过表达SIRT1基因通过PI3K/AKT信号通路抑制高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧水平

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧簇(ROS)水平的影响。方法:分别用空载质粒(pcDNA3.1-NC)和SIRT1过表达质粒(pcDNA3.1-SIRT1)转染心肌细胞,并进行高糖诱导。实验分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-NC组和高糖+pcDNA3.1-SIRT1组,用qPCR和Western blot法分别检测各组心肌H9c2细胞的SIRT1表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、AKT和磷酸化AKT的蛋白水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞中SIRT1表达显著降低,细胞活力显著下降,ROS水平和细胞凋亡率增加,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平下调(P0.05);过表达SIRT1可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力增加,ROS水平和凋亡率降低,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平上调(P0.05)。结论:过表达SIRT1可通过调控PI3K/AKT信号通路逆转高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

人参皂苷Rg1介导PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激反应

目的 探究人参皂苷Rg1通过PI3K/AKT/FOXO3通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应的调控作用。方法 首先将细胞分为对照组、HG组、低浓度Rg1组(HG+20 ng/ml Rg1)、中浓度Rg1组(HG+50 ng/ml Rg1)、高浓度Rg1组(HG+100 ng/ml Rg1),通过MTT法、Hoechst 33258染色和Western blot分别检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞存活率、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达的调控作用。其次,通过试剂盒检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、SOD、Gpx浓度的影响。并通过Western blot检测在Rg1作用下,PI3K/AKT/FOXO3通路中各蛋白的磷酸化及表达情况。最后,验证在AKT被抑制的情况下Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞的调控作用。结果 与对照组相比,HG组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著下降(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著上升(P0.05);与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著上升(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著下降(P0.05)。其次,与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组细胞中抑制剂之后,与HG组相比,HG+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著下降(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著升高(P0.05)。最后,与HG+MK-2206组相比,HG+Rg1+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论 人参皂苷Rg1可以通过活化PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖对HBZY-1细胞的诱导作用,减少HBZY-1细胞的凋亡,并缓解氧化应激反应。     

敲低SOX9基因增强As_2O_3诱导的人喉鳞癌细胞凋亡及机制

目的探讨敲低性别决定区Y盒基因9(SOX9)水平对As_2O_3诱导的喉鳞癌细胞凋亡的影响及机制。方法将SOX9的特异性小干涉RNA(si-SOX9)转染人喉癌Hep-2细胞,Western blot法检测转染48 h后细胞SOX9蛋白表达。随机将Hep-2细胞分为空白组、si-SOX9组、As_2O_3组和si-SOX9联合As_2O_3组。细胞按以上分组处理48 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞ROS含量,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平。结果转染si-SOX9后,可显著降低Hep-2细胞SOX9蛋白水平。As_2O_3组细胞活力及PCNA、VEGF、PI3K和p-AKT蛋白水平均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及BAX蛋白表达均显著增加;与单纯SOX9敲低组或单独As_2O_3处理组相比,敲低SOX9联合As_2O_3处理组的细胞活力及PCNA、VEGF、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及BAX蛋白表达均显著增加。结论敲低Hep-2细胞SOX9水平可增强As_2O_3对喉鳞癌细胞的凋亡诱导作用,与增加细胞ROS含量及下调PI3K/AKT信号通路有关。     

下调lncRNA NEAT1通过NF-κB信号传导途径抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放北大核心CSCD

目的:探究下调lncRNA NEAT1对TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放的影响。方法:将肺泡上皮细胞A549分成Control组、TNF-α组(TNF-α处理)、sh-NC组(转染shRNA control,TNF-α处理)、sh-NEAT1组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α处理)、sh-NEAT1+PMA组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α和NF-κB信号激活剂PMA处理)。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比妥酸法检测细胞中MDA含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中SOD活性,CellROX Green法检测细胞中ROS水平,ELISA检测IL-6、IL-8、IL-1β水平,Western blot检测Cleaved caspase-3、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,TNF-α组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,MDA含量、ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌IL-6、IL-8、IL-1β增多,细胞中p65蛋白表达水平升高。与sh-NC组相比,sh-NEAT1组肺泡上皮细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,MDA含量、ROS水平降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β减少,细胞中p65蛋白表达水平降低。与sh-NEAT1组相比,sh-NEAT1+PMA组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3、p65蛋白表达增多,MDA含量和ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β增多。结论:下调NEAT1通过降低NF-κB信号通路激活水平抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症因子释放。     

敲减FGFR1基因表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物学特性的影响

目的:研究敲减成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因的表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)活力、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:经转染FGFR1小干扰RNA(si-FGFR1)下调FGFR1表达,研究FGFR1对HemECs生物学特性的影响,以CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡水平, Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白水平。结果:转染si-FGFR1进入HemECs能够显著抑制细胞的活力(P0.05),促进其凋亡(P0.05),降低细胞的侵袭和迁移能力(P0.05);Western blot结果显示,下调细胞中FGFR1基因的表达可降低PI3K和p-AKT的蛋白水平(P0.05),但对AKT蛋白水平无显著影响。结论:敲减HemECs细胞内FGFR1的表达可通过影响PI3K/AKT信号通路调节婴幼儿血管瘤内皮细胞的生物学特性。     

槲皮素对大鼠肾小管上皮细胞增殖、线粒体功能的影响及其机制研究

目的:探讨槲皮素对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)增殖、线粒体功能的影响及PI3K/AKT通路的调控作用。方法:体外培养NRK-52E细胞,将其分为空白对照组(N组)、0.4mmol/L尿酸组(U组)、0.4mmol/L尿酸+15mg/L槲皮素组(Q组),每组设6个复孔。培养24h后,倒置显微镜观察细胞的形态,MTT法测定各组细胞的增殖率,荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况,JC-1染色法于荧光显微镜下观察线粒体膜电位变化,Western blot检测磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白的表达。结果:与N组相比,U组NRK-52E细胞的增殖率下降(P0.01),Q组的增殖率较U组明显上升(P0.05)。与U组相比,Q组细胞ROS生成减少(P0.01),线粒体膜电位增加(P0.01)。与U组相比,Q组AKT磷酸化水平增加,PI3K、AKT、mTOR的表达亦增加(P0.01)。结论:槲皮素对尿酸致NRK-52E细胞凋亡有保护作用,其保护作用可能是通过PI3K/AKT信号途径改善线粒体功能,从而减少细胞凋亡,促进细胞增殖来实现的。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

下调miR-21 抑制PI3K / AKT 信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨miR-21 对白血病K562 细胞增殖凋亡的影响及对PI3K/ AKT 信号通路的调控作用。方法:将K562 细胞分为对照组、miR-21 NC 组和miR-21 干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 转染miR-21 inhibitor 和miR-21 negative control。转染48 h 后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA 的表达情况,采用MTT 比色法检测miR-21 对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21 对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21 对各组细胞中PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白PI3K、AKT 和p-AKT 表达的影响。结果:miR-21 干扰组中细胞的miR-21 mRNA 表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC 组均明显降低;与对照组和miR-21 NC 组比较,流式细胞仪检测miR-3 干扰组中G0/ G1 期所占细胞比例明显升高,S 期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高。Western blot 检测p-AKT 的表达水平较对照组和miR-21 NC 组明显下降,但PI3K 和AKT 蛋白的表达水平变化不大。结论:下调miR-21 能够抑制白血病K562 细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/ AKT 信号通路有关。     

过表达脾酪氨酸激酶降低氧化应激诱导的小鼠成骨细胞凋亡

目的探究脾酪氨酸激酶(SYK)对氧化应激(OS)诱导的小鼠成骨细胞MC3T3-1凋亡的影响及其机制。方法过氧化氢(H_2O_2)孵育MC3T3-1细胞,建立OS模型;实时荧光定量PCR检测SYK的mRNA表达量;Western blot检测SYK、AKT、p-AKT和UCP2蛋白表达量;构建重组质粒pcDNA.3.1-SYK或pcDNA.3.1-UCP2,分别转染MC3T3-1;AKT抑制剂HIMO抑制AKT磷酸化;annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡;caspase-3荧光检测等试剂盒检测caspase-3活性和ROS水平。结果 OS降低MC3T3-1中SYK的表达(P0.01);过表达SYK降低OS诱导的细胞凋亡(P0.05)、caspase-3活性(P0.01)和ROS水平(P0.01);过表达SYK提高AKT的磷酸化水平(P0.05)和UCP2的表达量(P0.01);抑制AKT磷酸化后可消除过表达SYK对细胞凋亡和UCP2的表达的影响(P0.01)。在过表达SYK、抑制AKT的MC3T3-1细胞中,过表达UCP2,细胞凋亡(P0.05)和ROS水平(P0.01)均显著降低。结论过表达SYK可通过调控AKT/UCP2降低OS对小鼠成骨细胞的伤害。     

牛蒡子苷元诱导人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其作用机制

 目的: 探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响及其分子作用机制。方法: 经不同浓度的ARG处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测ARG对CNE-1细胞活力的影响;caspase-3及caspase-9活性检测法检测CNE-1细胞caspase-3及caspase-9活性的变化;流式细胞术分析CNE-1细胞凋亡率的变化; real-time PCR法检测PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子mRNA表达水平的变化;Western blot法检测PI3K/AKT/XIAP通路蛋白水平的变化。结果: 随浓度和时间的增加,ARG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的活力(P<0.01);caspase-3及caspase-9活性的增加及细胞凋亡率的升高表明ARG可显著促进CNE-1细胞的凋亡;与对照组相比,PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子对mRNA表达均明显下调(P<0.01);ARG可明显下调PI3K/AKT/XIAP各蛋白水平(P<0.05)。结论: ARG可诱导鼻咽癌细胞凋亡,降低PI3K/AKT/XIAP相关分子水平可能是其促进细胞凋亡的机制。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

PTEN缺失对小鼠成纤维细胞Cu/Zn超氧化物歧化酶表达的影响及其意义

目的 探讨PTEN缺失是否影响小鼠成纤维细胞Cu/Zn超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平及其意义.方法 采用Western blot验证及检测对照永生化小鼠胚胎成纤维细胞系PTEN+/+及PTEN缺失细胞系PTEN-/-内PTEN、磷酸化Akt、Cu/Zn SOD表达水平;Northern btot检测细胞内Cu/Zn SOD表达水平;单细胞碱性电泳检测细胞DNA损伤程度;荧光探针标记检测细胞内超氧阴离子水平;MTT法检测H2O2对细胞增殖状况的影响.结果 PTEN缺失细胞系PqEN-/-中,Cu/Zn SOD表达下调,Akt激酶磷酸化水平上调,细胞内超氧阴离子水平明显增高,空白组及H2O2处理后DNA损伤程度均较PTEN+/+细胞重,H2O2对其细胞增殖的抑制作用减弱.结论 PTEN缺失细胞内Cu/Zn SOD表达下调,并由此引起了细胞内活性氧持续高水平和氧化损伤累积以及活性氧对细胞增殖的抑制作用减弱.     

鸡内金对冠状动脉内皮细胞损伤的影响及可能机制研究

目的 探究鸡内金对冠状动脉内皮细胞(HCAEC)的影响及可能机制。方法 将HCAEC细胞分为对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组和ox-LDL+鸡内金组。CCK-8方法检测各组细胞的活力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot方法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3II和p62的表达以及PI3K、Akt、mTOR的表达。结果 ox-LDL可显著抑制HCAEC的细胞活力,抑制LC3II和PI3K/Akt/mTOR的表达水平,促进凋亡和p62蛋白的表达;而鸡内金预培养则可显著缓解由ox-LDL引起的细胞活力降低和凋亡率的升高,促进自噬,激活PI3K/Akt/mTOR通路。结论 鸡内金可通过调控自噬和上调PI3K/AKT/mTOR通路减轻ox-LDL引起的冠状动脉内皮细胞损伤。     

胰岛素样生长因子-1对雪旺细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对雪旺细胞氧化损伤的保护作用。方法:用体外纯化培养的雪旺细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分成氧化损伤组、IGF-1保护组和正常对照组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,免疫印迹法检测凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2处理组细胞胞体积缩小、空泡化,细胞活性降低,SOD含量明显减少,Bcl-2表达减弱;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高,SOD含量较损伤组高,Bcl-2表达明显上调。结论:IGF-1对氧化损伤的雪旺细胞有保护作用。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性（P<0.05）,由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

脑源性神经营养因子保护H_2O_2诱导的氧化损伤血管内皮细胞

目的:研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:离体培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立H2O2致HUVECs氧化损伤模型后,利用不同浓度(1、10和100μg/L)BDNF处理HUVECs,同时设置未损伤对照组、H2O2损伤后PBS处理组和Trk B inhibitor组(同时加入100μg/L BDNF和1∶1 000的Trk B inhibitor)。利用MTT方法检测各组细胞存活率;同时测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平变化;ELISA方法检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的浓度变化;流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)含量及细胞凋亡的变化;Western blot检测各组细胞中Trk B、p-Trk B、cleaved caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:与未损伤组相比,经H2O2氧化损伤后,PBS处理组的HUVECs存活率显著下降,LDH和MDA含量显著上升而SOD和GSH的活性显著下降,细胞中NO分泌功能显著降低而ET-1和ICAM-1的分泌浓度则显著增加,ROS的含量和细胞凋亡率均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著上升,Bcl-2蛋白表达则显著下降;与PBS处理组相比,不同浓度BDNF处理组中HUVECs的存活率逐渐上升,LDH和MDA含量逐渐下降,而SOD和GSH活性逐渐上升,细胞中的NO分泌量显著上升而ET-1和ICAM-1分泌量逐渐下降;ROS含量和细胞凋亡率则逐渐下降,Trk B和p-Trk B水平均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平逐渐下降而Bcl-2蛋白表达逐渐上升,但BDNF的作用均受到Trk B inhibitor的抑制。结论:BDNF能够通过提高HUVECs细胞存活率,增强细胞抗氧化损伤能力,降低ROS产生和细胞凋亡率而保护氧化损伤的血管内皮细胞,并通过其与Trk B结合后激活BDNF-Trk B信号通路发挥作用。     

6-姜酚对大鼠髓核细胞凋亡的影响

目的:研究6-姜酚对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠髓核细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:获取SD大鼠髓核细胞并在体外扩增培养,CCK-8法测定不同浓度H_2O_2及6-姜酚对髓核细胞活力的影响,同时采用Western blot检测6-姜酚作用不同时间后p-Akt的蛋白水平。实验分为4组:对照组、H_2O_2组、6-姜酚组(6-姜酚+H_2O_2)及LY294002组(6-姜酚+H_2O_2+LY294002)。流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧簇(ROS)水平,TUNEL荧光比较凋亡细胞比率,透射电镜观察线粒体微结构改变,Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、p-Akt、Akt及p53蛋白的水平,RT-qPCR检测蛋白多糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达。结果:CCK-8实验结果发现24 mg/L为6-姜酚促进大鼠髓核细胞活力的最佳浓度,80μmol/L的H_2O_2作用6 h可用于氧化损伤造模。p-Akt的蛋白水平随6-姜酚干预时间延长而增多。与对照组比较,H_2O_2组的细胞凋亡率、细胞内ROS水平及TUNEL染色阳性细胞比率增高,细胞线粒体肿胀明显,同时促凋亡蛋白caspase-3、Bax及p53的蛋白水平明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,蛋白多糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达下降(P0.05);与H_2O_2组比较,6-姜酚可以减少H_2O_2造成的髓核细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达,而PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002可以抑制6-姜酚的作用。结论:6-姜酚可经PI3K/Akt信号通路减轻H_2O_2诱导的髓核细胞氧化损伤,抑制髓核细胞凋亡,促进髓核细胞外基质表达。     

槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的 研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K (p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT (p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果 随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲...     

PODXL参与瘢痕疙瘩成纤维细胞的过度增殖

目的探讨podocalyxin样蛋白(PODXL)基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响。方法 RT-qPCR检测正常皮肤成纤维细胞(hDF)和瘢痕疙瘩成纤维细胞(hKF)中PODXL mRNA的表达量;用重组PODXL基因的shRNA慢病毒表达载体感染瘢痕疙瘩成纤维细胞下调PODXL基因的表达量; EdU法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡率;蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)总蛋白和磷酸化蛋白。结果与正常皮肤成纤维细胞相比,PODXL mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著增加(P0.05);下调PODXL基因表达显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P0.05),阻滞细胞周期于S期,促进细胞的凋亡(P0.05),降低PI3K和AKT磷酸化蛋白水平(P0.05)。结论 PODXL在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著增加;下调PODXL基因表达可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,从而将细胞周期阻滞在S期,抑制细胞的增殖和诱导凋亡。