贝母素甲对小鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应及自噬的影响

目的通过探讨贝母素甲(PM)对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的炎症反应和自噬的影响。方法 SPF级,健康C57BL小鼠144只,按体重随机分为假手术组、模型组、阿司匹林(ASA)组、PM低、中、高剂量组。使用颈内动脉线栓法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,其中PM低、中、高剂量组于造模前3 d分别灌胃给药1 mg/(kg·d),2 mg/(kg·d),4 mg/(kg·d),ASA组灌胃给药2 mg/(kg·d),观察各组小鼠行为学、脑梗死体积、脑组织水含量和脑组织海马的病理形态学的变化,测定脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-10和自噬蛋白LC3-Ⅱ的表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠脑组织病理损伤严重,行为学评分明显升高(P0.01),TNF-α和IL-1β含量明显升高(P0.05),IL-10含量和自噬蛋白LC3-Ⅱ的表达量显著降低(P0.01);与模型组比较,ASA组、PM给药组明显改善行为学评分,脑梗死率、脑组织水含量、脑匀浆TNF-α、IL-1β含量明显降低(P0.05),IL-10含量和自噬蛋白LC3-Ⅱ的表达量显著升高(P0.01),且呈剂量依赖性。结论 PM对小鼠脑CIRI有较好的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应和促进自噬有关。     

益肺温阳化浊汤调控PI3K/Akt-mTOR信号通路保护AD大鼠神经细胞的作用机制研究

目的探讨中药复方益肺温阳化浊汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型调控PI3K/Akt-mTOR信号通路、保护AD大鼠神经元的作用机制。方法选取SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、对照组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组,每组大鼠20只。采用β-淀粉样蛋白1-40(Aβ均1-40)制备AD大鼠模型。采用Real-time PCR、Western Blot等方法检测PI3K/Akt-mTOR通路及其下游自噬与凋亡相关因子的mRNA和蛋白表达水平,观察益肺温阳化浊汤灌胃对AD模型大鼠海马区PI3K/Akt-mTOR信号通路相关因子及Aβ含量的影响;探讨益肺温阳化浊汤治疗AD的作用机制。结果对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠定位航行试验逃避潜伏期、平台象限游泳距离、非平台象限游泳距离、平台象限游泳时间、非平台象限游泳时间、跨越原平台次数均显著优于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。假手术组大鼠的海马组织神经细胞凋亡率及Aβ含量均低于其他5组,模型组高于其他用药4组,差异有统计学意义(P0.05)。六组大鼠海马组织的神经细胞凋亡率表现为模型组低剂量组对照组中剂量组高剂量组假手术组,海马组织Aβ含量表现为模型组低剂量组中剂量组对照组高剂量组假手术组。大鼠脑组织中PI3K、Akt、Beclin1、LC3蛋白表达水平均表现为模型组对照组低剂量组中剂量组高剂量组,mTOR水平表现为模型组对照组低剂量组中剂量组高剂量组假手术组。与假手术组大鼠比较,模型组大鼠脑组织中PI3K、Akt、Beclin1的mRNA表达水平显著升高,mTOR的mRNA水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组大鼠比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组及对照组大鼠脑组织的PI3K、Akt的mRNA表达水平均明显降低,mTOR的mRNA表达水平均明显升高;低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠脑组织的Akt的mRNA水平显著低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论益肺温阳化浊汤灌胃可通过调控PI3K/Akt-mTOR信号通路,调节AD模型大鼠自噬系统,清除神经细胞Aβ,抑制神经细胞凋亡,发挥保护神经细胞的作用。     

蓝莓对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达的影响

目的:观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的影响.方法:60只健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、蓝莓原浆高剂量组、蓝莓原浆中剂量组、蓝莓原浆低剂量组及复方鳖甲软肝片组.除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射无菌猪血清复制大鼠肝纤维化模型.造模同时各蓝莓组给予不同浓度蓝莓原浆(0.25 m L/100 g、0.5 m L/100 g、1.0 m L/100 g)灌胃,复方鳖甲软肝片组用复方鳖甲软肝片灌胃(0.054 g/100 g),1次/d.12wk处死大鼠,测定血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量,行肝组织病理学检查;Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin1、Ⅰ型胶原(ColⅠ)的蛋白水平;实时定量PCR(realtime quantitative PCR,q RT-PCR)检测LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA水平.结果:各组大鼠血清ALT、AST水平差异无统计学意义(均P0.05).与正常对照组比较,模型组肝纤维化程度明显(P0.05),LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA及蛋白表达、ColⅠ的蛋白表达明显增高(均P0.01).与模型组比较,蓝莓原浆高、中剂量组肝纤维化程度明显减轻(P0.05),胶原表达减少;LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA、蛋白表达及ColⅠ的蛋白表达明显降低(均P0.01).结论:猪血清所致的大鼠免疫性肝纤维化中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1升高,蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预作用可能与下调LC3和Beclin1的基因及蛋白表达,进而抑制自噬有关.     

调脾护心方对慢性心力衰竭大鼠toll样受体4及TNF-α表达的影响

目的观察调脾护心方对慢性心力衰竭大鼠toll样受体4及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法选择SD雄性健康大鼠40只,随机分为对照组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组和模型组,各8只。将除对照组外的32只大鼠结扎左冠状动脉前降支,建立心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。造模成功后,中药高剂量组以23.40mg/(kg·d)标准给予调脾护心方颗粒剂灌胃,中药低剂量组以5.85mg/(kg·d)标准给予调脾护心方颗粒剂灌胃,西药组以0.36mg/(kg·d)标准给予培哚普利灌胃,模型组和对照组给予相同剂量的生理盐水灌胃。连续给药4周后,观察实验期间各组大鼠精神、饮食及饮水、消瘦等一般情况。采用免疫印迹法检测toll样受体4表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α表达水平及光镜下各组大鼠心肌细胞变化情况。结果模型组大鼠心肌toll样受体4和TNF-α表达明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药低剂量组和中药高剂量组、西药组心肌toll样受体4和TNF-α表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);中药低剂量组与西药组toll样受体4和TNF-α表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论调脾护心方可缓解慢性心力衰竭大鼠炎症状态,减轻临床症状;同时改善心力衰竭炎症状态存在药物剂量浓度差异,在一定范围内,增加调脾护心方剂量,在改善心力衰竭炎症状态方面,达到最佳治疗效果。     

YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

加味五虎追风散对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元α-syn及TH表达的影响

目的探讨加味五虎追风散对鱼藤酮诱导帕金森病(PD)模型多巴胺能神经元大鼠黑质区α-突触核蛋白(α-syn)异常聚集及酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达的影响。方法将90只健康SPF级Wistar大鼠随机分为5组:空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,各16只。颈、背部交替皮下注射鱼藤酮法制备大鼠PD模型。中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组分别给予加味五虎追风散4.15 g/(kg·d)、8.3 g/(kg·d)、16.9 g/(kg·d)灌胃,模型组及空白组用相等体积的蒸馏水灌胃,连续28 d。比较各组黑质纹状体区α-syn聚集情况及TH蛋白含量。结果行为学观察结果:PD造模大鼠不同程度出现捕捉动作减少、皮毛及尾巴时有竖立、中重度震颤、肢体偏瘫等表现。模型组脑黑质区α-syn含量较空白组增加,TH蛋白含量较空白组降低,差异均有统计学意义(P<0.01);中药低剂量组、中剂量组、高剂量组脑黑质区α-syn含量较模型组降低,TH蛋白含量较模型组升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中中药高剂量组脑黑质区α-syn含量均低于中药中剂量组、中药低剂量组(P<0.05),TH蛋白表达均高于中药中剂量组、中药低剂量组(P<0.05)。结论加味五虎追风散对PD大鼠黑质纹状体区α-syn异常聚集具有一定程度的抑制作用,能增加TH含量,对多巴胺能神经元起保护作用。     

电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注后学习记忆障碍大鼠皮质区内LC3 Ⅱ和Beclin-1的影响

目的 观察大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型大鼠皮质区中自噬体的形成。方法 线栓法制备局灶性脑缺血损伤大鼠模型。45只SD大鼠造模成功后用随机数字表法分为电针组、模型组和假手术组各15只。电针组行电针干预治疗14 d。透射电镜下观察大鼠皮质区溶酶体及自噬体的形成；Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠脑组织中酵母Atg6基因在哺乳动物中同源类似物(Beclin)-1和自噬微管相关蛋白轻链3抗体(LC3)Ⅱ含量。结果 电针组溶酶体及自噬体形成数量明显多于模型组和假手术组(P<0.05);与模型组相比，电针组脑组织中Beclin-1和LC3Ⅱ含量明显升高(P<0.05);模型组脑组织中Beclin-1和LC3Ⅱ含量显著高于假手术组(P<0.05)。结论 自噬体形成及自噬相关蛋白可以调控脑缺血再灌注后大鼠的学习及记忆能力，自噬网络及其调控机制在脑卒中所导致的认知障碍形成及恢复过程中起着重要作用。     

活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用研究

目的:探讨活血通络方对脑缺血再灌注大鼠损伤的神经保护作用及其机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、活血通络方低剂量组、活血通络方高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水10 mg/(kg·d)灌胃;阳性对照组给予尼莫地平混悬液9.375 mg/(kg·d)灌胃;活血通络方低剂量组、高剂量组分别给予活血通络方水体液6.25 g/(kg·d)、25 g/(kg·d)灌胃。连续灌胃2周后,评估大鼠神经功能,蛋白免疫印迹法测定紧密连接蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白表达水平,免疫组化法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和水通道蛋白4(AQP4)含量。结果:与假手术组比较,模型组及各用药组神经功能评分均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各用药组神经功能评分均明显降低(P<0.05);与活血通络方低剂量组比较,阳性对照组和活血通络方高剂量组神经功能评分均明显降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组及各用药组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显降低,MMP-2和AQP4水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1...     

芪参益气汤对阿霉素致心力衰竭大鼠心功能及miR133a表达的影响

目的探讨芪参益气汤对阿霉素致心力衰竭(CHF)大鼠心功能及微小核糖核酸133a(miR133a)表达的影响。方法选取清洁级健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为对照组、模型组、西药组及中药低、中、高剂量组,各15只。模型组、西药组及中药低、中、高剂量组采用阿霉素尾静脉注射建立CHF模型,对照组大鼠以等量0.9%氯化钠溶液尾静脉注射。模型建立后,模型组和对照组分别予以0.9%氯化钠溶液10mL/kg灌胃给药,每日1次;西药组予以0.25mg/mL卡托普利溶液10mL/kg灌胃给药每日1次;中药低、中、高剂量组分别予以0.8g/mL、1.6g/mL、3.2g/mL芪参益气汤10mL/kg,灌胃给药,每日1次。各组大鼠均给药28d。检测比较各组心脏功能、心肌细胞凋亡指数(AI)、心肌组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)表达水平及miR133a、Bcl-2mRNA、Caspase-9mRNA表达水平。结果与模型组比较,其他各组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)较低,心肌AI较低,心肌组织Caspase-9蛋白及Caspase-9mRNA表达水平较低,且除LVEDD指标中药中剂量组与中药低剂量组比较差异无统计学意义之外,其余指标均中药低剂量组>中药中剂量组>中药高剂量组和西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,其他各组大鼠射血分数(EF)、短轴缩短分数(FS)较高,心肌组织Bcl-2蛋白及miR133a、Bcl-2mRNA表达水平较高,且中药低剂量组<中药中剂量组<中药高剂量组和西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芪参益气汤能明显改善CHF大鼠的心功能,而且剂量越高效果越好,其作用可能与促进miR133a表达,调节miR133a下游Bcl-2、Caspase-9蛋白表达水平,抑制心肌细胞凋亡有关。     

益气养阴通络法通过JAK/STAT通路对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察益气养阴通络法对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡JAK/STAT通路的影响。方法取健康SD大鼠60只,随机分为6组,假手术组、模型组、西药组(盐酸地尔硫卓片)、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。对模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、西药组实验动物结扎左冠状动脉前降支进行造模,复制急性心肌缺血模型。西药组给予盐酸地尔硫卓片,中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组给予双参通脉颗粒灌胃2周。检测各组心功能、免疫组化法(IHC)检测P-STAT3蛋白表达,蛋白免疫印迹法检测心肌组织中Caspase-3的表达水平。结果与模型组比较,中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组心功能改善明显。与模型组比较,各治疗组P-STAT3蛋白表达均升高。与假手术组比较,模型组Caspase-3表达明显升高(P0.01);与模型组比较,西药组、中药高剂量组、中药中剂量组Caspase-3蛋白表达均降低(P0.01)。结论益气养阴通络法能够上调P-STAT3蛋白表达、下调Caspase-3蛋白表达,抑制急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡。     

何首乌对血管性认知障碍大鼠学习记忆功能的影响

目的探讨何首乌对血管性认知障碍(VCI)大鼠学习记忆功能的影响。方法筛选造模成功VCI大鼠48只,随机分为4组:何首乌高剂量组、何首乌中剂量组、何首乌低剂量组、VCI模型组,每组12只大鼠。另有12只假手术大鼠作为正常对照组(假手术组)。造模成功后对大鼠用灌胃器灌胃,灌胃液体温度为20℃,何首乌高、中、低剂量组给予4.0 g/m L、2.0 g/m L、0.5 g/m L何首乌溶液灌胃,模型组、假手术组均生理盐水灌胃,灌胃剂量按1 m L/(100 g·d),共28 d。术后28 d各组大鼠开始行Morris水迷宫学习记忆能力等行为学测试,行为学测试结束后,行免疫组织化学检测Bcl-2、Bax阳性细胞的表达。结果与VCI模型组相比,何首乌中剂量组、何首乌高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越目标象限时间明显延长,穿越平台次数明显增加,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);各组VCI大鼠造模28 d完成行为学试验后海马区Bcl-2和Bax蛋白表达显著高于假手术组。而何首乌高剂量组、中剂量组与VCI模型组相比Bcl-2蛋白表达增加的幅度明显大于Bax蛋白(P0.05或P0.01)。结论何首乌通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡,从而改善VCI大鼠的学习以及认知能力。     

绞股蓝总甙调控mTOR/ULK1通路对ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的影响

目的基于mTOR/ULK1自噬信号通路探讨绞股蓝总甙改善动脉粥样硬化模型小鼠主动脉脂质沉积的作用机制。方法 30只健康ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型对照组、绞股蓝总甙组和辛伐他汀组,每组10只。10只C57BL/6J小鼠作为正常组。模型对照组、绞股蓝总甙组和辛伐他汀组采用高脂饲料喂养4周,绞股蓝总甙组和辛伐他汀组分别采用绞股蓝总甙2.973 g/(kg·d)、辛伐他汀2.275 mg/(kg·d)灌胃8周,模型对照组、正常组予等量生理盐水灌胃。HE染色观察小鼠动脉粥样硬化斑块形成情况,全自动生化分析仪检测血脂水平,Western blot检测主动脉ULK1、Beclin1、LC3、p-mTOR的蛋白表达。结果与正常组相比,模型对照组TG、TC和LDLC水平升高(P0.05),HDLC水平降低(P0.05),主动脉管腔见较大粥样斑块,ULK1、Beclin1、LC3蛋白表达水平下调(P0.01),pmTOR蛋白表达水平上调(P0.01);与模型对照组相比,绞股蓝总甙组和辛伐他汀组TG、TC和LDLC水平降低(P0.05),HDLC水平升高(P0.05),主动脉管腔粥样斑块明显减少,ULK1、Beclin1、LC3蛋白表达水平上调(P0.01),p-mTOR蛋白表达水平呈下调趋势(P0.01或P0.05)。结论绞股蓝总甙可能通过调控自噬缓解动脉粥样硬化斑块形成,进而防治动脉粥样硬化。     

辛伐他汀对哮喘小鼠细胞自噬和炎症的影响及其机制的实验研究

目的观察不同剂量辛伐他汀对哮喘小鼠自噬和炎症的影响及机制。方法32只小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、低剂量辛伐他汀组(C组40 mg/Kg)、高剂量辛伐他汀组(D组60 mg/Kg),每组8只。B、C、D三组采用卵清蛋白+氢氧化铝造模,C、D组同时给予辛伐他汀40 mg/kg、60 mg/kg灌胃。采用H.E染色观察肺组织,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR,RT-PCR法检测Atg5和Beclin1 mRNA。结果A组支气管未见炎症细胞浸润,管腔规则、黏膜上皮正常;B组可见大量炎症细胞浸润,管壁增厚,气道黏膜增生;C、D组上述表现较B组减轻,且D组改善更明显。与A组比较,B组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D两组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,D组上述指标变化更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠自噬水平增加,p-mTOR/mTOR信号通路蛋白降低;辛伐他汀可能通过阻断mTOR信号通路进一步提高LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA水平,从而缓解气道炎症。     

糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用

目的观察糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用,探讨雷帕霉素是否通过调节自噬、内质网应激和细胞凋亡对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。方法雄性SD大鼠用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病组和雷帕霉素干预组。采用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型。雷帕霉素干预组给予雷帕霉素2mg/(kg·d)灌胃。于实验第8周留取血标本,用于血生物化学指标和脂联素水平检测,然后处死动物并迅速取出胸主动脉和腹主动脉,测定主动脉Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清脂联素水平显著降低(P0.05),主动脉壁增厚,内皮严重受损,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P 0. 05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与糖尿病组比较,雷帕霉素干预组大鼠血清脂联素水平显著升高(P0.05),主动脉组织病理改变显著减轻,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠主动脉组织自噬水平降低,雷帕霉素可能通过激活自噬和减轻内质网应激和细胞凋亡水平对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。     

天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠外周血VEGF、TNF-α及EPCs动员的影响

目的探讨天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血压和血管内皮损伤修复的影响。方法将50只自发性高血压大鼠分为模型组、西药组[依那普利3mg/(kg·d)]、中药低剂量组[1.0mL/(100g·d)]、中剂量组[1.5mL/(100g·d)]和高剂量组[2.0mL/(100g·d)],另设对照组。各组大鼠均灌胃6周,每周测量血压,末次给药后检测外周血内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,并对外周血内皮祖细胞进行流式细胞计数。结果与模型组比较,中药高剂量组及西药组大鼠血压降低(P<0.05);中药低剂量组、中剂量组、高剂量组及西药组血清VEGF、TNF-α浓度较模型组均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);中药高剂量组及西药组外周血内皮祖细胞数量升高(P<0.05)。结论天麻钩藤饮可降低自发性高血压大鼠血压,其作用机制可能与降低血管内皮细胞损伤、促进内皮祖细胞动员有关。     

Apelin-13对高血压性肾纤维化的影响及机制研究

目的探讨血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(APJ)激动剂Apelin-13对高血压性肾纤维化的影响及其机制。方法 12周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为对照组、1μg/(kg·d)Apelin-13组、10μg/(kg·d)Apelin-13组、100μg/(kg·d)Apelin-13组;Apelin-13通过尾静脉给药。测量大鼠24 h尿蛋白量、血清肌酐和尿素氮浓度。采用套尾法测量尾动脉收缩压,HE染色和Masson染色观察大鼠肾脏组织学改变,Western blot检测肾脏组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62的表达。结果与对照组比较,10μg/(kg·d)Apelin-13组、100μg/(kg·d)Apelin-13组以剂量依赖方式降低大鼠收缩压、24 h尿蛋白量、血清肌酐和尿素氮水平、肾脏损伤评分和胶原容积分数(均P0.05),减轻肾小管上皮细胞水肿,减少间质胶原沉积,降低肾间质纤维化程度。10μg/(kg·d)Apelin-13组、100μg/(kg·d)Apelin-13组也以剂量依赖方式增加大鼠肾脏组织中LC3-Ⅱ表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1表达,降低p62表达(均P0.05)。结论 Apelin-13抑制高血压性肾纤维化的进展,其机制可能与Apelin-13抑制细胞自噬有关。     

补阳还五汤对舒张性心力衰竭大鼠心肌钙转运蛋白表达水平的影响

目的研究补阳还五汤对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠心肌钙转运蛋白L型钙通道(LTCC)、兰碱尼受体(RyR2)、肌浆网上的钙泵(SERCA2a)和受磷蛋白(PLB)mRNA表达的影响,初步探寻补阳还五汤治疗DHF的作用机制和药物干预靶点。方法选择60只雄性SD大鼠,随机分为假手术组和造模组,造模组利用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,每组7只。中药组给予补阳还五汤12.72 g/(kg·d)灌胃,西药组给予酒石酸美托洛尔0.004 5 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等量的去离子水灌胃,各组均每日灌胃1次。药物干预8周后,运用聚合酶链式反应法(PCR)检测LTCC、RyR2、SERCA2a和PLB的mRNA转录。结果各组LTCC mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P0.05);与假手术组相比,模型组、中药组RyR2 mRNA表达降低(P0.05),而西药组RyR2 mRNA的表达与假手术组差异无统计学意义(P0.05),中药组、西药组与模型组组间相比差异无统计学意义(P0.05)。模型组、中药组、西药组SERCA2a和PLB mRNA表达与假手术组相比均降低(P0.05),西药组、中药组SERCA2a和PLB mRNA表达与模型组相比均升高(P0.05),中药组与西药组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤可明显提高DHF大鼠SERCA2a、PLB的mRNA转录,有可能通过作用于这两种蛋白改善DHF大鼠左室舒张功能。     

Wnt/β-catenin信号通路通过下调自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察Wnt/β-catenin信号通路通过调控大鼠皮层神经元细胞自噬水平对脑缺血再灌注(CIR)损伤的影响。方法将56只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、CIR组、Wnt/β-catenin激动剂氯化锂(Li Cl)处理组(Li Cl+CIR组)、生理盐水(NS)处理组(NS+CIR组),每组14只。采用大脑中动脉线栓阻塞法建立大鼠CIR损伤模型,缺血2 h后再灌注24 h。采用Garcia神经功能缺陷评分评估各组大鼠神经行为学改变;氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积;Western blot测定大鼠皮层β-catenin、LC3-Ⅱ及P62蛋白表达。结果再灌注24 h后,与Sham组相比,CIR组神经行为学评分升高,脑梗死体积增加,皮层β-catenin表达降低,LC3-Ⅱ表达升高,P62蛋白表达水平下降(P0.05);与CIR组相比,Li Cl+CIR组神经行为学评分降低,脑梗死体积减少,皮层β-catenin表达增加,LC3-Ⅱ表达降低,P62蛋白表达水平增加(P0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路通过调控自噬改善大鼠CIR的神经损伤。     

搜风祛痰中药对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白beclin1和LC3的影响

目的观察搜风祛痰法中药复方稳斑汤对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块自噬相关蛋白beclin1和LC3的影响。方法建立Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并设立空白组、模型组、西药组及稳斑汤低、中、高剂量组。实验周期1个月,麻醉处死小鼠取主动脉组织HE染色后在光学显微镜下进行病理学观察,然后采用Western blot法检测beclin1及LC3的蛋白表达水平。结果 beclin-1蛋白表达结果显示:与空白对照组比较,模型对照组小鼠腹主动脉组织中beclin1蛋白表达水平显著降低(P0.01);与模型对照组比较,中药中剂量组、中药高剂量组、西药组小鼠腹主动脉组织中beclin1蛋白表达水平显著升高(P0.01);中药高剂量组与西药组无统计学意义(P0.05)。LC3蛋白表达结果显示:与空白对照组比较,模型对照组小鼠腹主动脉组织中LC3蛋白表达水平显著降低(P0.01);与模型对照组比较,中药各剂量组及西药组小鼠腹主动脉组织中LC3蛋白表达水平显著升高(P0.01);中药高剂量组与西药组无统计学意义。结论搜风祛痰法中药复方稳斑汤对于beclin1与LC3的蛋白表达密切相关,即搜风祛痰法中药复方稳斑汤可能通过影响beclin1与LC3的蛋白表达,从而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性。     

心衰宁合剂对慢性心力衰竭大鼠心肌自噬相关蛋白表达的影响

目的 探讨心衰宁合剂(XSNM)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌自噬效应蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ表达的影响。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照(卡托普利组,10 mg/kg),XSNM低、中、高剂量组(15.6、31.2、62.4 g/kg),采用阿霉素(ADR,2.5 mg/kg)腹腔注射复制CHF大鼠模型,空白组注射等量生理盐水,每周1次,造模6 w。模型复制结束后各组按剂量灌胃,空白组及模型组灌胃生理盐水,灌胃4 w。采用超声心动图检测大鼠心功能;苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察大鼠心肌病理学变化情况;透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK)-MB含量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western印迹检测大鼠心肌Beclin1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)均显著增加(P<0.01),左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分率(LVFS)显著降低(P<...