白首乌新苷A抗肿瘤及诱导肿瘤细胞凋亡作用的研究

目的 评价自首乌新苷A(CA)的体内外抗肿瘤活性及诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法 以3种人肿瘤细胞株为模型,用MTT法检测药物对肿瘤细胞增殖的影响;以小鼠移植性肉瘤S180 为模型,检测药物对在体肿瘤生长的影响;以人乳腺癌细胞株MCF-7为模型,用Wright's-Giemsa染色观察药物对细胞核形态的影响,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率;以体外培养的大鼠皮层神经元细胞为模型,评价药物对正常细胞的毒性.结果 CA对3种人肿瘤细胞株的生长呈浓度依赖性抑制,其半数抑制浓度(IC50)为35.68～39.78 mg/L;CA 40、80、160mg/kg对S180内瘤生长的抑制率分别为20.0%、28.0%,48.1%;CA 80 mg/L 处理后,MCF-7细胞的凋亡率显著增高(P＜0.01),细胞核出现固缩、断裂;CA 100 mg/L 对体外培养8 d的神经元无毒性.结论 CA有明显的体内外抗肿瘤活性,诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一.     

朱砂七总蒽醌抗肿瘤的实验研究

目的:研究朱砂七总蒽醌的体内外抗肿瘤作用。方法:通过朱砂七总蒽醌对S180、和H22荷瘤小鼠瘤重的研究,观察朱砂七总蒽醌的体内抗肿瘤作用。应用MTT法检测朱砂七总蒽醌对HL-60细胞的生长抑制作用,Giemsa染色法从形态上观察朱砂七总蒽醌对HL-60细胞凋亡的影响。结果:朱砂七总蒽醌具有抑制小鼠肿瘤S180和H22的作用,抑制率在40%以上,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);朱砂七总蒽醌能明显抑制HL-60细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50)为3.2mg/mL;形态学观察显示朱砂七总蒽醌作用HL-60细胞后,可见典型的凋亡细胞的形态学特征。结论:朱砂七总蒽醌在体内对小鼠肿瘤S180和H22均有抑制作用;体外试验证实:能抑制HL-60细胞的增殖,诱导细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

苦参碱诱导淋巴细胞白血病L1210细胞凋亡的实验研究

目的在体外培养条件下,观察苦参碱对L1210细胞的损伤效应,探讨苦参碱的作用机制,期待为临床白血病治疗提供新的思路。方法取对数期生长的L1210细胞,在细胞培养板每孔接种1×105/孔,培养24 h后,加入终浓度为0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L的苦参碱,对照组加入等体积的培养液。收集24 h、48 h和72 h的L1210细胞标本,台盼蓝染色观察直接损伤的作用,TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况。结果苦参碱浓度越高,作用时间越长,L1210细胞台盼蓝拒染率越低,与对照组相比有显著性差异。高浓度的苦参碱(0.5 g/L)对L1210细胞细胞凋亡才会有显著的影响(P0.05),随着时间的延长,较高浓度的苦参碱也会显著影响L1210细胞的凋亡。结论苦参碱有杀伤白血病L1210细胞的作用,其机制可能是诱导细胞凋亡和直接损伤细胞膜。     

广西甜茶总黄酮的体外抗肿瘤作用

目的:研究广西甜茶总黄酮(RSTF)体外抗肿瘤作用。方法:广西甜茶总黄酮经60%的乙醇提取,聚酰胺柱分离后,用化学反应、薄层层析法及高效液相法进行鉴定;采用MTT法对肿瘤株S180(小鼠移植性肉瘤细胞)、H22(小鼠腹水型肝癌细胞)、L1210(小鼠白血病细胞)进行RSTF体外抗肿瘤作用筛选。结果:广西甜茶总黄酮在体外对肿瘤株S180,H22,L1210的增殖具有一定的抑制作用,其中对H22抑制作用最强(IC5046.31μg·mL-1);对S180抑制作用次之(IC5071.48μg·mL-1),对L1210抑制作用最弱(IC50163.59μg·mL-1)。结论:广西甜茶总黄酮在体外可抑制S180,H22和L1210肿瘤株的增殖。     

全蝎蛋白药效组分对L1210肿瘤细胞凋亡的影响

目的 研究全蝎(Scorpio)蛋白药效组分对L1210肿瘤细胞凋亡的影响,为建立全蝎与临床疗效对应的生物效应质量评价方法奠定基础.方法 采用改良MTT法、流式细胞法研究全蝎蛋白药效组分对L1210细胞毒和细胞周期抑制的作用.结果 抑制癌细胞生长的浓度≥37 mg/ml,剂量与浓度呈正比,相关系数为0.9357,IC50为175 mg/ml,显效时间0～48 h;全蝎蛋白药效组分浓度≥9.25 mg/ml时,可显著提高L1210细胞的凋亡率.结论 全蝎蛋白药效组分具有促进L1210细胞凋亡、抑制增殖的作用,其抗肿瘤生物效应指标为:9.25～175 mg/ml,可作为全蝎生物效应质量评价的指标之一.     

狗舌草总黄酮对L_(1210)细胞的体外作用研究

目的:研究狗舌草总黄酮对L1210细胞体外生长和细胞周期的影响。方法:用细胞计数法绘制细胞生长曲线,用细胞平均倍增时间(mPDT)检测L1210细胞增殖速度,台盼蓝拒染率测定细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期。结果:狗舌草总黄酮能抑制L1210细胞生长且呈浓度依赖性,对L1210细胞的增殖具有显著抑制作用。S期细胞数目显著增加,并引起S-G2阻滞,从而阻断细胞周期的正常发展。结论:狗舌草总黄酮对L1210细胞体外生长、增殖有抑制作用,对细胞周期有阻滞作用,显示一定的抗肿瘤活性。     

海藻提取物Fucoidan抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究海藻提取物Fucoidan抗肿瘤作用,并对其机制进行初探.方法 观察Fucoidan对小鼠S180移植性实体瘤、体外培养肿瘤细胞的作用,并了解其对动物免疫功能的影响.结果 Fucoidan能明显抑制小鼠S180实体瘤的生长(P<0.01),且呈现剂量相关性,其抑瘤率达到环磷酰胺阳性对照的70.4%～78.2%,对体外培养A549细胞、HeLa细胞和L1210细胞的生长均无显著抑制作用,Fucoidan中剂量组和大剂量组能显著提高碳粒廓清实验中的廓清指数K、吞噬指数α和脾脏器指数(P<0.05或P<0.01),但对胸腺脏器指数影响不大.在DNFB诱导迟发性变态反应实验中,Fucoidan中剂量组和大剂量组亦可使小鼠耳肿胀度增大.结论 Fucoidan具有抗肿瘤作用,其机制可能是通过对免疫功能的增强来实现的.     

干壁虎对食管癌细胞和S180荷瘤小鼠的抑制作用

目的:观察干壁虎体外对食管癌细胞,体内对S180荷瘤小鼠的抑制作用及对免疫系统的影响.方法:体外实验应用血清药理学方法,MTT法测定含干壁虎血清对食管癌EC9706和食管癌EC1细胞系生长的抑制作用,按台盼蓝排染法绘制细胞生长曲线.体内实验建立移植瘤小鼠S180肉瘤模型,给药后计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数,观察腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞实验指标;用SABC免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的蛋白表达,TUNEL方法检测细胞凋亡率.结果:干壁虎体外可抑制食管癌细胞的生长,体内可抑制小鼠肉瘤S180生长,对免疫系统无影响;可降低肿瘤组织VEGF、bFGF蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.结论:干壁虎有抗肿瘤活性;其抗肿瘤的部分作用可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤血管的生成而实现.     

桦木酸对S_(180)荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

目的以S180荷瘤小鼠为研究对象,研究桦木酸的抗肿瘤作用,旨在开发新的药物资源.方法观察S180荷瘤小鼠瘤重抑制率、利用DNA结合荧光探针直接对肿瘤细胞DNA染色后FCM分析肿瘤细胞凋亡、细胞周期的影响以及P 53蛋白的表达率.结果桦木酸各剂量能明显抑制S180肿瘤细胞的生长,且桦木酸低、中剂量组能够明显增加S180肿瘤细胞G0/G1期和降低S期的肿瘤细胞数目,升高S180肿瘤细胞P53蛋白的表达率.结论桦木酸可能通过影响肿瘤细胞生长周期及P53蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡而达到抗肿瘤作用.     

小金胶囊对斑马鱼移植瘤的抗肿瘤作用

目的应用斑马鱼模型研究小金胶囊(麝香、木鳖子、制草乌等)的抗肿瘤作用。方法荧光标记的人乳腺癌细胞(michigan cancer foundation-7,MCF-7)移植入斑马鱼卵黄囊内建立移植瘤模型。小金胶囊以水溶液暴露移植瘤斑马鱼以评价其抗肿瘤作用,用转基因斑马鱼观察其对新生血管形成的抑制作用。吖啶橙染色后,图像分析法评价该药物的体内细胞凋亡诱导作用。结果 26.47、88.24、264.72μg/m L的小金胶囊对斑马鱼MCF-7移植瘤的抑制率分别为31.66%、54.35%、53.77%(P0.01)。小金胶囊在高质量浓度(264.72μg/m L)下能显著抑制血管形成和诱导细胞凋亡,抑制率和诱导率分别为21.74%和28.92%(P0.01)。结论小金胶囊能诱导细胞凋亡,抑制MCF-7移植瘤生长和新血管形成,具有潜在的抗肿瘤作用。     

银杏提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的:对银杏提取物进行抗肿瘤活性研究.方法:用MTT比色法检测银杏提取物对S180和H22细胞株的体外细胞毒作用;同时在昆明系小鼠异体移植性S180和H22肿瘤模型上观察银杏提取物的抑瘤作用.结果:银杏提取物能够明显抑制体外培养的瘤细胞生长,对两种瘤细胞有明显的细胞毒效应,其IC50分别是197.90 mg/L、206.27 mg/L,而且对荷S180和H22小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,高剂量组抑瘤率分别为60.53%、58.41%.结论:银杏提取物在体内外对S180和H22均有抑制作用.     

藏药绿萝花体外抑制肿瘤细胞生长的实验研究

目的探讨藏药绿萝花的体外抗肿瘤细胞作用,为其临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据。方法以L9(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以来源于不同组织器官的人肺腺癌细胞株A549、肝癌细胞株Hep G2、胃癌细胞株SGC7901、恶性黑色素瘤细胞株MM-A375、神经母细胞瘤细胞株SHEP1为研究对象,采用瘤细胞生长曲线、细胞形态、软琼脂克隆实验及细胞凋亡检测方法,研究绿萝花体外抗肿瘤细胞生长的作用。结果绿萝花对5种肿瘤细胞生长均有抑制作用,其IC50分别为1 708.58、550.04、467.39、1 084.25、1 805.42μg/m L,其中对肝癌细胞株Hep G2、胃癌细胞株SGC7901抑制效果最好,且500μg/m L绿萝花干膏制剂能引起SGC7901瘤细胞皱缩、细胞形态变圆、细胞周围变亮、细胞克隆数量减少和克隆体积变小,并能引起38.41%的SGC7901瘤细胞凋亡。结论绿萝花干膏制剂在体外通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而产生抗肿瘤作用,并具有剂量、时间依赖性。     

兴安升麻总苷抗肿瘤药效研究

目的观察升麻总苷对小鼠移植性肿瘤和人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的体内抗肿瘤作用，以及体外对人肿瘤细胞株的抑瘤活性，并对其抑瘤机制进行初步探讨。方法MTT法检测体外升麻总苷对人肿瘤细胞的增殖抑制作用；体内实验观察其对小鼠S180和裸鼠体内移植人肺腺癌A549的抑制作用；同时采用流式细胞仪和肿瘤病理切片对接种的A549肿瘤细胞凋亡进行观察。结果升麻总苷对A549、HepG2、HL60、Eca-109、MDA-MB231肿瘤细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为20．3、27．1、21．2、23．4和32．7gg／mL。小鼠口服升麻总苷100mg／kg和200mg／kg可明显抑制S180移植瘤（抑瘤率分别为42．8％和54．6％）和裸鼠移植人肺腺癌A549的生长（T／C值分别为58．1％和52．2％），肿瘤组织病理切片和流式细胞仪对A549肿瘤细胞凋亡的检测显示，升麻提取物可诱导体内肿瘤细胞凋亡。结论升麻体内体外均具有抗肿瘤活性，其体内抑制肿瘤生长可能与诱导细胞凋亡相关。     

小白菊内酯对人肺癌A-549细胞周期变化和凋亡通路的影响

目的:研究小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及其机制,为研发新型抗肿瘤中药奠定坚实的基础。方法:应用MTT法测定小白菊内酯对肺癌细胞的毒性作用和抑制增殖作用;应用倒置显微镜、Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)染色荧光显微镜观察药物作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用活性氧(ROS)检测药物作用后细胞内活性氧的水平,以及活性氧含量与细胞凋亡之间的关系;应用免疫细胞化学技术检测药物作用前后蛋白阳性表达变化的情况并进一步探讨小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株抑制增殖和诱导凋亡的作用机制。结果:(1)MTT法检测结果显示:小白菊内酯在不同浓度(5mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、55 mg/L、60 mg/L、65 mg/L)对人肺癌A-549细胞有不同程度的生长抑制作用,并呈现出浓度和时间梯度依赖性,当药物终浓度为55 mg/L作用时间为48h时,对A-549细胞的抑制率为51.02%。(2)Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察发现实验组细胞可见大量绿色荧光细胞和红色凋亡细胞。(3)活性氧检测发现:实验组细胞内活性氧的水平出现明显升高。(4)免疫细胞化学检测法结果显示对照组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax分别为10.07%、11.42%、14.09%、9.75%和11.87%,加入小白菊内酯后(实验组)细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax蛋白的表达为89.24%、85.75%、84.46%、85.14%和84.09%,与对照组相比明显增加,有显著差异。结论:小白菊内酯作用于人肺癌A-549细胞株后,诱导其出现细胞凋亡的改变,它通过死亡受体通路和线粒体通路来完成诱导凋亡的机制,小白菊内酯作用后活性氧水平的增加可能参与诱导细胞凋亡的机制。     

野西瓜挥发油抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的研究

目的 研究野西瓜挥发油的抗肿瘤作用.方法 采用MTT实验和SRB实验观察野西瓜挥发油对SGC-7901细胞的体外抗肿瘤作用;采用倒置荧光显微镜观察野西瓜挥发油作用后典型的细胞凋亡形态;采用流式细胞仪测定野西瓜挥发油对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 10-200 μg/mL的野西瓜挥发油作用于SGC-7901细胞72 h后均可不同程度的抑制SGC-7901细胞的增殖,其IC50为145.5μ/mL,GI50为121.32μg/mL,LC5o为900.96/μg/mL,TGI为240.55/μg/mL;作用24 h后出现典型的凋亡形态;75、150、300μg/mL的野西瓜挥发油作用24 h时出现细胞凋亡;周期分布发生改变.呈现S期阻滞.结论 野西瓜挥发油具有明显抑制SGC-901细胞增殖作用,其SGC-7901机制为诱导肿瘤细胞凋亡及改变细胞周期.     

瑶药葫芦钻提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的研究葫芦钻提取物的抗肿瘤作用。方法体外抗肿瘤活性研究采用MTT比色法,靶细胞采用人肝癌细胞BLE-7404;通过复制小鼠S180,H22腹水瘤和肉瘤动物模型,观察葫芦钻提取物对小鼠平均生命延长率和肿瘤抑制率的影响来评价体内抗肿瘤作用。结果葫芦钻水、醇提取物浓度为20 mg/ml时,对体外培养的肿瘤细胞的抑制率均>50%;葫芦钻水、醇提取物的最大耐受剂量均是150 g/kg;经3次实验,葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180腹水瘤小鼠平均生命延长率均>50%,葫芦钻醇提物高剂量组对H22腹水瘤小鼠平均生命延长率>50%。葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均>30%,对H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均>50%。结论葫芦钻水、醇提取物具有一定的抗肿瘤作用。     

刺果紫玉盘素J的体内外抗肿瘤作用

目的观察刺果紫玉盘素J(calamistrin J,Cal-J)的体内外抗肿瘤活性及其选择性。方法MTT法观察不同质量浓度的Cal-J对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞、人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人结肠癌Lovo细胞、肉瘤S180细胞5种肿瘤细胞系和正常人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖的影响,Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察Lovo细胞凋亡的形态变化。在S180荷瘤小鼠进行整体抑瘤实验,计算Cal-J的抑瘤率。结果Cal-J对NCI-H460、HepG2、HeLa、HELF、S180、Lovo等6种细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,其IC50依次为>100、(91±4)、(60.5±2.4)、(39.3±1.7)、(38±4)、(25±4)μg/mL。其中对Lovo细胞株抑制作用最强,且呈剂量、时间双重依赖性。Cal-J作用48h后,荧光显微镜下可见Lovo细胞核固缩,染色质凝聚等典型凋亡形态学特征。Cal-J对荷瘤小鼠S180移植瘤的生长有明显的抑制作用,Cal-J高、中、低(90、30、10mg/kg)剂量组的抑瘤率分别为51%、30%、17%,作用呈剂量依赖性。结论Cal-J对体外培养的多种人类肿瘤细胞和人胚肺成纤维细胞具有不同程度的细胞毒性作用,其中对人结肠癌Lovo细胞作用最强,并具有诱导细胞凋亡的作用。Cal-J还可抑制荷瘤小鼠S180移植瘤的生长。     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

莲房原花青素对黑色素瘤B16细胞的抑制作用

 目的研究莲房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus,LSPC)对体外培养的黑色素瘤B16细胞活性的影响。方法以MTT法和细胞平板集落形成实验测定LSPC的抗肿瘤活性;电镜观察LSPC对瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测LSPC对瘤细胞凋亡和细胞周期的影响;激光扫描共聚焦显微镜检测LSPC对瘤细胞内Ca²⁺浓度的影响。结果LSPC对B16细胞生长的抑制作用与作用时间和浓度呈时效和量效关系,并可诱导瘤凋亡效应,最大抑制率达84.5%,使瘤细胞阻滞于S期;瘤细胞内Ca²⁺浓度显著升高;细胞有典型的凋亡形态。结论LSPC是以诱导凋亡的方式抑制黑色素瘤B16细胞增殖,其凋亡作用可能与细胞被阻断于S期和Ca²⁺浓度升高有关。     

皂角刺总黄酮对HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究皂角刺总黄酮对HCT116细胞增殖和凋亡的影响,探讨其抗肿瘤作用机制;方法:体外培养人结肠癌HCT116细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮(12.5、25、50、100、200和400mg/L)处理后,采用CCK-8试剂盒(cell countingkit-8)检测对HCT116细胞增殖的抑制作用,Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率。结果:不同浓度的皂角刺总黄酮作用于细胞48h后,能显著抑制HCT116细胞的增殖,随着药物浓度的增加,抑制作用增强,IC50为104.72±0.96mg/L;Hoechst33258染色可见细胞核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡形态学改变;流式Annexin V/PI双染法检测显示,不同浓度的皂角刺总黄酮均可诱导HCT116细胞凋亡,在100mg/L时细胞凋亡率为(35.61±3.76)%。结论:皂角刺总黄酮能明显抑制HCT116细胞的增殖和诱导其凋亡。