三氧化二砷选择性诱导人肝癌细胞凋亡及 相关基因的实验研究

目的 明确三氧化二砷对人肝癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝法、AO/EB荧光染色法、透射与扫描电镜观察、DNA电泳、流式细胞术、TUNEL法及免疫组织化学等方法,观察了三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株QGY-7701、QGY-7703和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响。结果 三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞QGY-7701和QGY-7703的生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡形态学和生化学改变,并使细胞周期阻滞于S期,且bcl-2基因表达明显下降,bax和Fas基因表达显著增强;三氧化二砷对正常人肝细胞株L-02无明显作用。结论 三氧化二砷对人肝癌细胞有显著的选择性诱导凋亡作用,且受到多种基因调控,这一结论为应用三氧化二砷治疗原发性肝癌提供了可靠的实验依据。     

三氧化二砷对人恶性黑素瘤细胞株A375生长和凋亡影响的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）对人恶性黑素瘤细胞株A375的生长抑制与促凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测As2O3对黑素瘤细胞的抑制作用；倒置显微镜、电镜观察细胞形态变化和凋亡特征；流式细胞仪分析DNA含量和检测细胞周期。结果1．0、2．0、4．0、8．0、16．0μmol／L As2O3均能抑制A375细胞的生长，且抑制率具有浓度和时间依赖性。8．0和16．0μmol／L组主要表现细胞毒性作用；4．0μmol／L组作用72h后，A375细胞出现较典型的凋亡形态特征，流式细胞仪检测到亚二倍体凋亡峰，同时出现S期阻滞。结论As2O3能有效的抑制人恶性黑素瘤细胞株A375的生长并促进其凋亡。     

肝细胞凋亡与肝癌癌前病变

目的观察肝细胞癌（HCC）癌分组织与单纯肝硬变二者在肝细胞凋亡的区别，以探讨癌前病变的特性．方法HCC癌旁标本及单纯肝硬变标本分别为24及对例（A及B组），全部作原位末端标记（ISEL），HBsAg免疫组化及HE观察分析ISEL阳性强度分4级，作A、B组比较，卡方统计．结果A组的肝细胞ISEL阳性率及阳性强度均显著高于B组（P＜0．01）．阳性细胞核深棕色，散在分布，以汇管区及纤维隔周边部为多．A组绝大多数属静息性门脉性肝硬变；而B组尚有慢活肝及侵重肝肝硬变炎症B组较A组明显（P＜0．05）．HBsAg阳性率A组89．4％，B组93．7％ISEL阳性与HBsAg、肝细胞活跃增生和肝细胞非典型增生无相关性此外，发现A组中有1例“凋亡性肝硬变”，其ISEL及HE均证明50％的肝细胞有凋亡结论HCC癌旁肝硬变的凋亡发生率明显高于单纯肝硬变者，认为肝细胞凋亡是HCC癌前病变的一种特性，与癌的发生有关．     

三氧化二砷对肝癌细胞增殖的影响

为探讨三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用 ,应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验 ,研究As2 O3 对肝癌细胞的增殖抑制和细胞毒作用。结果发现As2 O3 能显著抑制肝癌细胞的生长 ,5 μmol/LAs2 O3 抑制程度明显强于 1μmol/L。 5 μmol/L和 1μmol/LAs2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为 1.5± 1.2 %和 12 3± 2 .2 % ,明显低于对照组的 30 .0± 4.2 % (P <0 .0 1)。As2 O3 对肝癌细胞有较强的细胞毒作用 ,且呈显著剂量和时间依赖性。其对于肝癌细胞的杀伤率高于 5 氟脲嘧啶 ( 5 FU )和丝裂霉素 (MMC) ,但无显著差异。As2 O3 与 5 FU及MMC存在协同效应 ,联合应用 ,对肝癌细胞的杀伤率明显升高。说明As2 O3 具有明显的抑制肝癌细胞增殖的作用 ,有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值     

三氧化二砷对肝癌细胞株凋亡的诱导作用

目的研究三氧化二砷(As2O2)对人、鼠肝癌细胞株凋亡的诱导作用.方法用不同质量浓度(0.25,0.5,1,2,3,4 mg/L)的三氧化二砷处理体外培养的鼠7919,人HePG2肝癌细胞株,以MTT比色法、AO/EB荧光染色法、DNA凝胶电泳和免疫组化染色法检测细胞凋亡.结果不同浓度的三氧化二砷均可抑制7919,HePG2细胞生长;AO/EB荧光染色在荧光显微镜下观察肝癌细胞呈典型的凋亡形态学改变;DNA凝胶电泳呈梯形条带为凋亡的特征;免疫组化染色加药组bcl-2表达下调,bax表达上调,对照组bcl-2表达上调,bax表达下调,两株细胞结果相同.结论As2O3对两株细胞均有诱导凋亡作用.这为临床应用As2O3治疗肝癌提供了一个可供参考的实验依据.     

全反式维甲酸联合三氧化二砷对人肝癌细胞株HepG2及其移植瘤的抑制作用

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）联合三氧化二砷（As2O3）在体外和体内对肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法将不同剂量的ATRA和As2O3单独及联合作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，用MTT比色法分析两药物对肝癌细胞生长的体外抑制作用。建立人肝癌细胞HepG2移植瘤模型，观察ATRA联合As2O3的体内抑瘤作用。结果ATRA在体外对HepG2具有增生抑制作用，并呈现明显的剂量依赖性，10μmol／L的抑制率为（40．9±2．3）％，与As：O，联用产生协同作用，能明显增强其对HepG2的抑制作用，10μmol／LATRA与1μmol／L As2O3联合应用抑制率达（62．7±2．5）％。体内实验显示，ATRA与As2O3单独及联合均能对HepG2移植瘤起到明显的抑制作用，联合应用组对实体瘤的瘤重和瘤体的抑瘤率分别为70．75％和70．02％，明显优于单独用药组。结论ATRA和As2O3在体外和体内对肝癌细胞HepG2的生长均有抑制作用，联合应用具有协同效应，抑瘤作用明显增强。ATRA和As2O3联合应用将来有望用于肝癌的临床治疗。     

三氧化二砷对肝细胞肝癌抗肿瘤作用的实验研究

近年来，砷剂（主要成分三氧化二砷，As2O3）治疗白血病取得明显疗效，并已证实砷剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡达到治疗的目的。有报道砷剂可诱导人肝癌细胞株凋亡，抑制肝癌细胞增殖。为进一步研究其搞肿瘤效应及其机制，以期为临床上使用As2O3治疗肝细胞肝癌的可行性提供理论依据，我们的研究设计用As2O3治疗实验性肝癌大鼠，研究As2O3及复方苦参对体内肝癌的治疗作用及其作用机制。     

三氧化二砷抗肝癌作用研究进展

三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞性白血病取得肯定的临床效果,但对实体瘤作用的研究尚不够深入,其临床治疗肝癌的效果仍需进一步探讨。此文复习国内外文献,对三氧化二砷抗肝癌作用的研究进展作一综述。     

缺氧时三氧化二砷对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制

目的:探讨不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)对人肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡的影响及机制.方法:应用化学缺氧剂二氯化钴(CoCl_2)诱导人肝癌细胞BEL-7402缺氧.不同浓度As_2O_3对BEL-7402进行干预后,应用MTT法测定缺氧条件下的生长抑制作用:应用电镜,激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察其对细胞凋亡的影响;应用逆转录聚合酶链式反应检测缺氧诱导因子HIF-1α,耐药基因mdrl的表达水平.结果:As_2O_3具有抑制人肝癌细胞株BEL-7402缺氧条件下生长的作用,并呈剂量-效应依赖性;4.0μmol/L AS_2O_3干预48h后,缺氧条件下的细胞呈现典型的凋亡形态学特征;缺氧时,0.5-4.0μmol/L As_2O_3下调HIF-1α,mdrl基因表达水平,其中4.0μmol/L AS_2O_3组作用最强,基因相对表达量分别为HIF-1α0.60±0.07,mdrl 0.59±0.09.各剂量组As_2O_3作用后与缺氧对照组比较差异有显著性(P<0.01).结论:不同浓度的As_2O_3在由CoCl_2诱导的化学缺氧奈件下能够抑制人肝癌细胞BEL-7402的生长及诱导凋亡,其机制可能与As_2O3下调HIF-1α、mdrl的基因表达水平有关.     

氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究三氧二化砷（氧化砷）对胃癌细胞的诱导凋亡作用。方法 应用ＴＵＮＥＬ染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对胃癌细胞ＭＫＮ－４５、ＭＫＮ－２８的诱导凋亡作用。结果 氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化：细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片断化,凋 亡小体形成等。流式细胞仪ＤＮＡ直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。ＴＵＮＥＬ染色法     

三氧化二砷对裸鼠膀胱癌细胞凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抑制膀胱癌细胞生长的作用。方法体外培养膀胱癌T24细胞,取指数生长期T24细胞裸鼠皮下接种,成瘤后连续7 d尾静脉分别注射As2O3(5、10 mg·kg-1·d-1)、丝裂霉素(MMC)及生理盐水。应用电镜、流式细胞术和免疫组化等方法检测了癌细胞的超微结构变化、细胞的凋亡和Caspase3蛋白的表达。结果电镜下As2O3组可见典型癌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞分析,As2O3组可见癌细胞凋亡峰,凋亡率分别为10．67％和23．42％,明显高于对照组(0．83％);免疫组化检测As2O2组Caspase 3蛋白表达(33．54％和56．22％)也明显高于对照组(6．25％)。结论As2O3可以通过诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞生长。     

氧化砷诱发胃癌细胞株凋亡的初步研究

目的在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗ＡＰＬ的基础上，进一步探讨Ａｓ２Ｏ３能否诱发胃癌细胞株凋亡。方法采用荧光标记法，经流式细胞仪和荧光显微镜观察Ａｓ２Ｏ３对ＭＫＮ４５和ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株的凋亡诱发率和形态学改变。结果发现Ａｓ２Ｏ３诱发胃癌细胞凋亡率高于５－Ｆｕ的作用；形态学见凋亡细胞呈荧光标记阳性，细胞内出现斑块状荧光，体积缩小。结论Ａｓ２Ｏ３可诱发胃癌细胞凋亡，有必要进一步探索其对胃癌治疗的价值。     

氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的信号传导途径研究

目的 检测氧化砷(As2O3)诱导胃癌细胞株(SGC-7901和MKN-45)凋亡过程中cAMP、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性变化，以探讨其诱导胃癌细胞凋亡过程中可能存在的信号传导途径。方法 应用钙离子拮抗剂、PKC和PTK抑制剂研究其对AS2O3诱导胃癌细胞凋亡过程的影响，以TUNEL法检测细胞凋亡率。以放射免疫法测定As2O3作用前后细胞内cAMP水平的变化。抽提PKC和PTK蛋白，以Lowry法测定As2O3作用前后各自蛋白表达水平的变化。结果 钙离子拮抗剂对As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程没有影响，PKC和PTK抑制剂不仅本身能诱导胃癌细胞凋亡，且对As2O3诱导胃癌细胞凋亡具有协同作用。在As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程中存在cAMP浓度增高和PKC、PTK活性显著降低，提示cAMP、PKC和PTK可能参与As2O3诱导胃癌细胞凋亡的作用。结论 PKC和PTK抑制剂可以通过影响信号传导系统诱导胃癌细胞凋亡，并能促进As2O3诱导胃癌细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导胰腺癌细胞系PC-3凋亡及其抑制转移的作用

目的:探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液诱导人类胰腺癌细胞凋亡及其抑制转移的作用机制.方法:用AS2O3处理人胰腺癌细胞株PC-3,通过流式细胞仪观察细胞的凋亡率及生长周期的变化;用免疫组织化学的方法,检测凋亡相关基因蛋白Fas,Fas-L,Bc1-2和Bax及转移相关基因蛋白CD44和nm23表达的变化.结果:流式细胞仪检测显示明显的凋亡峰出现,并使细胞周期主要被阻滞在S期(14.9%-63.7%);免疫组化结果显示,Bc1-2( ～ ),CD44( ～ )基因的表达下调,Fas( ～ )、Fas-L(-～ )及nm23( ～ )基因的表达上调.结论:As2O3注射液可诱导人类胰腺癌细胞株PC-3凋亡并具有抑制转移作用,这可能与调节Bc1-2,Fas,Fas-L及CD44,nm23蛋白的表达有关.     

砷剂对NB4细胞凋亡过程的影响

目的 :探讨砷制剂诱导NB4 细胞凋亡的途径及调控因子。方法 :将NB4 细胞与不同浓度的As2 O3 共同孵育 ,在不同时间 ,用比色法检测NB4 细胞胞浆内Caspase 3、 6、 8的活性 ,并用流式细胞仪检测细胞内转录因子NF κB的表达 ,同时作细胞周期分析及DNA梯度鉴定As2 O3 的致凋亡作用。结果 :NB4 细胞在 1.0、2 .0 μmol/LAs2 O3 的诱导下 ,于 16～ 2 4h的时段内均有明显的凋亡现象 ;期间 ,Caspase 3, 6 , 8被活化 ,较对照组差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;不同的时间点Caspase家族成员激活顺序不同 ,这种时间上的差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;NF κB在 6～ 16h期间的对照组和加药组 (1.0 μmol/LAs2 O3 )均有表达 ,加药组较对照组明显减低 (P <0 .0 5 ) ,但无时间依从性。结论 :As2 O3 可抑制NF κB的表达 ,诱发凋亡 ;NB4 细胞通过Caspase途径凋亡 ,顺序可能为Caspase 8→Caspase 6→Caspase 3,其中 ,Caspase 6是活性较高的成员之一 ;As2 O3 作为NF κB的有效抑制剂 ,可能对多种肿瘤有潜在的治疗意义。     

三氧化二砷对肝癌细胞表达PTTG1和VEGF的影响及其意义

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721的作用及其可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测As2O3对两种细胞的生长活性;用流式细胞仪测定经不同浓度As2O3溶液处理后的两种细胞的周期变化,并用Annexin V-FITC与PI双染法检测细胞凋亡;用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测As2O3对两种细胞垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响;用蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测As2O3对两种细胞PTTG1和VEGF蛋白表达的影响.结果 As2O3可显著抑制BEL-7402和SMMC-7721细胞的生长,并呈量效关系(r=0.973,P<0.01;r=0.985,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为4.38 μmol/L和5.16 μmol/L.BEL-7402和SMMC-7721经As2O3处理后均发生显著凋亡(P<0.01).As2O3能显著下调两种细胞PTTG1和VEGF mRNA及蛋白的表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期.结论 As2O3可有效抑制人肝癌细胞的生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期及下调PTTG1和VEGF的表达有关.     

三氧化二砷对非APL急性白血病细胞的毒性作用观察

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病(APL)以外的急性白血病细胞的细胞毒性及其与其他化疗药物相互作用情况。方法 用噻唑蓝(MTT)法检测0．1μmol／L、0．5μmol／L、1．0μmol／L，和6．0μmol／L的As2O3对27例急性白血病患者的白血病细胞的细胞毒性作用，观察了1．0μmol／L的As2O3与柔红霉素(DNR)、阿糖胞苷(Ara-C)、依托泊甙(VP-16)、长春新碱(VCR)和三尖杉酯碱(H)的相互作用。结果 0．5μmol／L，以上浓度的As2O3可抑制非APL急性白血病细胞生长，与DNR、Ara-C、H和VP-16联合作用时协同和相加作用占优势，分别占59．3％、74．1％、85．7％和51．9％，而与VCR联用时拮抗作用占优势，占59．3％。结论 As2O3是治疗非APL急性白血病的潜在药物，As2O3可与DNR、Ara—C、H或VP-16联合组成新的化疗方案。