糖组学技术及其在疾病标志物挖掘中的应用

蛋白质糖基化修饰的变化与癌症和其他疾病密切相关,也成为挖掘肿瘤等疾病诊疗标志物的有效手段。定量技术的精准是揭示糖组奥秘的关键前提,糖链疾病标志物的筛选和验证离不开对临床大样本的研究,因此糖组学研究和应用技术应简便、快速、高通量、准确和实用。本文对一些常用糖组分析技术特点及其在糖链标志物中的应用研究进行了简要论述,重点阐...     

凝集素芯片及其应用进展

凝集素芯片是糖组学研究的一项新技术。现就凝集素芯片的研究背景、原理、制备、应用和前景进行综述。     

蛋白质糖基化修饰在自身免疫反应中的研究进展

糖链基团具有广泛的生物活性,在机体结构与功能等方面起重要作用.蛋白质糖基化修饰是最常见的翻译后修饰之一,目前已知蛋白序列有半数以上属于糖基化蛋白[1].蛋白质附着的聚糖不仅影响蛋白质结构组成、性质稳定等方面,而且在细胞信号传导、免疫调节、肿瘤发生及转移等环节也发挥重要功能[2-3].近年来随着糖组学及糖蛋白组学的研究进...     

糖尿病视网膜病变机理及临床研究

本文对住院的63名糖尿病患者眼底及血流变学进行检查.结果发现糖尿病视网膜病变组(糖网病组)的血液粘度、红细胞聚集性升高,红细胞变形能力下降,凝血机制障碍,眼底微血管受损重于糖尿病无视网膜病变组(非糖网病组).提示糖尿病微血流及微血管功能障碍导致致了糖尿病视网膜病变.     

基于代谢组学的红细胞贮存损伤相关研究新进展

组学技术是通过超高通量定量跟踪标记底物的实验研究方法,从整体角度出发分析人类组织器官功能和代谢的状态。代谢组学定量研究了在外界不同刺激情况下红细胞代谢物的生理和病理变化,不同代谢物的代谢调节通路。本文深入探究红细胞在体外贮存期间氨基酸、铁、一氧化氮、糖和脂质代谢等能量代谢和氧化损伤的变化,扩大了对于代谢贮存损伤机制的理解,明确红细胞代谢物与机体生理、病理变化的相对潜在关系,为个性化体外红细胞贮存如定制添加剂、研发不同的红细胞贮存液提供思路。     

血红素加氧酶-1对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β1和纤维连接蛋白表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1（HO-1）对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉（CoPP）＋高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP＋高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP＋高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP＋高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP＋高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP＋高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。     

血红素加氧酶-1对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β_1和纤维连接蛋白表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉(CoPP)+高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP+高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP+高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP+高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP+高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP+高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。     

锌对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的研究金属锌对大鼠糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,证实锌对糖尿病视网膜病变的防治作用。方法用Wistar大鼠建立糖尿病视网膜病变模型,随机分成4组:正常对照组、正常补锌组、高糖组、高糖+锌组。3M后轻摘眼球,在视网膜切片上行VEGF免疫组化。结果正常对照组、正常+锌组及高糖+锌组视网膜石蜡切片中免疫组化染色VEGF阳性表达,高糖组视网膜石蜡切片VEGF免疫组化明显阳性表达,高糖组视网膜切片VEGF免疫组化IOD值与正常组、正常+锌组及高糖+锌组相比明显增高(P0.001),正常组视网膜切片VEGF免疫组化IOD值与正常+锌组及高糖+锌组相比无显著性差异(P0.05)。结论我们认为补充金属锌能减少糖尿病大鼠视网膜病变VEGF的表达,有防治DR的作用。     

驱治肝吸虫68例分析

目的：探讨目前驱治肝吸虫常规药物的疗效。副反应及患者的顺从性。方法：对肝吸虫感染者68例,行T管引流术后随机分两组,分别用阿苯达唑驱虫糖（由广东省寄生虫防治研究所研制）或吡喹酮驱虫治疗,比较两组疗效、副反应及患者的顺从性。结果：疗效两组无明显差异,副反应以吡喹酮组为多,患者的顺从性以阿苯达唑驱虫糖组为好。结论：肝吸虫感染的患者胆汁的检出率比大便的检出率高,建议T管引流者常规作胆汁寄生虫学检查,驱虫药以阿苯达唑驱虫糖为佳。     

高糖、胰岛素影响肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达的研究

目的:探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达的影响,进一步研究GluT4在糖尿病肾病发病中的作用。方法:将培养的鼠1097系膜细胞分为8组:正常对照组,生理浓度胰岛素组(10-9M),低浓度胰岛素组(10-8M),高浓度胰岛素组(10-6M),高糖组(30mM),甘露醇组,高糖加高浓度胰岛素组,高糖加生理浓度胰岛素组。采用RT-PCR法检测GluT4 mRNA含量。结果:①正常系膜细胞可检测到GluT4mRNA。②高糖组GluT4 mRNA表达为对照组的58.7%(p<0.05);10-8M胰岛素组、10-6M胰岛素组分别为对照组的230.2%和297.2%(P<0.01);高糖加10-6M胰岛素组,高糖加10-9M胰岛素组分别为高糖组的170.6%和140.3%(p<0.05)。结论:①正常系膜细胞有GluT4 mRNA表达。②高糖可抑制GluT4 mRNA表达,胰岛素有一定拮抗作用,且呈剂量依赖性。③GluT4是糖尿病肾病发生发展中的重要因子。     

胆管癌胆管胆汁中糖蛋白糖链结构变化及其酶学机制

目的：研究胆管癌胆汁中糖蛋白糖链结构的变化及其酶学机制，探讨胆汁中糖蛋白成份厦其糖链结构的改变在良恶性胆道病变中的鉴别诊断价值。方法：运用各种生化技术将一组恶性胆道病变（胆管癌27例、胆囊癌9例、壶腹癌5例）和20例良性胆道病变所致梗阻性黄疸病人胆管胆汁中的蛋白分离出来，进行糖蛋白定性。采用制备好的HRP标记凝集素探针（DSA-HRP、WGAHRP、LCA-HRP、ConA-HRP）分别对良恶性胆管胆汁中的糖蛋白的糖链结构进行检测和分析。将已分离、纯化和鉴定好的GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的最适受体底物与上述胆管癌、胆囊癌组织及良性胆管组织的酶液进行反应，再以HPLC测定组织中（GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活力。结果：良恶性胆道病变的胆汁中糖蛋白的糖链结构存在明显差异，胆管癌胆汁中糖蛋白的糖链结构的变化主要表现为天线数和核心岩藻糖的明显增多，还可能伴有平分型GlcNAc的增多。GnT-Ⅴ、Ⅳ、Ⅲ的活力在胆管癌和胆囊癌癌组织中明显高于良性对照组，尤以GnT-Ⅴ、Ⅲ活力增高更明显。结论：胆管癌胆汁中的糖蛋白厦其糖链结构的变化可能对胆管癌的定性诊断有一定价值。胆管癌组织中糖基转移酶活力的改变是胆汁中糖蛋白糖链结构变化的酶学机制。     

高糖对小鼠脑微血管内皮细胞释放高迁移率蛋白-1的影响

目的研究不同浓度高糖培养基对小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的损伤作用。方法对照组:25 mmol/L糖浓度组;高糖诱导组:35、40、45、50、60 mmol/L糖浓度组;辛伐他汀干预组:高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(0.1μmol/L)、高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(1μmol/L)、高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(10μmol/L)。将各实验组分别培养10、18、24、36、48、72 h用于试验,辛伐他汀干预组培养24 h后用于实验。细胞酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组细胞上清液中高迁移率蛋白-1(HMGB-1)值,光镜和电镜观察细胞形态和结构的改变。结果在同一时间点测得HMGB-1进行比较,可发现各实验组随葡萄糖浓度的升高HMGB-1释放量呈递增趋势,培养48 h后,高糖组(40、45 mmol/L)达到释放峰值;辛伐他汀干预组释放HMGB-1量明显下降。各高糖组可引起细胞线粒体明显肿胀,空泡样变,以60 mmol/L糖浓度组最为明显;辛伐他汀干预组细胞线粒体结构则无明显变化。结论高糖可引起内皮细胞损伤,其潜在的机制很有可能是通过晚期炎症因子HMGB-1的释放而起到炎症介导的的过程。     

并脑梗塞糖尿病患者血脂及血液流变学变化观察

观察发现非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）合并脑梗塞（ＣＩ）患者的血糖、血脂与血糖度水平均较正常对照明显增高（Ｐ〈０．０１中Ｐ〈０．０５）；合并ＣＩ组的血８糖汲血粘度水平较未合并ＣＩ的糖尿病组亦明显增高（Ｐ〈０．０１），提示ＤＭ患者糖代谢紊乱血流变学异常可能是其易发生ＣＩ的重要因素。     

鹿茸多肽诱导骨髓间充质干细胞体外向软骨表型的分化

背景：实验证实鹿茸多肽可以促进体外培养软骨细胞的增殖和细胞外基质糖胺多糖、Ⅱ型胶原、Aggrecan蛋白的表达。目的：通过对体外培养的兔骨髓间充质干细胞在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响。方法：将第3代兔骨髓间充质干细胞随机分为空白对照组、诱导组、鹿茸多肽组,分别采用普通培养液、诱导培养液、含10mg/L鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养;并取兔的关节软骨细胞作为关节软骨组。分别于1,2,3周后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的观察。结果与结论：空白对照组培养2周后,细胞团块逐渐崩解,无法进行苏木精-伊红染色。诱导组、鹿茸多肽组细胞团块除有轻度收缩外,呈白色半透明状;苏木精-伊红染色发现部分细胞为圆形或卵圆形,表层细胞密度大;诱导组、鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达随培养时间延长而增多,各时间点诱导组、鹿茸多肽组含量均高于空白对照组（P〈0.05）;各时间点鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达均高于诱导组,但低于关节软骨组（P〈0.05）。提示骨髓间充质干细胞在特定培养条件下能向软骨细胞表型分化,且鹿茸多肽对其定向软骨分化有明显促进作用。虽然在体外可以构建出软骨组织,但其与关节软骨质量相比仍有很大差距。     

IgG糖链结构异常与类风湿性关节炎

近年研究发现类风湿性关节炎 (RA)患者血清中IgG糖链结构发生改变。这种改变先于RA患者的临床症状出现 ,并与RA病理和病情复发密切相关 ,对RA的早期诊断和治疗具有重要意义。现就IgG的糖链结构改变、致病机制、酶学基础、检测方法及临床意义作一综述。     

肥胖合并2型糖尿病血清游离脂肪酸、超敏C反应蛋白的变化及临床意义

目的 研究超体质量/肥胖合并2型糖尿病患者血清游离脂肪酸(FFA)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化并探讨FFA、hs-CRP与体质量,糖、脂代谢及胰岛素敏感性等的相关性.方法 180例受检者根据体质量指数(BMI)及糖调节状况分成4组,分别是糖调节与体质量均正常组(Ⅰ组,男/女:20/22)、正常体质量的2型糖...     

碳酸酐酶2对高糖诱导心肌成纤维细胞凋亡和增殖的影响

目的:研究碳酸酐酶2(CA2)在高糖刺激下的表达改变和对心肌成纤维细胞凋亡、增殖的影响。方法:SD乳鼠心肌原代培养差速离心法分离心肌成纤维细胞,分为3组:正常糖(5.5 mmol/L,NG)组、高糖(25mmol/L,HG)组、高糖加碳酸酐酶抑制剂乙氧苯唑胺(ETZ)组。细胞免疫荧光观察CA2的表达变化,MTS测定心肌成纤维细胞的增殖,Western blot检测bax、bcl-2、caspase3、carbonic anhydrase2的蛋白表达情况。结果:与NG组相比,高糖能促进心肌成纤维细胞增殖和凋亡,并上调CA2的表达,通过抑制CA2可以抑制心肌成纤维细胞增殖和凋亡。结论:通过抑制CA2可减缓高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖和凋亡。     

叉头框转录因子O亚族1对高糖环境下胰岛β细胞生长及细胞周期分布影响

目的研究叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)对高糖诱导的胰岛β细胞生长和周期分布的影响。方法 INS-1细胞分成对照组、高糖组、阴性+高糖组、干扰+高糖组共4组,处理方法如下:对照组:INS-1细胞不做任何处理。高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d。阴性+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染shRNA control慢病毒的INS-1细胞。干扰+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染FOXO1 shRNA慢病毒的INS-1细胞。用Western blot和qRT-PCR检测细胞中FOXO1的表达情况,CCK-8测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot方法测定细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果高糖组胰岛β细胞中FOXO1表达水平高于对照组,干扰+高糖组胰岛β细胞中FOXO1的表达水平低于高糖组,阴性+高糖组细胞中FOXO1的表达水平与高糖组比较没有变化。高糖组胰岛β细胞增殖能力降低,细胞G0/G1期比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。干扰+高糖组胰岛β细胞增殖能力升高,细胞G0/G1期比率降低,细胞中cyclin D1蛋白水平升高,p27蛋白水平降低,与高糖组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高糖诱导胰岛β细胞中FOXO1表达,敲低其表达能够逆转高糖对胰岛β细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞作用。     

癌症的基因组研究与转化医学前景

组学研究是指当今生物医学领域蓬勃发展的"-OMICS"研究。"-OMICS"概念最早见于21世纪初,伴随着基因组学技术的发展应运而生,并逐步衍生出不同的分支领域,如研究全基因组变异信息的基因组学(genomics),研究全表达谱变异信息的转录组学,研究基因表达调控全景变化的表观遗传组学,研究全蛋白质表达谱变化的蛋白质组学,研究机体或细胞代谢物全貌的代谢组学。组学研究的     

妊娠期糖尿病患者伴慢性乙型肝炎病毒感染对妊娠结局的影响

目的分析伴发慢性乙型肝炎病毒感染对妊娠期糖尿病患者妊娠结局的影响。方法选择我院2015年4月～2018年4月收治的100例妊娠期糖尿病患者进行研究,将伴有慢性乙型肝炎病毒感染的50例患者设为肝炎病毒合并组,将不伴有慢性乙型肝炎病毒感染的50例患者设为妊糖组,另外选取50例健康孕妇为对照组,比较3组妊娠结局。结果肝炎病毒合并组胎膜早破、产后出血、妊娠期肝内胆汁淤积症、急性绒毛膜羊膜炎发生率均高于妊糖组,差异有统计学意义(P0.05);妊糖组与对照组比较,无显著性差异(P0.05);肝炎病毒合并组巨大儿、胎儿窘迫出现率均高于妊糖组和对照组,早产率高于妊糖组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);肝炎病毒合并组产后出血量明显多于妊糖组,对照组产后出血量明显少于其他2组,差异有统计学意义(P0.05)。结论妊娠期糖尿病患者伴慢性乙型肝炎病毒感染会明显影响妊娠结局,临床应该做好慢性乙型肝炎病毒感染的控制,以提升妊娠质量。