减毒沙门氏细胞为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建

目的：构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法：设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir，含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件，插入pTriEx真核启动子CMV IE下游，构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒16型L1L7，融合基因，插入pCMVnir，制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL3261，厌氧诱导表达，SDS－PAGE和Western blot分析检测Nir启动子的活性。结果：经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析，成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL3261，厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论：成功构建了一种与胞内寄生细菌（减毒沙门氏细菌）匹配的双启动子DNA疫苗新型载体，并构建了HPV16pCMVnirL1E7新型DNA疫苗。     

减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建

目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 ,并构建了HPV16pCMVnirL1E7新型DNA疫苗     

双启动子DNA疫苗载体pCMVnir的构建及其启动子的活性

目的：研制携带CMVie和NirB两种双启动子的DNA疫苗新型载体pCMVnir(pCN)。方法：设计细菌IVI启动子nirB，置换pTfiEx-4中plO和T71ac启动子，获得pCN，将报告基因pEGFP-N1和pDsRed2-N1分别插入pCN构建成pCN—EGFP和pCN—DsRed两种报告质粒，转化减毒沙门菌Salmonella SL3261和大肠杆菌DH5d；同时采Fugene脂质体，转染Hela细胞和前列腺细胞，检测pCN启动子的活性。结果：pCN的两个启动子都可高效转录和表达两种荧光报告基因，并且nirB是温和厌氧依赖性的。结论：成功构建了一种双启动子DNA疫苗表达载体pCN。     

表达幽门螺杆菌UreB减毒鼠伤寒沙门氏菌对小鼠的免疫保护作用

目的：构建表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B亚单位（UreB)减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌,研究其对小鼠抗H.pylori的免疫保护作用。方法：用PCR扩增ureB,将其克隆入高效原核表达质粒pTrc99A,进行基因测序,重组质粒鉴定后导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261。用SDS聚丙烯安凝胶电泳、Western blot和薄层扫描进行目的蛋白表达分析。C57BL／6小鼠用重组菌免疫,4周后用H.pyloriSS1攻击,再4周后处死小鼠,取胃做快速尿素酶试验和H.pylori定量培养,对照观察免疫效果。结果：构建了携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB,并将它成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261。重组菌SL3261(pTrc99A-ureB）表达了约66ku的UreB。与对照组相比,重组菌免疫组H.lpylori定植水平明显下降（P＜0．05）。结论：构建了表达H.pylori UreB的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌,该菌株对C57BL／6有免疫保护作用。     

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用

目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用.方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗.口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只.治疗组予109cfu/0.4 ml疫苗菌灌胃,1次/周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒.末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价.结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-na-pA核苷酸和蛋白质的同源性均＞98%.免疫后4周治疗组75%(3/4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P＜0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高.结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础.     

减毒鼠伤寒沙门菌作基因递呈载体的体外试验

目的　体外情况下验证鼠伤寒沙门菌作为基因递呈载体 ,将基因转染入真核细胞的能力 .方法　构建增强绿色荧光蛋白 (EGFP)真核表达载体 pc DNA3.1(+) / EGFP,将重组 pc DNA3.1(+) / EGFP质粒和 pc DNA3.1(+)空载体用电穿孔法分别转入减毒鼠伤寒沙门菌 .分别用 2种重组细菌体外情况下感染小鼠腹腔灌洗巨噬细胞 ,培养 4 8h后 ,流式细胞仪检测两组小鼠巨噬细胞荧光强度 ,验证鼠伤寒沙门菌作为基因递呈载体的能力 .结果　成功构建了 pc DNA3.1(+) /EGFP重组鼠伤寒沙门菌 ;感染细胞培养 4 8h后 ,流式细胞仪检测表明 pc DNA3.1(+) / EGFP重组减毒鼠伤寒沙门菌感染的小鼠巨噬细胞荧光细胞百分比为 4 0 .6 % ,荧光强度为0 .92 7,均明显高于对照组 (分别为 3.8% ,0 .345 ,P<0 .0 1) .结论　减毒鼠伤寒沙门菌是一种有效的基因递呈工具 ,可将外源基因转入真核细胞并在其中表达 ,为进一步应用其研制口服 DNA疫苗奠定了基础 .     

表达幽门螺杆菌UreB减毒鼠伤寒沙门氏菌对小鼠的免疫保护作用

[目的]构建表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hplori)尿素酶B亚单位(UreB)减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌,研究其对小鼠抗H.pylori的免疫保护作用.[方法]用PCR扩增ureB,将其克隆入高效原核表达质粒pTrc99A,进行基因测序,重组质粒鉴定后导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL261.用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westernblot和薄层扫描进行目的蛋白表达分析.C57BL/6小鼠用重组菌免疫,4周后用H.pyloriSS1攻击,再4周后处死小鼠,取胃做快速尿素酶试验和H.pylori定量培养,对照观察免疫效果.[结果]构建了携带ureB的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB,并将它成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌SL261.重组菌SL3261(pTrc99A-ureB)表达了约66ku的UreB.与对照组比,重组菌免疫组H.pylori定植水平明显下降(P＜0.05).[结论]构建了表达H.pyloriUreB的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌,该菌株对C57BL/6有免疫保护作用.     

携带幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建

目的 构建含幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法 抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术从基因组DNA扩增ureB基因,克隆入pucmT载体,检测ureB基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应进行鉴定。重组载体pIRES-ureB转入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再次转入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES-ureB转染COS-7细胞,SDS-PAGE Western印迹法检测pIRES-ureB表达蛋白的免疫原性。结果 扩增出长约1700bp的ureB基因,测序结果表明扩增出的ureB基因与基因库Hp ureB序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实ureB基因克隆人真核表达载体pIRES,并成功构建了Hp ureB基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,并且Westem印迹法检测到特异性的蛋白条带。结论 构建了具有免疫反应性的Hp UreB减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其体内的免疫作用奠定了基础。     

携带flk-1的减毒沙门疫苗菌抗胶质瘤血管生成的研究

目的观察表达鼠血管内皮生长因子受体2（VEGFR2，flk-1）的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌对胶质瘤荷瘤小鼠的抗肿瘤血管及肿瘤生长抑制作用。方法构建真核表达载体pcDNA3、1-flk-1通过电转化法将pcDNA3．1-flk-1导入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中，经由胃管饲于C57BL／6J小鼠，对胶质瘤荷瘤小鼠进行免疫预防及治疗。通过观察免疫动物的生存期，免疫荧光法检测肿瘤血管密度，评价重组疫苗菌的抗血管及肿瘤生长抑制作用。分离免疫小鼠的脾细胞，分析重组疫苗菌免疫后小鼠体内的特异性细胞毒性T细胞（CTL）应答。结果重组疫苗菌免疫能够明显减少肿瘤血管密度，延缓胶质瘤的生长，延长小鼠生存期，获得明显的抗肿瘤效果。重组疫苗菌免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞产生针对flk-1的CTL活性。结论表达鼠flk-1的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌经口服免疫，可打破小鼠对于自身抗原flk-1的免疫耐受，诱导小鼠产生抗flk-1的特异性免疫反应，特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞，预防和治疗小鼠胶质瘤。     

幽门螺杆菌尿素酶减毒鼠伤寒杆菌疫苗诱导小鼠黏膜免疫应答的研究

目的研究表达幽门螺杆菌((H．pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗口服免疫Balb／c小鼠后的黏膜免疫应答状况。方法将已构建成功的表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3261／pTC01-UreB口服免疫Balb／c小鼠，12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应。结果疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性抗体IgA和IgG，病理学检查显示疫苗组小鼠较对照组小鼠胃黏膜炎症程度的差异无统计学意义。结论表达H．pylori UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261／pTC01-ureB能够诱导小鼠产生抗H．pylori的黏膜免疫，可用作抗H．pylori感染的口服疫苗。     

经络腧穴理论的形成与发展

从<脉书·十一脉><黄帝内经>等文献人手,梳理了血气、经络、腧穴理论的形成与发展,简要介绍了四肢部的基本腧穴、躯体部要穴,以及腧穴配伍的基本要义.     

载脂蛋白的结构和功能与病毒病的预防和治疗

载脂蛋白（apo）是脂蛋白的重要组成成分,其主要功能是调节酶活性,介导细胞受体与脂蛋白结合,保持脂蛋白结构的稳定性。目前已发现数十种载脂蛋白,其结构的显著特点是分子中具有多个双性alpha螺旋及Beta-折叠结构。载脂蛋白的这种双性alpha螺旋结构是其结合及转运脂质的结构基础。在HIV外壳结构中的一种糖蛋白（gP）也具有这种alpha螺旋结构。近年研究表明,载脂蛋白和由载脂蛋白组成的脂质体还具有抗肝炎病毒、抗HIV病毒、抗单纯疱疹和中和细菌内毒素的功能。以脂蛋白和载脂蛋白为主要成分构成的脂质体已成为运载抗病毒和抗肿瘤药物受体的靶向性载体。     

神经病学与神经解剖学优化整合的评价与分析

目的评价神经病学与神经解剖学优化整合教学法的教学效果,寻找存在的问题及解决对策,为今后的神经病学教学改革提供参考。方法采用问卷调查、访谈的方式,分析神经病学教改后的教学效果、对学生学习态度的影响、教学中存在的不足。结果教改班的教学效果、对学生学习态度的改善优于非教改班(P<0.01)。结论神经病学与神经解剖学优化整合的教学改革效果显著,达到了预期的目的。     

析议痰瘀同源、互结、同治

目的:探讨痰瘀相关,意在梳理痰瘀知识、并强调痰瘀相关的重要性。方法:通过多角度地分析、刍议"痰瘀同源"、"痰瘀互结"、"痰瘀同治"等痰瘀经典理论的方式论述痰瘀相关。结果:痰与瘀是中医界里重要的元素,痰与瘀互结是许多疾患共同的病机,痰瘀同治是常用治法。结论:痰瘀同源、互结、同治,不但在临床上有着实用的指导意义,又能与时俱进、在探究中创新。     

新生儿游泳对生长发育的影响研究

目的:探讨新生儿游泳的护理以及对生长发育的影响。方法:按照知情同意制度,选取125例实施游泳的新生儿为观察组,随机选取同期未游泳的新生儿为对照组(125例)。观察两组新生儿出生后42d头围、生长和体重的变化,比较两组生后7d、15d和28d的24h摄乳量。结果:42d后游泳组的婴儿头围、生长、体重增长明显,特别是体重增幅较大,两组统计学有明显差异;游泳组摄乳量从第7天开始均高于对照组,出生后28d更是明显增多,有显著统计学意义。结论:游泳有利于新生儿增加摄乳量,促进新生儿体格发育。     

“医信融创”教育模式的构建与实践探索

从必要性、要求及实质3个角度梳理了“医信融创”教育的内涵,并在此基础上探索“医信融创”教育的模式。“医信融创”需要遵循由“融”到“创”的逻辑主线,通过“融行-融智-融心”的过程最后走向“创新”的目的。最后以山西医科大学的实践案例证明了“医信融创”教育的必然性和可行性。     

卵巢子宫内膜样癌的CT、MRI诊断与病理分析

目的：探讨卵巢子宫内膜样癌（OEC）的CT、MRI表现及病理基础。方法：回顾性分析经手术病理证实的8例OEC的CT、MRI表现,并与手术和组织病理学结果进行对照分析。结果：8例OEC位于左侧5例,右侧3例。肿瘤最大径4．5～17．5cm,平均9．2cm。全部肿瘤均呈囊实性,6例形态不规则呈分叶状,2例呈圆形或卵圆形。肿瘤边界部分模糊7例,清楚1例。CT平扫：肿瘤实性成分cT值37～46Hu,平均4lHu,囊性成分cT值14～40Hu,平均25Hu;增强后肿瘤实性成分呈中等程度强化,动脉期cT值6l～77HIJ,平均66Hu,实质期cT值65～78HU,平均71HU。MR平扫：T2wI实性成分呈等信号,囊性成分呈低信号,T2wI实性成分呈稍高信号,囊性成分呈高信号,增强后肿瘤实性成分中等程度强化。8例OEC中合并子宫体内膜癌2例,其中l例经MRI检查,表现为子宫体部内膜不规则增厚,T2wI呈等信号,TnwI呈稍高信号,增强后呈中等程度强化,1例合并同侧卵巢巧克力囊肿。结论：CT、MRI能较好地反映OEC的病理特征,清晰显示肿瘤的形态、内部结构及邻近结构侵犯等情况,具有重要的定性价值,并为临床选择合理治疗方案提供依据。     

瘿病源流简析

以先秦两汉、隋唐、宋金元、明清四个时期,将瘿病的发展总结为理论奠基期、方药汇集期、方药充实期和应用发展期。通过对中国历代医学文献中有关瘿病内容的梳理,追溯有关瘿病理、法、方、药认识的历史,厘清前人对瘿病在不同历史时期的表述特点,以及前人对这一疾病认识的发展脉络,为现今中医药防治瘿病提供理论依据和启示。     

针灸推拿与康复实验室一体化建设实践与思考

通过对独立学院针灸推拿康复实验室建设模式的分析,提出构建适合医科独立学院内涵式发展的实验室一体化建设的可行性,以期探索一种既实现资源共享,又能提高学生实践能力的创新型实验室构建模式。     

教考分离的实践与探索

通过对学校三个年级学生使用“基础医学课程国家试题库”后的情况分析,认为教考分离是今后考试工作的一个趋势。但目衣使用的试题库在知识点的构成,个别试题质量以及适应性方面有待改进。因此有必要建立适合我校的,反映最新学科进展的试题库,以利于提高教学质量。