定量检测抗甲状腺过氧化物酶抗体的吖啶酯化学发光法的建立及初步应用

目的 建立一种用于定量测定血清中抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法并初步进行临床验证.方法 用TPO抗原偶联磁微粒,鼠抗人IgG抗体标记吖啶酯,建立间接法的反应模式.对该方法的线性范围、精密度、检出限、准确度进行测定,并与罗氏的电化学发光试剂进行比对.结果 在5～1 000 IU/mL范围内,线性相关系数r 为0.9999,检出限为0.224 IU/mL,两份样本的精密度(CV)分别为3.1％和4.3％,两份样本的准确度分别为1.1％和3.0％.经检测185例正常健康人,将参考区间定为小于30.32 IU/mL.与罗氏的电化学发光试剂平行测定84份血清样本,两者检测结果的相关系数r为0.975,显著性检验P＜0.01,相关性良好.结论 建立了定量测定血清中Anti-TPO的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法,满足临床检测要求.     

LiCA500全自动化学发光仪检测甲状腺项目的性能验证

目的 对LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统及配套甲状腺项目检测试剂盒(化学发光法)进行临床分析性能验证。方法 依据国家卫生行业标准(WS/T492-2016)和美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP系列文件的要求,对LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统检测抗甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody, TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody, TGAb)和甲状腺球蛋白(thyroglobulin, TG)的精密度、准确度、线性范围和参考区间进行验证,并与厂商声明的性能标准进行比较。对40份血清进行检测,并与传统的放射免疫法检测结果进行比对。结果LiCA500全自动光激化学发光免疫分析系统检测TPOAb、TGAb和TG的批内不精密度变异系数(CV)均≤8%,总不精密度均≤1/3 TEa;校准品检测均值与靶值的偏倚均≤1/2 TEa;线性回归方程斜率在0.992～1.010之间,R²均≥0.975;正常人血清样本的检测结果均在参考区间内;与放射免疫法检测结果进行线性回归分析,...     

高灵敏电化学发光法检测人血清抗甲状腺过氧化物酶抗体

目的 通过竞争电化学发光免疫分析的原理,建成一种检测抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroid peroxidase antibody,Anti-TPO)的电化学发光分析方法.方法 钌(Ru)标记的Anti-TPO竞争的去结合生物素化的甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase antibody,TPO),进而和链霉亲和素(streptavidin,SA)包被的磁珠结合,将未结合的钌标记的复合物洗去,含钌并结合SA的复合物吸附到电极上,通过施加电压发光,随后测定RLU(relative light units).结果 本研究建立的Anti-TPO的分析灵敏度(lower limit of detection,LLD,95％置信区间)为5 IU/mL,线性范围为10～600 IU/mL,正确度为0.900～1.100,批间CV<10.0％,批内CV<5.0％.与Roche公司生产的Anti-TPO线性相关系数r=0.9868(n=198),热处理后,试剂性能指标符合要求.结论 该方法各项性能指标均能达到临床检测要求,可以推广应用.     

两种免疫分析系统对甲状腺过氧化物酶抗体的一致性评价

目的 评估国产和进口两种化学发光法免疫分析系统检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)结果的一致性,探讨国产化学发光法免疫分析系统(MAGLUMI 4000PLUS全自动化学发光法免疫分析系统)检测TPOAb的可行性和实用性.方法 用两种方法检测130份血清样本TPOAb水平,比较两种检测方法的相关性、符合率,并对国...     

甲状腺自身抗体的临床意义

甲状腺自身抗体包括抗甲状腺过氧化物酶抗体(Thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulin antibody,TGAb)、抗TPO/Tg天然双特异性抗体(Anti-TPO/Tg Natural bispecific antibody,TGPOAb)、促甲状腺素受体抗体(TSH receptor antibody,TRAb)及其他抗体。这些抗体是自身免疫性甲状腺疾病(Autoimmune thyroid disease,AITD)诊断和治疗随访中的重要指标,对AITD的发生和发展具有重要意义。     

基于光激化学发光技术开发的多表位检测cTnI的方法

目的建立一种多表位识别检测人血清心肌肌钙蛋白水平的光激化学发光免疫检测分析方法。方法采用双抗体夹心法,通过多表位识别建立检测人血清中心肌肌钙蛋白水平的方法,评估其分析灵敏度、回收率和批内精密度,并与Siemens(化学发光法)进行比较。结果心肌肌钙蛋白I的分析灵敏度为0.06 ng/ml,回收率为93.43%,批内精密度(CV)为0.62%~1.55%,与化学发光法的符合率好(r=0.99)。结论光激化学发光免疫分析方法多表位测定心肌肌钙蛋白I具有超高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床。     

基于光激化学发光技术开发的多表位检测cTnI的方法

目的建立一种多表位识别检测人血清心肌肌钙蛋白水平的光激化学发光免疫检测分析方法。方法采用双抗体夹心法,通过多表位识别建立检测人血清中心肌肌钙蛋白水平的方法,评估其分析灵敏度、回收率和批内精密度,并与Siemens(化学发光法)进行比较。结果心肌肌钙蛋白I的分析灵敏度为0.06 ng/ml,回收率为93.43%,批内精密度(CV)为0.62%~1.55%,与化学发光法的符合率好(r=0.99)。结论光激化学发光免疫分析方法多表位测定心肌肌钙蛋白I具有超高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床。     

间接ELISA法检测轮状病毒

本文报道检测急性小儿腹泻患者粪便中轮状病毒的间接 ELISA 法。分别用兔抗 SA_(11)轮状病毒血清和正常兔血清的粗提 IgG 包板,检测抗体为豚鼠抗 SA_(11)抗体。酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗豚鼠 IgG 抗体。根据正常人标本结果为阴性,阻断试验成立,以及阳性标本用正常豚鼠血清检测为阴性,说明本试验具特异性。分析比较50份标本的电镜检查结果和间接 ELISA 试验结果,说明本试验的敏感性好。初步比较了抗牛轮状病毒(NCDV)抗体和抗 SA_(11)抗体检测的结果,两者基本一致。用硫酸铵粗提的 IgG 代替兔全血清,可减少非特异性显色。     

2型糖尿病患者血清TGA、TPO-Ab及甲状腺激素检测的评价

目的:探讨检测2型糖尿病(DM2)患者血清TGA、TPO-Ab及甲状腺激素含量的临床意义.方法:采用化学发光免疫分析(CLIA)测定82例DM2患者血清中甲状腺球蛋白抗体(TGA)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)及游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺素(TSH)水平.结果:与68例正常...     

用ELISA检测流行性出血热特异性免疫复合物的初步研究

为检测流行性出血热特异性循环免疫复合物,建立了抗原特异性双抗体夹心ELISA技术。以兔抗EHF IgG包被反应板,使待检标本内循环免疫复合物通过暴露的EHF病毒抗原位点而被结合到固相上,再以辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG进行示踪,从而检出EHF’特异性循环免疫复合物。在228份EHF患者血清中,用胶因素ELISA检出非特异性循环免疫复合物183份,抗原特异性ELISA检出特异性循环免疫复合物188份。本方法特异性强,重复性及稳定性较好,可应用于临床检测。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

检测循环免疫复合物的快速ELISA捕捉法

以兔抗日本脑炎病毒(JEV) IgG与JEV形成的免疫复合物(IC)为模型,羊抗兔IgG为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的JEV种特异性单抗为结合物,通过选择适宜的试验条件,建立了检测IC的快速ELISA捕捉法(RICC-ELISA);并初步用于检测感染JEV的恒河猴多次注射单抗后,猴抗鼠IgG及IgM与单抗形成的IC的动态变化.应用该法,在60分钟内就可得出结果,具有快速、简便、特异、敏感等特点,并可推广应用,检测其它类型的IC.     

游离甲状腺素化学发光免疫分析方法的建立

目的 采用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,建立测定血清中游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法.方法 利用竞争法建立游离甲状腺素的检测体系,分别对该体系进行分析性能评估、2016年度内分泌室间质评,并与进口全自动发光试剂盒检测结果进行一致性检验.结果在4~64pmol/L的校准曲线范围内相关系数0.9995,最低检出限为0.54pmol/L,批内和批间精密度均小于7.0%,稳定性结果良好,不影响检测结果.2016年全国室间质评测定结果均在允许范围内,与进口西门子发光试剂盒有很好的临床符合性,两种试剂盒的样本测值差异不具有统计学意义.结论 本方法利用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,在节约包被原料的同时改善了精密度且提高了灵敏度,最后通过临床血样的一致性评价,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.     

重组乙肝病毒核心基因DNA与表面抗原-抗体共免疫应答研究

目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组建的复合物(简称sIC)免疫Balb/c小鼠。用ELISA法检测血清抗体IgG和IgG1、IgG2a亚类的效价。用半定量PCR法分别检测鼠脾细胞IFN-γ及IL-4的mRNA。结果:pHBc144及sIC联合免疫鼠的抗HBs IgG、IgG1、IgG2a效价均显著高于sIC组(P＜0．05)。同时小鼠还可产生抗HBc及由HBsAg、HBcAg特异诱生的IFN-γ及IL-4。但与sIC共免疫,小鼠对HBcAg诱生的IFN-γ mRNA有所降低。结论:可用HBcAg基因与sIC共免疫,以获得针对乙肝病毒2种结构蛋白的免疫应答。     

化学发光法检测抗-HEV IgG方法的建立

目的 建立化学发光检测抗HEV IgG方法,用于HEV感染的实验室诊断及流行病学调查,为试剂盒研制打下基础.方法 以HEV重组抗原包被微孑孔板,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立抗HEV IgG的化学发光检测方法,评价其灵敏度、特异性、精密性等指标.检测患者血清中抗HEV IgG抗体并与第三方试剂比较.结果 建立了检测抗HEV IgG的化学发光方法,检测500例临床患者标本并与对照试剂盒对比,阳性符合率为99.32％,阴性符合率为98.58％,总符合率98.80％,其灵敏度、特异性、重复性均达到设计要求.结论 建立了化学发光检测血清中抗-HEV IgG的方法,具有敏感性高、特异性强、操作简便等特点,适用于戊型肝炎的临床诊断和流行病学调查.     

化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用分析

目的 通过对比,探讨了化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值.方法 选取2013年5月至2015年5月在我院的疑似乙型肝炎患者80例,抽取空腹血液样本后都分别进行乙肝病毒以及核心抗体的化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测,并对其检测结果进行分析.结果 化学发光酶免疫分析法检出乙型肝炎病毒阳性78例,检出率为97.5％;而ELISA检出乙型肝炎病毒阳性76例,检出率为95.0％,两种方法的检出率对比差异无统计学意义(P＞0.05).化学发光酶免疫分析法对于乙肝病毒核心抗体IgM与IgG的检测阳性率分别为80.0％和70.0％,而ELISA法检测两种抗体的阳性率则分别为18.8％和20.0％,化学发光酶免疫分析法对乙肝核心抗体IgM与IgG的检测阳性率明显高于ELISA法(P＜0.05).ELISA法检出HBc-IgM的最低限为0.135 IU/ml,检出HBc-IgM最低限为0.143 IU/ml;化学发光酶免疫分析法检出HBc-IgM最低限为0.032 IU/ml,检出HBc-IgG最低限为0.038 IU/ml.结论 化学发光酶免疫分析法在乙型肝炎检测中具有高的检出率,尤其对乙肝病毒的核心抗体的检测敏感度较高,值得在临床推广应用.     

间接免疫荧光法测定抗人肾脏集合管细胞抗体

<正>越来越多的研究表明不少远端肾小管性酸中毒(dRTA)可继发于自身免疫性疾病,如临床上发现某些甲状腺疾病患者可伴发dRTA,这可能是抗甲状腺球蛋白抗体(TG)及抗甲状腺微粒体抗体(TM)与集合管细胞存在交叉反应.因此测定体内抗集合管抗体,对于研究和诊治dRTA具有较大价值.为此,我们用培养的人集合管细胞作为载体.运用间接免疫荧光法建立了测定血清中抗集合管细胞抗体的检测方法.1 材料和方法1.1人肾脏集合管细胞株H_5培养于载玻片.H_5细胞为法国Tenon医院肾脏实验室赠送.1.2对象阳性对照:小鼠抗人集合管细胞单克隆抗体(McAb).阴性对照:正常人血清.测定对象:两例甲亢病例,同时伴有典型dRTA,且血清抗甲状腺球蛋白抗体及抗甲状腺微粒体抗体阳性.1.3FITC标记的羊抗人IgG抗体及羊抗小鼠IgG抗体(华美生物工程公司).     

化学发光免疫法测定人体甲状腺激素的性能验证及其临床应用

目的 评估化学发光免疫系统在临床甲状腺素检测中的应用效果.方法 选取我院2018年6月至2019年11月区间内的100例甲亢患者、100例甲低患者和100例甲状腺功能正常者作为试验对象,将化学发光免疫法(CLIA)与酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫测定法(RAI)检测结果比较.结果 使用化学发光免疫系统实测血清促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)时,所得线性范围、准确度、总精密度均较好,标准变异系数(CV)1.58％～6.44％、灵敏度较高且方法总回收率在99.7％～104.6％;且实际样本检测结果优于ELISA法、RAI法.结论 利用化学发光免疫法对甲状腺功能异常患者进行血清中甲状腺素及其抗体检测,可显著提高检测结果准确性并缩短检测周期,具有较高的临床医学推广价值.     

FITC与抗-FITC系统检测促黄体生成素的应用评价

目的 使用抗-异硫氰酸荧光素(FITC)固相包被板建立促黄体生成素(LH)的酶联免疫(ELISA)检测方法.方法用FITC及辣根过氧化物酶(HRP)分别标记两株抗-LH单克隆抗体,建立一步检测LH的ELISA检测方法,并与经典的双抗体夹心法进行了方法学对比评价.结果 FITC与抗-FITC系统检测LH,在2~50mIU/mL的校准曲线范围内相关系数0.9968,分析内精密度为7.6%,分析间精密度为7.02%,热稳定性下降18.5%,与双抗体夹心法相当,空白检测限为0.15mIU/mL,优于双抗体夹心法,钩状效应(HOOK效应)比双抗体夹心法差.与贝克曼检测结果回归方程Y=0.970X+0.614,相关系数r=0.975.结论 成功建立基于FITC与抗-FITC系统的ELISA检测方法,与双抗体夹心法相比,两种方法均能满足临床检测的需要.     

应用固相C_1q和辣根过氧化物酶结合的羊抗人IgG检测人血清中免疫复合物

本文介绍一种检测人血清中免疫复合物的改良方法。该法应用辣根过氧化物酶连接羊抗人IgG检测结合在固相C1q上的免疫复合物。并参照热凝集IgG标准曲线计算免疫复合物含量。著者实验证明,试验的敏感度能检出10—10,000ng热凝集IgG,且不受外源