小鼠巨细胞病毒感染对调节性T细胞扩增的影响及机制

目的 在体内外水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对调节性T细胞(Treg)扩增的影响及其可能的机制.方法 建立全身播散型MCMV慢性感染模型,分别采用Western blot法和流式细胞术动态检测小鼠脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;模拟MCMV感染细胞的免疫环境,建立T淋巴细胞与MCMV感染的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养细胞模型,在培养前和共培养3 d后检测T淋巴细胞中的Foxp3蛋白表达水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率,RT-PCR方法检测MEF中转化生长因子(TGF)-βmRNA表达水平,双抗体夹心ELISA方法检测共培养上清中TGF-B蛋白表达水平.结果 整体研究发现,MCMV在感染慢性期可显著增加T淋巴细胞中Foxp3的蛋白表达水平和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率.体外细胞模型发现,MCMV感染在体外同样可以上调T细胞中的Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率.TGF-β在MEF中的基因表达和上清中的蛋白表达在MCMV感染后显著增加.结论 MCMV感染在体内外均可诱导Treg在数量上的扩增和功能上的活化;MCMV感染导致宿主细胞TGF-β表达水平升高,可能是其在外周诱导Treg种群扩增的重要机制之一.     

巨细胞病毒感染对Th1/Th2细胞分化特异性转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的动态观测小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子T_bet/GATA_3表达的影响。方法建立MCMV感染模型,20只模型鼠分别于接种MCMVSmith株后第3、5、7、14天各处死5只;另设20只正常小鼠作为对照。用蚀斑形成法测定脾组织病毒滴度;双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清Th1类细胞因子IFN_γ和Th2类细胞因子IL_10表达水平;Western_blot法检测脾组织转录因子T_bet/GATA_3表达强度。结果MCMV感染早期IFN_γ表达显著上升,在感染第3天达峰值,与正常对照组比较差异显著(P<0.01);随后迅速下降,在感染第14天左右基本降至基线水平。T_bet转录因子表达在感染3d后逐渐下降,第7～14天表达显著低于感染后第3天(P<0.01)。IL_10表达在MCMV感染第5天增高,随后下降;在感染第14天又升高,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。转录因子GATA_3表达水平在MCMV感染第7～14天显著高于感染后第3天(P<0.01)。小鼠脾组织病毒滴度在感染第5天出现第1次高峰,随后下降,在感染第14天又增高达到峰值。结论MCMV感染通过上调GATA_3转录因子和IL_10表达,下调T_bet转录因子和IFN_γ表达,导致Th1/Th2失衡,表现为Th2细胞优势应答状态,这可能是CMV感染致宿主特异性细胞免疫功能降低并逃避机体特异性细胞免疫攻击的原因之一。     

T-bet基因传递对支气管哮喘模型小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节作用

目的 应用携带T-bet基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-T-bet)经鼻干预支气管哮喘(哮喘)小鼠模型,探讨T-bet基因传递对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节及改善炎症的作用.方法 采用随机数字表法将40只健康的6～8周龄SPF级Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、rAAV介导的增强型绿色荧光蛋白(rAAV-eGFP)干预对照组(C组)及rAAV-T-bet干预组(D组),每组10只.B、C、D组以卵清蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,其中C、D组在第18、19天分别经鼻滴入等剂量rAAV-eGFP、rAAV-T-bet进行干预;B组处理方法同上,以等剂量的9 g/L盐水干预.于最后一次激发24 h后处死小鼠并取材.应用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织中转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3水平;计数BALF中细胞总数并分析其细胞类型;ELISA法测定BALF中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达水平.结果1.B组、C组中T-bet表达细胞的阳性率均明显低于A组(P均＜0.05),GATA-3表达细胞的阳性率明显高于A组(P均＜0.05),D组中T-bet表达明显增强,GATA-3表达则显著下降(P均＜0.05),Foxp3的表达阳性率在各组间的差异与T-bet的表达类似.2.D组BALF中细胞总数为(0.35±0.11)×109/L,其中EOS比例为0.04±0.02,虽高于A组,但明显低于B、C组(P均＜0.05);IL-4和IL-5分别为(158±55) ng/L、(68±22) ng/L,显著低于B、C组(P均＜0.05),高于A组但差异无统计学意义(P均＞0.05),而IFL-γ水平[(113±35) ng/L]明显低于B、C组(P均＜0.05),与A组比较水平相近(P＞0.05).结论 在建立小鼠哮喘模型的基础上,经鼻应用rAAV-T-bet干预可使T-bet基因顺利定向插入到受转染细胞的基因组中,成功编码T-bet蛋白,并进一步对哮喘小鼠模型发挥相应的免疫调节作用.     

调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用

目的 体外研究调节性T细胞（Treg）在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）机制中的免疫调节作用。方法 采用尼龙毛柱和MACS Treg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞（TdepTreg），建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量；流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+)，Tc2（CD3+CD8+IL4+），Th1（CD3+CD8-IFN-γ+），Th2（CD3+CD8-IL-4+）细胞比率变化；双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β（TGF-β）和IL-10蛋白表达水平。结果 TdepTreg与MEFMCMV共培养3 d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低，同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量，同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少，且均与Treg比率存在剂量相关性；而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高，与Treg存在正性相关。结论 Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用，并且由于Treg抑制作用的不均衡性，导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调，创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。     

先天性巨细胞病毒感染对婴幼儿的影响

为探讨先天性巨细胞病毒(CMV)感染对婴幼儿的影响,采用瞬态诱发性耳声发射(TEOAE)对65例先天性CMV感染儿及82例非感染儿于新生儿期进行听力筛查,并于生后6个月至4岁进行听力及智力随访.感染组发育商落后8例,对照组仅1例,二组差异显著.感染组新生儿期、随访时分别有7例9耳、9例11耳未通过TEOAE听力测试,对照组均为1例1耳未通过,未通过率感染组明显高于对照组.新生儿期、随访时双耳反应能量感染组明显低于对照组.14例进行了脑干听觉诱发电位(ABR)检测,感染组9例17耳听力异常,对照组1例1耳听力异常.提示先天性CMV感染对听力、智力的影响应引起长期关注.     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

宫内巨细胞病毒感染对新生儿心肌的影响

为研究宫内细胞病毒（CMV）感染的特点，我们对24例母亲孕早中期CMV－IgM阳性，而新生儿生后一周内CMV－IgM阴性进行了临床分析，结果显示其中5例仅以心肌受损为主要表现，如心动过缓、心肌酶明显异常等。提示应更加重视妊娠晚期CMV感染对胎儿的影响，心肌受损可以是宫内CMV感染的主要表现。     

先天性无症状性巨细胞病毒感染对婴儿期发育的影响

目的 通过对先天性无症状性巨细胞病毒(HCMV)感染的新生儿进行系统随访,观察其听力学、体格发育、智能发育、行为发育等多方面的改变,探讨先天性无症状性HCMV感染对婴儿期发育的影响.方法 按照1998年宜昌会议通过的<巨细胞病毒感染诊断方案>标准及美国Fowler标准确定先天性无症状性巨细胞病毒感染.2003年7月至2005年7月符合人选条件感染病例41例,对照组21例.进行静脉血荧光定量PCR(FQ-PcR)检测确定HCMV感染.感染组与对照组于新生儿期、3月龄、6月龄、1岁分别进行新生儿20项行为神经检查(NBNA)、听力学检查包括耳声发射听力检查(OAE)、听力脑干诱发电位检查(ABR)、Bayley婴幼儿发育量表评估发育智商、52项运动神经检查(Amid-Tison法)和体格发育检查、一般状况检查.结果 (1)两组新生儿12～14 d时加项NBNA得分分别为38.8±2.75和38.5±2.29,差异无统计学意义(t=0.98,P＞0.05).(2)ABR检查:感染组中23例做ABR检查者V波阈值升高异常率为15.2%;对照组21例未发现V波阈值升高,差异有统计学意义,所有病例均通过OAE检查.(3)感染组中38例1岁时行Bayley婴幼儿发育量表检查智力发育指数(MDI)及精神运动发育指数(PDI)分别为106.86±10.24和108.45±18.25,与对照组2l例(107.49±19.31和107.19±10.98)差异亦无统计学意义(t=0.33,P＞0.05,t=0.35,P＞0.05).(4)52项运动神经发育:两组比较,差异无统计学意义(t=0.02,P＞0.05).结论 (1)先天性无症状HCMV感染在婴儿期即可出现脑干听性反应V波阈值升高,而OAE听力筛查未能检出异常.(2)先天性无症状性HCMV感染对新生儿期行为神经、婴儿期智力、婴儿期神经运动发育无明显影响.     

母乳喂养对人巨细胞病毒感染婴儿免疫功能的影响

目的 探究母乳喂养对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染患儿免疫功能的影响。方法 回顾性分析2021年1月—2022年5月郑州大学附属儿童医院收治的135例喂养方式为母乳喂养的HCMV感染患儿的病例资料,根据母乳HCMV-DNA检测结果分为母乳阳性组(78例)和母乳阴性组(57例),再根据母乳HCMV-DNA载量中位数,将母乳阳性组患儿分为母乳高病毒载量亚组(39例)和母乳低病毒载量亚组(39例),分别比较母乳阳性组和母乳阴性组、母乳高病毒载量亚组和母乳低病毒载量亚组患儿外周血淋巴细胞亚群CD3⁺T、CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B百分率,CD4⁺T/CD8⁺T比值,IgG、IgM、IgA及尿液HCMV-DNA载量。结果 母乳阳性组和母乳阴性组、母乳高病毒载量亚组和母乳低病毒载量亚组患儿在CD3⁺T、CD3⁺CD4...     

哮喘缓解期患儿Th1/Th2相关上游转录因子及细胞因子的表达

目的从基因和蛋白质水平了解哮喘缓解期患儿T辅助淋巴细胞(Th)免疫平衡状况。方法选取24例哮喘缓解期和12例健康儿童作为对照,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(real time PCR)法分别测定外周血细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平及外周血单个核细胞(PBMC)中特异性转录因子T-bet、GATA-3表达情况。结果病例组血浆IL-4水平(37.14±12.77)ng/L显著高于对照组(27.08±6.12)ng/L,t=2.467 P<0.05;病例组PBMC中GATA-3的表达强度(5.45±1.11)较对照组(4.70±0.86)显著增高(t=2.049 P<0.05);病例组与对照组比较IFN-γ/IL-4及T-bet/GATA-3比率均显著降低(t=-2.208,-4.212 P<0.05,P<0.01)。结论哮喘缓解期患儿体内存在基因和蛋白质水平Th1/Th2平衡的紊乱,以Th2亚群亢进为主。     

哮喘患儿外周血调节性T细胞和 Th1/Th2 的变化及其与哮喘病情的关系

目的：通过测定哮喘患儿外周血 CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞（Treg）以及 Th1/Th2 比值变化,探讨其与哮喘病情的关系。方法：150 例哮喘患儿按临床表现分为急性期组 (94 例) 和缓解期组 (56 例), 其中急性期组按病情再分为轻度组 (54 例) 和重度组 (40 例)。应用流式细胞仪检测各组外周血 CD4+CD25+Foxp3+ Treg、CD4+IFN-γ+ Th1 和 CD4+IL-4+ Th2 水平,并与正常儿童（对照组,n=50）进行比较。结果：哮喘组 Treg 水平明显低于对照组 (P<0.01)：其中急性期组 Treg 水平明显低于缓解期组和对照组(P<0.01),重度组 Treg 水平则明显低于轻度组(P<0.01)。哮喘组 Th1/Th2 比值显著低于对照组 (P<0.01)。哮喘急性期组 Th1/Th2 比值显著低于缓解期组和对照组 (P<0.01)。哮喘患儿外周血 Treg 水平与哮喘的病情严重程度呈负相关 (r=-0.737, P<0.01),Th1/ Th2 比值与哮喘病情严重程度亦呈负相关 (r=-0.615, P<0.01),且Treg 的水平与 Th1/ Th2 比值呈正相关(r=0.856, P<0.01)。结论：哮喘患儿外周血Treg 水平明显降低,Th 亚群失衡,提示 Treg 和 Th 免疫在哮喘发病中具有重要作用。外周血Treg 水平与 Th1/Th2 比值可用来评估哮喘病情。     

CTLA-4Ig融合蛋白对病毒性心肌炎小鼠Foxp3+调节性T细胞的影响

目的 探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对柯萨奇B3病毒(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠的病死率、心肌病理改变、病毒复制和心肌组织中Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的影响.方法 106只4 ～ 6周龄健康雄性Balb/c小鼠,体质量为12 ～ 16 g,随机分为CTLA-4Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,CTLA-4Ig组、病毒组和IgG组小鼠腹腔注射半数组织细胞感染量(TCID50)为10-3/L的CVB3 0.15 ml,正常对照组小鼠接种0.15 ml不含病毒的Eagle液.CTLA-4Ig组、IgG组小鼠于接种病毒后6、72 h分别注射CTLA-4Ig(0.1 mg/kg)及IgG(0.1 mg/kg).接种病毒后第7天处死所有小鼠在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA的表达;采用免疫组织化学法检测Foxp3分子在心肌组织中的表达,并计算Foxp3+ Tregs所占浸润细胞数的百分率.结果 与病毒对照组相比较,CTLA-4Ig组小鼠病死率降低(80%比50%,P ＜ 0.05),心肌组织病理积分下降(1.78 ± 1.05比1.00 ± 0.72,P ＜ 0.05),心肌CVB3 mRNA表达减少(3.48 ± 2.89比0.81 ± 1.06,P ＜ 0.05);CTLA-4Ig组小鼠心肌组织中Foxp3+ Tregs所占浸润细胞数的百分率较病毒组明显增加(9.22 ± 2.28)% 比(5.42 ± 1.59)%,(P ＜ 0.05).结论 CTLA-4Ig可减轻VMC小鼠心肌炎症,降低心肌病毒复制及病死率,其机制可能与上调Foxp3+ Tregs比、抑制T细胞活化有关.     

Th17细胞与CD4~+CD25~+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的 探讨Th17细胞与CD4+CD25+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿48例,采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的比例,采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-6、TGF-β等mRNA表达;同期40例同龄健康儿童作为对照.结果 过敏性紫癜急性期患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01).Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.01).CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 Th17等促炎性T细胞高表达和CD4+CD25+调节性T细胞数量减少导致的免疫抑制效应不足,是导致过敏性紫癜免疫失衡的重要原因,IL-6高表达与此密切相关.     

Th17细胞和调节性T细胞与白血病的研究进展

T辅助性17(T helper17,Th17)细胞和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的分化过程与功能相互对抗,在白血病的发病、治疗及预后中发挥不同的作用.大多数白血病患者Th17细胞和Treg细胞的功能增强和(或)数量增加,Th17细胞主要功能是促进炎症反应,提高机体对白血病细胞的防御能力;Treg细胞主要介导免疫抑制和免疫耐受,抑制机体对白血病细胞的免疫反应,降低疗效.Th17细胞和Treg细胞与白血病的发病、治疗、预后等关系密切,人们有望通过干预初始T细胞的分化方向达到治疗白血病的作用.     

人巨细胞病毒感染婴儿γδT、Treg细胞和相关细胞因子的表达及临床意义

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染婴儿外周血γδT细胞、调节性T细胞（Treg）的表达和相关细胞因子的含量及其临床意义。方法 以22例HCMV感染婴儿（HCMV感染组）和22例门诊健康体检婴儿（对照组）为研究对象,流式细胞术检测两组外周血γδT细胞和Treg细胞的表达,ELISA法检测两组血浆IL-17、TGF-β1水平。结果 HCMV感染组的γδT细胞表达和IL-17水平高于对照组（P < 0.01）;Treg细胞表达和TGF-β1水平低于对照组（P < 0.01）。HCMV组的γδT细胞表达与Treg细胞表达、TGF-β1水平呈负相关（P < 0.05）,而与IL-17水平呈正相关（P < 0.05）;Treg细胞表达与TGF-β1水平呈正相关而与IL-17水平呈负相关（P < 0.05）,IL-17水平与TGF-β1水平无相关性（P > 0.05）。结论 HCMV感染婴儿存在γδT细胞和Treg细胞表达的失衡,γδT细胞可能参与了IL-17的分泌。