘ２值分别为２８．３６、２２．４２，Ｐ＜０．０５），肝癌组织ＧＧＴ ｍＲＮＡ—Ｆ亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组（５０％与１００％，ｘ２＝１８．９９，Ｐ＜０．０５）。结论 ＧＧＴｍＲＮＡ亚型转化与肝癌发生有密切关系，分析ＧＧＴ基因可望成力检测肝细胞癌变的灵敏方法。     

Autotaxin mRNA在人肝细胞癌中的表达

目的了解自分泌运动因子Ａｕｔｏｔａｘｉｎ（ＡＴＸ）ｍＲＮＡ在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）研究５例正常肝组织、３２例肝癌组织中ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ的表达，以βａｃｔｉｎ为内参照。结果５例正常肝组织及３２例肝癌中均有ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ表达；但Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因表达值（ｘ±ｓ）癌组织显著高于正常肝组织（６８．２３％±１５．３１％对３１．９７±８．０５％，Ｐ＜０．００１）。高表达ＡＴＸ肝癌与癌细胞肝内转移、门静脉癌栓形成、肿瘤的分化程度有关，而与年龄、性别、病因、肿瘤大小等无关。结论Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因过度表达与肝细胞癌的进展、转移有关。     

Cx32在胃癌中的表达

连接蛋白基因（Ｃｏｎｎｅｘｉｎｇｅｎｅ）是一个多基因家族,目前研究较多的有Ｃｘ３２,Ｃｘ４３,Ｃｘ３７等．我们采用ＲＴＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术研究Ｃｘ３２基因在胃癌中的表达．１　材料和方法１．１　材料　３０例未经过放疗或化疗确诊为胃癌的手术标本及配对癌旁组织,正常组织,冻存于液氮中,其中２４例为低分化腺癌,４例印戒细胞癌,２例高分化腺癌．Ｃｘ３２基因ＰＣＲ引物及内对照ＧＡＰＤＨ引物由中科院上海细胞生物学研究所合成．Ｃｘ３２,ＰＣＲ引物：正义链：５＇ＡＡＣＴＧＧＡＣＡＧＧＴＣＴＡＴＡＣ…     

血吸虫病肝纤维化患者转化生长因子β_1mRNA的水平及其临床意义

目的：研究血吸虫病患者 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平及其临床意义。方法：用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 加 ｄｏｔｂｌｏｔ法测定血吸虫病患者 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ中 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平,与肝硬变和肝癌患者作比较,并研究了部分肝脏组织（肝癌患者１６ 例,肝血管瘤患者正常肝组织 ５ 例）中 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平与 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ中水平的关系。同时,测定血清中 Ｈ Ａ、 Ｌ Ｎ、 ＣｏｌⅠⅤ和 Ｐ ＣⅢ水平,作为衡量肝纤维化活动与否的指标。结果： Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ内 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平在晚期血吸虫病患者组（ｎ＝ ２１,１２６±０１４）,肝硬变患者组（ｎ＝ １５,２０５±０８１）和肝癌患者组（ｎ＝ ２５,１８３±１２９）均显著高于正常对照组（ｎ＝ １６,０６２±０４０）（ Ｐ＜ ００５）。其中晚期血吸虫病患者组又显著低于肝硬变患者组或肝癌患者组（ Ｐ＜ ００５）,后两组差异无显著性（ Ｐ＞ ００５）。肝组织与 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ内 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平差别无统计学意义（ Ｐ＞ ００５）。血清 Ｈ Ａ、 ＣｏｌⅣ和 Ｌ Ｎ 异常组的 Ｔ Ｇ Ｆβ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平显著高于正常组（ Ｐ＜ ００５）。结论： Ｐ     

丙型肝炎病毒NS5b区与5'-非编码区不同基因区RNA检测结果的比较

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５ｂ区与５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）不同基因区ＲＮＡ检测结果的区别及临床应用价值。利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测１４８例肝炎患者血清ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因的ｃＤＮＡ,并与５’－ＮＣＲ基因区ｃＤＮＡ检测技术进行了比较。结果 ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因区ＲＮＡ检出率为２４．３％（３４／１４８）,５’－ＮＣＲ基因区ＲＮＡ检出率为３１．１％（４７／１４８）。Ｈ     

人肝癌组织中芳香基酰胺酶表达与异常改变的研究

为探讨肝癌不同部分组织中ＡＡＤ的表达和改变规律。方法将自身配对的肝癌、癌周和远癌组织中总ＲＮＡ和ＡＡＤ纯化,并分析了肝匀浆中ＡＡＤ及不同分子形式ＡＡＤ比活性,并与对应组织中ＧＧＴ进行了比较。结果肝癌组织总ＲＮＡ浓度,癌组织明显低于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０１）;总ＡＡＤ比活性（Ｕ／ｇ）在癌组织明显高于远癌组织（Ｐ＜０．０５）;肝癌组织中膜结合性ＡＡＤ升高,但差别不明显（Ｐ＞０．０５）,而可溶性ＡＡＤ在肝癌组织中明显地高于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０５）。结论资料提示肝癌组织可表达大量ＡＡＤ,且以可溶性ＡＡＤ升高为主。     

大肠癌EGF受体表达对细胞增殖的影响

目的研究ＥＧＦ受体（ＥＧＦＲ）在大肠癌中表达的意义，并探讨其对细胞增殖的影响．方法用免疫组化ＬＳＡＢ法检测８６例大肠癌组织ＥＧＦＲ，ＰＣＮＡ的表达．结果在８６例被检组织中，ＥＧＦＲ阳性表达４４例（５１２％），低分化癌（８００％，４０／５０）、淋巴结转移癌（６８８％，２２／３２）较高分化（３８９％，１４／３６）、淋巴结未受累大肠癌（４０７％，２２／５４）有更高的ＥＧＦＲ表达（Ｐ＜００５）．ＤｕｋｅｓＡ，Ｂ，Ｃ期大肠癌的ＥＧＦＲ表达率分别为３２０％，４８３％，６８８％，Ｃ期与Ａ期比较差异显著；ＥＧＦＲ阳性大肠癌较阴性癌有更高的ＰＣＮＡ标记（两者ＰＣＮＡⅠ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ级的例数分别为４，８，１７，１５；１４，１６，７，５；Ｐ＜００５）．结论ＥＧＦＲ过表达与大肠癌恶性程度、转移趋势密切相关，并可促使癌细胞过度增生．     

肝癌和慢性肝炎患者丙型肝炎病毒核心蛋白基因表达及其核苷酸序…

目的：为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染在肝癌发生中的作用。方法：从ＨＣＶ第二代抗体阳性的肝癌和慢性肝炎患者血清中提取ＨＣＶ－ＲＮＡ，经随机引物逆转录合成ｃＤＮＡ，再以病毒５＇－末端至Ｅ１区间的多对引物进行巢式ＰＣＲ扩增，其最终产物（４２５ｂｐ和６２１ｂｐ）分别连接ｐ－ＧＥＭ－Ｔ载体，在大肠杆菌中表达后进行测序。结果：所有患者均为ＨＣＶ－Ⅱ型感染，完整的核心蛋白基因（５７３ｂｐ）与已报道的其它株比较     

人肝癌组织中总RNA浓度和GGT异常表达关系的研究

为探讨γ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）在肝癌发生过程中表达及其变化。以病理组织学和生物化学方法,将自身配对的肝癌,癌旁组织和远癌组织中总ＲＮＡ纯化,对总ＧＧＴ比活性和不同分子形式ＧＧＴ的表达改变进行了研究,结果显示,在２４例肝癌,癌旁和远癌组织中;（１）癌灶→癌旁→远癌组织中,总ＲＮＡ浓度呈逐步升高趋势,组织间的差异显著;（２）总ＧＧＴ可溶性和膜结合性ＧＧＴ比活性,癌组织较癌周和远癌组织明显升高（Ｐ〈０