尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

Moesin调控肺癌A549细胞增殖、侵袭的实验研究

目的研究Moesin在非小细胞肺癌中的作用及其机制。方法通过数据库分析发现Moesin高表达在非小细胞肺癌患者中与不良预后相关。利用Western Blot检测Moesin在肺癌细胞株内表达情况。选取Moesin表达量中等A549细胞株进行实验。将A549细胞分为对照组和Moesin干扰组,分别利用CCK-8, Transwell检测细胞增殖、转移的作用,利用Western blot检测干扰Moesin对细胞增殖、上皮间充质转移(EMT)信号通路蛋白的影响。结果干扰Moesin后,增殖信号通路p-AKT, p-ERK,EMT信号通路E-cadherin, N-cadherin, Vimtein等蛋白都有明显变化,并且肺癌细胞表型如增殖,转移、侵袭能力也有明显下降。结论 Moesin在非小细胞肺癌中表达上调,其高表达与不良预后相关。并且,通过影响下游增殖、转移信号通路蛋白,Moesin可促进肺癌细胞增殖转移。     

miR-126抑制非小细胞肺癌细胞系A549细胞的增殖、转移和侵袭

目的探讨miR-126在非小细胞肺癌(NSCLC)株A549细胞中的表达和生物学作用。方法通过qRT-PCR检测正常人肺上皮细胞16-HBE和A549细胞中miR-126的表达。将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126过表达组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126过表达组分别转染control-mimics和miR-126 mimic。并将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126抑制剂组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126抑制剂组分别转染control-inhibitors和miR-126 inhibitor。通过噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁徙能力,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 A549细胞株中miR-126水平明显低于16-HBE细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,miR-126 mimic可明显降低A549细胞的增殖率,而miR-126 inhibitor可明显增加A549细胞的增殖率(P0.01)。miR-126 mimic转染后24 h的A549细胞的迁移和侵袭能力下降,转染miR-126 inhibitor后,A549细胞的迁移和侵袭能力提高(均P0.01)。结论 miR-126在肺癌细胞中表达下调,体外过表达可明显抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭能力。     

Ezrin对人肺癌细胞株A549侵袭转移能力的影响及机制

目的观察Ezrin对人肺癌细胞株A549侵袭转移能力的影响,并探讨其机制。方法用细胞转染方法将Ezrin特异性siRNA（观察组）和对照siRNA（对照组）转入A549后,采用Western blot法检测A549中Ezrin蛋白表达情况,采用Transwell实验检测穿过膜的A549细胞数量,采用RT-PCR方法检测A549中MMP-2、MMP-9、u-PA、c-Fos、c-Jun和NF-κB mRNA的表达。结果与对照组相比,siRNA干扰Ezrin基因后,A549细胞穿过膜的细胞数量明显减少（P均〈0.01）,u-PA、c-Fos、c-Jun和NF-κB的表达明显降低（P均〈0.01）。结论 Ezrin通过诱导c-Fos、c-Jun和NF-κB三种转录因子活性,进而通过u-PA促进A549细胞的侵袭和转移能力。     

姜黄素对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素对肺癌A549细胞侵袭迁移力的影响及其机制。 方法利用不同浓度姜黄素处理正常肺上皮细胞,台盼蓝法检测药物细胞毒性;不同浓度的姜黄素作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;细胞划痕实验和Transwell实验分别测定药物处理后A549细胞的迁移和侵袭能力变化情况;Werstern blot测定A549细胞中于侵袭迁移有关的表皮生长因子受本(EGFR)、E-型钙黏蛋白(E-cadherin)、N-型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白的表达。 结果姜黄素浓度在0～40 μg/ml时正常肺上皮病死率低,差异无明显统计学差异(P>0.05),表明姜黄素对正常肺上皮细胞的不良反应小;MTT实验结果显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的迁移能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Transwell实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的侵袭能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Western blot显示姜黄素处理A549细胞后EGFR蛋白(P<0.01)和N-cadherin蛋白表达降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。 结论一定浓度内姜黄素细胞毒性低,姜黄素能够抑制A549的增殖、迁移和侵袭,可能是通过调节EGFR、N-cadherin、E-cadherin蛋白从而逆转上皮间质转化过程。     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法取A549细胞株,分为对照组、实验组,分别转染si-NC阴性对照、OGFR特异性的小干扰RNA。采用RT-qPCR和Westernblotting法分别检测细胞中的OGFRmRNA和蛋白,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,实验组OGFRmRNA及蛋白相对表达量低,培养24、48、72 h细胞增殖OD值均低,穿膜细胞数少,细胞迁移率低,克隆形成细胞集落数少(P均<0.05)。结论沉默OGFR基因可降低A549细胞株OGFR基因mRNA和蛋白质的表达,在体外减弱了其增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A5...     

ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的构建ABCE1基因的SiRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,研究ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对SiRNA引物,构建携带红色荧光的重组质粒ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N。采用lipofect2000法将载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N转染入小细胞肺癌细胞中。转染48 h后应用West-ern印迹法检测转染后ABCE1蛋白表达。MTT法、Transwell小室、划痕实验检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、迁移能力的改变。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-SiRNA表达载体构建成功。转染ABCE1-SiRNA后的小细胞肺癌细胞内可见红色荧光。在转染ABCE1-SiRNA-N的NCI-H446细胞中ABCE1基因呈高表达,而转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的细胞呈低表达。MTT实验提示,转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的小细胞肺癌细胞与转染ABCE1-SiRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制。Transwell实验发现转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞穿膜细胞数较未转染和转染ABCE1-SiRNA-N组细胞明显减少。划痕实验显示转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞迁移速度明显慢于转染ABCE1-SiRNA-N的细胞和对照组细胞。结论成功构建了ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA。ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2转染人小细胞肺癌细胞后不仅可抑制ABCE1基因的表达,而且还能明显的抑制细胞生长,使其增殖能力下降,降低其侵袭、迁移能力。     

外源性PTEN对胰腺癌细胞ASPC-1增殖、侵袭及转移的影响

目的 研究第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、细胞增殖、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达、裸鼠成瘤及转移能力的影响.方法 将含PTEN基因的质粒pE-PTEN转染ASPC-1细胞,以空质粒pE转染为对照,分别获得ASPC-1-pE-PTEN (A-pE-P)细胞及ASPC-1-pE (A-pE)细胞.应用RT-PCR检测细胞PTEN mRNA表达;免疫细胞化学法检测PTEN、VEGF、EGFR蛋白表达;克隆形成实验观察克隆形成数;Transwell小室观察细胞侵袭能力;裸鼠皮下注射癌细胞法观察成瘤情况.结果 与ASPC-1细胞比较,A-pE-P细胞的PTEN mRNA表达增加179.3％,PTEN蛋白表达明显增加;VEGF蛋白表达明显减少;EGFR蛋白表达无明显变化;G2/M期细胞数明显增加[(31.5±1.76)％比(26.81±1.03)％,P＜0.05];克隆形成数降低[(24.0±3.9)比(33.3 ±3.4),F=4.283,P＜0.01],克隆形成率降低28％;穿膜细胞数明显减少[每高倍视野(46.3±6.6)比(63.8±7.5)个,F=2.476,P＜0.05];种植瘤体积明显缩小[(142.4±30.9)比(202.7±43.6)mm3,t=4.834,P＜0.01],抑瘤率达42.4％;远处转移灶明显减少[(2.0±0.7)比(5.0±1.3)个,t =0.451,P＜0.01].结论 PTEN基因转染后ASPC-1细胞VEGF表达减少,细胞生长被阻滞在G2/M期,增殖及转移被抑制.     

SATB1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭及凋亡的影响

目的构建SATB1的siRNA表达载体,并研究其对小细胞肺癌(SCLC)的作用。方法根据SATB1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建携带绿色荧光的重组质粒SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2、SATB1-siRNA-N。应用lipofect2000将载体SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2、SATB1-siRNA-N转染入SCLC细胞NCI-H446中。转染48 h后应用Western印迹法检测转染后SATB1蛋白表达细胞增殖能力检测(MTT法)、Transwell小室、流式细胞仪检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、凋亡的改变。结果成功的构建了SATB1基因的siRNA表达载体。转染SATB1-siRNA后的SCLC细胞内可见绿色荧光。转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2的NCI-H446细胞中其SATB1表达明显低于转染SATB1-siRNA-N及空白对照组的NCI-H446细胞中。MTT实验提示,转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2的SCLC细胞与转染SATB1-siRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制。Transwell结果显示转染SATB1-siRNA-1、SATB1-siRNA-2后的SCLC细胞穿膜细胞数较未转染的和转染SATB1-siRNAN组细胞明显减少。流式结果显示细胞凋亡率转染SATB1-siRNA-1和SATB1-siRNA-2的细胞均显著高于转染SATB1-siRNA-N和空白对照组细胞(P<0.05)。结论 SATB1-siRNA可抑制SCLC细胞的增殖及侵袭能力,并诱导其细胞凋亡,提示SATB1在人SCLC的转移中起着重要的作用。     

选择性环氧化酶2抑制剂对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤,患者5年生存率仅15％。因此,新的治疗方法的探讨对肺癌防治具有重要意义。流行病学资料表明,非甾体类抗炎药物(NSAIDS)阿司     

下调KDM1A基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭及AKT信号通路的影响

目的探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(KDM1A)对结直肠癌细胞增殖侵袭及AKT信号通路的影响。方法采用LipofectamineTM2000转染试剂将si-KDM1A转染至结直肠癌HCT15细胞中,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,RT-PCR检测细胞中KDM1A mRNA的表达,Western blotting检测KDM1A蛋白和AKT信号通路相关蛋白p21、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT的表达。结果转染si-KDM1A后,HCT15细胞中KDM1A mRNA、KDM1A、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT蛋白表达均显著降低,而p21蛋白表达显著升高;细胞的增殖能力和侵袭能力明显减弱;细胞在G1期所占比例明显增加,而在S期和G2期明显减少。结论下调KDM1A基因可抑制结直肠癌HCT15细胞的增殖、侵袭能力,其分子机制可能与抑制AKT信号通路的活化有关。     

胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 研究胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖、侵袭能力及细胞低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子( VEGF)表达的影响.方法 采用0.1、1、10、100 nmol/L胰岛素处理PANC1.噻唑蓝法和Transwell小室侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力;蛋白质印迹法和实时PCR法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)及HIF-1α、VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 胰岛素呈剂量依赖性诱导PANC1细胞的增殖,上调HIF-1α、VEGF蛋白表达.100 nmol/L胰岛素干预4d,PANC1细胞的PCNA蛋白表达显著上调(1.196±0.014比1.157±0.013,P＜0.05);Transwell小室穿膜细胞数量显著增加[(141.0±2.1)个比(89.0±1.4)个,P＜0.05];HIF-1α蛋白表达显著上调(1.139±0.020比0.598 ±0.013,P＜0.05),但HIF-1α mRNA表达无明显变化;VEGF蛋白表达显著上调(1.011±0.023比0.627±0.013,P ＞0.05),VEGF mRNA表达亦显著上调(0.970±0.016比0.350±0.013,P＜0.05).结论 高胰岛素微环境可诱导PANC1细胞增殖,并通过上调HIF-1α及VEGF的表达增强细胞的侵袭能力.     

HIF-1对乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭、迁徙能力的影响及其机制

目的：探索低氧诱导因子-1(HIF-1)对乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭及迁徙能力的影响及可能机制。方法采用氯化钴建立人肺腺癌 A549细胞体外化学乏氧模型。给予 HIF-1α特异性抑制剂YC-1抑制 A549细胞 HIF-1α的表达;通过 Western blot、免疫细胞化学、real time-PCR 检测 HIF-1α、S100A4蛋白及 mRNA 的表达;Transwell 小室模型检测 A549细胞 侵 袭 及 迁 徙 能 力。结果乏氧组A549细胞 HIF-1α、S100A4表达较常氧组增加,侵袭及迁徙能力较常氧组增强。YC-1干扰 HIF-1α表达后,YC-1组 A549细胞侵袭及迁徙能力减弱,S100A4蛋白及 mRNA 表达均降低。结论 HIF-1可能通过上调 S100A4的表达促进乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭及迁徙的能力。     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

鸦胆子苦醇抑制人非小细胞肺癌A549细胞转移的机制

目的探讨鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌A549细胞转移能力的抑制作用及其机制。方法采用Reed-Muench法计算鸦胆子苦醇对A549细胞的半数致死浓度(LC50);通过CCK-8测定细胞活力绘制增殖曲线和流式细胞周期测定鸦胆子苦醇对A549细胞增殖能力的影响;采用Transwell法检测鸦胆子苦醇对A549细胞株转移的抑制情况,以及在半数致死浓度的鸦胆子苦醇浓度下不同时间对细胞转移的抑制率;应用Western印迹法检测细胞转移相关蛋白的表达情况。结果非小细胞肺癌A549细胞的增殖能力在鸦胆子苦醇处理后基本没有变化;鸦胆子苦醇处理后A549细胞的转移能力与对照组相比明显下降,且在一定作用时间范围内有时间依赖性;肿瘤转移相关蛋白(BRF)2、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)、CD151的表达水平在鸦胆子苦醇处理后的细胞中明显下调。结论鸦胆子苦醇是潜在的抗非小细胞肺癌的药物,有必要进一步阐明其抗非小细胞肺癌的分子机制,为临床治疗提供一定的指导意义。