L-NNA减少大鼠脑缺血后脑区NO的生成(论著摘要)

近年来的研究已经肯定了一氧化氮（ＮＯ）参与脑缺血的损伤过程，选择易于透过血脑屏障的ωＮ－硝基左旋精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）并采用不同剂量，观察其对脑缺血时脑区ＮＯ生成的影响。１　材料和方法　雄性ＳＤ大鼠（每组１０只），随机分为假手术组、脑缺血１０ｍｉｎ组、脑缺血１０ｍｉｎ＋Ｌ－ＮＮＡ（０．５ｍｇ／ｋｇ）组、脑缺血１０ｍｉｎ＋Ｌ－ＮＮＡ（１ｍｇ／ｋｇ）组和脑缺血１０ｍｉｎ＋Ｌ－ＮＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ）组，实验当日所用的Ｌ－ＮＮＡ按需溶于１ｍＬ生理盐水（ｐＨ７．０），于缺血前３０ｍｉｎ腹腔注射，假手术组用１…     

亚低渐在全脑缺血再灌注损伤中对大鼠海马NO合成的影响

目的 通过研究亚低温对ＮＯ合成的影响,探讨亚低温脑保护效应的机制,方法 采用４－ＶＯ法制作全脑缺血模型。动物分为８组,均缺血１２ｍｉｎ,于再灌注３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、２ｈ、４ｈ后处死取材,测定海马区ＮＯ含量及ＮＯＳ活性。结果 ①低温３０及６０ｍｉｎ组ＮＯ含量较相应常温组显降低（Ｐ〈０．０１）,ＮＯＳ活性亦显降低（Ｐ〈０．０５）;②常温３０ｍｉｎ组ＮＯ含量、ＮＯＳ活性较高,６０ｍｉｎ组达到高峰     

大鼠全脑缺血再灌流过程中几个脑区的自由基体外自旋捕捉ES…

本研究采用自由基自旋捕捉剂ａ－ｐｈｅｎｙｌ－ｔ－ｂｕｔｙｌ ｎｉｔｒｏｎｅ（ＰＢＮ）进行体外自旋捕捉，用电子自旋共振波谱仪（ＥＳＲ）测定其加合物含量。动物模型采用ｗｉｓｔａｒ大鼠４血管阻断造成全脑缺血１０ｍｉｎ再灌流模型，分别于缺血１０ｍｉｎ、再灌５、１０、１５、３０、６０、１２０ｍｉｎ，１２、２４、４８、７２、１２０ｈ处死动物，分别取小脑、新皮层、海马、丘脑和纹状体等５个脑区进行体外自旋捕捉。测     

Wistar鼠全脑反复缺血再灌流6脑区中精氨酸加压素含量的动态研究

精氨酸加压素（ＡＶＰ）是脑内重要的神经递质，本研究采用４血管关闭的方法，制造Ｗｉｓｔａｒ大鼠全脑反复缺血再灌流长期生存动物模型，然后利用放免方法测定了缺血后存活不同时间大鼠额叶、颞叶、海马、丘脑、纹状体、脑干６个脑区的ＡＶＰ含量。发现缺血即刻各脑区ＡＶＰ无显著变化（Ｐ＞０．０５），缺血后１５天显著下降（Ｐ＜０．０１），３０天时继续下降（Ｐ＜０．０１），６０天时变化方趋稳定，９０天和１８０天时和对照组比较仍有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结果提示ＡＶＰ下降与脑对缺血选择易损伤性有关，ＡＶＰ参与了脑缺血病理生理的全过程。     

汉防己碱对缺血—再灌流大鼠脑NOS活性及超微结构的影响

用ＮＡＤＰＨｄ 组织化学和电镜技术研究了汉防己碱（Ｔｅｔ）对大鼠缺血再灌流脑一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及超微结构变化的作用。结果发现,缺血１５ ｍ ｉｎ,再灌流２ ｈ 后,海马超微结构出现明显的病理学损害,主要包括核周出现髓鞘样变,核周间隙增大,胞核均质化,大量片状软化灶,毛细血管周围水肿。Ｔｅｔ １０ 和２０ｍ ｇ／ｋｇ 缺血前３０ ｍ ｉｎ 腹腔注射可明显改善或避免出现上述缺血组织学改变。缺血１５ ｍ ｉｎ,再灌流２４ ｈ 后,皮层和海马ＮＯＳ阳性细胞数目显著增多,Ｔｅｔ５,１０ 和１５ ｍ ｇ／ｋｇ 缺血前３０ ｍ ｉｎ 腹腔注射,浓度依赖地抑制缺血再灌流所致的ＮＯＳ阳性细胞数目增加。这些结果提示,Ｔｅｔ可抑制缺血再灌流脑ＮＯＳ活性,减少ＮＯ产生,这可能与Ｔｅｔ减轻脑缺血再灌流的损害有关。     

全脑缺血再灌注兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素含量的变化

目的：采用大鼠全脑缺血再灌注模型,观察海马组织兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素含量的变化,研究分析脑缺血再灌注损伤中兴奋性氨基酸与钙平衡紊乱的变化和作用。方法：测定假手术组,缺血３０ｍｉｎ再灌注６０ｍｉｎ和缺血３０ｍｉｎ再灌注１２ｈ组,脑海马组织兴奋性氨基酸、线粒体钙、钙调素的含量。结果：缺血３０ｍｉｎ再灌注６０ｍｉｎ海马组织兴奋性氨基酸明显低于假手术组（Ｐ＜０．０１）,线粒体钙、钙调素含量显著性高于假手术组（Ｐ＜０．０１）,缺血３０ｍｉｎ再灌注１２ｈ组同假手术组比较没有显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：我们从鼠脑缺血再灌注时线粒体钙、钙调素含量升高证实钙平衡紊乱参于兴奋性氨基酸的缺血再灌注脑损伤过程     

脑缺血后脑组织一氧化氮合成酶基因表达及丹参影响的初步研究

一氧化氮（ＮＯ）具有神经介质或调质的功能，广泛参与体内的生理及病理过程，具有扩张血管和神经毒性作用。体内ＮＯ系通过一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）催化形成，并通过Ｃａ２＋／钙调素机理生成ＮＯ，因此ＮＯＳ是ＮＯ合成的关健因素。为研究脑缺血与脑组织ＮＯＳ的关系及丹参的影响，采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血模型，用地高辛精标记的ＮＯＳ探针进行原位杂交。结果示缺血对照组栓塞侧皮层和尾壳核ＮＯＳ基因表达显著增多，图像分析灰阶值为：缺血侧皮层１１６．２±１．０，非缺血侧１３４．５±０．７（Ｐ＜０．０１）；缺血侧尾核壳核１２２．０±０．７，非缺血侧１３７．５±０．８（Ｐ＜０．０１）。阳性细胞数：缺血侧皮层３２６．７±８．２，非缺血侧１０７．５±９．９（Ｐ＜０．０１）；缺血侧尾壳核２６２．２±３．５，非缺血侧７２．２±９．８（Ｐ＜０．０１）。虽然丹参组缺血侧皮层和尾壳核ＮＯＳ基因表达亦显著高于非缺血侧（Ｐ＜０．０１），但显著低于缺血对照组（Ｐ均＜０．０１），而两组非缺血侧比较无显著差异。结果表明，脑缺血后脑组织ＮＯＳ基因表达显著增多，丹参能部分下调缺血所致的ＮＯＳ基因的异常表达，这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

Wistar鼠全脑反复缺血再灌流6脑区中精氨酸加压素含量…

精氨酸加压素（ＡＶＰ）是脑内重要的神经递质，本研究采用４血管关闭的方法，制造Ｗｉｓｔａｒ大鼠全脑反复缺血再灌流长期生存动物模型，然后利用放免方法测定了缺血后存活不同时间大鼠额叶，颞叶，海马，丘脑，纹状体，脑干６个脑区的ＡＶＰ含量。发现缺血即刻各脑区ＡＶＰ无显变化（Ｐ＞０．０５），缺血后１５天显著下降（Ｐ＜０．０１），３０天时继续下降（Ｐ＜０．０１），６０时变化方趋稳定，９０天和１８０天时和对照组比     

大鼠脑冷冻伤后脑组织NOS活性的变化

目的研究大鼠脑组织冷冻伤后一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化规律。方法利用液氮杯硬膜外冷冻大鼠顶叶脑组织复制冷冻伤模型，测定大鼠脑冷冻伤后不同时间脑组织ＮＯＳ活性。结果大鼠冷冻伤后３０ｍｉｎ局部脑组织ＮＯＳ活性增加（Ｐ＜０．０５），６０ｍｉｎ达较高水平（Ｐ＜０．０１），２ｈ有所下降（Ｐ＜０．０５），６ｈ左右再次升高，直至１２ｈ仍维持高水平（Ｐ＜０．０１）。结论表明大鼠脑组织冷冻伤后ＮＯＳ活性增高，ＮＯ是导致大鼠冷冻伤脑水肿的一重要因子     

急性脑血栓形成不同时期一氧化氮含量的变化

探讨急性脑血栓形成不同时期一氧化氮（ＮＯ）含量的变化。测定３０例急性脑血栓形成患者发病不同时期血清中ＮＯ、ＳＯＤ、ＭＤＡ的含量。另选２８例性别、年龄组成相似的健康人作为正常对照。结果表明，脑血栓形成期，ＮＯ、ＳＯＤ含量显著降低（Ｐ＜０．０５），ＭＤＡ含量显著增高（Ｐ＜０．０１）；脑水肿期，ＮＯ含量较前显著增高（Ｐ＜０．０１）达正常水平（Ｐ＞０．０５），ＳＯＤ含量进一步降低（Ｐ＜０．０５），ＭＤＡ含量进一步增高（Ｐ＜０．０５）；进入稳定期后，ＮＯ较前稍降低（Ｐ＞０．０５）仍在正常水平（Ｐ＞０．０５），ＳＯＤ含量增高（Ｐ＜０．０１）仍低于正常（Ｐ＜０．０５），ＭＤＡ含量较前下降（Ｐ＜０．００１）仍高于正常（Ｐ＜０．０１）。提示：急性脑血栓形成早期ＮＯ含量降低与脑缺血损伤有关，脑水肿期ＮＯ参与脑损伤。     

尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤早期保护作用的研究

目的探讨尼莫地平对急性脑缺血再灌注损伤的早期保护作用。方法线栓法复制大鼠急性脑缺血模型。30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术、模型、尼莫地平3组。模型组采取缺血2h再灌注2h。尼莫地平组大鼠在缺血0时刻起每小时腹腔注射给药一次,剂量为5mg/kg。各组大鼠在手术4h后实验结束后,行腹主动脉采血,同时取完整脑组织。脑组织切片进行TTC染色,并比较各组脑组织梗死面积。检测各组大鼠血清及脑组织匀浆中SOD、MDA、NO含量。结果与模型组相比,尼莫地平组大鼠脑组织梗死面积显著减少。血清生化指标显示,模型组SOD含量显著低于假手术组,给予尼莫地平治疗后,SOD含量增加明显。模型组MDA、NO含量明显高于假手术组,尼莫地平组明显降低血清中MDA、NO。结论尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤有保护作用,这种保护作用与NO和氧化应激密切相关。     

大鼠急性局灶性脑缺血再灌注脑组织NO含量和NOS活性的变化

目的探讨一氧化氮（ＮＯ）和神经元型ＮＯ合酶（ｎＮＯＳ）是否参与急性局灶性脑缺血再灌注的发病机理。方法采用栓红法建立大鼠大脑中动脉阻塞（ＭＣＡＯ）模型,观察脑组织ＮＯ含量和一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化及ｎＮＯＳ抑制剂７－硝基吲唑（７－ＮＩ）对再灌注期两者的影响。结果缺血３０分种ＮＯ含量和ＮＯＳ活性显著升高,缺血３小进两者下降;再灌注３０分种ＮＯＴ和ＮＯＳ再次升高,而再灌注３小时两者又下降。７－Ｎ     

GM_1对大鼠脑缺血再灌注后bcl-2、bax表达的影响

目的:探讨神经节苷脂GM_1对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤后凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法:用线栓法制成大鼠大脑中动脉(MCA)闭塞及再通模型,利用免疫组化,观察一侧MCA缺血30分钟,再灌注5小时后病变侧海马CA1区bcl-2、bax表达的情况以及GM_1对其表达的影响。结果:假手术对照组海马区CAI可见bcl-2及少量bax表达。缺血/再灌注后,该区bcl-2及bax表达增加(分别P<0.01),且以bax表达明显占优势,bax染色阳性细胞以小体积,核固缩的凋亡细胞为主。应用GM_1后bcl-2表达进一步增加(P<0.01),而bax蛋白水平变化不明显,bcl-2与bax蛋白比值增加,bax染色阳性细胞胞体趋于正常,但核仍大而圆。结论:GM_1确实可以通过调节脑局灶性缺血/再灌注后bcl-2、bax表达而发挥神经保护作用。     

大鼠脑缺血-再灌注损伤中P-选择素的表达对脑血流的影响

目的　探讨脑缺血-再灌注损伤中P-选择素(PS)的表达及其与脑缺血后脑血流恢复的关系。方法　建立脑缺血-再灌注损伤大鼠模型,实验动物随机分为假手术组、非治疗组和藻酸双酯钠治疗组。观察大鼠治疗前后脑组织中PS表达、髓性过氧化物酶(MPO)活性和大鼠脑血流。结果　大鼠脑缺血再灌注损伤组织PS表达及MPO活性增高,缺血侧脑血流量明显减低。藻酸双酯钠治疗组脑组织中PS表达和MPO活性增高受抑,相应的再灌后脑血流量较非治疗组的明显增高。结论　抑制脑缺血-再灌注损伤脑组织中PS表达可改善脑缺血后无复流现象。     

Apolipoprotein E deficiency worsens outcome from global cerebral ischemia in the mouse

BACKGROUND AND PURPOSE: Apolipoprotein E (apoE) has been found relevant in a variety of central nervous system disorders. This experiment examined the effect of endogenous murine apoE on selective neuronal necrosis resulting from a transient forebrain ischemia insult. METHODS: ApoE deficient (n=16) and wild type (n=17) halothane-anesthetized mice were subjected to severe forebrain ischemia (10 minutes of bilateral carotid occlusion and systemic hypotension). After 3 days' recovery, brain injury was determined histologically. In other apoE-deficient and wild-type mice, regional cerebral blood flow (CBF) was determined by 14C-iodoantipyrine autoradiography 10 minutes before, 5 minutes after onset of, and 30 minutes after reperfusion from 10 minutes of forebrain ischemia. RESULTS: The percentage of dead hippocampal CA1 neurons (mean+/-SD) was greater in the apoE-deficient group (apoE deficient=67+/-30%; wild type=37+/-33%; P=0.011). A similar pattern was observed in the caudoputamen (P=0.002) and neocortex (P=0.014). Cerebral blood flow was similar between groups at each measurement interval. Marked hypoperfusion persisted in both groups at 30 minutes after ischemia. CONCLUSIONS: ApoE deficiency worsens ischemic outcome. This is not attributable to effects on CBF. A role of apoE in the cerebral response to global ischemia is consistent with prior reports that murine apoE deficiency increases infarct size resulting from focal cerebral ischemia.     

一氧化氮供体及前体对大鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的探讨

目的 观察介入给药一氧化氮（NO）供体硝酸甘油（Nitroglycerine，NG）及前体L-精氨酸（L-Arginine，ARG）对大鼠脑缺血再灌注后海马区星形胶质细胞表达的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的影响，探讨NG及ARG的脑保护机制。方法 采用大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）法建立局灶性脑缺血模型。将大鼠随机分为假手术组、MCAO组、NG组和ARG组。MCAO组、NG组和ARG组于缺血2 h再灌注同时分别局部介入给予生理盐水、NG和ARG，于再灌注3 h或24 h时，荧光法检测血清NO含量。并在3 h或24 h时处死大鼠，病理分析脑梗死体积以及免疫组织化学法检测海马区GFAP表达情况。结果 缺血再灌注后3 h血清NO升高（P <0.01），治疗组较MCAO组明显（P <0.01），GFAP表达阳性细胞数增加，但治疗组较MCAO组减少（P <0.01），各组大鼠脑组织未出现肉眼可见梗死灶；缺血再灌注后24 h，血清NO治疗组较3 h降低，而MCAO组较3 h升高（P <0.05），GFAP表达阳性细胞数较3 h增加（P <0.01），治疗组较MCAO组减少（P <0.01），TTC染色显示脑梗死体积治疗组较MCAO组减小（P <0.05）。结论 脑缺血再灌注后海马区脑组织GFAP表达增强，通过局部介入给予NG、ARG增加NO合成，抑制GFAP高表达，减小脑梗死体积。提示NG、ARG抗脑缺血性损伤的保护机制可能与抑制星形胶质细胞过度表达有关。     

Age-related differences in recovery of blood flow and metabolism after cerebral ischemia in swine

We tested two hypotheses: 1) that cerebral blood flow, oxygen consumption, and evoked potentials recover to preischemic values at 120 minutes of reperfusion more completely in 1-2-week-old piglets than in 6-10-month-old pigs after complete ischemia; and 2) that recovery of cerebral blood flow, oxygen consumption, and electrical function in piglets and pigs at 120 minutes of reperfusion is better after incomplete than after complete ischemia. During 30 minutes of ischemia produced by intracranial pressure elevation, cerebral blood flow determined by the microspheres technique was decreased to 0-1 ml/min/100 g with complete ischemia, to 1-10 ml/min/100 g with severe incomplete ischemia, or to 10-20 ml/min/100 g with moderate incomplete ischemia. During reperfusion after complete ischemia, both piglets and pigs demonstrated hyperemia but delayed hypoperfusion occurred in more brain regions in pigs, oxygen consumption returned to preischemic values in piglets but not in pigs (70 +/- 10% of preischemic values), and evoked potentials recovered better in piglets than in pigs (24 +/- 4% and 9 +/- 4% of preischemic values, respectively). Both piglets and pigs had fewer brain areas with hyperemia and hypoperfusion and improved oxygen consumption and electrical function during recovery from incomplete than from complete ischemia. We speculate that piglets tolerate complete ischemia better than pigs because of decreased reperfusion injury and that both groups recover better from incomplete than complete ischemia because of improved substrate supply during ischemia.     

Transient and permanent resolution of ischemic lesions on diffusion-weighted imaging after brief periods of focal ischemia in rats : correlation with histopathology

BACKGROUND AND PURPOSE: The early ischemic lesions demonstrated by diffusion-weighted imaging (DWI) are potentially reversible. The purposes of this study were to determine whether resolution of initial DWI lesions is transient or permanent after different brief periods of focal brain ischemia and to evaluate histological outcomes. METHODS: Sixteen rats were subjected to 10 minutes (n=7) or 30 minutes (n=7) of temporary middle cerebral artery occlusion or sham operation (n=2). DWI, perfusion-weighted imaging (PWI), and T(2)-weighted imaging (T(2)WI) were performed during occlusion; immediately after reperfusion; and at 0.5, 1.0, 1.5, 12, 24, 48, and 72 hours after reperfusion. After the last MRI study, the brains were fixed, sectioned, stained with hematoxylin and eosin, and evaluated for neuronal necrosis. RESULTS: No MRI or histological abnormalities were observed in the sham-operated rats. In both the 10-minute and 30-minute groups, the perfusion deficits and DWI hyperintensities that occurred during occlusion disappeared shortly after reperfusion. The DWI, PWI, and T(2)WI results remained normal thereafter in the 10-minute group, whereas secondary DWI hyperintensity and T(2)WI abnormalities developed at the 12-hour observation point in the 30-minute group. Histological examinations demonstrated neuronal necrosis in both groups, but the number of necrotic neurons was significantly higher in the 30-minute group (95+/-4%) than in the 10-minute group (17+/-10%, P<0.0001). CONCLUSIONS: Transient or permanent resolution of initial DWI lesions depends on the duration of ischemia. Transient resolution of DWI lesions is associated with widespread neuronal necrosis; moreover, permanent resolution of DWI lesions does not necessarily indicate complete salvage of brain tissue from ischemic injury.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。