别嘌呤醇对血管内皮细胞舒张功能的保护作用

目的探讨别嘌呤醇(Allo)对同型半胱氨酸(Hcy)和低密度脂蛋白(LDL)协同损伤人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)舒张功能的保护作用。方法将HUVEC与一定浓度的Hey、LDL及不同浓度的hllo共同培养24h,应用MTT试验(用甲欣光吸收OD值表示活细胞数)观察Allo是否对HUVEC有保护作用;测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量,观察HUVEC血管舒张因子产生情况。同时,利用半定量RT-PCR方法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)转录水平,以观察Allo是否影响eNOS的转录。结果HUVEC培养24h后,Hey(H)组、Hcy+LDL(H+L)组与Con组相比,活细胞数减少,NO产生减少(P值均<0.05)。H+L组与H组相比,活细胞数进一步减少(MTT试验OD值0.179±0.004.vs0.217±0.001)。Hcy+LDL+Allo(0.2mmol/L)(H+L+A)组,与H+L组相比,活细胞数增加(MTY试验OD值0.207±0.002),NO增加(15.58±0.193μmol/lvs14.21±0.340μmol/1)(P值均<0.05)。同时,活细胞数随Allo浓度增加而升高,至0.3mmol/L时趋于稳定。eNOS的半定量RT-PCR结果显示各组间的产物电泳带无明显差异。结论(1)Hcy可导致内皮细胞损伤、功能障碍;(2)Hcy和LDL对内皮细胞的损伤和功能障碍具有协同作用;(3)别嘌呤醇对Hcy和LDL协同损伤HUVE有保护作用。提示别嘌呤醇对体内存在高氧化状态的患者有对抗动脉粥样硬化的作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞骨架与内皮细胞功能的影响

目的:通过动态观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)作用后的血管内皮细胞功能的变化,以及对内皮细胞骨架肌动蛋白G-actin和F-actin的定量分析,探讨骨架肌动蛋白在Hcy损伤内皮中的作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)分为正常对照组、低剂量Hcy组(0.1mmol/L)、中剂量Hcy组(0.5mmol/L)和高剂量Hcy组(1.0mmol/L),观察各组细胞培养24h时其细胞骨架和相关功能的变化;中剂量Hcy组及高剂量Hcy组还观察了6h、12h时的相应变化。分别采用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法检测各组条件培养基中一氧化氮(NO)、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量。用Rhodamine-Phalloidin标记纤维状肌动蛋白(F-actin),Alexa Flour488-DnaseⅠ标记球状肌动蛋白单体(G-actin),激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测内皮细胞骨架G-actin、F-actin含量,并计算G/F比值。结果:随着Hcy作用时间的延长或剂量的增大,NO含量总体呈下降趋势,而MDA含量增高;G-actin、F-actin总体含量及G/F比值上升,并呈一定的时间、剂量相关性。结论:Hcy可通过改变骨架蛋白G-actin和F-actin含量,以及G/F比值引致内皮细胞功能的损伤,这也可能是其诱导动脉粥样硬化早期变化的重要机制之一。     

17β-雌二醇对H_2O_2致血管内皮损伤的保护作用及机制的研究

目的探讨17β-雌二醇对H2O2引起的血管内皮损伤的保护作用和可能的机制。方法人脐静脉内皮细胞株在37℃、5%CO2,条件下正常培养至细胞形成致密单层时,分别进行干预。实验分为5组,空白对照组:细胞正常培养,含10%胎牛血清DMEM培养基培养;过氧化氢损伤组:将培养融合状态达到80%~90%的HUVEC,每孔加入终浓度为0.75 mmol/L的H2O2;H2O2损伤+17β-雌二醇保护组:H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组,17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L;单纯17β-雌二醇组:17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L;H2O2损伤+17β-雌二醇保护+渥曼青霉素组H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组,17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L,渥曼青霉素终浓度100 nmol/L。收集干预后的各组细胞,Western-blot法检测细胞内PI3K/Akt蛋白表达情况,用CCK-8法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞凋亡率,荧光探针标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果 17β-雌二醇可以明显提高氧化应激损伤组内皮细胞中PI3K/Akt的表达,17β-雌二醇可以明显提高H2O2损伤后血管内皮细胞的存活率,降低早期和晚期凋亡率,并且减少H2O2损伤后血管内皮细胞内的ROS含量,差异有统计学意义(P0.001),在加入PI3K/Akt通路的特异性抑制剂渥曼青霉素以后,17β-雌二醇抗氧化损伤的作用明显减弱。结论 17β-雌二醇通过上调H2O2导致的血管内皮细胞损伤后胞内PI3K/Akt蛋白的表达,提高细胞存活率,发挥抗氧化损伤和抗细胞凋亡作用,这可能是雌激素发挥心血管保护效应的重要途径之一。     

波动性高糖对人脐静脉血管内皮细胞的损伤及其机制的研究

目的 观察波动性高糖在体外诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的损伤作用,并探讨其机制.方法 以HUVEC为研究对象,体外培养至第三代,实验分为:A组为正常组(正常培养的细胞),B组给予恒定加入5.5mmol/L 葡萄糖(Glu),C组给予恒定加入7.8mmol/L Glu,D组给予每24h轮换加入5.5mmol/L/7.8mmol/L Glu,E组给予恒定加入14.5mmol/L Glu,F组给予每24h轮换加入5.5mmol/L/14.5mmol/L Glu,G组给予恒定加入20mmol/L Glu,H组给予每24h轮换加入5.5mmol/L/20mmol/L Glu各组分别与HUVEC孵育5d,测定各组细胞液中的细胞活力(MTT)指标.测定正常对照组、恒定性高糖组(E组和G组)及波动性高糖组(F组和H组)细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶活力(SOD)、一氧化氮(NO)的含量、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量及细胞凋亡率,并在显微镜下观察细胞形态变化.结果 培养液中SOD、NO的含量在波动性高糖组与恒定性高糖组均与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);培养液中MDA及ICAM-1的含量在波动性高糖组与恒定性高糖组均与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).波动性高糖与恒定性高糖均可导致HUVECs出现凋亡的形态学变化,波动性高糖组的凋亡率与恒定性高糖组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 (1)波动性高糖和恒定性高糖对人脐静脉血管内皮细胞均有损伤,且波动性高糖对其损伤更大.(2)波动性高糖体外诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的机制可能与其氧化应激水平更高,炎症反应加重及细胞凋亡率增加有关.     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞增殖活性的影响及瑞舒伐他汀干预研究

目的血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平升高被认为是动脉粥样硬化的独立危险因子;瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)是目前降低LDL-C最强的调脂药物兼有调脂以外的作用。本研究观察Hcy对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响以及RSV的保护作用。方法将HUVEC分为3组进行培养包括正常对照组、Hcy不同浓度刺激组和RSV干预组。通过MTT法测定各组细胞的增殖活力,realvtimePCR检测内皮细胞血管细胞间粘附因子1(VCAM-1)mRNA和细胞间粘附因子1(ICAM-1)mRNA的表达。结果 (1)用不同浓度的Hcy与HUVECs共孵育24 h后观察细胞增殖情况,从0.1～1 mmol/L随着Hcy浓度逐渐增大,细胞活性逐渐减少,0.4～1 mmol/L各组细胞活性均明显小于正常对照组(P<0.05);(2)RSV 5、2、1、0.5、0.1μmol/L浓度干预组VCAM-1mRNA和ICAM-1 mRNA表达较Hcy组明显下降(P>0.05)。结论 Hcy对HUVEC有明显抑制细胞增殖的作用;RSV能有效抑制Hcy对HUVEC的损伤,促进HUVEC增殖;RSV可浓度依赖性抑制Hcy诱导的内皮细胞ICAM-1mRNA和VCAM-1mRNA表达的上调。提示RSV的保护作用可能与抗炎作用有关。     

蚤休皂苷对氧化损伤的脐静脉内皮细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1表达的影响

目的研究中药蚤休皂苷对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞ECV304损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304,建立氧化损伤细胞模型,然后分为五个实验处理组:正常对照组、氧化损伤组、高浓度蚤休皂苷组、中浓度蚤休皂苷组和低浓度蚤休皂苷组,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测蚤休皂苷对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的影响,逆转录聚合酶链反应检测细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1mRNA的表达水平,流式细胞术定量检测细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1的表达。结果损伤后细胞吸光度值低于正常对照组(P<0.01),药物预处理后吸光度值增加,高浓度蚤休皂苷组吸光度值与正常组相比差异无显著性;药物预处理氧化损伤后,细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1mRNA的表达水平与损伤组相比明显减弱(P<0.01);损伤组中与内参照的灰度值之比最大,与正常组相比差异显著(P<0.01);损伤组中表达细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1的阳性细胞数增多,与正常组相比差异显著(P<0.01);药物预处理氧化损伤后,阳性细胞数明显减少,且此效应呈剂量依赖性(P<0.01)。结论蚤休皂苷可以保护H2O2造成的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤,是通过抑制内皮细胞粘附分子的表达从而抑制炎症性损伤,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的。     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

依那普利抑制同型半胱氨酸致血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨依那普利对同型半胱氨酸（Hcy）引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法 取大鼠主动脉内皮细胞，培养并传代备用，进行血管内皮细胞药物保护实验。分为正常对照组（正常组）:不加Hcy及依那普利；损伤组:给予Hcy 2000 μmol/L；干预组:在给予Hcy 2000 μmol/L的同时再给予依那普利，依那普利的浓度不同又分为干预A、B、C、D和E组，其依那普利的浓度依次为10，20,40,80和160 nmol/L。内皮细胞的鉴定利用因子VIII间接免疫荧光；利用光学仪器进行血管内皮细胞形态学观察；测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）的活性；利用CCK8试剂检测各组血管内皮细胞活力；利用细胞计数板测定活细胞百分率。 结果 :① Hcy损伤组血管内皮细胞呈现出细胞损伤形态学改变；② 各组细胞LDH活性与正常对照组(100%)比较分别为:损伤组细胞LDH活性为（157 ± 17）%，干预C组（依那普利浓度40 nmol/L）细胞活性为（126 ± 7）%。干预C组较损伤组LDH活性显组降低（P<0.01）;③血管内皮细胞活力:正常组细胞活力定为 100%，损伤组为（52 ± 6）%，干预C组为（75 ± 6）%。干预C组细胞活力较损伤组相比细胞活力显著升高（P<0.01）；④ 活细胞百分率测定，与正常对照组[（98 ± 1）%]比较，损伤组活细胞比例[（72 ± 4）%]显著降低（P<0.01）；干预C组活细胞比例为(87 ± 3)% 较损伤组显著增加（P<0.01）。 结论 依那普利可改善Hcy对血管内皮细胞的损伤，具有保护作用。     

七氟醚预处理对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究七氟醚对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECS)损伤的保护作用及可能机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并鉴定;将人脐静脉内皮细胞生长至70%～80%融合时分为4组:正常葡萄糖浓度组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高葡萄糖组(25mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高葡萄糖(25 mmol/L葡萄糖)+七氟醚组。各组细胞培养第1天、第4天、第7天评估细胞功能改变:采用MTT法观察细胞增殖的改变;流式细胞术PI/Annexin双染法检测细胞凋亡水平;Griess检测一氧化氮(NO);RT-PCR测定细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达;Western Blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果各组细胞增殖水平比较差异无统计学意义。与正常糖浓度组比较,高葡萄糖组细胞凋亡增加,Bcl-2表达下调(P <0.05),Bax表达上调(P <0.05),eNOS表达下降(P <0.05);与高葡萄糖组比较,高葡萄糖+七氟醚组水平细胞存活数量增多(P <0.05),SOD活性增强(P <0.05)。结论七氟醚对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞有抑制凋亡和抗氧化的保护作用。     

波动性高糖对内皮细胞血管舒张因子合成的影响

目的对比研究波动性与恒定性高糖对血管内皮细胞血管舒张因子合成的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,分别测定波动性高浓度葡萄糖(5或20 mmol/L)与恒定性高浓度葡萄糖(20 mmol/L)环境下内皮细胞合成的血管舒张因子前列环素及一氧化氮的含量,同时观察培养液中丙二醛含量的变化。前列环素应用放射免疫法测定其稳定代谢产物,而一氧化氮及丙二醛的检测则分别应用Griess法与Schuh法。结果波动性高糖组前列环素与一氧化氮均明显低于恒定高糖组(分别为21±6 ng/L比36±8 ng/L,P<0.01;13.6±2.0mmol/L比18.2±3.7 mmol/L,P<0.001),而波动性高糖组的丙二醛则明显高于恒定性高糖组(16.5±2.7 mmol/L比13.2±2.2 mmol/L,P<0.05)。结论波动性高血糖较恒定性高血糖对血管内皮细胞可能具有更强的损伤效应。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸所诱导内皮祖细胞功能损伤的保护作用

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能损伤的氧化应激机制及阿托伐他汀的拮抗作用。方法:密度梯度离心法获取小鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞,FITC-UEA-1荧光染色鉴定EPCs。EPCs与不同浓度Hcy(0μmol/L,50μmol/L,500μmol/L)共孵育24 h或分别经不同浓度的阿托伐他汀(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育0.5 h后,再加入500μmol/LHcy共孵育24 h。用MTT比色法,改良Boyden小室、黏附能力测定和体外血管生成试剂盒,分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管生成能力。荧光探针H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平,光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶活性,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,RT-PCR法测定eNOS基因表达。结果:Hcy诱导EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降,活性氧的产生及NADPH氧化酶的活性增加,eNOS基因表达及细胞培养液中NO含量减少,与无Hcy处理组相比有明显差异(P0.05或P0.01)。与500μmol/L Hcy组相比,阿托伐他汀预处理可呈剂量依赖性地拮抗Hcy诱导的上述改变(P0.05或P0.01)。结论:Hcy可能通过激活NADPH氧化酶,诱导EPCs活性氧的产生及降低eNOS基因表达和NO水平,导致EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降。阿托伐他汀部分拮抗Hcy的作用。     

Ghrelin对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤和炎性反应的保护作用

目的探讨Ghrelin对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)损伤和炎性反应的保护作用及作用机制。方法取雄性SD大鼠心肌细胞培养鉴定后,分别以不同浓度的Hcy、不同浓度Ghrelin孵育24 h,采用MTT法检测细胞活力。另选细胞随机分为对照组、Hcy组(0.25 mmol/L)、Ghrelin组(100 ng/L)和混合组,Hoechst染色计算细胞凋亡率,NO试剂盒检测NO的分泌活性,ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的分泌,免疫印迹法检测NF-κB蛋白的表达。结果不同浓度Hcy细胞活性较不同浓度Ghrelin明显降低(P0.05,P0.01)。与对照组比较,Hcy组NO的分泌活性显著降低,细胞凋亡率显著上升,IL-6和ICAM-1的分泌显著增加,NF-κB的表达显著增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。与Hcy组比较,混合组可以明显抑制上述指标(P0.05)。结论 Hcy可诱发大鼠CMECs的损伤和炎性反应,而Ghrelin预处理对Hcy诱导的损伤及炎性反应有明显的抑制作用,其保护作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

别嘌呤醇对高糖诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

目的探讨别嘌呤醇对高糖损伤后的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制。方法以HUVEC为研究对象,体外培养至第三代,分为：①20mmol／L高糖损伤对照组;②别嘌呤醇保护组（浓度分别为0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）;③维生素C阳性对照组（浓度为100mg／L）。不同浓度别嘌呤醇及维生素C先与HUVEC孵育24h,再加入20mmol／L高糖诱导损伤48h,测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量及细胞凋亡率。结果别嘌呤醇（0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）药物保护组的细胞凋亡率低于20mmol／L高糖组,其中以0．3mmol／L更为明显（P〈0．01）;细胞培养液中SOD、NO的量均较20mmol／L高糖组增高,其中以0．3mmd／L别嘌呤醇组更为明显（P〈0．01）。药物保护组细胞培养液中合成MDA、ICAM-1较波动性高糖组降低,且在一定浓度范围内（0．05-49．30mmol／L）呈浓度依赖性（P〈0．05）。结论①别嘌呤醇对高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,呈浓度依赖性。②别嘌呤醇对高糖体外诱导HUVEC损伤保护作用的机制包括抑制氧化应激、炎症反应及细胞凋亡。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞eNOS表达及NO含量的影响

目的 通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)一氧化氮合酶(eNOS)表达及NO含量的影响,探讨Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为5组,分别加入Hcy0、2.5、5、10及15 mmol/L,培养24h.通过MTT比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测eNOS mRNA的表达,通过硝酸还原酶法测NO含量.结果 与对照组比较,Hcy(5 ～ 15 mmol/L)剂量处理组细胞活力明显下降(P＜0.05,P＜0.01),eNOS mRNA的表达显著降低(P＜0.01);NO的含量明显下降(P＜0.01),eNOS mRNA的表达变化及NO的含量变化呈现明显的剂量依赖性(P＜0.01).结论 Hcy可通过抑制eNOS mRNA的表达,使eNOS合成减少,活性降低,进而减少HUVECs内NO的生成,这可能是Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制之一.     

氧化低密度脂蛋白对内皮细胞L-精氨酸-NO系统的影响及其机制

目的　探讨氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)对内皮L 精氨酸 NO系统的影响及其机制。方法　生化分析方法测定孵育液中亚硝酸盐含量及一氧化氮合酶活性 ,用Western印迹方法测定内皮一氧化氮合酶 (eNOS)的蛋白表达。结果　不同浓度的ox LDL呈剂量依赖性地降低eNOS的蛋白表达 ,抑制NOS活性及内皮产生的NO量 (11.4 4± 1.4 3vs 8.18± 1.0 ,6 .4 5± 0 .99,5 .83± 0 .95 ,P <0 .0 5 ) ,(1.94± 0 .12vs 1.73± 0 .14 ,1.5 7± 0 .11,1.4 6± 0 .12 ,P <0 .0 5 ) ,预先加入血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX1)抑制剂阻断了ox LDL的上述作用。结论　ox LDL损伤内皮细胞 ,导致内皮L 精氨酸 NO系统的改变 ,LOX1介导了ox LDL的这一作用     

Allopurinol-enhanced myocardial protection does not involve xanthine oxidase inhibition or purine salvage

Summary Isolated working rat hearts were subjected to aerobic perfusion (25 min), cardioplegic infusion (3 min), global ischemia (30 min at 37°C) and reperfusion (35 min). Measurements of myocardial xanthine oxidase and dehydrogenase activity, together with various adenine nucleotides and metabolites, were made at defined stages of the protocol (n=6/group). Allopurinol pretreatment (20 mg/kg body wt/day for 3 days) improved the postischemic recovery of cardiac function; thus, aortic flow (a representative index) recovered to 68.8±4.2% compared with 53.2±2.3% in untreated controls (p<0.05). In fresh tissue, allopurinol pretreatment inhibited xanthine dehydrogenase activity by 73.1% (from 11.9±0.5 to 3.2±0.8 mIU/g wet wt: p<0.05) and xanthine oxidase activity by 95.2% (from 8.3±1.2 to 0.4±0.2 mIU/g wet wt: p<0.05); however, this inhibition was not maintained during perfusion. During reperfusion, myocardial xanthine dehydrogenase and oxidase activity was reduced by 40–60% (p<0.05) in both allopurinol pretreated and control hearts. Tissue content of creatine phosphate, adenosine triphosphate and catabolites, NAD and inorganic phosphate were not different in allopurinol pretreated or control hearts during either ischemia or reperfusion. This study does not support the concept that allopurinol protects the rat heart during ischemia and reperfusion by inhibition of xanthine oxidase activity or by conservation of purines. It appears that allopurinol achieves its protective effects by some, as yet undefined, mechanism.     

κ-阿片受体激活后通过caveolin-eNOS途径抑制由软脂酸钠诱导的内皮损伤

目的 探讨κ-阿片受体在对抗软脂酸钠（sodium palmitate,SP）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤中的作用及其作用机制。 方法 体外培养HUVECs并分为6组即正常对照组、κ-阿片受体激动剂U50,488H组、SP组、SP+U50,488H组、SP+U50,488H+κ-阿片受体阻断剂nor-BNI组、SP+U50,488H+eNOS抑制剂L-NAME组。检测各组细胞生存率、测定各组caveolin-1、eNOS的蛋白表达水平,以及NO的产生及细胞凋亡情况。 结果 与正常对照组相比,SP组细胞的生存率明显降低（P<0.01）,caveolin-1的蛋白表达显著增加（P<0.01）,eNOS的活性明显受到抑制（P<0.05）,NO生成量大幅下降（P<0.01）,细胞凋亡显著增加（P<0.01）;而κ-阿片受体激动剂U50,488H可以显著抑制SP的上述作用,使细胞生存率升高（P<0.01）,caveolin-1的蛋白表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）,eNOS的蛋白表达显著增加（P<0.05）,NO生成量显著增多（P<0.01）,细胞凋亡明显减少（P<0.01）。U50,488H的作用可被κ-阿片受体阻断剂nor-BNI或NO合酶抑制剂L-NAME所阻断（P<0.05或P<0.01）。 结论 激活κ-阿片受体能够抑制软脂酸钠诱导的内皮损伤,其机制可能与下调caveolin-1表达,增强eNOS活性有关。     

Allopurinol improves cardiac dysfunction after ischemia-reperfusion via reduction of oxidative stress in isolated perfused rat hearts.

It has been reported that the xanthine oxidase inhibitor, allopurinol, has a protective effect on ischemia - reperfusion injury, but the precise mechanism of its action is still unclear. Therefore, in the present study the mechanisms of the myocardial protection of allopurinol were evaluated in isolated perfused rat hearts. Allopurinol significantly inhibited myocardial xanthine oxidase activity, and improved left ventricular dysfunction after ischemia - reperfusion. In addition, the lactate dehydrogenase content in the coronary effluent obtained after reperfusion was significantly decreased. ATP, ADP, AMP and IMP significantly decreased, whereas inosine, hypoxanthine and xanthine significantly increased after ischemia in both the control and allopurinol groups. The concentration of xanthine was significantly decreased after ischemia - reperfusion in the allopurinol group; however, allopurinol did not affect the other purine metabolites. To evaluate the accumulation of oxidative stress, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) production in myocardial tissue was measured and allopurinol significantly decreased TBARS formation after ischemia - reperfusion. Finally, myocardial hydroxyl radicals were directly measured by electron spin resonance spectroscopy with the nitroxide radical 4-hydroxy-2, 2,6,6-tetramethyl-piperidine-N-oxyl. Hydroxyl radicals significantly increased immediately after reperfusion, but were significantly decreased in the allopurinol group. In conclusion, allopurinol reduced myocardial injury after ischemia-reperfusion by suppressing oxidative stress, but not by salvage of ATP. These findings may lead to the development of new therapeutic strategies for myocardial ischemia - reperfusion injury.     

脂联素改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞功能障碍及机制研究

目的研究重组人球状脂联素(APN)改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)功能障碍,探讨其潜在的分子机制。方法取SD雄性大鼠PMVECs原代培养,传至第三代行细胞鉴定;PMVECs分3组,常氧(210ml/L O_2,37℃)组;低氧(20 ml/L O_2,37℃)组;低氧(20 ml/L O_2,37℃)+APN(1μg/ml)处理组,分别培养3 h、6 h、9 h和12 h,收集细胞上清测NO浓度;3组PMVEC行RT-PCR测定eNOS基因表达;BCA法测定各组总蛋白含量;行Western blot检测AMPK/p-AMPK、PI3K/p-PI3K、Akt/p-Akt和eNOS/p-eNOS表达。结果 (1)鉴定培养细胞为PMVECs;(2)在相应时间点,与正常组比较,低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达显著下降(P0.01);与低氧组对比,低氧+APN组显著增加了低氧诱导的NO浓度、eNOS mRNA表达水平、总蛋白表达(P0.01);(3)3组AMPK、PI3K、Akt和eNOS总蛋白表达水平不变;与正常组比较,低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平下降(P0.05);与低氧组对比,低氧+APN组增加了低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化表达水平(P0.05)。结论在细胞水平上,APN能改善低氧条件下诱导的PMVECs功能障碍,促进肺血管具有舒张作用的NO产生,其可能机制可能是伴随着AMPK/PI3K/Akt/eNOS/NO信号通路的激活,APN可能成为潜在治疗低氧性肺动脉高压的辅助药物。     

Effects of the reactive oxygen species hydrogen peroxide and hypochlorite on endothelial nitric oxide production

Reactive oxygen species (ROS) hydrogen peroxide (H(2)O(2)) and hypochlorite (HOCl) participate in the pathogenesis of ischemia/reperfusion injury, inflammation, and atherosclerosis. Both NO and ROS are important modulators of vascular tone and architecture and of adhesive interactions between leukocytes, platelets, and vascular endothelium. We studied the effect of H(2)O(2) and HOCl on receptor-dependent (bradykinin [10(-6) mol/L] and ADP [10(-4) mol/L]) and receptor-independent mechanisms (calcium ionophore A23187 [10(-6) mol/L]) of NO production by porcine aortic endothelial cells (ECs). Changes in the level of EC cGMP (the second messenger of NO) were used as a surrogate of NO production. EC cGMP increased 300% in response to bradykinin and A23187 and 200% in response to ADP. Exposure of ECs to H(2)O(2) (50 micromol/L) for 30 minutes significantly impaired cGMP levels in response to ADP, bradykinin, and the receptor-independent NO agonist A23187. In contrast, preincubation with HOCl (50 micromol/L) impaired cGMP production only in response to ADP and bradykinin but not A23187. These concentrations of H(2)O(2) and HOCl did not result in increased EC lethality as assessed by lactate dehydrogenase release. Neither H(2)O(2) nor HOCl affected EC cGMP production in response to NO donor sodium nitroprusside, which suggests that guanylate cyclase is resistant to these oxidants. We also demonstrated that neither H(2)O(2) nor HOCl affects endothelial NO synthase (eNOS) catalytic activity as measured by conversion of L-arginine to L-citrulline in EC homogenates supplemented with eNOS cofactors. The present studies show that H(2)O(2) impairs NO production in response to both receptor-dependent and receptor-independent agonists and that these effects are due, at least in part, to inactivation of eNOS cofactors, whereas HOCl inhibits NO production by interfering with receptor-operated mechanisms at the level of the cell membrane. Concentrations of H(2)O(2) and HOCl used in the present studies have been shown to be generated in vivo during inflammation and ischemia/reperfusion. Therefore, we infer that these effects of H(2)O(2) and HOCl on EC NO production may contribute to disregulated vascular tone and altered leukocyte-EC interactions that occur in vascular injury as a result of those causes in which ROS generation is involved.