阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的检测及耐药性分析

目的调查产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶阴沟肠杆菌基因型及其耐药性,以期为临床治疗提供依据。方法使用VITEK-AMS鉴定细菌;采用三维试验检测阴沟肠杆菌的ESBLs与AmpC酶表型;β-内酰胺酶耐药基因型检测采用PCR扩增技术;耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)指南进行药敏试验。结果86株阴沟肠杆菌中ESBLs携带率为48.8%;CTX-M型为主要类型,其中CTX-M-3亚型为27.9%,CTX-M-9亚型为16.3%,CTX-M-14亚型为3.4%;SHV-12型为18.6%;11株同时产ESBLs与AmpC酶,占12.8%,31株单独产ESBLs(36.0%),8株单独产高产AmpC酶(9.3%);亚胺培南对ESBLs菌株的敏感率为100.0%;8株产ESBLs菌株接合试验成功。结论CTX-M型与SHV-12型是阴沟肠杆菌ESBLs的主要基因型。ESBLs可以通过质粒接合试验进行水平传播。     

产超广谱β-内酰胺酶菌在老年患者中的感染

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶菌在老年患者中的感染情况，指导临床合理使用抗菌药物。方法 对1997年1月～2001年10月541份老年患者的各类标本中分离出的细菌进行分析，采用双纸片协同试验检测产超广谱β—内酰胺酶菌株，纸片扩散法测定产超广谱β-内酰胺酶菌株对17种抗菌药物的敏感性。结果 产超广谱β—内酰胺酶菌株的总检出率19．6％；产超广谱β—内酰胺酶菌株对亚胺培南和头孢哌酮／舒巴坦的敏感性达100％。结论 产超广谱β—内酰胺酶菌在老年患者中的感染率较高，临床宜选用亚胺培南和头孢哌酮／舒巴坦治疗。     

产新德里金属β-内酰胺酶型细菌的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)是近来发现的由新的超级耐药基因编码的一种耐药酶.编码该酶的基冈位于质粒等町移动遗传因子上,使得该类酶基因可在细菌间广泛传播.产此类酶的细菌对几乎所有现存的抗生素耐药.此文就NDM-1的流行病学特征、分子生物学特性和耐药机制等作了综述.     

湖南地区SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的 了解湖南地区产SHV型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的检出情况,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法 收集、鉴定分离菌株,进行ESBLs检测;PCR扩增blaSHV基因;对PCR产物测序确定其基因型;并通过随机扩增多态性DNA(RAPD)进行菌株同源性分析.结果 171株多药耐药的肠杆菌科中共有26株菌携带blaSHV基因,PCR产物经测序共检出5种基因型:9株携带SHV-28、7株携带SHV12、7株携带SHV-1、2株携带SHV-11和1株携带SHV-5;RAPD结果显示,19株肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,5株阴沟肠杆菌分别为不同的RAPD类型.结论 SHV-12是湖南地区主要流行的SHV型ESBLs,并且在产SHV型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中存在菌株间的克隆传播,未发现产SHV型ESBLs的大肠埃希菌.     

产新德里金属β-内酰胺酶型细菌的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)是近来发现的由新的超级耐药基因编码的一种耐药酶.编码该酶的基冈位于质粒等町移动遗传因子上,使得该类酶基因可在细菌间广泛传播.产此类酶的细菌对几乎所有现存的抗生素耐药.此文就NDM-1的流行病学特征、分子生物学特性和耐药机制等作了综述.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的分子流行病学研究

目的调查北京医院住院患者2002年1～8月期间产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率、耐药情况和各种基因型的流行分布. 方法采用浓度梯度法对86株大肠埃希菌和132株肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物进行最低抑菌浓度测定,采用酶抑制剂增强法对产ESBLs菌株作确认试验;等电点测定及PCR扩增对产ESBLs菌初步分型,然后对PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型,并做结合实验. 结果肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产ESBLs细菌阳性率分别为18.9%和29.1%, ESBLs菌合计的阳性率为22.9%;ESBLs阳性菌对抗生素的耐药率明显高于ESBLs阴性菌;在50株产ESBLs阳性菌株中,TEM型31株(62%)均为TEM-1型;CTX-M型26株(52%),其中CTX-M-14型11株,CTX-M-22型9株,CTX-M-24型 5株,CTX-M-13型1株;SHV型22株,占44%,SHV-1型5株,SHV-12型5株(4株菌被结合实验结果证实含有SHV-12型基因的质粒),SHV-2a型3株(2株菌含有该型基因质粒),2株SHV-2(2)型(2株菌含有该型基因质粒),未分出亚型7株,同时结合实验也证实不含有SHV型基因的质粒. 结论 CTX-M型和SHV型是北京医院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

多重耐药铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶基因研究

目的调查多重耐药铜绿假单胞菌(PAE)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的流行状况。方法采用琼脂稀释法对35株临床分离的PAE进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测7种ESBLs基因。结果35株PAETEM、OXA、PER、GES的阳性率分别为51.4%、42.8%、31.4%、22.9%,而SHV、VEB、CTX-M-1基因均阴性。结论我院临床分离PAETEM、OXA、PER、GES基因携带率高,检出GES基因为国内首次报道。     

三种产超广谱β-内酰胺酶细菌的分析

目的：分析产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的常见肠杆菌的耐药性及特点。方法：对2002年6月～2003年9月分离的肠杆菌科细菌用VITEK32及GNI鉴定卡和GNI。鉴定卡鉴定和药物敏感试验。结果：在检测的肠杆菌科细菌中,肺炎克雷伯茵、大肠埃希茵和阴沟肠杆菌的产酶率分别为33．02％、28．44％、35.2％,产ESBLs菌对l7种抗生素的耐药率与不产ESBLs茵相比差异有显著性。结论：治疗产ESBLs菌引起的感染,应选用亚胺培南、美罗培南、β-内酰胺类抗生素／酶抑制剂复合药、第四代头孢类。     

多药耐药肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶基因分析

目的研究临床分离的多药耐药肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型,为临床治疗产ESBLs的肠杆菌科细菌提供依据。方法收集2011年5月-2012年5月临床分离的27株肠杆菌科细菌,运用VITEK-2药敏试验复合板进行药敏试验,分析其耐药性,利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs基因blaCTX、blaTEM和blaSHV;测序结果与GenBank数据库进行比对分析,以确定ESBLs的主要基因亚型。结果27株肠杆菌科细菌均呈现多药耐药性,其对头孢菌素类、青霉素类和碳青霉烯类的耐药率为40.7%~100.0%;PCR扩增出18株细菌携带2种以上ESBLs基因,6株携带1种ESBLs基因,有3株细菌未检测到ESBLs基因;ESBLs基因亚型主要为blaCTX-M-3、blaTEM-1和blaSHV-12。结论医院多药耐药的肠杆菌科细菌产ESBLs基因较普遍,其主要亚型为blaCTX-M-3、blaTEM-1和blaSHV-12。     

产超广谱β-内酰胺酶表型及基因型分布

目的了解淮北地区3所医院,临床分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs表型和基因分布. 方法用1999年NCCLS推荐的初筛试验,从 147株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中筛选出可疑产ESBLs细菌,并用确证试验加以确认,然后用PCR的方法扩增其基因型. 结果116株大肠埃希菌和31株肺炎克雷伯菌中,共检出69株产ESBLs(46.9%),其中大肠埃希菌51株(42.2%),肺炎克雷伯菌18株(58.1%);将初筛得到的可疑菌株用纸片扩散确证法,头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸测定,检出69株产ESBLs细菌,而用头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs阳性菌为32株;PCR扩增基因型阳性结果为TEM型 119株、SHV型10株、CTX-M型68株、OXA型18株. 结论淮北地区ESBLs的检出率为46.9%,头孢噻肟检测ESBLs的敏感性明显高于头孢他啶;基因型以CTX-M型为主,有些菌株同时携带≥2种耐药基因.     

革兰阴性杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶调查研究（首次发现产blaCTX-M-14的斯氏普罗威登斯菌）

目的调查某院临床分离的革兰阴性（G^-）杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）株的流行情况，并确定其基因型。方法收集2004年10月--2005年7月临床标本分离的多重耐药G^-杆菌233株，按美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的方法进行ESBLs表型确证试验，聚合酶链反应（PCR）法对表型阳性株进一步进行CTX-M酶基因型的扩增，对PCR产物测序并确定其基因型。结果从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌和斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M型ESBLs，首次从斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M-14型ESBLs。结论该地区多种G肠杆菌科细菌携带CTX-M型ESBLs，斯氏普罗威登斯菌也能产生CTX-M型ESBLs。     

显色培养基快速检测大肠菌群和大肠杆菌效果的研究

目的 评价大肠菌群（Coliform）和大肠杆菌（Escherichia coli）复合显色培养基（CCEA）的检测效果。方法 本实验室研究的显色培养基CCEA与经典培养基结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）和国外两种同类商品化显色培养基（AgarⅠ和AgarⅡ）作对比,分别对11种质控菌株、添加大肠杆菌或大肠菌群的13种无菌样品以及4种实际样品进行检测,对检测结果进行统计分析,以及观察对实际样品检测的符合率情况。结果 CCEA具有良好的选择性;对7种质控菌株检验结果的分析,CCEA与VRBA和AgarⅡ比较无统计学意义;CCEA比AgarⅠ长出菌落数略多,有统计学意义。对13种无菌样品中添加大肠杆菌或大肠菌群检验结果的分析,CCEA比VRBA长出菌落数略多,有统计学意义;CCEA与AgarⅠ和AgarⅡ比较无统计学意义。对4种实际样品中大肠菌群检验结果的分析,CCEA与VRBA、AgarⅠ和AgarⅡ比较无统计学意义;大肠菌群经验证总体符合率分别为90％、71．88％、86．25％和81、25％,即符合率大小为CCEA〉AgarⅠ〉AgarⅡ〉VRBA。对4种实际样品中大肠杆菌检验结果的分析,CCEA与AgarⅠ和AgarⅡ比较无统计学意义;大肠杆菌经验证总体符合率均为100％。结论 本实验室研究试制的显色培养基CCEA优于经典培养基VRBA并与国外两种同类显色培养基AgarⅠ和Agar Ⅱ总体检测效果无统计学意义。     

2010年度卫生部全国细菌耐药监测报告:肠杆菌科细菌耐药监测

目的 了解2010年度全国临床分离的肠杆菌科细菌对常用抗菌药物的耐药性.方法 卫生部全国细菌耐药监测网成员单位,按照监测方案要求,收集临床分离肠杆菌科细菌,进行药物敏感性测试;根据CLSI 2010标准,判断敏感性,用Whonet 5.6软件处理数据.结果 2010年度全国6大地区129所医院参加了监测,共收集肠杆菌科细菌105 782株,分离量居前3位的依次为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及阴沟肠杆菌,分别占44.7％、28.5％及9.2％;敏感性最高的抗菌药物为碳青霉烯类,亚胺培南对绝大多数细菌的耐药率均＜10.0％;另外除志贺菌对美罗堵南耐药率为8.8％外,其余各菌种对美罗培南耐药率均＜5.0％;头孢噻肟不敏感的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对各类抗菌药物的耐药率多高于敏感株.结论 肠杆菌科细菌对抗菌药物呈现不同程度的耐药,碳青霉烯类抗菌药仍然是活性最高的药物,但已经出现耐药菌株,应引起足够的重视.     

First detection and molecular characteristics of caprine kobuvirus in goats in China

Caprine kobuvirus (CKoV), a member of the genus Kobuvirus, has only been identified in South Korea and Italy until now. In this study, 24 goat diarrheic fecal samples were collected from 3 farms in Sichuan province, China, and 87.5% (21/24) samples were detected as CKoV positive by RT-PCR. Meanwhile, full-length VP0, VP3, and VP1 genes were simultaneously cloned from 17 clinical samples. Phylogenetic analysis showed that all CKoV strains were most closely related to porcine kobuvirus based on amino acid (aa) sequences of VP0 and VP3 proteins, but CKoV strains were closely related to with Aichivirus B strains (ferret, bovine, and sheep kobuvirus) based on aa sequences of the VP1 protein. Interestingly, compared with known CKoV strains in the GenBank database, Chinese CKoV strains have unique amino acid changes in VP0 and VP1 proteins. Moreover, the first Chinese CKoV nearly complete genome was successfully obtained from a diarrheic fecal sample, named SWUN/F11/2019. Compared with the two known CKoV strains, five aa mutations (S60A, L252I, V267T, I, V 306 L, V331I) were found in the VP0 gene and 7 aa mutations (S57N, G, T243A, V244I, T, A248V, L, S251A, R252H, and M255L) were found in VP1 in the SWUN/F11/2019 genome. This was the first report of the detection and molecular characteristics of CKoV from goats in China, which could be helpful for improving the understanding of the prevalence and genetic evolution of CKoV.     

抗氯菊酯人源scFv抗体筛选与鉴定

目的 筛选氯菊酯人源单链可变区（scFv）抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以氯菊酯作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮＂吸附-洗脱-扩增＂筛选过程,随机挑选抗氯菊酯的100个克隆,利用酶联免疫吸附法（ELISA）、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与氯菊酯结合活性较强的scFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定Sfi Ⅰ/Not Ⅰ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠杆菌XL1-Blue,提取质粒进行酶切鉴定分析.结果 经过筛选100个克隆中有18株克隆ELISA的吸光度（A值）-490 nm波长（A490nm）值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白（BSA）进行交叉反应,确定有5株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化感受态细胞XL1-Blue.结论 提取质粒酶切片段与目的相符;为下一步其特异性亲和力的研究创造了条件.     

耐药柠檬酸杆菌属β-内酰胺酶检测

目的了解安徽医科大学第一附属医院临床分离的耐药柠檬酸杆菌属产β-内酰胺酶的情况。方法采用琼脂稀释法测定17种抗菌药物对临床分离的52株柠檬酸杆菌最低抑菌浓度（MIC）,用改良三维试验检测31株柠檬酸杆菌ESBLs、AmpC、MBL的产酶情况,再用聚合酶链反应（PCR）法扩增β-内酰胺酶基因。结果31株柠檬酸杆菌对多种抗菌药物耐药,三维试验检出24株菌产ESBLs,3株菌产AmpC酶,2株同时高产AmpC酶和ESBLs,未检出MBL;PCR检出20株菌携带blaTEM基因,1株菌携带blaSHV基因,8株菌携带blaCTX-M-1基因,15株菌携带blaCTX-M-13基因,5株菌携带blaCIT基因。结论31株多重耐药的柠檬酸杆菌同时产〉1种的ESBLs及高产AmpC酶,是其对β-内酰胺类药物耐药的重要原因。     

鲍氏不动杆菌耐药性和氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶基因研究

目的了解我国浙江湖州地区鲍氏不动杆菌(ABA)耐药性和氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶基因存在状况. 方法收集2000年7月～2002年12月分离自浙江湖州地区住院患者60株鲍氏不动杆菌进行耐药性和9种氨基糖苷类修饰酶基因、2种β-内酰胺酶基因检测. 结果该60株菌已呈多重耐药;49株检出氨基糖苷类修饰酶基因(81.7%);9种基因由高到低的检出率分别为:ant(3″)-Ⅰ(60.0%)、aac(6′)-Ⅰ(55.0%)、aac(3)-Ⅰ(51.7%)、ant(2″)-Ⅰ(20.0%)、aac(3)-Ⅳ(15.0%)、aac(3)-Ⅱ(11.7%)、aac(6′)-Ⅱ(10.0%)、aph(3′)-Ⅵ(3.3%)、aac(3)-Ⅲ(0);本研究ant(3″)-Ⅰ(AY551438)、aac(6′)-Ⅰ(AY536063)、aac(3)-Ⅰ(AY529103) 序列已登录GenBank;β内酰胺酶基因检出率分别为:TEM 100%、SHV 30.0%;本研究TEM-1(AY263331)、TEM-128(AY359287)、SHV-12(AY259163)、SHV-48(AY259164)、SHV-56(AY352599)序列已登录GenBank. 结论我国浙江湖州地区ABA菌已呈多重耐药;氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶基因携带率较高.