亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK／ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK／ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6 μmol／L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3及MAPK／ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P<005);Western blotting结果显示,实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase 3、p JNK／JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl 2、p ERK／ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005);RT PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK／ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。     

原苏木素A通过ERK/c-Myc信号通路对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的:探讨原苏木素A对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响及其机制。方法:设置顺铂和空白对照,用MTT法测定不同浓度原苏木素A对人肺腺癌A549细胞的生长抑制情况;选取合适的药物浓度,采用集落形成实验,拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比（SER）;用Western-blot法对ERK、pERK、c-Myc、pc-Myc进行半定量分析。结果:原苏木素A对人肺腺癌A549细胞存在一定生长抑制作用,且存在剂量和时间依赖性,药物浓度越大、作用时间越长,其形态变化越明显。原苏木素A和外照射联合可增加其放射敏感性,且与浓度相关。原苏木素A联合外照射作用于A549细胞可通过下调ERK/c-Myc的表达增加其放射敏感性。结论:原苏木素A对人肺腺癌A549细胞具有生长抑制作用且存在药物剂量和作用时间依赖性;并可增加其放射敏感性;ERK/c-Myc信号通路为原苏木素A抑制A549细胞增殖的主要通路。     

TSA对肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响

目的：探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对A549肺腺癌细胞凋亡的影响。方法：Annexin V和Hoechst染色法检测细胞凋亡；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测凋亡信号通路中caspas-8、caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶（PARP）裂解情况。结果：TSA可诱导细胞凋亡，主要使细胞积聚在G2／M期，且呈浓度依赖性。Western blot检测表明TSA诱导了A549肺腺癌细胞caspase-8、caspase-9裂解活化及PARP裂解，且随TSA作用时间延长而逐步升高。结论：TSA诱导A549细胞凋亡中caspase-8、caspase-9介导caspas-3的活化，TSA通过caspase级联反应诱导A549细胞凋亡。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP 细胞凋亡

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法:A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果:对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著(P<0.01),逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著(P<0.01)。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论:A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

迷迭香酸通过MAPK/ERK信号通路对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨迷迭香酸通过丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶（MAPK/ERK）信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。［方法］ 取对数生长期LS174T细胞,加入迷迭香酸（0、25、50和100μmol/L）处理24、48 和72h后,CCK-8法检测迷迭香酸对细胞增殖活性的影响。以100μmol/L迷迭香酸处理细胞,24、48 和72h后,采用流式细胞仪检测迷迭香酸对细胞周期和细胞凋亡率的影响;采用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白的表达及ERK1/2磷酸化水平。［结果］ 迷迭香酸对LS174T细胞呈时间浓度依赖性抑制细胞增殖;100μmol/L迷迭香酸处理LS174T细胞不同时间后,与对照组相比,迷迭香酸组细胞中S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,G0/G1期比例显著升高,但组间时间效应不显著（P>0.05）;而Bcl-2蛋白表达、ERK1/2磷酸化水平明显降低,细胞凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著增强,均表现出明显的时效关系（P<0.05）。［结论］ 迷迭香酸能够抑制结肠癌LS174T细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。     

顺维甲酸体外诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

目的:探讨9-顺维甲酸(9-cis-RA)对人肺腺癌细胞A549的诱导凋亡作用。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用MTT法观察9-cis-RA对细胞的生长抑制作用,采用电镜、流式细胞仪等方法检测9-cis-RA对细胞的诱导凋亡作用。结果:9-cis-RA对A549细胞有生长抑制效应,抑制率随着9-cis-RA浓度、作用时间的增加而增加。9-cis-RA明显诱导A549细胞的凋亡,可观察到凋亡小体和凋亡峰,药物作用48h后,9-cis-RA浓度为5、10μmol/L的细胞凋亡率分别为7.2%和13.3%,细胞凋亡率呈现量效关系。结论:9-cis-RA可能通过诱导肺癌细胞凋亡抑制肺癌细胞增殖,发挥其抗癌作用。     

Livin基因反义寡核苷酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡

目的探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响.方法用阳离子脂质体介导Livin ASODN转染A549细胞后,MTT法检测对A549细胞增殖抑制率的影响;RT-PCR法和细胞免疫荧光化学检测Livin ASODN转染前后,A549细胞中Livin mRNA和蛋白表达的变化;吖啶橙/溴乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)复合染色检测A549细胞的凋亡率.结果在A549细胞中同时有Livin α和Livin β的表达,Livin蛋白在细胞质和细胞核中均有分布.Livin基因ASODN可显著抑制A549细胞的增殖(P＜0.01).且作用具有剂量依赖性.终浓度为400 nmol/L的Lip-ASODN转染后,A549细胞Livin mRNA和Livin蛋白的表达均被明显抑制,细胞凋亡率达(31.25 ±5.75)%,与对照组(3.23±1.98)%相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制A549细胞的增殖,并促进A549细胞凋亡.因此,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点.     

UC-MSC经PI3K/AKT信号通路影响人肺腺癌A549 细胞的凋亡和增殖

[摘要] 目的:探讨人脐带来源间充质干细胞（umbilical cord-derived mesenchymal stem cell, UC-MSC）经PI3K/AKT信号通路对人肺腺癌A549 细胞凋亡和增殖的影响及其作用机制。方法:采用酶消化法从人脐带组织中分离UC-MSC并进行体外培养,用流式细胞术鉴定所得到的UC-MSC的免疫表型。收集UC-MSC培养上清,建立UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549 细胞株的体外间接共培养体系。采用CCK-8 法检测A549 细胞增殖率,通过Annexin V/PI 染色流式细胞术检测A549 细胞的凋亡率,通过PI染色法判断肿瘤细胞的细胞周期分布;qPCR实验检测CyclinD1、BAX、Bcl-2 等PI3K/AKT通路下游凋亡与增殖相关基因的转录水平;Wb测定PI3K/AKT通路相关蛋白质表达水平。结果:人脐带组织分离培养3 周后,可见纤维状细胞铺满培养瓶,平行排列或呈旋涡状生长。流式细胞术检测发现所得细胞表达MSC标志分子CD73、CD90、CD105,不表达CD45 和HLA-DR。UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549 细胞株在体外间接共培养后,与对照组比较,A549 细胞的增殖率明显降低、凋亡率明显升高,其细胞周期明显停滞在G1期（均P<0.01）。PI3K/AKT信号通路相关分子CyclinD1 和Bcl-2 转录下调、BAX的转录上调（均P<0.01）;UCMSC条件培养基培养的A549 细胞总AKT水平不变,p-AKT蛋白表达呈剂量性依赖下降（P<0.01）。结论:UC-MSC明显影响肺腺癌A549 细胞的增殖和凋亡能力,细胞周期停滞在G1 期,其主要作用机制是UC-MSC抑制A549 细胞PI3K/AKT信号通路,为探索UC-MSC临床应用的安全性和有效性提供实验依据。     

人肺腺癌A549/DDP耐药细胞减弱顺铂诱导的细胞凋亡

目的：探讨人肺腺癌Ａ５４９／ＤＤＰ耐药细胞的多药抗药机理。方法;应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、原位ＤＮＡ断裂点的末端标记法观察细胞亡的状况,用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因的表达。结果：癌细胞在顺铂作用下产生了典型的凋亡形态学改革。３μｇ／ｍｌ,５μｇ／ｍｌ,７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９细胞ＤＮＡ裂解片断呈现典型的阶梯状排列条喧,而在５μｇ／ｍｌ、７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９／     

Netrin-4对胶质母细胞瘤细胞ERK/MAPK信号通路的影响

目的:通过免疫印迹方法检测不同浓度的Netrin-4(NTN4)重组蛋白对GBM细胞中磷酸化ERK水平的影响,初步探讨NTN4对GBM细胞ERK/MAPK信号通路的调控作用.方法:体外培养野生型GBM细胞:U251 MG细胞及U87MG细胞,加入两种不同浓度的NTN4重组蛋白(5ng/ml,50ng/ml),裂解细胞提取目的蛋白,在不同时间点(0,10min/20min,30min,1h,2h,3h)通过免疫印迹方法检测磷酸化ERK水平变化情况.结果:加入NTN4后,U251 MG细胞和U87MG细胞中的磷酸化ERK水平都有所增加;在U251 MG细胞中,5ng/ml的NTN4作用后1h,磷酸化ERK水平最高,50ng/ml的NTN4作用后10分钟,磷酸化ERK水平最高;在U87MG细胞中,不同浓度的NTN4都在作用10分钟时,磷酸化ERK水平最高.结论:Netrin-4激活胶质母细胞瘤细胞内ERK/MAPK信号通路,是其抑制GBM细胞衰老的可能机制.     

Ad-Gax转染诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制

背景与目的细胞凋亡与肺癌的发生发展密切相关,诱导肺癌细胞凋亡是肺癌治疗的一大策略。本研究探讨生长终止特异性同源盒Gax(growth arrest-specific homeobox)基因转染对人肺腺癌A549细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染A549细胞。以透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察转染前后A549细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后A549细胞凋亡现象明显增强。无Ad-Gax转染时,无或仅见极少量的TUNEL染色阳性细胞;Ad-Gax转染后,TUNEL染色阳性细胞显著增多,尤其在转染后24小时更明显。Ad-Gax转染后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为12.57%、17.29%和15.03%,与未转染组(0.25%)比较有显著性差异(χ2值分别为7.357、11.126、9.943,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bcl-2蛋白平均积分光密度值(AOD)分别是2.02±0.07、1.79±0.02、1.25±0.51和1.21±0.24,转染组Bcl-2蛋白AOD随转染时间的延长逐渐降低,与未转染组相比呈显著性差异(t值分别为6.651、7.089、7.438,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bax蛋白AOD分别是3.12±0.42、4.49±0.61、4.24±0.37和3.95±0.43,转染组Bax蛋白AOD升高,与未转染组相比差异显著(t值分别为7.469、7.287、6.473,P值均小于0.01)。转染组A549细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关关系(r=-0.49,P<0.01)。结论Ad-Gax转染可诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的。     

乏氧对多柔比星诱导肺腺癌A549细胞凋亡的影响

背景与目的：乏氧是恶性肿瘤中常见的现象。乏氧时肿瘤细胞对化疗抗拒，细胞凋亡减少：本实验通过研究乏氧对肺腺癌A549细胞（野生型P53）多药耐药蛋白表达及细胞凋亡的影响，探讨乏氧在多柔比旱诱导细胞凋亡巾的作用。方法：乏氧条件下（2％O，）人肺腺癌细胞株A549体外培养24h，免疫组化法榆测乏氧诱导因子-1d（HIF-1α）、P-糖蛋白（P-gP）和P53蛋白的表达；MTT法检测乏氧条件下A549细胞在多柔比星作用下的存活率；应用流式细胞仪检测细胞凋亡i结果：①乏氧条件下A549中HIF-1α、P-gp和P53蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高，HIF-1α蛋白的表达与P-gP和P53蛋白的表达存在明显的相关性、名乏氧条件下A549细胞对多柔比星的耐药性明显增强，多柔比旱诱导细胞凋亡率明显减低：结论：乏氰情况下，A549细胞能够通过HIF-1仅上调P-gp和P53蛋白的表达；A549细胞住乏氧条件下多柔比星诱导细胞凋亡存在非P53依赖途径？     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。     

多聚肌苷酸-多聚胞苷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究多聚肌苷酸-多聚胞苷酸[Poly(I:C)]对肺腺癌A549细胞活力的影响,探讨Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡机制.方法 用Poly(I:C)和脂质体3000转染A549细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting用于检测凋亡相关蛋白、实时定量PCR检测细胞因子β干扰素(IFN-β)、趋化因子-10(CXCL-10)的表达.使用pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK和caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK抑制凋亡蛋白后,观察Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡的变化.RNA干扰实验敲低黑色素瘤分化相关抗原5(MDA5)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的表达,进行上述指标的检测.结果 200 ng/ml Poly(I:C)转染后,肺腺癌A549细胞的存活率为74.92％±6.24％,较转染前(95.32％±3.05％)降低(t=2.883,P=0.041).100、200、400 ng/ml的Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡率分别为9.97％±0.88％、23.63％±1.41％、32.57％-±2.39％,与对照组(0.74％±0.15％)相比,差异均有统计学意义(t =4.489,P=0.002;t=11.616,P=0.000;t=16.932,P=0.000).此外,死亡受体途径蛋白如TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3明显升高,同时MDA5/RIG-Ⅰ通路激活以及1FN-β、CXCL-10的表达上调.pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK、caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK使细胞凋亡率分别降至3.17％±0.66％、5.35％±0.64％,与不加抑制剂(15.87％ ±0.93％)相比,差异有统计学意义(t=8.643,P=0.001;=6.824,P=0.002).RIG-Ⅰ、MDA5敲低后,Poly(I:C)诱导的TRAIL、IFN-β、CXCL-10表达下调.结论 Poly(I:C)能降低A549细胞的存活率,通过激活死亡受体途径诱导A549细胞的凋亡,并且MDA5/RIG-Ⅰ可能参与了该凋亡途径,此过程可能与IFN-β、CXCL-10有关.     

雷公藤甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果:4.0μg/mLTP呈时间依赖性降低Survivin和Bcl-2的表达(与对照组比较P<0.05),升高Fas的表达(与对照组比较P<0.05),TP作用后Caspase-3和Caspase-9活性增强,作用24、48h后Caspase-3活性分别为1.32±0.07和1.46±0.03,Caspase-9活性分别为2.36±0.06和2.41±0.03,与对照组比较,P<0.01。结论:降低Survivin和Bcl-2表达,促进Fas表达可能是TP诱导A549细胞凋亡的机制之一。     

PD98059抑制MAPK/ERK信号通路对胃癌细胞生物学功能的影响

目的：研究MAPK/ERK信号通路中关键信号分子MEK和ERK在胃癌SGC-7901细胞中的表达及PD98059抑制MAPK/ERK通路对胃癌细胞生物学功能的影响。方法：体外培养胃癌细胞株SGC-7901,不同浓度（0、25、50、100、200、300和400 mmol/L）PD98059处理24 h后CCK-8法检测细胞增殖率变化;再用0、25、50和100 μmol/L PD98059处理24 h后采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测MEK和ERK mRNA的表达量;Western blot检测MEK和ERK蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。同时设正常胃黏膜上皮GES-1细胞为对照。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌SGC-7901细胞中MEK和ERK mRNA的表达升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）;p-MEK、p-ERK蛋白的表达亦显著升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。0~200 μmol/L PD98059处理SGC-7901细胞后,细胞增殖率随着抑制剂浓度的升高而降低（P < 0.05）。当PD98059浓度处于200~400 μmol/L时抑制作用逐渐趋于平稳。0~100 μmol/L PD98059作用后MEK、ERK mRNA的表达量低于对照组（P < 0.05）,随着PD98059浓度升高,ERK mRNA表达量逐渐降低（P < 0.05）。Western blot检测结果显示50和100 μmol/L PD98059作用后p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低（P < 0.05）。且抑制剂PD98059使胃癌SGC-7901细胞发生G0/G1期阻滞,可诱导细胞凋亡。结论：MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中激活,PD98059通过抑制MAPK/ERK信号通路的活性可影响胃癌细胞的生物学功能。     

XAF1基因对顺铂诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用的研究

目的:通过顺铂诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡,研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1,XAF1)基因在A549细胞中的表达情况,初步探讨该基因在凋亡中的作用。方法:采用4μg/mL浓度的顺铂处理A549细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率;AnnexinⅤ/7-AAD检测A549细胞凋亡情况;RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测A549凋亡后XAF1mRNA和蛋白的表达;Caspase-3试剂盒检测A549细胞凋亡后Caspase-3的活性。结果:用4μg/mL浓度顺铂处理A549细胞2、12和24h后,A549细胞增殖抑制率分别为(3.40±0.65)%、(8.31±0.73)%和(14.72±0.24)%,与对照组(1.03±0.28)%相比均明显增高,P值分别为0.004、0.000和0.000,细胞增殖抑制率随时间增加而增强;A549细胞凋亡率分别为(4.35±0.95)%、(9.69±2.60)%和(22.35±1.24)%,与对照组(1.39±0.21)%相比均明显增加,P值分别为0.006、0.005和0.000,细胞凋亡率随顺铂作用时间延长而增加;实验组XAF1mRNA表达水平分别为(0.199±0.029)、(0.654±0.093)和(1.216±0.101),对照组为(0.091±0.020),XAF1mRNA表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.006、0.001和0.000;实验组XAF1蛋白表达水平分别为(0.322±0.041)、(0.508±0.014)和(0.901±0.014),对照组为(0.124±0.007),XAF1蛋白表达水平随作用时间的延长呈增加趋势,P值分别为0.001、0.000和0.000;Caspase-3活性(A405nm)分别为(34.745±3.781)、(69.524±3.096)和(94.787±5.429),对照组为(21.914±1.962),Caspase-3活性随顺铂作用时间的延长而增加。结论:顺铂诱导A549细胞凋亡可以引起XAF1表达增加,且随细胞凋亡水平的提高而增加,提示XAF1可能参与顺铂诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡过程。     

FADD在人肺腺癌细胞A549诱导T淋巴细胞凋亡中的作用

背景与目的:细胞凋亡是肺癌免疫逃逸的机制之一.Fas相关死亡结构域蛋白(Fas associated death domain protein,FADD)在细胞凋亡过程中起着重要作用.本研究旨在探讨FADD在人肺腺癌细胞A549诱导人T淋巴细胞凋亡过程中的作用.方法:用人肺腺癌细胞株A549细胞诱导人淋巴瘤T细胞株Ju...     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.