miR-21反义寡核苷酸对eNOS基因调节及血管内皮细胞增殖相关转录因子AP1的作用机制

目的:探讨miR-21反义寡核苷酸(AS-miR-21)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因调节的分子机制及血管内皮细胞增殖相关转录因子AP1作用机制的可能性。方法:应用MTT方法检测细胞增殖抑制率;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭小室模型分别检测各组细胞侵袭能力的变化;Western blot检测miR-21表达相关情况及细胞核转录因子eNOS和AP1表达情况。结果:AS-miR-21能抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生长,促进其凋亡;AS-miR-21对HUVECs迁移和侵袭具有抑制作用;AS-miR-21干预下HUVECs的eNOS和AP1蛋白表达明显减少。结论:AS-miR-21显著抑制eNOS和AP1蛋白表达,转录因子AP1在ASmiR-21对eNOS的表达调节中起重要作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞eNOS表达及NO含量的影响

目的 通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)一氧化氮合酶(eNOS)表达及NO含量的影响,探讨Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为5组,分别加入Hcy0、2.5、5、10及15 mmol/L,培养24h.通过MTT比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测eNOS mRNA的表达,通过硝酸还原酶法测NO含量.结果 与对照组比较,Hcy(5 ～ 15 mmol/L)剂量处理组细胞活力明显下降(P＜0.05,P＜0.01),eNOS mRNA的表达显著降低(P＜0.01);NO的含量明显下降(P＜0.01),eNOS mRNA的表达变化及NO的含量变化呈现明显的剂量依赖性(P＜0.01).结论 Hcy可通过抑制eNOS mRNA的表达,使eNOS合成减少,活性降低,进而减少HUVECs内NO的生成,这可能是Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制之一.     

微小核糖核酸-24对内皮型一氧化氮合酶基因表达的调节及其对血管内皮细胞管腔形成的影响

目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据转染质粒将实验细胞分为:miR-24高表达组、miR-24干扰组和空白质粒对照组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力,人工基底膜检测细胞的管腔形成能力;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测eNOS和Sp1转录因子m RNA和蛋白表达水平。结果:(1)与空白质粒对照组比较,miR-24高表达组细胞增殖能力降低45.45%(0.36±0.04 vs 0.66±0.08,P0.05);miR-24高表达组细胞迁移速度明显减缓,且迁移数目降低74.75%(30.25±3.78 vs 119.80±10.94,P0.01),未能形成明显管腔样结构。(2)与空白质粒对照组比,miR-24高表达组eNOS m RNA降低46.2%(0.49±0.02vs 0.91±0.01,P0.05),蛋白表达减少49.07%(0.55±0.05 vs 1.08±0.05,P0.05);同时Sp1 m RNA降低44.9%(0.49±0.01 vs 0.89±0.02,P0.05),其蛋白质表达量也相应减少54.90%(0.46±0.02 vs 1.02±0.04,P0.05)。在miR-24抑制组中,上述指标较空白质粒对照组降低,但比miR-24高表达组显著升高,特别是小管形成数量、及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:miR-24显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并且与miR-24对eNOS的表达调控有关;miR-24明显抑制eNOS表达,Sp1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。     

小葱葱白提取物对人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的观察小葱葱白提取物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮(NO)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用。方法从小葱葱白中提取活性成分,体外培养HUVECs用不同浓度(100g/L,50g/L,25g/L,12.5g/L)的葱白提取物分别作用于HUVECs。观察细胞形态,MTT法观察葱白提取物对HUVECs活性的影响,比色法测定各组的NO含量,RT-PCR法及Western Blot法测定内皮型eNOS的表达水平。结果和对照组比较,小葱葱白提取物对内皮细胞形态和活性无明显影响,能增加HUVECs释放NO及eNOS生成(P<0.05或P<0.01)。结论小葱葱白提取物可能通过增加eNOS生成而提高HUVECs释放NO,从而保护内皮功能。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ所致主动脉内皮细胞游离钙离子及产生一氧化氮的影响

目的 通过观察猪主动脉内皮细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下时,不同浓度和不同作用时间的丹参酮ⅡA(TSN)对血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)及其内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响、细胞内游离钙离子浓度的变化,探讨TSN对血管内皮细胞的保护作用.方法 采用硝酸还原法、免疫组织化学法,首先分别检测不同浓度(10-8～10-6 mol/L)和不同作用时间(1、6、24 h)的AngⅡ对培养的猪主动脉内皮细胞产生NO及其eNOS蛋白质表达的影响;然后比较在10-6mol/L的AngⅡ作用的不同点(0 h点为A组、6 h点为B组)加入不同浓度(10、50 mg/L)TSN,分别检测作用1、6、24 h后内皮细胞的NO生成和eNOS的蛋白质表达变化.用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)水平的变化.结果 (1)随着AngⅡ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞NO的产生及eNOS的表达呈顺序下降(P＜0.01),表现出剂量、时间依赖性的负性作用.(2)TSN可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS表达的负性作用(P＜0.01),但尚不能恢复到空白对照组水平(P＜0.05);此作用与TSN的浓度无明显关系(P＞0.05).在TSN作用1、6 h,A组的抑制效应明显强于B组(P＜0.05);随着作用时间延长至24 h,两组间差异无显著性(P＞0.05).(3)AngⅡ可引起主动脉内皮细胞[Ca2+]i显著升高(P＜0.01),TSN可部分抑制AngⅡ诱导的内皮细胞[Ca2+]i升高(P＜0.05).结论 TSN可抑制AngⅡ对血管内皮细胞分泌NO以及细胞eNOS蛋白质表达的负性作用,可能通过多种途径对血管内皮细胞及其功能起到保护作用.     

TGIF2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响。方法将培养的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞分为对照组(未处理)、高糖组(葡萄糖处理)、空载体阴性对照质粒(NC)高糖组(葡萄糖+转染NC质粒)和TGIF2高糖组(葡萄糖+转染psiC HECK2-TGIF2 3'-UTR质粒),处理24 h和48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖;处理48 h后,以RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达,Transwell法检测细胞迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高糖组、NC高糖组和TGIF2高糖组HUVECs细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、迁移能力均显著降低,凋亡率显著升高(P0.05);与高糖组相比,TGIF2高糖组中TGIF2 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论高糖诱导下,TGIF2在血管内皮细胞中表达下降,上调其表达对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡具有一定的保护作用。     

尼古丁对血管内皮细胞PAI-1表达水平的影响

目的 研究尼古丁对人脐静眯内皮细胞(HUVECs)表达纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的影响.方法 HUVECs培养后接种于25 cm2培养瓶,随机分为对照组(培养液中不加任何干预)和尼古丁组(培养液中加入尼古丁.使其终浓度100 μmol/L),分别孵育12 h后收集各组细胞及细胞上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法(ELISA)测定各组细胞上清液中PAI-1的抗原浓度;采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组细胞PAI-1mRNA的表达水平.结果 尼古丁组PAI-1含量在12 h显著升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.01),且PAI-1mRNA的表达显著升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.01).结论 尼古丁损伤血管内皮细胞,显著上调HUVECs PAI-1mRNA的转录和PAI-1蛋白的分泌,抑制内皮细胞的纤溶活性.     

非诺贝特促进人内皮细胞内皮一氧化氮合酶复偶联的作用研究

目的探讨非诺贝特能否对脂多糖（LPS）诱导的血管内皮一氧化氮合酶（eNOS）脱偶联发挥保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用非诺贝特预处理HUVECs 2 h,再与LPS共孵育24 h,采用高效液相色谱法检测细胞四氢生物蝶呤（BH4）的表达水平,ELISA检测细胞eNOS表达水平和细胞上清一氧化氮（NO）浓度,利用Confocal方法检测细胞内活性氧（ROS）产生水平。结果与对照组比较,单纯LPS刺激组内皮细胞BH4表达水平降低,伴有eNOS表达下调和NO水平降低,而内皮细胞内ROS产生增加（P均〈0.05）。与单纯LPS刺激组比较,非诺贝特预处理组内皮细胞BH4表达水平升高,同时伴有eNOS表达上调和NO水平增加,而内皮细胞内ROS产生降低（P均〈0.05）。结论非诺贝特通过上调BH4水平,对LPS诱导的血管内皮细胞eNOS脱偶联有逆转作用,这可能是其发挥血管内皮保护作用的机制之一。     

正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响

目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显著升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。     

脂联素及其受体对血管内皮细胞一氧化氮合酶活性差异调节的分子机制

目的:探讨脂联素Ⅰ型及Ⅱ型受体(AdipoR1和AdipoR2)在内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性调节中的作用。方法:采用随机数字表法,将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为对照组、脂联素组、脂联素+siRNA-adipoR1组、脂联素+siRNA-adipoR2组和脂联素+L-NAME组。使用siRNA分别沉默AdipoR1和AdipoR2受体基因,Western blot方法检测脂联素作用下磷酸化eNOS的表达情况。结果:不同浓度(0、5、10和15μg/ml)以及不同时间(0、15、30和60min)脂联素干预内皮细胞,eNOS磷酸化水平不同,浓度为5μg/ml干预15min时,磷酸化的eNOS蛋白表达最多(P0.05)。特异性siRNA-adipoR1沉默AdipoR1基因而抑制其表达(P0.01),脂联素对内皮细胞eNOS的磷酸化水平明显降低(P0.05)。相反,AdipoR2的表达被siRNA-adipoR2抑制(P0.01),脂联素作用于内皮细胞时,eNOS的磷酸化水平无明显变化。NOS抑制剂L-NAME阻断NO的形成,脂联素引起内皮细胞eNOS磷酸化作用降低,磷酸化eNOS蛋白表达量减少(P0.05)。结论:脂联素通过AdipoR1影响内皮细胞eNOS的活性,促进eNOS的磷酸化(ser1177)及NO的分泌,维持正常内皮细胞的功能。     

谷红注射液有效成分介导eNOS与LOX-1对冠状动脉内皮细胞损伤的影响

目的探究谷红注射液有效成分羟基红花黄色素A(HSYA)介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与凝素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)对人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)损伤的影响。方法取HCAECs细胞采用加入20 μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理诱导细胞损伤模型作为模型组,将不同浓度(1、10、100 μmol/L)HSYA处理过的细胞作为低、中、高HSYA组,将未处理的HCAECs细胞作为对照组,检测培养24 h各组细胞存活率及培养液中一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)量,采用RT-PCR和Western blot检测各组LOX-1、eNOS的mRNA和蛋白表达量。结果 CCK8检测结果显示,培养24 h时各HAYA处理组细胞存活率均高于模型组、低于对照组,且HAYA浓度越高细胞存活率越高,差异具有统计学意义(P0.05);培养24 h时各HAYA处理组细胞培养液中NO含量均高于模型组、低于对照组,LDH含量低于模型组、高于对照组,且HAYA浓度越高NO含量越多,LDH含量越少,差异具有统计学意义(P0.05);RT-PCR及Western blot检测结果显示,培养24 h时各HAYA处理组eNOS mRNA及蛋白相对表达量均高于模型组、低于对照组,LOX-1mRNA及蛋白表达量低于模型组、高于对照组,且HAYA浓度越高eNOS mRNA及蛋白表达量越高,LOX-1 mRNA及蛋白表达量越低,差异有统计学意义(P0.05)。结论谷红注射液有效成分HSYA可呈剂量依赖性促进eNOS表达和抑制LOX-1蛋白表达,促进冠状动脉内皮细胞损伤修复。     

氯吡格雷对尼古丁诱导的血管内皮损伤的保护作用

目的探讨尼古丁对血管内皮细胞的影响及氯吡格雷的保护作用。方法将40只SD大鼠分为5组,对照组、模型组(尼古丁2 mg/kg)、尼古丁损伤+氯吡格雷低剂量组(低剂量组)、尼古丁损伤+氯吡格雷中剂量组(中剂量组)、尼古丁损伤+氯吡格雷高剂量组(高剂量组),每组8只。尼古丁造模4周后,测定大鼠血浆超氧化物歧化酶(SOD)、内皮素1、NO及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)浓度,免疫组织化学法及Western blot法测定血管eNOS阳性细胞的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血浆NO、eNOS及SOD浓度明显下降,而内皮素1浓度明显上调,eNOS阳性细胞表达明显减少(P0.01);与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠NO、eNOS及SOD浓度明显升高,eNOS阳性细胞表达明显增多,且中、高剂量组大鼠增多更显著(P0.05,P0.01)。结论氯吡格雷可能抑制氧化应激反应,调节内皮细胞中eNOS的正常表达,从而缓解尼古丁对血管内皮细胞的损害。     

抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及Akt信号机制

目的探讨抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及其可能的信号机制。方法分离、培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,以不同浓度抵抗素（15、50、100ng／ml）干预。荧光显微镜检测各组细胞中N0的生成,RT-PCR检测eNOS mRNA表达水平,Western blot检测Akt和eNOS磷酸化水平。结果15、50、100ng／ml抵抗素干预HUVECs 24h后,胰岛素刺激的内皮NO生成显著降低（三组分别为4．01±0．69、3．764±0．71、3．73±0．45,vs对照组P均〈0．05）,同时伴有内皮Akt和eNOS磷酸化水平的降低（us对照组P均〈0．05）,而eNOS mRNA表达无显著改变。结论抵抗素可通过P13K／Akt途径影响HuVECs eNOS磷酸化水平,进而调节内皮细胞NO生成,但该影响并非Akt依赖性。     

枸杞多糖对人脐静脉血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成的影响

目的观察枸杞多糖(LBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移能力及血管形成的影响。方法在HUVECs分别加入不同浓度的LBP后,应用噻唑蓝(MTT)和划痕实验方法检测对HUVECS增殖与迁移的影响。利用基质胶实验检测实验浓度LBP对血管形成作用的影响。结果 1MTT实验结果表明:随LBP浓度增加,抑制HUVECs增殖能力增强,同时应用甩片实验可推断LBP通过促进HUVECs凋亡而达到抑制细胞增长的作用;2划痕实验显示实验浓度LBP作用下HUVECs迁移距离较空白对照组具有统计学差异;3实验浓度LBP可明显抑制血管形成。结论 LBP对HUVECs增殖迁移及血管生成能力具有明显抑制作用。     

依泽替米贝抑制大鼠血管平滑肌细胞荷脂

背景和目的治疗性血管新生在缺血性疾病包括对动脉粥样硬化的干预中具有实际意义,我们近年研究发现,生理性微电场可介导血管内皮细胞血管新生样反应,但其机制尚待深入研究。本研究拟探讨微电场影响内皮细胞血管新生相关基因的表达及其机制。方法应用微电场对血管内皮细胞进行刺激;利用显微成像系统及共聚焦显微镜研究内皮细胞的形态与结构;用ELISA法和/或RT-PCR测定内皮细胞血管新生相关基因的表达;用特异抑制剂研究血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体(VEGF/VEGFR)介导的细胞信号通路在内皮细胞血管新生及其基因表达中的作用。结果生理性微电场可刺激血管内皮细胞变长和定向排列,以及细胞定向移动。这些细胞行为在微血管内皮细胞(HMEC-1)和大血管内皮细胞(HUVEC)的反应存在明显差异。微电场刺激血管内皮细胞使VEGF165、VEGF121和白细胞介素8(IL-8)表达上调,而对其他血管新生相关分子如碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β(TGF-β)以及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)等mRNA表达影响不明显。VEGFR抑制剂作用于血管内皮细胞后,抑制微电场对内皮细胞VEGF和IL-8的表达及内皮细胞定向排列...     

从血管内皮生长因子及其受体调控角度探讨地黄梓醇促血管新生作用及分子机制研究

背景血管新生是目前缺血后脑保护研究的新方向之一,地黄主要有效成分梓醇具有促血管新生作用,但其具体作用机制尚未完全明确。目的从血管内皮生长因子(VEGF)及其受体调控角度探讨地黄梓醇促血管新生作用及分子机制。方法实验时间为2019年4—8月,将采用0.9%氯化钠溶液处理的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为对照组,将采用终浓度为1 mg/ml的梓醇溶液处理的HUVECs作为实验组。采用MTT法检测细胞增殖能力,采用细胞迁移实验检测细胞迁移能力,另分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法检测HUVECs的VEGF、血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)mRNA及蛋白表达情况。结果(1)对照组HUVECs的OD值低于实验组(P<0.05);与对照组相比,实验组HUVECs相对增殖率为(1.871±0.152)%。(2)以培养0 h为对照,实验组培养12、24 h迁移细胞数量多于对照组(P<0.05);两组HUVECs培养24 h迁移细胞数量均多于培养12 h(P<0.05)。(3)两组HUVECs的VEGFR-1 mRNA及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组HUVECs的VEGF、VEGFR-2 mRNA及蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05)。结论地黄梓醇通过上调VEGF、VEGFR-2表达而促进HUVECs增殖、迁移,进而发挥促血管新生作用。     

奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸诱导损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法用ADMA16μmol/L培养HUVECs 24 h,不加或加入阿替洛尔20μmol/L、奈比洛尔(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)预处理1 h。0.25%胰酶消化细胞,获取细胞悬液,离心收集细胞上清液,检测一氧化氮(NO)水平、一氧化氮合酶(NOS)活性。提取HUVECs总RNA,用RT-PCR分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达。结果 ADMA16μmol/L刺激HUVECs 24 h后,上清液NO含量和NOS活性降低,eNOS mRNA表达下调。奈比洛尔可剂量依赖性抑制ADMA所致的上述损伤。阿替洛尔对ADMA诱导的损伤无显著改善。结论奈必洛尔可保护ADMA诱导损伤HUVECs。     

MicroRNA-181b 对衰老内皮细胞血管新生功能的影响

目的研究microRNA-181b（miR-181b）对衰老内皮细胞增殖、迁移和管腔形成等血管新生功能的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,通过传代培养计算细胞群体倍增水平（Population doublings,PDL）,建立HUVECs衰老模型（PDL44）。在PDL44HUVECs中过表达或抑制miR-181b,分刖用MTS法、划痕实验及成管实验检测内皮细胞增殖、迁移和成管功能,结果过表达miR-181b可抑制PDL44内皮细胞的增殖功能18％（P〈O．001）,减少内皮细胞迁移率40％（P=O．032）;反之,给于miR-181b抑制刹可硅著改善PDL44内皮细胞的迁移和增殖：给了血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）刺激,术观察到miR-181b对PDL44内皮细胞成管功能的调控作用。结论抑制miR＋181b可提高衰老内皮细胞的增殖和迁移能力,提示它可作为一个新的靶点,调节内皮细胞的损伤修复和血管新生。     

姜黄素抑制白细胞介素8诱导的血管内皮细胞迁移的分子机制

目的探讨姜黄素对白细胞介素(IL)-8诱导的血管内皮细胞迁移的影响及分子机制。方法应用IL-8、姜黄素及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂PD98059(PD)处理HUVECs细胞,Transwell和Western印迹实验检测细胞迁移、血管内皮生长因子(VEGF)、ERK1/2和磷酸化(p)-ERK1/2蛋白表达。结果 IL-8可显著促进HUVECs细胞迁移并上调VEGF和p-ERK1/2蛋白表达;姜黄素或PD可有效抑制IL-8诱导的HUVECs细胞迁移和VEGF表达。结论姜黄素和PD均能抑制IL-8诱导的HUVECs细胞迁移和VEGF表达,并且姜黄素能够显著抑制pERK1/2蛋白表达,提示抑制MAPK/ERK信号通路可能是姜黄素抗血管生成的部分机制。     

晚期蛋白氧化产物对大鼠胰岛微血管内皮细胞体外增殖、迁移及再血管化功能的影响及机制研究

目的探讨晚期蛋白氧化产物(AOPPs)对大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)体外增殖、迁移及再血管化功能的影响及可能机制。方法分为空白对照(NC)组、鼠血清白蛋白(RSA)组、不同浓度AOPP组(100、200、300μg/ml)及AOPPs 200μg/ml+NADPH氧化酶抑制剂(Apocynin)组。CCK8试剂盒检测IMECs增殖活性;Transwell小室、Matrigal胶及显微镜下细胞计数法检测AOPPs对IMECs体外迁移及再血管化的影响;化学发光法检测还原型辅酶-Ⅱ(NADPH)氧化酶活性;免疫印迹检测磷酸化丝-苏氨酸激酶(p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白的表达及ELISA检测一氧化氮(NO)水平。结果 AOPPs可呈剂量、时间依赖性降低IMECs体外增殖能力、迁移能力及再血管化能力,增强细胞内NADPH氧化酶的活性,降低细胞内p-Akt、p-eNOS的表达水平以及细胞内NO的水平(P0.05)。结论 AOPPs可导致胰岛微血管内皮细胞增殖、迁移及再血管化功能受损,可能与下调p-Akt及p-eNOS的表达水平以及加强NADPH氧化酶介导的eNOS脱偶联有关。