CXCL1通过调控JAK2/STAT3信号通路促进宫颈癌细胞增殖和转移

目的 探究CXCL1在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 使用GEPIA在线数据库分析CXCL1在宫颈癌组织和正常组织中的表达水平，分析其与宫颈癌患者总生存期的关系。qRT-PCR检测CXCL1 mRNA在宫颈癌细胞(C-33A和Hela细胞系)和正常宫颈上皮细胞系(HcerEpic细胞系)中的表达。将CXCL1过表达质粒转染进宫颈癌细胞系中，CCK-8法检测CXCL2对宫颈癌细胞增殖的影响，TUNEL实验检测CXCL1对宫颈癌细胞凋亡的影响，Transwell实验检测CXCL1对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响，Western blot实验检测CXCL2对宫颈癌细胞系中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响。结果 CXCL1在宫颈癌组织中的表达水平显著高于正常组织，且高表达CXCL1与宫颈癌患者总生存期较低有关。高表达CXCL1可显著促进宫颈癌细胞增殖，迁移和侵袭，并抑制细胞凋亡；促进p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达。结论 CXCL1通过调控JAK2/STAT3信号通路促进宫颈癌细胞增殖和转移，并抑制细胞凋亡。     

宫颈癌组织和细胞株中PD-1的表达及意义

目的探讨程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)在人宫颈鳞状细胞癌、腺癌组织及宫颈癌细胞株中的内源性表达,分析PD-1表达与宫颈癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测PD-1在宫颈癌组织中的表达,分析其与宫颈癌临床病理特征的关系;培养HPV阳性宫颈腺癌Hela细胞和HPV阴性宫颈鳞状细胞癌C33a细胞,并用Western blot法检测PD-1的表达。结果宫颈癌组织中PD-1主要表达于肿瘤间质淋巴细胞及癌细胞,PD-1在宫颈癌组织中的阳性率为93. 6%。PD-1表达与肿瘤分化程度和病灶大小均密切相关(P 0. 001),与淋巴结转移相关(P 0. 05);与患者年龄、FIGO分期、脉管浸润、神经浸润及HPV感染均无关(P 0. 05)。宫颈鳞状细胞癌和腺癌组织中PD-1的表达差异无显著性(P 0. 05)。在宫颈鳞状细胞癌组织中PD-1表达与患者年龄、淋巴结转移(P 0. 05)相关;在宫颈腺癌组织中,PD-1表达与组织学分级密切相关(P 0. 001),与肿瘤直径相关(P 0. 05)。在宫颈癌HPV+Hela细胞和HPV-C33a细胞中均有PD-1蛋白的表达,但差异无统计学意义(P 0. 05)。结论人宫颈癌组织中PD-1阳性率较高,宫颈癌细胞株亦表达PD-1,该基因与肿瘤的多个临床指标密切相关,PD-1可能参与了肿瘤的发生及恶性转化过程。     

乳腺浸润性导管癌中p57kip2、cyclin D1和cyclin E的表达及意义

目的探讨p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白在乳腺癌发生、发展中作用.方法用免疫组化S-P法检测64例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、15例乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和15例癌旁正常乳腺组织中p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表达情况.结果p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白在IDC的阳性率与在乳腺不同组织之间相比,cyclin D1、cyclin E蛋白在DCIS的阳性率与癌旁正常乳腺组织之间相比差异均有显著性(P≤0.05,P＜0.01).在IDC中,三者表达均与腋窝淋巴结转移有关(P≤0.05,P＜0.01),cyclin D1蛋白的表达与组织学分级有关(P＜0.01),cyclinE蛋白的表达与肿块大小有关(P＜0.01);p57kip2与cyclin D1之间、p57kip2与cyclin E之间的表达均呈负相关(P＜0.01)、cyclinD1与cyclin E之间的表达呈正相关(P＜0.01).结论p57kip2蛋白低表达、cyclin D1和cyclin E蛋白高表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生淋巴结转移的重要生物学标志,cyclin D1和cyclin E蛋白异常表达是乳腺癌发生的早期事件.联合检测p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白对预测乳腺癌淋巴结转移有重要意义.     

TRAF6基因对宫颈癌细胞体外生物学行为的影响及其相关机制

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因对于宫颈癌细胞生长、增殖、凋亡及浸润转移等生物学行为的影响,为将来人宫颈癌的生物治疗提供实验依据.方法:采用Western印迹方法检测TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki和C33A)中的表达,构建TRAF6-shRNA干扰表达载体并转染人宫颈癌Hela细胞,而后使用MTT法、流式细胞仪分析法、Transwell侵袭小室实验法等方法分析TRAF6对Hela细胞活力、周期、凋亡以及迁移等生物学行为的影响,同时检测TRAF6对其靶基因NF-κB表达的影响,以及Cyclin D1,easpase 3和MMP-9等蛋白影响.结果:TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki及C33A)中高表达,TRAF6 shRNA转染组Hela细胞的活力、增殖能力以及迁移能力明显低于阴性对照组和空白对照组Hela细胞(P＜0.05),TRAF6 shRNA转染组发生凋亡的Hela细胞所占比例明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组Hela细胞的活力、增殖能力、凋亡情况以及迁移能力无明显差异;TRAF6 shRNA转染组Hela细胞中NF-κB,Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),caspase 3蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),NF-κB,Cyclin D1,caspase 3和MMP-9在阴性对照组和空白对照组表达没有明显变化.结论:TRAF6基因可能具有促进Hela细胞生长增殖及其侵袭迁移能力,抑制Hela细胞凋亡的作用,TRAF6基因的表达下调可能与人宫颈癌Hela细胞迁移能力下降、凋亡能力增加有关.     

HPV16E7在宫颈癌组织中表达升高并促进宫颈癌细胞系HeLa和C33A的增殖

目的研究乳头瘤病毒HPV16E7在宫颈癌中表达水平及其在宫颈癌细胞系He La和C33A中的作用机制。方法 RT-qPCR和免疫组织化学染色检测宫颈癌患者组织及其对照组中HPV16E7、CEA和CA125 mRNA和蛋白水平,并分析3者之间的关系。RT-qPCR和ELISA检测宫颈癌患者及其对照组血清中HPV16E7、CEA和CA125水平变化。Western blot、MTT法、集落形成实验、流式细胞计量术探究HPV16E7在HPV阴性细胞系C33A及HPV阳性细胞系He La中发挥的作用。结果 HPV16E7、CEA和CA125 mRNA及蛋白水平在宫颈癌患者组织和血清中是高表达的(P0. 05)。HPV16E7与CEA和CA125具有正相关的关系(P0. 05)。HPV16E7在C33A细胞中不表达,在He La细胞中高表达。HPV16E7能够促进宫颈癌细胞系C33A和He La的增殖能力,促进细胞周期进程,并能够抑制细胞凋亡。结论 HPV16E7能够促进宫颈癌细胞的恶性行为,其表达水平在宫颈癌患者血清和组织中显著升高,并与CEA和CA125呈正相关的关系。     

CIP2A过表达对胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)过表达对胃黏膜上皮细胞GES-1增殖和凋亡的影响。方法:RT-q PCR检测正常胃黏膜组织和胃息肉组织中CIP2A和cyclin D1的表达。将胃黏膜上皮GES-1细胞分为空白对照组、空载体对照组和CIP2A过表达组,分组感染GES-1细胞后,分别用MTT法和Brd U试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot法和RT-q PCR检测凋亡蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清炎性因子的浓度。用E2F1 siRNA转染细胞,检测各组细胞中p-Rb、E2F1和cyclin D1的蛋白水平。结果:与正常胃黏膜组织相比,腺瘤性胃息肉组织中CIP2A和cyclin D1的mRNA表达水平均明显升高,而增生性胃息肉中CIP2A和cyclin D1的水平并无明显变化。GES-1细胞感染CIP2A过表达重组腺病毒之后,细胞的增殖能力和细胞活力提高,细胞凋亡率降低,炎性因子IL-1β和IL-10分泌增加,p-Rb、E2F1和cyclin D1蛋白水平升高,而E2F1沉默降低p-Rb、E2F1和cyclin D1的蛋白水平。结论:CIP2A通过激活Rb/E2F1促进GES-1细胞的增殖并抑制凋亡。     

细胞周期蛋白D1、结缔组织生长因子和血管内皮生长因子在食管鳞癌中的表达

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、结缔组织生长因子(CTGF)和血管内皮生长因子(VEGF)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中表达特征。方法应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法分别检测33例ESCC标本及相应癌旁组织(33例)中的cyclin D1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白的表达水平。结果与癌旁组织相比,在mRNA和蛋白水平,ESCC组织中cyclin D1、CTGF、VEGF表达均增加,差异有统计学意义(P0.05);并且在ESCC组织中,上述3个生物因子的mRNA及蛋白水平表达成正相关(r=0.418、0.733、0.659;P0.05)。结论 ESCC中cyclin D1、CTGF、VEGF在mRNA和蛋白水平表达均增高。     

AEG-1表达下调对人宫颈癌细胞细胞周期和侵袭能力的影响及其机制

 目的：研究星形细胞上调基因1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在人宫颈鳞癌细胞和组织中的表达,探讨AEG-1表达下调对宫颈癌SiHa细胞细胞周期和侵袭能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法：采用Western blotting检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、HeLa、SiHa和CaSki细胞中AEG-1蛋白的表达。将对照siRNA和AEG-1 siRNA分别转染SiHa细胞,利用Western blotting检测SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,采用Boyden小室检测细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blotting检测cyclin D1、细胞周期素依赖性激酶 2（CDK2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果：宫颈鳞癌组织中AEG-1蛋白表达显著高于正常宫颈组织（P<0.05）,同时3株宫颈癌细胞中AEG-1蛋白表达均显著高于正常宫颈组织,其中SiHa细胞中AEG-1蛋白表达最高（P<0.05）。此外,AEG-1 siRNA能显著下调SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达（P<0.05）,其表达下调能明显促使SiHa细胞在G0/G1期的比例增加和降低其侵袭能力。Western blotting结果表明,AEG-1 siRNA组中cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组（P<0.05）。结论：AEG-1在宫颈癌中的高表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的细胞周期静止和侵袭能力降低可能与cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白表达下调密切相关。     

长链非编码RNA MIAT在非小细胞肺癌中的表达及功能研究

目的:研究长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(MIAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞系中的表达情况及其对NSCLC细胞功能的影响。方法:利用Gene Expression Omnibus(GEO)数据库提取GSE19804和GSE30219数据集的生物信息学资料和临床预后资料,分析MIAT在NSCLC组织和正常肺组织中的表达差异,以及MIAT表达水平与NSCLC患者生存期的关系;用q PCR检测25对NSCLC肿瘤组织和其癌旁组织,以及NSCLC细胞系A549、NCI-H266和NCI-H1299及人正常支气管上皮细胞系HBE中MIAT的表达情况;将MIAT si RNA(si-MIAT)和对照序列(si-NC)分别转染NSCLC细胞系A549,采用流式细胞术、CCK-8实验和细胞集落形成实验检测2组细胞的增殖情况,并且用q PCR和Western blot实验检测2组细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)的表达情况。结果:GSE19804数据集分析显示MIAT在NSCLC组织中的表达高于正常肺组织(P0.05),GSE30219数据集分析显示MIAT高表达患者的生存期显著短于低表达患者(P0.01)。此外,与癌旁正常组织和HBE细胞相比较,NSCLC组织和细胞系中MIAT的表达水平升高(P0.05);si-MIAT组A549细胞中MIAT表达水平明显低于si-NC组(P0.01),且细胞活力和细胞集落数均低于siNC组,差异均有统计学意义(P0.05);同时,相较于si-NC组,si-MIAT组cyclin D1的表达受到明显抑制(P0.05),而CDKN1A的表达明显升高(P0.05)。结论:NSCLC组织及细胞系中MIAT呈高表达,沉默MIAT表达可明显抑制NSCLC恶性增殖的表型。MIAT可作为NSCLC靶向治疗的潜在靶标。     

STC-1在宫颈癌中的表达及其在预后判断中的价值

目的:研究宫颈癌中分泌蛋白斯坦尼钙调节蛋白1(stanniocalcin 1,STC-1)的表达情况及其与预后的关系.方法:Western印迹分析STC-1在宫颈癌细胞系的表达,免疫组织化学染色(immunochemistry,IHC)检测STC-1在宫颈癌和正常组织的表达,分析STC-1表达水平与宫颈患者临床病理特征之间关系,通过网上数据库初步探索STC-1表达与预后的关系.结果:宫颈正常上皮细胞Ect1/E6E7细胞株中几乎检测不到STC-1,宫颈癌细胞株中STC-1呈不同程度表达;IHC结果显示:STC-1主要在宫颈细胞的胞质和胞膜中表达,与匹配的癌旁正常组织相比,STC-1蛋白水平在宫颈癌组织中更高(P<0.05),并且与患者淋巴结转移正相关(P=0.038);另外,通过对数据库中宫颈癌患者的样本分析发现:高表达STC-1的宫颈癌患者预后更差(P<0.01).结论:STC-1表达与宫颈患者的总体存活负相关,STC-1可能具有预测宫颈癌患者预后生存时间的潜在价值.     

宫颈癌cyclin G1表达与临床病理因素关系的研究

目的:探讨细胞周期蛋白G1(cyclin G1)在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的表达及其与临床病理因素的关系。方法:收集石蜡包埋标本及其相关临床病理资料107例,其中正常宫颈上皮(正常对照)组18例、CIN组43例和宫颈癌组46例,用原位杂交技术检测其cyclin G1 mRNA的表达,用免疫组化二步法检测其cyclin G1蛋白的表达。结果:CIN组与宫颈癌组的cyclin G1 mRNA阳性表达率分别为46.5%和60.9%,两者差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于正常对照组(11.1%,P<0.05);正常对照组、CIN组和宫颈癌组的cyclin G1蛋白阳性表达率分别为5.6%、51.2%和71.7%,呈递增趋势,且差异均有显著性意义(P<0.05);在正常对照组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组中,cyclin G1 mRNA和蛋白的阳性表达强度与宫颈病变级别均呈正相关(r分别为0.378和0.487,P<0.05);cyclin G1蛋白与cyclin G1 mRNA的表达呈显著正相关(r=0.530,P=0.000);宫颈癌组cyclin G1 mRNA的表达与各项临床病理因素均无相关性(P>0.05),但cyclin G1蛋白的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:cyclin G1 mRNA和蛋白在宫颈癌中均有高表达,可能与宫颈癌的发生有关;cyclinG1蛋白的高表达可能是其mRNA转录水平增高所致,并且可能与宫颈癌恶性侵袭有关。     

PRR11在宫颈癌中的表达意义及对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响

目的研究富含脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11,PRR11)在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌患者临床病例特征及预后的关系,并探讨PRR11对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法免疫组化检测PRR11在60例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中的表达水平,并分析宫颈癌组织中PRR11的表达与临床病例特征的关系及患者预后的影响。Western-blot检测PRR11蛋白在宫颈癌细胞系HeLa和人宫颈上皮永生化细胞H8中的表达;HeLa经脂质体分别转染PRR11 siRNA(si-PRR11)和对照(si-NC)48h后,采用MTS实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期阻滞和凋亡情况,Western-blot检测各组细胞中CyclinD1、caspase-3蛋白的影响。结果免疫组化结果显示宫颈癌组织中PRR11的阳性表达率显著高于正常宫颈组织中的表达,PRR11阳性表达与宫颈癌肿瘤大小及组织学分级显著相关(P均<0.05),宫颈癌组织中PRR11阳性表达患者生存期较短。PRR11在宫颈癌细胞系HeLa中的表达均显著高于人宫颈上皮永生化细胞H8(P<0.05);转染PRR11 siRNA后,HeLa细胞增殖能力下降、细胞阻滞在G1期,凋亡细胞增多,CyclinD1蛋白表达减少,caspase-3蛋白表达增加(P均<0.05)。结论PRR11在宫颈癌组织和细胞系中均高表达,且高表达与肿瘤大小、组织学分级及不良预后相关,同时PRR11可能通过调控CyclinD1、caspase-3蛋白促进宫颈癌增殖和抑制细胞凋亡,PRR11可以作为治疗子宫颈癌的潜在分子靶点。     

原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白的表达及其临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌中5种细胞周期蛋白(cyclin)的表达及其与肝癌细胞的增殖状态、侵袭转移和乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法应用Instrumedics公司生产的组织芯片制作仪,将273例原发性肝癌组织、144例癌旁肝组织和10例尸检非肝病死亡肝组织制成组织芯片,取样针直径2．0am,采用免疫组织化学方法分别检测了cyclin A、cyclin B、cyclin D1、cyclin D3及cyclin E在肝癌、癌旁肝及尸检肝组织的表达率,并分析了肝癌、癌旁肝组织中HBV感染与这5种cyclin表达间的相关性。结果共获得3个肝癌组织芯片蜡块,分别含136、143和148个位点。在273例肝癌组织标本中5种cyclin的阳性表达率分别为cyclin A 52．7％、cyclin B 45．4％、cyclin D1 35．9％、cyclin D3 44．3％和cyclin E 23．1％;在144例癌旁肝组织中分别为8．3％、5．6％、4．9％、6．3％和1．4％;10例尸检肝组织除1例cyclin D1阳性外,其余均为阴性。5种cyclin在肝癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁肝组织(P＜0．01);组织学分级为Ⅱ、Ⅲ级的肝癌组织5种cyclin的表达高于Ⅰ级(P＜0．05);除cyclinA外,伴有门静脉癌栓组的阳性率高于无癌栓组(P＜0．01);HBV感染与cyclin的表达无明显相关性(P＞0．05)。结论各个cyclin在肝癌细胞中呈不同程度的高表达,使癌细胞周期缩短,处于细胞增殖活跃状态,并有利于肝癌细胞的侵袭转移;未发现与HBV感染有关。     

稳定表达人乳头瘤病毒58型(HPV58)E6E7融合基因的人宫颈癌细胞株C33A的构建及验证

为构建稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系,将实验前期构建好并实现真核表达的重组慢病毒颗粒LV-HPV58E6E7转染入HPV(–)的人宫颈癌C33A细胞,经流式细胞仪分选出稳定转染的阳性克隆,利用四唑盐比色(MTT)法检测转染后细胞的生长情况以及流式细胞术检测细胞周期,并将稳定表达HPV58E6E7融合基因的C33A细胞LV-HPV58E6E7/C33A接种于裸鼠左腋下成瘤,用荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测瘤组织中HPV58型E6E7融合基因的转录和表达。结果显示HPV58E6E7融合基因可促进C33A细胞的增殖;LV-HPV58E6E7/C33A细胞株能在裸鼠体内稳定转录及表达HPV58型E6E7融合基因。这表明我们成功建立了能稳定表达HPV58E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系LV-HPV58E6E7/C33A,为HPV58型治疗性疫苗的免疫效果检测提供了抗原细胞来源。     

miR-26b对宫颈癌细胞系迁移及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-26b对宫颈癌细胞迁移及上皮间质转化的影响及其作用机制。方法通过脂质体介导将miR-26b mimic转染C33A宫颈癌细胞系,细胞分为阴性对照组、无义对照组和miR-26b mimic组。用实时荧光定量PCR检测miR-26b及其靶基因的mRNA表达,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,用双荧光素酶基因报告载体检测miR-26b靶基因的表达。结果与正常宫颈上皮细胞相比,miR-26b mRNA在He La、Si Ha、Caski和C33A 4种宫颈癌细胞系中均低表达,其中以C33A细胞系最为明显;转染miR-26b mimic后,C33A细胞中miR-26b mRNA表达水平明显上升;过表达miR-26b可明显抑制C33A细胞的迁移能力,上调E-cadherin蛋白的表达,下调N-cadherin蛋白的表达,抑制上皮间质转化过程的发生;通过Target Scan、Pic Tar和miRDB软件预测显示,CXCL14、Smad4、TRAF5和Eph A2可能为miR-26b潜在的靶基因。双荧光素酶实验证实miR-26b可直接调控Smad4的表达。结论 miR-26b可能通过作用于Smad4的表达调节宫颈癌细胞的迁移和上皮间质转化过程的发生。     

miR-539通过靶向EMT调节宫颈癌细胞增殖、转移

目的 探讨微小RNA-539(miR-539)对人宫颈癌细胞C33a增殖、转移的影响及转移机制。方法 收集宫颈癌组织及癌旁正常组织并检测组织中miR-539 mRNA含量;以人正常宫颈上皮细胞系HUCECs作为对照,筛选宫颈癌细胞中miR-539 mRNA相对表达量最低的细胞株;甲基噻唑基四唑（MTT）法检测宫颈癌细胞的增殖;Transwell小室法检测miR-539对细胞侵袭、迁移能力的影响;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检法、蛋白免疫印迹（Western blot）法检测波形蛋白（vimentin）相对表达量。结果 RT-qPCR结果显示,宫颈癌癌组织中miR-539含量较癌旁正常组织显著减少（P<0.05）;与人正常宫颈上皮细胞系HUCECs相比,宫颈癌细胞C33a的miR-539明显降低（P<0.05）;当成功过表达C33a细胞中miR-539后,与空白对照组相比,mimics-miR-539组增殖能力减弱（P<0.05）;与空白对照组相比,过表达miR-539组细胞侵袭和迁移能下降（P<0.05）;mimics-miR-539组vimentin...     

RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RASSF1A mRNA在卵巢癌SK OV3细胞中表达缺失;RASSF1A和RASSF1C在人卵巢癌组织中的表达率分别为40.0%(32/80)和91.3%(73/80)。RASSF1AmRNA的表达在浆液性癌、黏液性癌和内膜样癌组织中分别是41.2%(20/48),38.1%(8/21)和36.4%(4/11),P>0.05;临床Ⅰ期和Ⅱ期分别为71.4%和75.0%(10/14,9/12),明显高于临床Ⅲ期和Ⅳ期(26.7%、12/45和14.1%,1/9),P<0.05;高和中分化组分别为58.6%和50.0%(17/29,10/20),明显高于低分化组(16.1%,5/31),P<0.05。结论卵巢癌细胞和人原发卵巢癌组织中存在RASSF1AmRNA表达的缺失,RASSF1A的表达与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关,可能作为一种新的抑癌基因在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用,RASSF1AmRNA的缺失提示预后不良。     

Linc00152靶向miR-376c-3p对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA Linc00152对宫颈癌细胞活力、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞以及正常宫颈细胞Ect1/E6E7中Linc00152与微小RNA-376c-3p(miR-376c-3p)的表达水平。建立Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达的宫颈癌HeLa细胞系,MTT法、流式细胞术、集落形成实验和Western blot分别检测Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞的活力、凋亡、放射敏感性及相关蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证Linc00152与miR-376c-3p的调控关系。结果:与Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞中的Linc00152表达上调,miR-376c-3p表达下调(P<0.05)。Linc00152低表达或miR-376c-3p过表达均可抑制HeLa细胞的活力,并诱导其凋亡,增强其放射敏感性,抑制cyclin D和Bcl-2蛋白表达,促进P21和Bax蛋白表达(P<0.05)。Linc0015...     

皮肤瘢痕及瘢痕癌组织中cyclin A、p21WAF1的表达及意义

目的 探讨cyclin A、p21WAF1在皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌组织中的表达及意义.方法 以病理性皮肤瘢痕、皮肤瘢痕癌组织为研究对象,以正常皮肤组织为对照.采用免疫组化SP法分别检测cyclin A、p21WAF1蛋白的表达,采用核酸分子原位杂交法检测cyclin A mRNA、p21WAF1 mRNA的表达,结合图像分析,分别观测3组被检组织中所检各项指标的表达(平均光密度和阳性面积);所有数据输入计算机后运用SPSS 16.0软件包进行统计学分析.结果 (1)cyclin A、cyclin A mRNA在正常皮肤表皮和病理性皮肤瘢痕上皮中的表达呈阴性或弱阳性,在瘢痕癌组织中呈强阳性.瘢痕癌组的表达(平均光密度和阳性面积)与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),但正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)p21WAF1蛋白、p21WAF1 mRNA在正常皮肤表皮和病理性皮肤瘢痕上皮中的表达呈阴性或弱阳性,在瘢痕癌组织中呈强阳性.瘢痕癌组的表达(平均光密度和阳性面积)与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),但正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)相关分析显示,在皮肤瘢痕癌中,cyclin A 与cyclin A mRNA(r=0.766,P<0.01)、p21WAF1与p21WAF1 mRNA(r=0.791,P<0.01)的表达呈正相关;cyclin A与p21WAF1蛋白(r=0.656,P<0.01)的表达呈正相关;cyclin A mRNA与p21WAF1 mRNA的表达呈正相关(r=0.475,P<0.05).结论 (1)cyclin A及其mRNA的高表达,可能与皮肤瘢痕癌的发生有关;(2)在瘢痕癌中,cyclin A、p21WAF1同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达;(3)p21WAF1及其mRNA在瘢痕癌中的高表达可能与细胞周期调控的反馈机制有关.     

TPX2在宫颈癌中的表达及意义

 摘要】 目的：研究TPX2mRNA和蛋白在宫颈鳞癌和腺癌组织及细胞株中的表达,并探讨它们的表达与宫颈癌患者临床病理资料之间的相关性。方法:采用RT-PCR法和免疫组织化学法、对62例原发性宫颈鳞癌、17例原发性宫颈腺癌、15例正常宫颈组织、30例CIN组织,宫颈鳞癌Siha细胞株和宫颈腺癌Hela细胞株进行检测,分析其TPX2的mRNA和蛋白质的表达水平。.结果:①经RT-PCR检测,正常宫颈组织中TPX2的mRNA几乎不表达为0.08±0.03,而宫颈腺癌组织中TPX2mRNA表达为0.467±0.031,宫颈鳞癌组织TPX2mRNA表达为0.441±0.011,Hela细胞的表达为1.923±0.04,Siha细胞的表达为1.679±0.042,它们与正常宫颈组织比较差异具有显著性((P<0.01).②经免疫组化检测,TPX2蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织中不表达,在CIN和宫颈鳞癌组织中阳性表达强度增加,三者之间比较具有统计学意义((P<0.05)。TPX2蛋白在正常宫颈腺上皮组织中不表达,宫颈腺癌组织中强阳性表达,两者之间比较具有显著性差异((P<0.01)。③TPX2在宫颈癌组织中的表达与FIGO分期、组织学分级、及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与年龄无相关性(P>0.05).④TPX2蛋白在腺癌Hela细胞株的表达强于鳞癌Siha细胞株((P<0.05)。结论:TPX2不表达于正常宫颈组织,TPX2可能参与了宫颈癌的发生发展,宫颈组织中TPX2的表达可作为宫颈癌早期诊断及估计宫颈患者预后的一个指标。TPX2的高表达有望成为研究宫颈癌发生机制和淋巴转移的新的分子标志及治疗靶点。 【关键词】　宫颈鳞癌;宫颈腺癌;Hela;Siha;TPX2;RT-pcr;免疫组织化学