Bostrycin作为肺癌分子靶向药物的体外研究

目的 观察海洋真菌新结构先导化合物Bostrycin对A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 A549细胞完全随机分为实验组和对照组,实验组用不同浓度不同作用时间的Bostrycin进行处理,而对照组未经Bostrycin处理.用MTT法检测A549细胞增殖率的变化;电镜、流式细胞术检测凋亡;实时定量PCR和免疫印迹法探讨其作用机制.结果 Boatrycin浓度≥10μmol/L时对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其24、48和72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为20.20、14.36和9.42μmol/L.Bostrycin干预后,电镜观察到A549细胞典型的凋亡形态;流式细胞术结果显示其G_0/G_1期比例升高、S期和G_2/M期比例下降,凋亡率增加.实时定量PCR检测到微小RNA(miRNA)一638和miRNA.923的表达较对照组上调.免疫印迹结果显示p110α、p-Akt蛋白表达量下降,p27蛋白表达量升高.结论 Bostrycin对A549细胞增殖有显著抑制作用,该作用可能通过miRNA抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)通路进行.     

异麦角甾苷对肺癌细胞A549 凋亡和氧化应激的影响

【摘要】　目的　探讨异麦角甾苷(ISO) 对A549 细胞凋亡和氧化应激的影响。方法　CCK-8 实验检测细胞的活力; A549 细胞分为ISO 0、5、10 和20 μmol/ L 4 组, 克隆形成实验检测细胞增殖; 流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化; Western 印迹检测凋亡相关蛋白的表达; 试剂盒检测细胞中的超氧化物歧化酶(SOD) 和丙二醛(MDA) 含量。结果　与ISO 0 μmol/ L 组比较, ISO 10 μmol/ L 及以上浓度均显著降低A549 细胞活力(P<0. 05), ISO 10 和20 μmol/ L 组抑制A549 细胞的增殖(P<0. 05), 促进细胞的凋亡 (P<0. 05), 降低细胞线粒体膜电位, 上调Bax/ Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表达, 下调c-Myc 蛋白表达(P<0. 05), 促进氧化应激(P<0. 05)。结论　ISO 能抑制A549 细胞增殖, 促进细胞凋亡和氧化应激。     

木犀草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响

目的探讨木犀草素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及可能机制。方法分别采用0、20、40、60μmol/L的木犀草素与非小细胞肺癌A549细胞共同培养,MTT法检测A549细胞在培养0、24、48、72 h时细胞的生存率。40μmol/L木犀草素与A549细胞共同培养48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western Blot方法检测A549细胞Caspase-3、p-Akt、基质金属蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)的蛋白表达变化。结果 20、40、60μmol/L木犀草素均能够显著抑制A549细胞的增殖,抑制效果具有药物浓度和时间依赖性。与对照组比较,40μmol/L木犀草素能够显著促进A549细胞的凋亡,抑制A549细胞的侵袭与迁移,上调Caspase-3的表达,抑制p-Akt、MMP2与MMP9的蛋白表达(P0.05)。结论木犀草素抑制A549细胞增殖、侵袭及迁移能力,诱导细胞凋亡,与上调Caspase-3的表达并抑制p-Akt、MMP2与MMP9的表达相关。     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

LINC00617靶向miR-218对肺癌吉西他滨耐药性的影响北大核心CSCD

目的:研究LINC00617对肺癌细胞增殖、凋亡及吉西他滨耐药性的影响及机制。方法:采用不同浓度(2、4、6、8μmol/L)吉西他滨处理肺癌A549和吉西他滨耐药细胞A549-Gem细胞,CCK8法和克隆形成实验检测吉西他滨对A549细胞存活率和克隆形成数,qRT-PCR检测细胞中LINC00617和miR-218的水平,Western blot检测细胞中Ki67和Caspase3表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证LINC00617和miR-218的靶向关系。结果:随着吉西他滨(2、4、6、8μmol/L)浓度升高,A549细胞存活率逐渐降低,A549-Gem细胞存活率无显著变化,最高浓度(8μmol/L)吉西他滨时A549-Gem细胞存活率(97.01±7.26)%显著高于A549(43.21±5.35)%;LINC00617在A549-Gem细胞中含量(3.19±0.14)显著高于A549细胞(1.00±0.08)(P<0.05);抑制LINC00617或过表达miR-218后细胞存活率和克隆形成数均降低,凋亡率升高,增殖蛋白Ki67含量降低,凋亡蛋白Caspase3含量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);LINC00617靶向负调控miR-218的表达;过表达miR-218增强了抑制LINC00617对A549-Gem细胞增殖、凋亡和吉西他滨耐药性的作用。结论:LINC00617可靶向miR-218调控A549-Gem细胞的增殖、凋亡及吉西他滨耐药性,也是肺癌潜在的分子靶点。     

转染Elafin对百草枯诱导的肺泡上皮凋亡的影响

目的:探讨转染Elafin对百草枯(Paraquat,PQ)诱导的肺泡上皮凋亡的影响及可能机制。方法:电穿孔法转染p EGFP-C1-Elafin进入A549细胞,培养24 h后,RT-PCR检测Elafin mRNA在A549细胞中的表达情况;并给予生理盐水、不同浓度PQ(5、50、100μmol/L)作用后,Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测A549细胞凋亡率、活性氧类物质(Reactive oxygen species,ROS)含量。Western blot检测核因子相关因子2(Nuclear factor erythroid like-2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达情况。结果:转入A549细胞Elafin成功表达。PQ呈浓度依赖性导致A549细胞凋亡;PQ可使ROS含量明显增加,Nrf2、HO-1表达下调。Elafin可抑制PQ诱导的细胞调亡,上调Nrf2、HO-1蛋白表达。结论:Elafin可以一定程度抑制PQ诱导的A549细胞凋亡,其机制可能与其上调抗氧化蛋白Nrf2等有关。     

曲古霉素A促进胶质瘤细胞系凋亡

目的组蛋白的异常修饰(去乙酰化)与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichomycin A,TSA)对胶质瘤细胞系凋亡的调节作用。方法将浓度分别为0.2μmol/L、0.4μmol/L和0.8μmol/L的TSA加入胶质瘤细胞系U251细胞中,应用Westernblot法检测U251细胞系经不同浓度的TSA处理后细胞内胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),乙酰化组蛋白H3和H4的表达,应用流式细胞术(Annexin V-FITC染色)检测不同药物浓度处理组中U251细胞的凋亡率。结果 TSA处理后,U251细胞内乙酰化组蛋白H3、H4及caspase-3的蛋白水平明显上调(P<0.01),具有明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示U251细胞TSA处理后细胞的凋亡率具有剂量依赖性显著上调。结论 TSA剂量依赖性上调胶质瘤细胞系U251中caspase-3表达,促进细胞凋亡。     

c-Met基因调控肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的探讨上调和下调肺腺癌细胞株A549细胞中c-Met基因表达水平后,该细胞鼠移植瘤放射敏感性的变化情况。方法利用电穿孔法将c-Met siRNA和重组表达载体pc DNA3.1-c-Met分别转染入肺癌A549细胞后采用G418筛选得到稳定转染的肺癌细胞系。转染48 h后用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中c-Met基因和蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验研究分别上调和下调c-Met基因表达水平对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响,移植瘤实验检测基因沉默和激进c-Met基因表达水平并联合放射射线照射对肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果 c-Met下调组中肺癌A549细胞内c-Met基因和蛋白表达水平明显降低,而上调组中的表达水平则得到了明显升高。c-Met下调组肺癌A549细胞放射敏感性升高,c-Met上调组肺癌A549细胞放射敏感性降低(P0.05)。下调组中肺癌A549细胞的增殖活性受到抑制而细胞凋亡率显著增加(P0.05),上调组肺癌细胞的增殖能力明显增强而细胞凋亡率明显降低(P0.05);下调组裸鼠移植瘤的平均体积明显小于对照组,而上调组裸鼠移植瘤的瘤体平均体积则显著大于对照组(P0.05)。结论基因沉默c-Met的基因表达水平能显著降低肺癌细胞的增殖活性,抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长并明显提高移植瘤瘤体的放射敏感性。     

硒化合物诱导高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡

目的探讨二氧化硒(SeO_2)对高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡的诱导作用及其分子途径。方法不同浓度SeO_2分别作用于高危型HPV亚型宫颈癌细胞He La(HPV18+)和Caski(HPV16+)24 h,光学显微镜下观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖及活力;流式细胞计量术(FCM)检测细胞凋亡率;Western blot测定细胞内caspase-3和p53蛋白表达;Stem-loop实时定量PCR检测凋亡相关miRNA LET-7a表达。结果 SeO_2作用后宫颈癌细胞变圆、皱缩;SeO_2呈量效依赖关系抑制宫颈癌细胞增殖,其中He La细胞在7.5~30μmol/L组抑制作用显著;Caski细胞在SeO_2低浓度组即有显著抑制作用(P0.05)。宫颈癌细胞凋亡率亦随SeO_2浓度升高而升高,在Caski细胞上升更加明显。SeO_2可明显上调宫颈癌细胞系中caspase-3与p53蛋白水平,在He La细胞中二者均于7.5μmol/L处达到峰值。Caski细胞从7.5μmol/L组开始凋亡蛋白表达量显著性升高(P0.05)。SeO_2还可显著上调两细胞系实验组细胞LET-7a表达水平,且均在7.5μmol/L处出现峰值。结论 SeO_2通过上调高危型HPV亚型宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白p53蛋白及miRNA LET-7a的表达,经caspase-3途径诱导细胞凋亡。对于SeO_2诱导宫颈癌细胞凋亡,HPV16+型较HPV18+型宫颈癌细胞更为敏感。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

新型培美曲塞衍生物对A549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响

目的探究新型培美曲塞(PMX)衍生物对A549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响。方法 MTT法初步筛选12种化合物对A549细胞的细胞毒性,筛选出高活性候选化合物进一步研究其对A549细胞增殖的影响;Transwell细胞迁移实验及划痕愈合实验测定候选化合物对A549细胞迁移的影响;流式细胞术测定候选化合物对A549细胞凋亡的影响。结果初筛发现其中9种化合物对A549细胞增殖具有抑制作用,其中化合物A12抑制作用最为显著,IC_50为(1.26±0.15)μmol/L,且抑制作用存在浓度及作用时间依赖性:IC_50在作用72 h处最低,为(1.06±0.24)μmol/L;Transwell细胞迁移实验及划痕愈合实验结果表明A12能够抑制A549细胞的迁移能力,且抑制作用具有浓度依赖性;流式细胞术实验结果显示A12能够显著提高A549细胞的早期凋亡率(P0.05)、晚期凋亡坏死率(P0.01)及总凋亡率(P0.05)。结论筛选得到的新型PMX衍生物A12能够明显抑制A549细胞的增殖及迁移活性,并能诱导其凋亡。     

MPPa光动力疗法诱导人肺癌顺铂耐药细胞凋亡

肺癌死亡率居世界肿瘤首位,5年生存率不足15%,顺铂耐药是死亡率居高不下的重要原因,本文将探讨光敏剂MPPa介导的光动力疗法诱导人非小细胞肺癌顺铂耐药株A549/DDP发生凋亡的现象及其机制。课题组分别给予不同浓度光敏剂MPPa(0、1、2、4、8、16μmol/L)、不同能量光照(0、0.6、1.2、2.4、3.6、4.8J/cm2)处理细胞,CCK-8法检测细胞活性。将细胞分为对照组、MPPa组(2μmol/L MPPa)、光照组(2.4J/cm2光能量密度)和MPPa介导光动力组(PDT组)(2μmol/L MPPa、2.4J/cm2光能量密度)。应用Anne-V/PI双染流式细胞技术检测细胞凋亡;DCFH-DA染色观察细胞内活性氧产生;蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。实验结果显示,单纯光照及MPPa对细胞生长无抑制作用;MPPa介导光动力却对人肺癌耐顺铂细胞A549/DDP有显著杀伤作用,其杀伤作用呈明显的剂量效应关系(P0.05);PDT组发生凋亡率均高于各对照组(P0.05);DCFH-DA染色发现PDT组细胞内活性氧明显高于各对照组;Western blot检测发现PDT组Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。实验证实MPPa介导的光动力疗法可抑制肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP活性,并诱导其凋亡。     

氯化钴化学模拟低氧对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察氯化钴(CoCl2)对体外培养的肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨合理的体外化学模拟低氧模式.方法 (1)MTY方法和流式细胞术检测不同浓度CoO:,在相应时间内对A549和HeLa细胞活力以及增殖和凋亡的影响.(2)免疫印迹测定HIE--la和凋亡蛋白的表达.结果 (1)CoCl:(≤200 p,mol/L)在24 h内对肿瘤细胞活力影响较轻,增加浓度或延长处理时间明显降低细胞活力.(2)CoCl2(200 l～mot/L)引起细胞早期凋亡.增加浓度(800 p,mol/L)导致晚期凋亡和坏死.(3)CoCl2(200 panol/L)诱导两种肿瘤细胞HIF.4a上调,24 h达高峰(P相似文献   

尼古丁抑制穿孔素/颗粒酶B诱导的A549肺癌细胞凋亡

目的: 首次探讨尼古丁对穿孔素/颗粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的A549肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。 方法: 以人肺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞术定量检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及存活素(survivin)mRNA的表达量。结果: (1)不同浓度尼古丁单独作用A549细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长(P< 0.01),其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.125 mg/L perforin作用于A549细胞(1×10⁶个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1 μL granzyme B(1 mg/L)孵育6 h时,perforin/granzyme B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)6 μmol/L尼古丁作用于perforin/granzyme B预处理的细胞6 h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP和survivin mRNA的含量时,发现尼古丁组表达量较高,perforin/granzyme B组表达量明显降低,而当尼古丁联合perforin/granzyme B时表达量最高。结论: 尼古丁可明显抑制perforin/granzyme B诱导的A549肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP和survivin的表达上调有关。     

放射敏感性启动子调控Apoptin基因表达对肺腺癌细胞的杀伤作用研究

目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线性DNA片段,T4连接酶连接,构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,测序、鉴定。脂质体介导瞬时转染肺腺癌细胞A549,RT-PCR、荧光显微镜等检测照射前后融合蛋白表达,流式细胞仪检测放射诱导前后转染细胞的凋亡变化。结果成功构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,并在被转染A549细胞中检测到Apoptin基因表达;经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照组pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(32.48±3.56)%和(10.67±2.42)%,未经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(6.33±1.21)%、(4.25±0.87)%;与其它3组相比,放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞凋亡率明显增高,具有非常显著统计学差异(P<0.01)。结论放射敏感性启动子调控的Apoptin基因表达可在放射线调控下在A549细胞中有效表达并诱导凋亡,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。     

miR-21在白藜芦醇诱导A549肺癌细胞株凋亡中的作用

目的探讨白藜芦醇对A549肺癌细胞株凋亡的影响,并揭示miR-21参与其中的机制。方法以高糖DMEM培养基培养A549肺癌细胞株,给予100μmol/L的白藜芦醇,过表达(或不过表达)miR-21培养3 d。Real-time PCR检测miR-21表达;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色观察细胞凋亡;Western blot检测细胞凋亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)的表达。结果白藜芦醇能抑制A549肺癌细胞株miR-21的合成,上调PDCD4的表达,抑制细胞生长,降低细胞活力,诱导A549细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-21能显著抑制白藜芦醇的抗肿瘤作用,PDCD4表达变化不明显,细胞生长状态、活力以及凋亡等均无明显变化(P0.05)。结论白藜芦醇能通过抑制miR-21合成,降低PDCD4表达,诱导A549肺癌细胞株凋亡。     

托瑞米芬逆转肺癌耐药细胞株A549/cDDP耐药性的研究

目的:探讨托瑞米芬(TOR)对耐顺铂(cDDP)细胞株A549的逆转作用,为临床应用提供实验数据。方法:用不同浓度的托瑞米芬单独及与cDDP联合与耐药细胞A549共同培养,通过MTT法和流式细胞仪法检测其对A549/cDDP的逆转及增敏效果。结果:经不同浓度的托瑞米芬单独及与cDDP联合与耐药细胞A549共同培养后,单独TOR(5μmol/L、10μmol/L)对A549/cDDP细胞的增殖均无明显影响,各组间数据无明显差异(P>0.05)。当cDDP与TOR联合作用时无论TOR终浓度5μmol/L或10μmol/L,均能明显增加cDDP对A549/cDDP细胞的敏感性(P<0.05,P<0.001)。其IC50值分别为39.06μmol/L和30.64μmol/L,逆转倍数分别为2.05倍和2.65倍。cDDP+TOR终浓度5μmol/L与cDDP+TOR终浓度10μmol/L之间除了在cDDP浓度为200μmol/L时两者有差异(P<0.05)外其它均无明显差异。结论:托瑞米芬与DDP联合应用可以提高A549/cDDP的逆转及治疗效果。     

GANT61 阻断Hedgehog 信号通道调控肺腺癌A549 / DDP 细胞耐药的机制研究

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 01或P 0. 05)。使用GANT61处理A549/DDP细胞,当其浓度分别≥20μmol/L、≥10μmol/L时,分别培养24 h和72 h,与对照组相比肿瘤细胞增殖活性下降(P0. 01),且呈现剂量依赖性。GANT61可通过下调c-myc、cyclin D1表达(P0. 01),阻滞细胞周期于G1期(P0. 01)。GANT61能够明显诱导A549/DDP细胞发生凋亡(P0. 05),其分子机制可能与促进caspase-3的剪切活化相关(P0. 05)。GANT61联合顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P0. 01)。结论:Gli1在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。     

AG490抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖并提高其放射敏感性

目的研究AG490对体外培养甲状腺髓样癌TT细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。方法采用(0、25、50、100)μmol/L AG490处理甲状腺髓样癌TT细胞,MTT法和流式细胞术进行细胞增殖和凋亡检测,克隆形成实验检测其放射敏感性、Western blot法检测各组细胞Janus激酶2(JAK2)、磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组相比,(25、50、100)μmol/L AG490组的抑制作用增强,呈浓度和时间依赖性;随着AG490药物浓度的增加凋亡率逐渐增加;与对照组相比,50μmol/L组细胞存活率显著降低,放射生物学参数:射线为2Gy时的存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)和外推数(N)降低;D0时放射增敏比(SER D0)、Dq时放射增敏比(SERDq)则增加。Western blot结果显示JAK2、p-STAT3和Bcl-2的蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐降低,Bax蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐增加。结论 AG490可抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖、增加细胞凋亡、提高放射敏感性。     

天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞上皮-间质转化中的微RNA表达变化

目的探讨天龙咳喘灵提取物抑制转化生长因子B1（TGF-β1）诱导A549细胞上皮-间质转化（EMT）过程中微RNA（miRNA）的表达变化。方法体外培养A549细胞,TGF—β1刺激A549细胞60min后加入天龙咳喘灵提取物,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化。反转录-PCR、免疫印迹法检测a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）mRNA和蛋白表达。miRNA芯片检测A549细胞EMT前后miRNA表达的变化。结果细胞形态学观察、反转录-PCR及免疫印迹检测均显示,5μg/LTGF-β1可以诱导A549细胞EMT且可以被50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制或逆转。miRNA芯片检测显示,与未处理的A549细胞比较,A549细胞EMT后有41种miRNA表达出现显著改变,其中26种表达上调2倍以上,15种表达下调2倍以上;与未处理的A549细胞比较,50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制TGF—β1诱导A549细胞EMT后有46种miRNA的表达出现显著变化,其中25种表达上调2倍以上,21种表达下调2倍以上;与TGF-β1诱导A549细胞EMT比较,50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞EMT时有17种miRNA差异表达,其中13种表达下调2倍以上,4种表达上调2倍以上。结论天龙咳喘灵提取物可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT,并参与调控miRNA的差异表达,可能有助于阻止慢性肺部纤维化疾病的进展。