血管内皮细胞上清液对口腔颊黏膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的：观察血管内皮细胞上清液（ECS）对正常人口腔颊黏膜成纤维细胞（NM-FB）增殖活性的影响。方法：收集不同时间点、并配成不同比例的ECS干预NM-FB。结果：ECS12h能促进NM-FB的增殖,随着时间延长ECS促增殖能力逐渐增强,ECS48h促FB增殖能力达到最大（P〈0.05）;ECS/（ECS＋RPMI-1640）比值为1/4时可促NM-FB增殖,ECS稀释倍数越小,NM-FB的增殖率越高（P〈0.05）。ECS能促进FB的增殖,存在时效和量效依赖关系。结论：血管内皮细胞能通过分泌某些介质影响口腔颊黏膜成纤维细胞的生物学活性。     

槟榔碱对血管内皮细胞增殖和分泌NO的影响

目的：观察去除槟榔碱干预后血管内皮细胞（EC）增殖和分泌一氧化氮（NO）的变化。方法：采用MTT法检测去除槟榔碱干预后的EC存活率，硝酸还原酶法检测EC分泌NO量。结果：30μg／ml～90μg／ml槟榔碱干预EC 24h，去除刺激并继续孵育48h，EC的增殖能力可恢复，且分泌NO增多（p〈0．05）；但120μg／ml槟榔碱干预24h、30μg／ml～120μg／ml槟榔碱干预48h并继续孵育48h，EC的增殖能力难以恢复（P〈0．05）。结论：去除低浓度、短时间槟榔碱干预后EC增殖能力的恢复可能与具有自我保护效应的NO分泌量增加有关。     

槟榔提取物抑制人类口腔黏膜成纤维细胞生长的实验研究

目的通过比较正常口腔黏膜和口腔黏膜下纤维性变(OSF)组织中成纤维细胞(FB)增殖差异、检测槟榔提取物(ANE)对成纤维细胞增殖的影响,来探讨OSF的发病机理.方法对人类口腔黏膜成纤维细胞进行分离培养,然后用四唑盐(MTT)比色试验法检测OSF患者和正常人口腔黏膜FB增殖状况,并且观察ANE对FB增殖的影响.结果表示增殖水平的OD值在OSF-FB为0.254±0.045,高于NM-FB的OD值0.236±0.012(P<0.05),ANE以浓度-效应依赖关系抑制FB增殖.结论 OSF-FB细胞增殖率较NM-FB高;ANE对口腔黏膜FB有细胞毒作用,提示槟榔及其有效成分不完全是通过直接刺激FB增殖而诱发OSF.     

槟榔碱对血管内皮细胞增殖活动影响的实验研究

目的：观察槟榔碱对血管内皮细胞（endothelial cell,EC）增殖活动的影响。方法：采用MTT法检测槟榔碱干预后的EC存活率。结果：30～120μg/ml槟榔碱抑制EC的增殖,并呈浓度和时间依赖效应（P〈0.05）,60μg/ml槟榔碱干预EC24h细胞数量减少,120μg/ml槟榔碱干预EC72h细胞存活率达到最低（p〈0.05）。结论：一定浓度范围的槟榔碱可抑制EC的增殖。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α2的影响

目的：通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞（FB）表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变（OSF）发病机制中的可能作用。方法：体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞（FB）,培养基中加入不同浓度（0、10、20、40、80、160μg/ml）的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果：槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异（p〉0.05）,40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异（p〈0.05）。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势（p〈0.05）。结论：槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。     

槟榔碱诱导体外培养的血管内皮细胞凋亡研究

了解槟榔碱 (Arecoline)对培养的人脐静脉内皮细胞 (HumanUmbilicalVeinEndothelialCells ,HU VECs)凋亡的影响。方法 :不同浓度的槟榔碱处理体外培养的HUVECs ,用Hoechst3 3 2 5 8染色 ,在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性”梯状”条带。结果 :①槟榔碱能以时间和浓度依赖方式诱导培养的HUVECs发生凋亡 ,其细胞凋亡率较正常对照组明显增高 (P <0 .0 1)。② 90ug/ml槟榔碱诱导VEC凋亡的DNA片段琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA“梯状”条带。结论 :槟榔碱浓度和时间依赖性诱导HUVECs凋亡 ,VEC凋亡异常可能是口腔黏膜下纤维性变的重要发病机理之一     

槟榔提取物抑制人类口腔黏膜成纤维细胞生长的实验研究

目的通过比较正常口腔黏膜和口腔黏膜下纤维性变(OSF)组织中成纤维细胞(FB)增殖差异、检测槟榔提取物(ANE)对成纤维细胞增殖的影响,来探讨OSF的发病机理.方法对人类口腔黏膜成纤维细胞进行分离培养,然后用四唑盐(MTT)比色试验法检测OSF患者和正常人口腔黏膜FB增殖状况,并且观察ANE对FB增殖的影响.结果表示增殖水平的OD值在OSF-FB为0.254±0.045,高于NM-FB的OD值0.236±0.012(P<0.05),ANE以浓度-效应依赖关系抑制FB增殖.结论 OSF-FB细胞增殖率较NM-FB高;ANE对口腔黏膜FB有细胞毒作用,提示槟榔及其有效成分不完全是通过直接刺激FB增殖而诱发OSF.     

槟榔碱对口腔黏膜肌成纤维细胞分化的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变组织中肌成纤维细胞的来源。方法通过体外口腔黏膜角质形成细胞和成纤维细胞共培养，用免疫组化、反转录聚合酶链反应等方法观察α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果体外培养的口腔黏膜下纤维性变成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的阳性率为（85.80±3.56）％，正常口腔黏膜成纤维细胞中阳性率为（3.82±0.76）％。槟榔碱直接干预成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白的表达与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；角质形成细胞与成纤维细胞共同培养组成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达增强；角质形成细胞经槟榔碱预处理后与成纤维细胞共同培养组α-平滑肌肌动蛋白的表达强于无干预共同培养组。结论口腔黏膜下纤维性变组织中成纤维细胞向肌成纤维细胞分化可能是槟榔成分与角质形成细胞共同作用的结果。     

槟榔提取液对血管内皮细胞分泌内皮素 1 的影响

目的:观察在不同浓度槟榔提取液(aqueous areca nut extract,AANE)作用下血管内皮细胞(endothelialcell,EC)分泌内皮素 1(endothelin-1,ET-1)的变化,探讨 EC 及 ET-1 在口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibro-sis,OSF)发生发展中的作用.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,换入含终浓度分别为0、50、100、200、400、600、800μg/ml AANE 的无血清 DMEM 培养基,48 h 后用放射免疫法检测细胞培养上清液中 ET-1 的水平.结果:100μg/ml及以上浓度的AANE作用后,EC 分泌 ET-1 的量较未加 AANE 组显著增加,并呈浓度依赖性.结论:一定浓度的AANE 能使 EC 异常分泌 ET-1,可能参与OSF病理过程的发生发展.     

槟榔碱在口腔黏膜纤维性变及癌变发病机制中的作用

口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)是一种慢性、隐匿性、具有癌变可能的炎性疾病.咀嚼槟榔习惯与OSF的发生密切相关,本文对槟榔碱在OSF及癌变发病机制中的作用作一综述.     

Effects of arecoline, safrole, and nicotine on collagen phagocytosis by human buccal mucosal fibroblasts as a possible mechanism for oral submucous fibrosis in Taiwan

BACKGROUND: Oral submucous fibrosis (OSF) is associated with the betel quid chewing habit, and 86% of betel quid chewers in Taiwan are also smokers. Arecoline and safrole are major principles in the composition of betel quid, and nicotine is the main toxic ingredient of cigarettes. METHODS: To explore the pathogenesis of OSF, flow cytometry was used to compare collagen phagocytosis by fibroblasts from the normal and the OSF region of the same 15 OSF patients. RESULTS: The results indicated that heterogeneity of fibroblasts existed because collagen phagocytosis by fibroblasts from the normal region was higher than from the OSF region in the same patient. The percentage of phagocytic cells was significantly inhibited by 10, 25 and 50 microg/ml arecoline, safrole and nicotine in normal fibroblast cultures, respectively, and the percentage of phagocytic cells was significantly reduced by 25, 25 and 50 microg/ml arecoline, safrole and nicotine in OSF fibroblast cultures, respectively. Collagen phagocytosis by fibroblasts exhibited prominent dose-dependent inhibition as the concentration of arecoline, safrole, and nicotine increased. Besides, nicotine had a synergistic effect on arecoline- or safrole-inhibited collagen phagocytosis. CONCLUSIONS: The present study concludes that even in the same person, the collagen phagocytosis by fibroblasts is different between normal and OSF region. The deficiency in collagen phagocytosis by fibroblasts of the lesion might participate in the pathogenesis of OSF. Arecoline, safrole and nicotine, which are released in saliva during BQ chewing plus cigarette smoking, inhibit collagen phagocytosis by fibroblasts in a dose-dependent manner and may induce OSF formation in Taiwan's patients.     

槟榔碱及机械刺激构建大鼠口腔黏膜下纤维化模型

目的 利用槟榔碱和机械刺激构建Sprague-Dawley（SD）大鼠口腔黏膜下纤维化（OSF）模型。方法 采用两因素析因实验设计将48只大鼠分为8个组,每组6只。分别用不同浓度（0、0.5、2、8 mg·mL ^-1）槟榔碱涂擦及机械刺激 (有或无毛刷涂擦)。处理16周后测量开口度;取局部颊黏膜行苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化;并检测组织内Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（TGF-β1）和γ干扰素（IFN-γ）的表达情况。结果 2和8 mg·mL ^-1（中、高）浓度槟榔碱处理16周,颊黏膜出现了典型的OSF病理特征;开口度显著减小并且Ⅲ型胶原、TGF-β1表达显著增加（P<0.05）。机械刺激虽可导致黏膜Ⅲ型胶原、TGF-β1和IFN-γ表达增高（P<0.05）,但无病理学改变,开口度改变不显著。结论 中、高浓度槟榔碱有致OSF作用;机械刺激无法导致大鼠OSF的发生。     

槟榔碱及机械刺激构建大鼠口腔黏膜下纤维化模型

目的 利用槟榔碱和机械刺激构建Sprague-Dawley（SD）大鼠口腔黏膜下纤维化（OSF）模型。方法 采用两因素析因实验设计将48只大鼠分为8个组,每组6只。分别用不同浓度（0、0.5、2、8 mg·mL ^-1）槟榔碱涂擦及机械刺激 (有或无毛刷涂擦)。处理16周后测量开口度;取局部颊黏膜行苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化;并检测组织内Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（TGF-β1）和γ干扰素（IFN-γ）的表达情况。结果 2和8 mg·mL ^-1（中、高）浓度槟榔碱处理16周,颊黏膜出现了典型的OSF病理特征;开口度显著减小并且Ⅲ型胶原、TGF-β1表达显著增加（P<0.05）。机械刺激虽可导致黏膜Ⅲ型胶原、TGF-β1和IFN-γ表达增高（P<0.05）,但无病理学改变,开口度改变不显著。结论 中、高浓度槟榔碱有致OSF作用;机械刺激无法导致大鼠OSF的发生。