宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA、HR-HPV DNA在宫颈病变筛查中的应用

目的 探讨HPV E6/E7 mRNA与高危型孔头瘤病毒（HR-HPV） DNA在宫颈病变筛查中的应用价值.方法 对301例宫颈病变疑似病例进行宫颈脱落细胞取样,分别检测慢性宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈鳞状细胞癌中HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的表达,比较二者在不同年龄组及病变程度中表达的差异.结果 在宫颈癌前病变及宫颈鳞状细胞癌患者中HPV E6/E7 mRNA的特异性和阳性预测值高于HR-HPV DNA（P均＜0.05）,敏感性低于HR-HPV DNA（P ＜0.05）.30岁以下与30～39岁受检者中HPV E6/E7 mRNA的阳性率低于HR-HPV DNA（P均＜0.05）.CIN2、CIN3及宫颈癌患者HPV E6/E7 mRNA阳性率高于慢性宫颈炎患者,且CIN3者高于CIN2者（P均＜0.05）,CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌患者HR-HPV DNA阳性率高于慢性宫颈炎患者（P均＜0.05）.结论 对于宫颈癌及癌前病变,HPV E6/E7 mRNA的阳性率及其诊断的特异性高于HR-HPV DNA,可作为筛查和随访的指标.     

HPV E6/E7 mRNA联合液基薄层细胞学检测在宫颈病变中的诊断价值

目的评价人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测联合液基薄层细胞学(TCT)方法在宫颈病变中的诊断价值。方法对750例高危型HPV DNA阳性患者分别进行TCT、HPVE6/E7 mRNA检测和阴道镜病理活检,比较HPV E6/E7 mRNA在各宫颈病变中阳性率的差异,以及比较单独检测和联合检测在宫颈病变中诊断价值的差异。结果 750例高危型HPV阳性患者进行阴道镜活检检出宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌293例,E6/E7 mRNA阳性患者占286例,各种宫颈病变(意义不明不典型鳞状细胞、低度鳞状上皮内瘤变、高度鳞状上皮内瘤变、鳞状癌变)患者HPV E6/E7 mRNA阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。单用TCT检出CIN阳性256例,单用E6/E7 mRNA检出CIN阳性247例,两者比较无统计学差异,单用TCT或E6/E7 mRNA检测出CIN阳性率均低于联合检测(P均<0.05)。结论 HPV E6/E7 mRNA检测联合TCT方法可降低宫颈病变的漏诊率,优于单独检测。     

人子宫颈癌组织PD-L1表达及其与HPV16E6/E7的相关性

目的探讨PD-L1在宫颈癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SABC法及RT-PCR法分别检测40份宫颈癌组织(宫颈癌组)、25份宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ级组织(CIN组)、8份正常宫颈组织(正常组)中程序性死亡配体1(PD-L1)、HPV16E6/E7(人乳头瘤病毒16型E6/E7)表达并分析二者的相关性。结果宫颈癌组、CIN组均有PD-L1、HPV16E6/E7表达,宫颈癌组表达明显高于CIN组(P<0.01);PD-L1与HPV16E6/E7表达呈正相关,r=0.531,P<0.01。正常组未见二者表达。结论 PD-L1在人子宫颈癌中发生、发展中起促进作用。     

植酸酮对宫颈癌细胞株中 HPV16／18 E6／E7 mRNA 及蛋白表达的影响

目的观察植酸酮对宫颈癌细胞株中HPV16/18 E6/E7 mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养Caski细胞株(含HPV16)与Hela细胞株(含HPV18),将所有细胞分成实验1、2、3、4组和对照组,每组均包含Caski细胞和Hela细胞。实验1、2、3、4组分别加入含58.6、117、586、5 860 mg/L植酸酮的培养液,对照组加入不含植酸酮的培养液。各组培养72 h后,采用real-time PCR法分别检测HPV16/18 E6/E7 mRNA,采用Western blotting法检测E6/E7蛋白。结果实验1、2、3、4组同一型别细胞中E6/E7 mRNA及蛋白相对表达量低于对照组,且实验1、2、3、4组E6/E7 mRNA及蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。各实验组内,Caski细胞中E6/E7 mRNA相对表达量低于Hela细胞(P均<0.05)。各实验组内同一型别细胞中,E6 mRNA相对表达量低于E7 mRNA(P均<0.05)。结论植酸酮可下调人宫颈癌细胞株中HPV16/18 E6/E7 mRNA及蛋白表达,且作用呈剂量依赖性;植酸酮对HPV16 E6/E7 mRNA的抑制作用强于HPV18 E6/E7 mRNA,并可能以抑制E6 mRNA表达为主导。     

CyclinB1、HPV16蛋白在宫颈组织芯片中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)和人乳头瘤病毒16(HPV16)型蛋白在宫颈癌变过程中的表达及临床意义。方法采用免疫组化卵白素-生物素-过氧化物酶连接(ABC)法检测二者在不同病变宫颈组织芯片(TMA)中的表达。结果 Cyclin B1、HPV16在宫颈癌中表达高于正常宫颈(P0.05)。Cyclin B1表达在中分化癌组高于高分化癌组及HPV16表达在鳞癌组高于腺癌组(P0.05)。Cyclin B1与HPV16表达呈正相关(r=0.46,P0.01)。结论 HPV16感染可能是导致宫颈癌中Cyclin B1表达上调的原因之一。二者协同促进宫颈癌的发生。     

下调雄激素受体表达对不同类型老年宫颈癌患者癌细胞活性的影响

目的探讨下调雄激素受体(AR)表达对不同类型老年宫颈癌患者癌细胞凋亡情况的影响及其相关机制。方法以AR为靶点构建小干扰RNA(siRNA),慢病毒为载体转染人宫颈腺癌细胞系C33a、宫颈鳞癌细胞系Caski。荧光定量PCR和Western印迹分别检测AR mRNA和蛋白的表达情况,流式细胞术检测宫颈癌细胞的凋亡情况。RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中G蛋白耦联受体(Cpr)30 mRNA和蛋白表达情况。结果 AR干扰组人宫颈癌细胞株C33a、Caski AR mRNA及其蛋白的相对表达量较阴性对照组、空白对照组明显降低(P<0.05)。AR干扰组C33a、Caski凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增加(P<0.05)。AR干扰组内比较显示,C33a凋亡率明显大于Caski(P<0.05)。AR干扰组Cpr30 mRNA及其蛋白相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论经siRNA转染下调AR表达后宫颈腺癌和宫颈鳞癌细胞凋亡率均增加,以宫颈腺癌更为明显;下调AR表达可提升Cpr30表达水平,进而激活Cpr30/Tlr3信号通路,促进宫颈癌细胞凋亡。     

老年宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16-E6、p53 mRNA表达及其与放疗敏感性的相关性

目的分析老年宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16-E6、p53 mRNA表达及其与放疗敏感性的关系。方法 40例宫颈癌患者均按计划进行根治性放射治疗前后采用实时定量反转录聚合酶链反应(PT-PCR)检测宫颈癌组织中HPV16-E6、p53 mRNA的表达水平,并根据治疗结果分为有效组29例和无效组11例,分析HPV16-E6、p53与放疗敏感性的关系。结果治疗总有效率为72.50%;放疗前后无效组2例HPV16-E6、p53 mRNA和蛋白差异无统计学意义(P>0.05),放疗前后有效组4例HPV16-E6 mRNA、p53 mRNA表达水平明显改善,HPV16-E6蛋白表达水平显著低于无效组,p53蛋白表达水平显著高于无效组(P<0.05)。结论 HPV16-E6感染、p53基因异常参与了老年宫颈癌发生、发展过程,检测HPV16-E6、p53 mRNA的表达可判断宫颈癌组织放疗敏感性。     

老年宫颈癌组织中转化生长因子-β1、叉头框蛋白P3、程序性死亡蛋白1及其受体的表达及意义

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1、叉头框蛋白(FOX)P3、程序性死亡蛋白(PD)-1及其受体(PD-L1)在老年宫颈癌患者组织中的表达及相关性。方法选取老年宫颈癌患者的癌组织60例、宫颈上皮内瘤样变组织30例及正常宫颈组织20例,采用免疫组化法检测其中的TGF-β1、FOXP3、PD-1及PD-L1蛋白表达,并分析各蛋白与老年宫颈癌患者的临床病理特征的关系。结果 TGF-β1在老年宫颈癌组织中阳性表达率为80.00%,明显高于宫颈上皮内瘤样变组织(40.00%)和正常宫颈组织(5.00%),差异有统计学意义(P0.05);FOXP3表达阳性率为75.00%,明显高于宫颈上皮内瘤样变组织(46.67%)和正常宫颈组织(10.00%),差异有统计学意义(P0.05);PD-1表达阳性率为66.67%,明显高于宫颈上皮内瘤样变组织(33.33%)和正常宫颈组织(5.00%)(P0.05);PD-L1表达阳性率为63.33%,明显高于宫颈上皮内瘤样变组织(36.67%),正常宫颈组织无PD-L1蛋白的表达(P0.05)。TGF-β1、PD-L1的阳性表达与宫颈癌的淋巴结转移有关(P0.05),FOXP3、PD-1的阳性表达与宫颈癌的组织学分级和淋巴结转移有关(P0.05)。TGF-β1与FOXP3表达呈正相关(r=0.685,P=0.003);PD-1与PD-L1表达呈正相关(r=0.412,P=0.000);TGF-β1与PD-1、PD-L1的表达无相关性(P0.05),FOXP3与PD-1、PD-L1的表达无相关性(P0.05)。结论在老年宫颈癌组织中,TGF-β1、FOXP3、PD-1、PD-L1蛋白呈高表达,并可能与老年宫颈癌的发生发展密切相关。     

HPV16感染与宫颈病变组织HDAC1和P21waf表达的关系

目的 探讨不同病理类型的宫颈病变中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、细胞周期调控抑癌基因P21waf蛋白的表达及其与人乳头瘤病毒(HPV) 16感染的关系.方法 选择宫颈病变病理蜡块标本110例,其中包括慢性宫颈炎20例(慢性宫颈炎组)、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ 22例(CIN Ⅰ组)、CINⅡ24例(CINⅡ组)、CINⅢ24例(CINⅢ组)、宫颈癌20例(宫颈癌组).应用免疫组化SP法检测各组宫颈组织中HDAC1、P21waf的表达,应用PCR法检测HPV16 DNA.统计各组宫颈组织中HPV16 DNA、HDAC1与P21waf的阳性率,比较HDAC1、P21waf与病理级别的相关性.结果 慢性宫颈炎组、CIN Ⅰ组、CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组HPV16感染阳性率逐渐增加、HDAC1表达逐渐增强(P均＜0.05).HDAC1表达强度与病理级别及HPV16感染呈正相关(r=0.510,P＜0.01),P21waf表达强度与病理级别及HPV16感染呈负相关(r=-0.468,P＜0.01).HDAC1与P21waf的表达呈负相关(r=-0.349,P＜0.05).结论HDAC1可能促进宫颈癌的发生、发展,P21waf可能参与阻止宫颈癌病变过程.HPV16能提高HDAC1的表达及降低P21waf的表达,从而促进宫颈癌的发生发展.     

宫颈细胞 HPV E6／E7 mRNA 检测在宫颈病变诊断中的价值

目的：评价高危型人乳头状瘤病毒（ HPV） E6/E7 mRNA检测对宫颈病变的诊断价值。方法520例患者采用b-DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA,并用宫颈液基细胞学（ TCT）行宫颈细胞学检查,对其中任何一项阳性者做阴道镜下宫颈活组织检查,以组织病理为金标准,计算HPV E6/E7 mRNA阳性对高级别宫颈上皮内瘤样病变（ CIN）、宫颈浸润癌诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,并与TCT检查进行比较。结果520例患者中HPV E6/E7 mRNA阳性158例, TCT异常222例。 TCT 异常者中HPV E6/E7 mRNA阳性率较TCT 正常者中HPV E6/E7 mRNA阳性率高（P＜0．05）。146例慢性宫颈炎、CINⅠ级患者与124例高级别CIN、宫颈浸润癌患者中HPV E6/E7 mRNA阳性率比较,P＜0．05。 HPV E6/E7 mRNA阳性对高级别CIN及宫颈浸润癌诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为74．19％、83．33％、58．23％、71．43％,TCT 检查分别为81．53％、69．44％、81．45％、92．28％,两者特异度及阳性预测值比较, P均＜0．05。结论在宫颈癌筛查中检测高危型HPV E6/E7 mRNA对预测高级别CIN,尤其对评估癌症风险有重要的临床价值。     

Expression and clinical significance of high risk human papillomavirus and invasive gene in cervical carcinoma

Objective:To study the expression of E6 and E7 mRNA in high-risk human papillomavirus(HPV) HPV-18 and the relationship between the expression of invasive gene and cervical carcinoma.Methods:A total of 119 patients with cervical cancer,cervical erosion and cervical HPV infection who were diagnosed in our hospital were selected and randomly divided into two groups:cervical cancer group(n= 58) and non-cancerous group(n= 61).Another 60 patients with uterine leiomyoma were selected as normal control group.Detection of HPV18 E6,E7 mRNA expression and invasion,migration,proliferation inhibition genes,epithelial mesenchymal transition genes and proliferation related protein content.Results:The relative expression of E6 and E7 HPV-18 in cervical cancer group was significant higher than that in non-cancerous group and control group(mRNA)(P0.05).The content of TRAF6 and c-FLIP in invasive cervical cancer group was significantly higher than that in non-cancerous group and control group(P0.05).The mR NA content of CD44v6 and MMP-9 in cervical cancer group was significantly higher than that in non-cancerous group and control group(P0.05).The content of DEC-1,IKK16,MBP-1 in cervical cancer group was significant lower than that in non-cancerous group and control group(P0.05).The mR NA content of beta-catenin and Vimentin in cervical cancer group was significantly lower than that in non cancerous group and control group(P0.05).The proliferation related protein E2F1 of cervical cancer group was significantly lower than that of non-cancerous group and control group,Bmi-1 content was significantly higher than non-cancerous group and control group(P0.05).Conclusions:The expression of the detection of cervical cancer in high-risk human papilloma virus HPV-18 E6 and E7 mRNA,and the invasion,migration,proliferation inhibition gene,epithelial mesenchymal transition and proliferation related gene protein content,HPV expression rate of mR NA increased with the development of cervical cancer,the expression is also enhanced.The expression has a certain correlation between the level and development of cervical cancer.Through the above indicators,the development of cervical cancer monitoring and treatment to provide important clinical guidance.     

Adv-shRNA抑制NRP2表达对胃癌SGC7901细胞增殖的影响

目的通过特异性抑制胃癌细胞株SGC7901中神经纤毛蛋白2(NRP2)基因的表达,检测RNA干扰片段对SGC7901细胞增殖能力的影响。方法将NRP2的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至胃癌细胞SCG7901 72 h后荧光显微镜观察转染情况;采用RT-PCR法检测转染后NRP2基因mRNA表达情况;MTT法检测胃癌细胞增殖情况;Western印迹检测转染后NRP2蛋白表达情况。结果成功将NRP2-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901。各重组腺病毒转染组NRP2 mRNA水平均低于阴性对照组和空白组,其中以NRP2-shRNA-3抑制效应最强。阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组间无显著差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著差异(P<0.05)。阴性对照组与空白组NRP2蛋白表达量明显高于实验组(P<0.01),而阴性对照组与空白组之间无显著差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体NRP2-shRNA可有效抑制胃癌细胞SCG7901中NRP2基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖,可作为动物实验的理论基础和前期条件。     

GRHL2沉默对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨GRHL2沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响。方法利用RNA干扰技术,构建GRHL2沉默慢病毒表达载体,将肺癌A549细胞分为3个组,实验组:GRHL2沉默慢病毒感染的A549细胞系;阴性对照组:空载慢病毒感染的A549细胞系;空白对照组:不给予任何处理的A549细胞系。采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的强度,通过实时定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测肺癌A549细胞中GRHL2 mRNA和蛋白质表达水平。采用细胞计数试剂盒检测GRHL2沉默对A549细胞增殖的影响。采用Annexin V-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞术分析GRHL2沉默对A549细胞凋亡的影响。结果实验组中GRHL2 mRNA及蛋白质表达水平均较空白对照组及阴性对照组显著降低(F=48.13、42.57,P值均<0.05),A549细胞的增殖能力明显下降(F=65.64,P<0.05),凋亡显著增强(F=56.76,P<0.05)。结论靶向沉默GRHL2能显著抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其凋亡,GRHL2有望成为临床肺癌靶向治疗的新靶点。     

Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响

目的探讨Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响。 方法设立Rab26质粒过表达组及Rab26 siRNA组,培养H446细胞,分别将含有Rab26过表达质粒和Rab26 siRNA瞬时转染H446细胞,同时设立空白对照组。48 h后,流式细胞仪检测转染效率,同时检测每组细胞中Rab26在mRNA及蛋白水平表达情况;MTT检测每组细胞的增殖情况,划痕试验观察每组细胞迁移的速度。 结果Rab26过表达质粒组转染效率为(76.8±4.3)%,Rab26 siRNA组转染效率为(79.5±3.57)%,均为有效转染;转染48 h后,发现Rab26质粒过表达组中Rab26在mRNA和蛋白水平均较空白对照组表达水平显著上调(P<0.05),siRNA组结果显示Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05);MTT检测结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞活力分别为(56.4±3.23)%、(100±4.31)%;Rab26质粒过表达组细胞活力分别为(42.5±3.59)%、(62.3±2.97)%;Rab26 siRNA组细胞活力分别为(75±3.86)%、(123.4±5.66)%,即Rab26质粒过表达组细胞活力较空白组显著降低(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞活力较空白组显著升高(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的增殖;划痕实验结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞迁移率分别为(0.53±0.03)μm/min、(0.32±0.04)μm /min;Rab26质粒过表达组细胞迁移率分别为(0.21±0.04)μm/min、(0.22±0.04)μm/min;Rab26 siRNA组细胞迁移率分别为(0.61±0.02)μm/min、(0.42±0.03)μm/min,即Rab26质粒过表达组细胞迁移率较空白组显著较少(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞迁移率较空白组显著增加(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的迁移。 结论Rab26可抑制小细胞肺癌H446细胞的增殖和迁移,故调控Rab26的表达有望成为小细胞肺癌治疗的新靶点。     

miR-1226靶向MUC1对非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性的影响

目的 研究miR-1226对非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养NSCLC细胞株人肺癌耐吉非替尼细胞株(PC9GR)和人肺腺癌细胞(PC-9);将PC-9组细胞设置为正常组,PC9GR细胞随机分为对照组、miR-1226 mimic组和miR-1226 NC组,并进行转染;利...     

罗格列酮调控PPARγ/HO-1的表达抑制肝星状细胞增殖

目的探讨罗格列酮(RGZ)对肝星状细胞(HSCs)中过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法以体外活化的肝星状细胞(HSC-T6)为研究对象,分为:空白对照组、RGZ干预组、RGZ与锌原卟啉-Ⅸ(ZnPP-Ⅸ)共同干预组。采用四甲基偶氮唑盐法检测HSC-T6的增殖情况,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)含量,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫细胞化学技术检测PPARγ、HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平。多组间样本均数的比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD检验。结果RGZ干预组HSC-T6增殖活性及HA、PⅢP表达较空白对照组显著下降(P值均<0.01),但PPARγ、HO-1的mRNA及蛋白相对表达量均较空白对照组显著增加(PPARγ:2.97±0.22对比1.07±0.05,0.96±0.08对比0.31±0.03;HO-1:4.28±0.73对比1.80±0.36,1.83±0.26对比0.61±0.09),P值均<0.01,差异有统计学意义。RGZ与ZnPP-Ⅸ共同干预组同RGZ干预组比较,HSC-T6增殖活性及HA、PⅢP表达有所升高(P值均<0.05);HO-1的的mRNA相对表达量(3.16±0.38对比4.28±0.73)和蛋白相对表达水平(1.31±0.17对比1.83±0.26)降低,P值均<0.05,差异有统计学意义;PPARγ的mRNA及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P值均>0.05),但呈下降趋势。RGZ与ZnPP-Ⅸ共同干预组与空白对照组HO-1的mRNA相对表达量(1.80±0.36)及蛋白相对表达量(0.61±0.09)比较,明显增高,P值均<0.05。免疫细胞化学染色同上述结果一致。结论罗格列酮诱导PPARγ表达增加进而抑制HSC增殖活化及胶原产生的作用可能是通过调控其下游HO-1的表达而实现的。     

血管紧张素Ⅱ对心肌微血管内皮细胞神经调节蛋白-1表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌微血管内皮细胞(CMEC)表达神经调节蛋白-1(NRG-1)的影响。方法取SD乳鼠心脏组织用含生长因子的培养液诱导培养CMEC,选生长良好的第2代CMEC分为三组:空白对照组单纯培养不干预,AngⅡ组加入AngⅡ100 nmol/L,缬沙坦组加入AngⅡ100 nmol/L及缬沙坦10μmol/L联合干预。培养24 h后分别收集CMEC。RT-PCR法检测NRG-1 mRNA表达变化;Western blot检测NRG-1蛋白表达。结果与空白对照组比较,AngⅡ组NRG-1 mRNA和蛋白表达明显下降(P均<0.05);缬沙坦组NRG-1 mRNA和NRG-1蛋白表达明显高于AngⅡ组(P均<0.05),与对照组比较无显著性意义(P>0.05)。结论 AngⅡ可抑制CMEC表达NRG-1基因,而缬沙坦可拮抗此作用。     

27nt-miRNA通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究

目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27ntmiRNA)组、阴性对照组。27nt-miRNA组:转染27nt-miRNA正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA组:转染27ntmiRNA反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组细胞给予100 ng/ml雷帕霉素诱导培养2 h诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况;CCK-8法、流式细胞术、qRT-PCR法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。结果:慢病毒转染VSMC后,27nt-miRNA稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC的mTOR mRNA与p-mTOR蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P均<0.05),细胞周期G1期向S期分裂进程阻滞减弱(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白表达量显著减少,Bcl-2蛋白表达量显著增加(P均<0.05);mTOR基因转录水平与p-mTOR蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:27nt-miRNA通过负调控m TOR基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC凋亡,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。