miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

miR-152-3p 靶向TCF4 对人胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探究miR-152-3p 对人胃癌SGC鄄7901 细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:用miR鄄152 类似物(miR-152 mimic) 转染细胞,RT鄄PCR 检测miR-152 及转录因子4(TCF4) 的表达;荧光素酶报告实验证明miR1523p 与TCF4 的靶 向关系;miR-152 mimic 和TCF pcDNA 重组质粒(pc鄄TCF4) 分别或同时转染细胞,Western blot 检测TCF4 的表达,CCK8 检测细 胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况。结果:miR152 mimic 能显著升高SGC鄄7901 细胞miR-1523p 的表达水平,降低TCF4 的 mRNA 水平;同时,miR152 mimic 还能显著降低TCF4 野生型荧光素酶活性;此外,miR-152 mimic 能显著降低SGC-7901 细胞 的增殖倍数,升高细胞凋亡率;pc-TCF4 能显著减弱miR-152 mimic 抑制SGC7901 细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。结论: miR-1523p 能抑制人胃癌SGC7901 细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与靶向调控TCF4 表达有关。     

miR-141-3p通过靶向PDCD1抑制人胃癌细胞系AGS的迁移与侵袭

目的 探讨miR-141-3p对胃癌(GC)细胞迁移与侵袭的影响,并揭示其潜在的分子机制.方法 用RT-qPCR分别检测临床组织样本、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS中miR-141-3p的表达.在AGS细胞中转染miR-141-3p mimic后,用Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭;荧光素...     

MicroRNA-590-3p对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控

目的研究microR NA-590-3p(miR-590-3p)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法从石蜡包埋的11例胃癌组织和11例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-590-3p的表达水平;培养胃癌细胞SGC-7901,应用Lipofectamine~?LTX试剂将化学合成的miR-590-3p antagomir和miR-590-3p agomir转染SGC-7901细胞,验证转染效率后应用MTT发检测细胞增殖能力的变化;应用Transwell小室法检测SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的变化;应用Western Blot方法检测上皮钙粘素(E-cadherin)的蛋白表达水平。结果与正常组织相比,miR-590-3p在胃癌组织中的表达水平显著增高。与对照组相比,miR-590-3p表达沉默能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,显著增加E-cadherin的蛋白表达水平。miR-590-3p过表达的作用与之相反。结论 MiR-590-3p沉默抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,迁移和侵袭可能与上调E-cadherin蛋白表达相关。     

miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响

背景:miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调,主要发挥抑癌作用。现已证实,miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而,目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少,机制尚不明确。目的:探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。方法:以胃癌细胞株SGC-7901为模型,用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞,转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平,采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力,流式细胞术检测CD24⁺CD44⁺细胞亚群比例。结果与结论:(1)与inhibitor NC或NC组比较,转染miR-7-5p inhibitor或mimics后,胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显著降低或升高(P <0.01);(2)与NC组比较,miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂...     

miR-188-3p靶向YAP1抑制肝细胞癌的侵袭和迁移

目的 探究miR-188-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其抑制HCC细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 利用RT-qPCR检测miR-188-3p在人HCC组织和细胞系中的表达情况,进一步分析miR-188-3p表达在HCC中的临床价值;利用Western印迹检测转染m...     

褪黑素抑制胃癌细胞系SGC-7901的迁移和侵袭

目的 探讨褪黑素(MLT)对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用及其分子机制。 方法 不同浓度(0.1、1、2 和4 mmol/L)的褪黑素干预人胃癌SGC-7901 细胞 24 h,应用划痕实验、Transwell小室法检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的改变;ELISA试剂盒检测培养液上清中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达,Real-time PCR检测胃癌细胞MMP-2、MMP-9、细胞间黏附分子1(ICAM-1）和CD44基因表达;免疫印迹法检测ICAM-1、CD44、p-P38、P38和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶（p-MKK）3/6蛋白表达。 结果 褪黑素抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,并呈剂量依赖性。与空白对照组比较,褪黑素降低胃癌细胞基质金属蛋白酶（MMP)-2、MMP-9和ICAM-1、CD44的表达,并抑制p-P38、P38和p-MKK3/6的表达。 结论 褪黑素通过抑制胃癌细胞MMP-2、MMP-9、ICAM-1和CD44的表达从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力,抑制作用可能与p38MAPK信号通路有关。     

丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响

目的:观察丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用不同浓度(1、3、5和7 mg/L)的丙泊酚培养SGC-7901细胞24 h。MTT实验检测细胞活力,细胞侵袭实验和划痕愈合实验分别检测细胞侵袭和迁移能力;免疫细胞化学法和Western blot实验检测富半胱氨酸血管生成诱导因子61(CYR61)、CD44v6和基质金属蛋白酶7(MMP-7)3种蛋白的表达。结果:与对照组相比,5 mg/L丙泊酚对SGC-7901细胞的活力无明显影响,但显著抑制细胞的侵袭和迁移能力(P0.05),并抑制CD44v6和MMP-7的表达(P0.05)。结论:丙泊酚可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力,抑制作用与CD44v6和MMP-7的表达降低相关。     

miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、侵袭和迁移的影响。方法利用Lipofectamine2000将miR-149-5p mimic质粒、mimic-NC质粒、CDK6质粒分别或联合转染进入Tca8113细胞,运用基因预测软件预测miR-149-5p的靶基因,采用双荧光素酶实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-149-5p与CDK6 mRNA的表达,MTT法检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测CDK6、C-Myc、和Cyclin D1的表达,裸鼠右后肢腹侧皮下注射构建OSCC移植瘤模型,并测定移植瘤体积和重量,同时采用免疫组化检测Ki67和Vimentin的表达。结果 miR-149-5p在OSCC细胞中低表达,与CDK6在3'UTR区存在结合位点,miR-149-5p直接靶向抑制CDK6; miR-149-5p过表达能够明显降低Tca8113细胞活性和克隆数目,并增强G0/G1期细胞周期阻滞,增加凋亡率,减少侵袭数目,降低伤口愈合率,且下调C-Myc、CDK6、Cyclin D1蛋白表达,而加入CDK6后能够反转这些现象; miR-149-5p过表达会使体内移植瘤的重量和体积明显减少,并使移植瘤的Ki67和Vimentin的阳性细胞比率明显减少。结论miR-149-5p靶向CDK6对口腔鳞状细胞癌细胞生长、侵袭和迁移具有抑制作用。     

StathminsiRNA抑制人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡

目的: 探讨微管解聚蛋白stathmin对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长和细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法: 将0.1 mL SGC-7901细胞悬液(5×10¹⁰/L)接种于裸鼠背部一侧皮下,建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:PBS组(PBS治疗)、对照siRNA组(接种对照siRNA,终浓度为100 nmol/L)和stathmin siRNA组(接种stathmin siRNA,终浓度为100 nmol/L),治疗方式均为腹腔注射。连续2周观察荷瘤裸鼠的生长情况,免疫组织化学方法检测增殖抗原Ki-67的表达,采用TUNEL研究肿瘤组织中细胞的凋亡,Western blotting检测裸鼠肿瘤组织中stathmin、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果: Stathmin siRNA能明显抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),stathmin siRNA组中裸鼠移植瘤的重量明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。免疫组化结果表明,stathmin siRNA组中Ki-67的增殖指数明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。TUNEL结果显示,stathmin siRNA组的凋亡细胞数显著高于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。Western blotting结果表明,与PBS组和对照siRNA组相比,stathmin siRNA组中stathmin和Bcl-2蛋白的表达显著下调,而Bax蛋白表达明显上升(均P<0.05)。结论: Stathmin在胃癌细胞增殖和细胞凋亡的调控中发挥重要作用,本研究有望为胃癌分子靶向治疗提供理论依据。     

过表达miR-299-3p抑制人肾癌细胞系增殖和迁移

目的探讨miR-299-3p在肾癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 RT-qPCR检测肾癌细胞系(786-O、769-P、ACHN和A498)和人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-299-3p的表达;MTT法、细胞划痕实验、Transwell小室法检测miR-299-3p mimic对肾癌786-O细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;在线生物信息学数据库对miR-299-3p的靶基因进行了预测。Western blot检测E-cadherin,N-cadherin、vimentin和MAP3K12的蛋白表达。结果 miR-299-3p在肾癌细胞系中均低表达(P0.05),且在786-O细胞中表达最低。过表达miR-299-3p可显著抑制肾癌细胞系786-O增殖、迁移、侵袭、体外成瘤和上皮间质转化(EMT),综合4个数据库的结果,发现预测的miR-299-3p的共同靶基为MAP3K12,荧光素酶报告基因验证了miR-299-3p与MAP3K12的靶向关系。miR-299-3p+MAP3K12共转染786-O细胞后,能够有效降低miR-299-3p mimic诱导的细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-299-3p在肾癌细胞中的作用机制可能是通过miR-299-3p靶向下调MAP3K12表达,调控EMT途径影响肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。     

miR-140-3p通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭

目的:探究微小RNA-140-3p(mi R-140-3p)对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的靶向关系以及对非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭的影响。方法:使用RT-qPCR检测HLF-1、A549和H1299不同细胞株中mi R-140-3p的表达水平,选择差异最显著的A549细胞用作后续研究对象; Target Scan软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证mi R-140-3p和PD-L1之间的靶向关系; RT-qPCR和Western blot检测转染mi R-140-3p模拟物和抑制剂对PD-L1表达水平的影响; MTT法检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞活力的影响; Transwell实验检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:mi R-140-3p在人肺癌A549和H1299细胞的表达中显著下调(P 0. 05); mi R-140-3p高表达能够使PD-L1表达下调,对A549细胞的活力、迁移和侵袭具有抑制作用;转染pc DNA3. 0-PD-L1能够阻断mi R-140-3p对A549细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:mi R-140-3p可通过靶向负调控PD-L1抑制A549细胞的活力、迁移和侵袭。     

miRNA-101-3p靶向调控EZH2蛋白抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:研究微小RNA-101-3p(miRNA-101-3p)对人胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的调控机制。方法:Real-time PCR检测2种人胃癌细胞和1种胃黏膜细胞中miRNA-101-3p和zeste增强子同源物2(EZH2)的表达水平;采用脂质体瞬时转染技术过表达miRNA-101-3p;流式细胞术检测miRNA-101-3p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;Transwell实验、CCK-8法和台盼蓝染色法检测miRNA-101-3p对胃癌细胞迁移和增殖能力的影响;Western blot法检测EZH2的表达。结果:miRNA-101-3p在胃癌细胞的表达水平显著低于胃黏膜细胞(P0.05);过表达miRNA-101-3p后,流式细胞术结果显示胃癌细胞的S期比例减少,G0/G1期比例增加,早期凋亡率增加(P0.05);CCK-8法、台盼蓝染色法及Transwell实验结果显示胃癌细胞的增殖和迁移能力显著降低(P0.05);Western blot结果显示胃癌细胞中EZH2蛋白的表达明显下降(P0.05)。结论:miRNA-101-3p可能通过靶向负调控EZH2蛋白的表达抑制胃癌细胞的增殖和迁移,进而促进胃癌细胞凋亡。     

miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法：将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照（NC）mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA (si-NC)组和HP1BP3 siRNA (si-HP1BP3)组,分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达;CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Traswell实验检测细胞侵袭;Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果：与NC mimic组相比,miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制HP1BP3蛋白表达;敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论：miR-433...     

miR-454-3p靶向TCF-4对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨miR-454-3p与TCF-4的靶向关系,以及对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法 miR-454-3p mimic和(或)pLV-TCF-4转染GRC-1细胞后,采用qRT-PCR法检测miR-454-3p和TCF-4 mRNA水平;Western blot法检测TCF-4蛋白的表达;双荧光素酶报告实验验证miR-454-3p与TCF-4的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-454-3p mimic抑制TCF-4 mRNA和蛋白的表达;pLV-TCF-4缓解miR-454-3p对TCF-4蛋白表达的抑制作用。miR-454-3p mimic与TCF-4野生型报告载体共转,荧光素酶活性降低;与TCF-4突变型报告载体共转后,荧光素酶活性无明显变化。与GRC-1组相比,miR-454-3p mimic转染到GRC-1细胞后,细胞增殖倍数明显降低(P0.01),细胞凋亡率由(5.08±1.21)%增加到(23.12±1.82)%,伤口愈合率由(58.43±6.32)%降低到(32.15±5.16)%,侵袭细胞数目由113.54±9.27减少至51.21±6.03;共转染miR-454-3p mimic和pLV-TCF-4后,能够逆转上述改变。结论 miR-454-3p可通过靶向TCF-4抑制人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

lncRNA-MALAT1通过靶向下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(lncRNA-MALAT1)是否可通过靶向下调微小RNA-570-3p(miR-570-3p)促进胃癌细胞增殖。方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901分为3组:空白对照组、si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组,其中空白对照组为单纯的SGC7901细胞株,si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组分别转染lncRNA-MALAT1 siRNA及其阴性对照。MTS法检测各组细胞的增殖情况。RT-qPCR检测单纯的SGC7901细胞株培养不同时点的miR-570-3p及不同组别lncRNA-MALAT1和miR-570-3p的表达情况。通过生物信息学软件RegRNA预测获取lncRNA-MALAT1与miR-570-3p潜在的互补结合位点。将MALAT1及其突变体克隆到萤光素酶载体psiCHECK-2中,构建MALAT1野生型和突变型质粒,并采用酶切和测序方法鉴定psi CHECK-2-MALAT1载体是否构建成功。将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照、miR-570-3p抑制剂阴性对照在293T细胞中共转染,收集细胞后通过双萤光素酶报告系统检测不同组别的萤光素酶活性,从而对lncRNA-MALAT1与miR-570-3p的靶向调节关系进行验证。结果:与空白对照组和si-MALAT1NC组相比较,si-MALAT1组在不同时点(24、48和72 h)的A490值显著降低(P 0. 01)。在单纯的SGC7901细胞株中,随着时间的推移,miR-570-3p的表达量逐渐下降(P 0. 05)。si-MALAT1组lncRNA-MALAT1的表达水平显著降低,而miR-570-3p表达显著升高(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测显示,与miR-570-3p模拟物阴性对照组相比,miR-570-3p模拟物组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低(P 0. 01),而miR-570-3p抑制剂组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性较miR-570-3p模拟物组明显增高(P 0. 01); miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照及miR-570-3p抑制剂阴性对照对MALAT1突变型的表达均无明显影响。结论:lncRNA MALAT1能够通过靶向结合并下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖。