TNF-α对培养的人肝星状细胞表达MMPs和IL-8的影响

了解TNF-α对人肝星状细胞表达MMPs和IL-8的影响。用TNF-α刺激培养的hHSC,用ELISA检测不同时间培养上清中的MMPs和IL-8的浓度。结果显示受TNF-α刺激后,MMP-1、MMP-2和IL-8水平为28h>24h>20h>4h—16h(P<0.05~0.001);MMP-3为28h>24h(P<0.01),24h>20h>4h—16h(P<0.05)。TNF-α刺激后MMP-1和MMP-2产生较早,从8h起已高于对照组(P<0.05),而MMP-3的平均浓度,从20h起才高于对照组(P<0.01)。提示TNF-α可刺激hHSC表达MMP-1、MMP-2、MMP-3和IL-8,其表达水平随刺激时间的延长而逐渐增加;未受TNF-α刺激的hHSC可表达一定量的MMPs,基本不表达IL-8。     

匹伐他汀对血管平滑肌细胞金属基质蛋白酶9表达的影响

目的 观察金属基质蛋白酶9(MMP-9)在动脉粥样硬化组织中的分布及匹伐他汀对TNF-α刺激血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达的影响.方法 病理标本取自外科择期手术病例,行常规病理和免疫组织化学检查;对照组动脉标本取自非正常死亡健康成人尸体及非血管病变切除标本;血管平滑肌细胞取自开放手术切除的主动脉中膜.实验为5 组,对照组和4 个实验组.实验各组平滑肌细胞在给予TNF-α刺激前预先加入不同浓度的匹伐他汀(分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml),测定其MMP-9 蛋白和mRNA 表达.结果 免疫组化检测显示,实验组动脉硬化组织TNF-α和MMP-9 蛋白分布明显增加,主要集中在炎性细胞聚集处,与对照组比较差异有统计学意义;MMP-9 的分布与TNF-α明显相关.匹伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α诱导平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达;MMP-9 蛋白表达分别减少10.5%、24.1%、46.0%和61.0%,mRNA 表达分别减少9%、21%、35%和46%,差异有统计学意义.结论 动脉硬化组织中MMP-9 分布与TNF-α明显相关,提示动脉粥样硬化组织中MMP-9 增加与其他细胞因子相互影响有关.预先给予匹伐他汀可以呈现浓度依赖方式显示抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达,提示他汀类药物可以通过抑制MMP-9 表达,延缓、稳定动脉粥样硬化病变,早期干预效果更好.     

转化生长因子-β1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)不同浓度和作用时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基因(MMP-9 mRNA)及基质金属蛋白酶抑制剂-1基因(TIMP-1 mRNA)表达的影响.方法 先分别用TGF-β1 0、100、200 ng/ml作用于绒癌JEG-3细胞,48 h收获细胞;再以TGF-β1 100 ng/ml分别与JEG-3细胞作用0、12、24、48、72 h;最后用RT-PCR技术检测TGF-β1不同浓度和作用时间收获JEG-3细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达.结果 随TGF-β1浓度升高和作用时间延长,各收获细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达均明显升高,且MMP-9 mRNA与 TIMP-1 mRNA比值均＞1(P＜0.01或＜0.05).结论 在一定浓度和作用时间内,外源性TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达.     

沉默RICTOR表达对血管瘤细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制

目的探讨沉默雷帕霉素靶蛋白(m TOR)雷帕霉素不敏感组分(RICTOR)表达对血管瘤细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法采用RNA干扰技术降低血管内皮瘤细胞EOMA中RICTOR的表达量,实验分为对照组、阴性组、转染组,Transwell法检测降低RICTOR表达对细胞侵袭、迁移能力的影响,Western印迹检测细胞中RICTOR、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白的表达量。结果转染后细胞中RICTOR蛋白的表达量显著降低(P0.05);沉默RICTOR表达可显著降低细胞的侵袭、迁移能力(P0.05);转染组细胞中AKT蛋白的表达量没有明显变化,p-AKT、MMP-9蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05)。结论沉默RICTOR表达可通过降低磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/AKT信号通路和MMP-9的表达抑制血管内皮瘤细胞EOMA的侵袭、迁移能力。     

基质金属蛋白酶-2、9在喉鳞状细胞癌患者血清中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-2、9在喉鳞状细胞癌(LSCC)患者血清中的表达水平及与临床特征的相关性。方法采用SDSPAGE Zymography法检测56例LSCC患者及40例正常对照组血清中MMP-2、MMP-9水平。结果喉癌患者血清MMP-2、MMP-9浓度明显高于正常对照组(P0.05),其血清MMP-2、MMP-9浓度升高与淋巴结转移显著相关(P0.05),与肿瘤原发部位、病理分级无明显相关性(均P0.05)。血清MMP-9浓度与肿瘤临床分期无明显相关性。血清MMP-2浓度在T4期中明显升高,与其他分期之间差异显著(均P0.05)。结论血清MMP-2、MMP-9在喉癌患者中的浓度明显升高,有助于喉癌的诊断;可能对预测淋巴结转移具有一定作用,并可成为喉癌手术方案选择的依据。     

TNF-α对胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达的诱导作用

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的诱导作用.方法:以外源性TNF-α作用于胃癌细胞.未经TNF-α作用的胃癌细胞作为对照.采用ELISA法检测胃癌细胞培养上清液中MMP-2和MMP-9蛋白的含量.采用RT-PCR检测胃癌细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达状况.采用Western blot检测胃癌细胞内MMP-2蛋白和MMP-9蛋白含量.结果:不同浓度(1,10和100μg/L)的TNF-α作用胃癌细胞后,胃癌细胞上清液中MMP-2的含量分别为8.24±1.36,23.65±3.45和14.83±2.54 ng/L,均显著高于对照组(1.56±0.23 ng/L,P<0.01);MMP-9的含量分别为12.47±2.66,34.12±6.78和23.31±4.45 ng/L,亦均明显高于对照组(5.25±0.89 ng/L,P<0.01),其中以10μg/L TNF-α作用时升高最为显著.TNF-α作用胃癌细胞16h后,上清液中MMP-2和MMP-9含量达到峰值,分别为23.65±3.45和34.12±6.78 ng/L.胃癌细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达明显增强,胃癌细胞内MMP-2和MMP-9蛋白表达亦明显增多.结论:TNF-α可上调胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达.     

TNF-α对胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达的诱导作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的诱导作用.方法以外源性TNF-α作用于胃癌细胞.未经TNF-α作用的胃癌细胞作为对照.采用ELISA法检测胃癌细胞培养上清液中MMP-2和MMP-9蛋白的含量.采用RT-PCR检测胃癌细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达状况.采用Western blot检测胃癌细胞内MMP-2蛋白和MMP-9蛋白含量.结果不同浓度(1,10和100 μg/L)的TNF-α作用胃癌细胞后,胃癌细胞上清液中MMP-2的含量分别为8.24±1.36,23.65±3.45和14.83±2.54 ng/L,均显著高于对照组(1.56±0.23 ng/L,P＜0.01);MMP-9的含量分别为12.47±2.66,34.12±6.78和23.31±4.45 ng/L,亦均明显高于对照组(5.25±0.89 ng/L,P＜0.01),其中以10μg/L TNF-α作用时升高最为显著.TNF-α作用胃癌细胞16 h后,上清液中MMP-2和MMP-9含量达到峰值,分别为23.65±3.45和34.12±6.78 ng/L.胃癌细胞MMP-2 mRNA和MMP-9mRNA表达明显增强,胃癌细胞内MMP-2和MMP-9蛋白表达亦明显增多.结论TNF-α可上调胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达.     

RNAi抑制存活素基因表达对前列腺癌细胞侵袭的影响

目的 探讨存活素(survivin)基因对前列腺癌细胞侵袭的影响和可能机制. 方法 采用survivin基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人前列腺癌细胞系PC-3后,分别采用实时-定量RF PCR和Western blot检测survivin基因和基质金属蛋白酶家族-2、-9(matrixmetalloproteinases-2、-9)mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力;其次,将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察对癌细胞体内侵袭的影响. 结果 软琼脂集落形成试验显示,3.125、6.250 nmol/L和12.500 nmol/L siRNA组集落形成数分别为17.8±1.6、13.6±1.5、8.8±1.4,而对照组为22.65±1.8(P<0.05);Boyden小室模型试验显示,3.125、6.250 nmol/L和12.500/ nmol/L siRNA组穿过滤膜的细胞数分别为33.6±2.1、19.5±1.9、8.1±1.8,而对照组为49.4±2.3(P<0.05).体内试验显示,对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管,而转染组未见这些现象.同时发现,转染组细胞MMP-2、-9基因mRNA和蛋白水平明显下调,呈浓度和时间依赖性(P<0.01). 结论 采用survivin siRNA转染可抑制前列腺癌细胞侵袭转移,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9表达有关.     

塞来昔布干预对人胃癌细胞E-钙黏蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨COX-2与E-cadherin、MMP-2之间的相互关系及其参与胃癌细胞侵袭迁移的可能机制。方法应用塞来昔布(celecoxib)对体外培养的人胃癌细胞SGC7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin、MMP-2 mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化。结果塞来昔布明显抑制体外培养的人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达,E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高,MMP-2 mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性降低。塞来昔布30μmol/L干预人胃癌细胞SGC7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高。塞来昔布干预组细胞穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组。结论 COX-2特异性抑制剂塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin的表达,下调MMP-2的表达,抑制体外培养的胃癌细胞SGC7901的侵袭迁移能力。     

细胞因子对肺癌H460细胞MMP表达的影响及地塞米松的干预作用

目的 在肺癌H460细胞的三维立体培养过程中,直接观察细胞因子[肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β]对肺癌H460细胞关于基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9表达的诱导作用及地塞米松的干预作用.方法 在肺癌H460细胞三维立体培养过程中加入细胞因子TNF-α和IL-1β来诱导MMP的表达,同时加入地塞米松干预MMP-2和MMP-9的表达;用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9,同时在培养5d后测定胶原含量大小.结果 TNF-α和IL-1β诱导培养在立体胶原内的肺癌H460细胞产生大量MMP-2和MMP-9,并促进其活化,引起大量胶原降解,地塞米松抑制了MMP-2及MMP-9的表达及活化,进而抑制了胶原的降解,对抗了细胞因子TNF-α和IL-1β对胶原的降解作用.结论 细胞因子TNF-α和IL-1β可诱导MMP的表达,MMP可直接降解肺内胶原,进而促进肺癌的侵袭或转移;地塞米松通过抑制MMP的表达与活化对抗MMP对肺组织的破坏作用,进而抑制了肺癌的侵袭与转移.     

成纤维细胞与肺癌细胞相互作用对膜型基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的 研究胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MTl-MMP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法 采用Western blot方法检测各组MT1-MMP的表达.取其上清,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液中活性MMP-2的浓度.结果 H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时均有MT1-MMP表达,但混合培养后MT1-MMP表达增强(P＜0.05).H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时MMP-2均有分泌,混合培养MMP-2分泌增强(P＜0.05).结论 胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞相互作用能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达从而促进肺癌的侵袭和转移,这可能为肺癌侵袭转移的一个重要机制.     

肾细胞癌组织中KISS-1、MMP-9蛋白的表达变化及意义

目的观察肾细胞癌组织中KISS-1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化方法检测50例肾细胞癌组织、15例癌旁肾组织、15例正常肾组织中的KISS-1和MMP-9蛋白。结果肾细胞癌组织、癌旁肾组织及正常肾组织中KISS-1蛋白呈阳性表达者分别为16(32.00%)、11(73.00%)、10(66.67%)例,三者相比,P<0.05;KISS-1蛋白的表达与肾细胞癌的临床分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(P均<0.05)。肾细胞癌组织、癌旁肾组织及正常肾组织中MMP-9蛋白呈阳性表达者分别为32(64.00%)、6(40.00%)、1(6.67%)例,三者相比,P<0.05;MMP-9蛋白的表达与肾细胞癌的临床分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(P均<0.05)。肾细胞癌组织中KISS-1及MMP-9蛋白的表达呈负相关(rs=-0.468,P<0.01)。结论肾细胞癌组织中KISS-1蛋白低表达、MMP-9蛋白过表达,可能与肾癌的发生及侵袭转移有关,而且KISS-1基因可能抑制MMP-9蛋白的表达,二者有望成为判断肾细胞癌侵袭和转移能力的生物学指标。     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

SRPX2对肝癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制

目的探讨sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人肝癌细胞MHCC97H侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97H,用Lipofectamine法将阴性对照和SRPX2特异性siRNA转染到人肝细胞癌MHCC97H,继续培养48 h收获细胞,用Transwell检测细胞体外侵袭和迁移能力;实时荧光RT-PCR法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和基质金属蛋白酶(MMP2)mRNA表达的影响;Western Blot法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和MMP2蛋白水平的影响。结果与阴性对照组比较,干扰SRPX2组人肝癌细胞MHCC97H侵袭、迁移能力、SRPX2 mRNA、MMP-2 mRNA、SRPX2蛋白和MMP-2蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SRPX2可能通过调节MMP2而影响人肝癌细胞MHCC97H侵袭和迁移。     

川芎嗪对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和迁移的影响

目的 探讨中药川芎有效成分川芎嗪（TMP）对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和转移的影响。方法 取对数生长期的HepG-2细胞,分别给予50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP和未加药物的阴性对照处理,采用基质粘附实验、Transwell小室迁移和侵袭实验测定HepG-2细胞活动能力,使用流式细胞仪检测HepG-2细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP2）蛋白表达情况,并计算MMP-2/TIMP2比值。结果 随着TMP浓度的加大,HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移数逐渐降低, 50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP处理组HepG-2细胞粘附率分别为（56.2±5.1）%、（36.9±4.2）%、（22.1±3.2）%,明显低于阴性对照组的【（89.4±4.6）%,P<0.05】; 100 mg/L和200 mg/L TMP 处理组HepG-2细胞迁移细胞数分别为（196.6±10.6）个/视野、（182.2±12.4）个/视野,明显低于阴性对照组的（234.6±8.7）个/视野（P<0.05）;100 mg/L和200 mg/L TMP组HepG-2细胞侵袭细胞数分别为（145.9±9.8）个/视野和（123.5±9.3）个/视野,明显低于阴性对照组的（166.3±10.2）个/视野（P<0.05）;随着TMP浓度的加大,细胞MMP-2蛋白表达量逐渐降低,而TIMP2蛋白表达量逐渐升高,与阴性对照组比,实验组细胞MMP-2蛋白表达量和MMP-2/TIMP2比值明显降低,而TIMP2蛋白表达量明显升高（P<0.05）。结论 TMP可有效抑制肝癌HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其能明显下调细胞MMP-2而上调TIMP2蛋白表达有关。     

他莫西芬对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用及临床意义

目的探究他莫西芬对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及临床意义。方法不同浓度他莫西芬干预骨肉瘤MG-63细胞(1、2、4、8、16μmol/L),MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞术和Transwell法检测他莫西芬(16μmol/L)处理的骨肉瘤MG-63细胞的凋亡率和侵袭能力;采用无血清培养基稀释MG-63细胞注射入SPF大鼠胫骨近端骨髓腔中,构建骨肉瘤大鼠模型,并予他莫西芬,观察肿瘤的体积;蛋白质印迹法(Western印迹)检测细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP)-9、MMP-2蛋白的水平。结果与对照组相比,他莫西芬可显著抑制细胞的增殖(P<0.05),且具有一定的浓度依赖性。他莫西芬处理的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),侵袭能力显著下降(P<0.05)。骨肉瘤大鼠模型经他莫西芬干预后,肿瘤体积显著低于模型组(P<0.05)。他莫西芬可显著降低骨肉瘤细胞中MMP-9、MMP-2蛋白的水平(P<0.05)。结论他莫西芬可抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,可能通过下调MMP-9、MMP-2蛋白的表达抑制细胞的侵袭能力。     

单核细胞增生李斯特菌感染对Bewo细胞炎症因子及迁移能力的影响

目的 研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染致Bewo细胞炎症因子表达及迁移能力的变化,并探讨其可能的机制。方法 Lm以MOI=10感染Bewo细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bewo细胞炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平;划痕试验及Transwell试验检测Bewo细胞的迁移能力;Western Blot检测Bewo细胞迁移相关蛋白(MMP2,MMP9,TIMP-1)以及MAPK家族蛋白(p-p38MAPK,p38MAPK,p-ERK1/2,ERK1/2)的表达水平。结果 Lm感染Bewo细胞后炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平与感染1 h相比均升高。Western Blot结果表明,随着感染时间的延长,迁移相关蛋白MMP2逐渐升高;MMP9和TIMP-1变化趋势一致,先上升后下降;Lm感染致MAPK家族p38MAPK及ERK1/2蛋白磷酸化水平升高。结论 Lm感染Bewo细胞后导致细胞迁移能力增强,MMP2在调控细胞迁移能力的变化中起主要作用,Lm感染可以激活Bewo细胞MAPK家族p38MAPK及ERK1/2信号通路。     

槲皮素抑制口腔鳞癌细胞增殖和迁移的机制

目的探讨槲皮素对人类口腔鳞癌(SAS)细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法体外培养SAS细胞,分别加入不同浓度的槲皮素进行处理后用MTT实验检测细胞增殖抑制情况;采用涂有Matrigel胶的Transwell小室模型对SAS细胞进行体外侵袭力检测;划痕实验研究槲皮素对SAS细胞迁移的影响;明胶酶谱法测定SAS细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的活性;蛋白质印迹法研究槲皮素与SAS细胞迁移和侵入相关的蛋白质表达水平的关系。结果槲皮素可以浓度、时间依赖性抑制SAS细胞的增殖;划痕实验、Transwell小室迁移实验中,随着槲皮素浓度提高,SAS细胞迁移数目呈递减趋势、细胞侵袭能力呈递减趋势;槲皮素可以显著抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达;槲皮素抑制SAS细胞中核转录因子(NF)-κB蛋白的表达。结论槲皮素抑制SAS细胞生长能力,通过抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达以及NF-κB蛋白的表达阻断SAS细胞迁移、运动以及侵袭。     

肿瘤坏死因子α刺激培养的人肝星状细胞表达基质金属蛋白酶的研究

目的　了解肿瘤坏死因子 (TNF)α对培养的人肝星状细胞表达基质金属蛋白酶 (MMP)的影响。方法　分离、培养人肝星状细胞 ,用于TNFα刺激。用酶联免疫吸附试验检测不同时间培养上清液中的MMP-1、MMP-2和MMP-3浓度。结果　受TNFα刺激的肝星状细胞表达MMP-1、MMP-2和MMP-3水平呈逐渐上升趋势 ,从刺激后 2 0h开始显著增加 :MMP-1水平 2 8h >2 4h >2 0h >4～ 16h(P <0 .0 0 1) ;MMP 2水平 2 8h >2 4h >2 0h(P <0 .0 0 1) >4～ 16h(P <0 .0 5 ) ;MMP 3水平 2 8h >2 4h(P <0 .0 1) ,2 4h >2 0h >4～ 16h(P <0 .0 5 )。TNF α刺激后肝星状细胞产生的MMP 1和MMP 2平均浓度 8h时已高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,2 0h后显著高于对照组 (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1)。而MMP 3平均浓度在 4～ 16h与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,2 0h后才显著高于对照组 (P <0 .0 1)。结论　TNFα可刺激星状细胞表达MMP-1、MMP-2和MMP-3 ,其表达水平随刺激时间的延长呈逐渐增加趋势     

基质金属蛋白酶-9基因启动子甲基化在非小细胞肺癌治疗中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因启动子甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测NSCLC患者及健康人外周血白细胞MMP-9启动子的甲基化状态。用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血浆MMP-9的含量及RT-PCR检测外周血白细胞中MMP-9mRNA的表达水平。结果 NSCLC组MMP-9基因启动子平均甲基化密度显著降低,与对照组相比有显著性差异(23.5±4.7vs40.6±3.8,P<0.05);NSCLC组MMP-9mRNA表达显著增强,与对照组相比有显著性差异(1.35±0.31vs0.76±0.07,P<0.05);NSCLC组MMP-9含量显著增高,与对照组相比有显著性差异(597±143vs242±65,P<0.05)。MMP-9甲基化状态与NSCLC患者的肿瘤组织类型、TNM分期无关(P>0.05);MMP-9mRNA表达及MMP-9蛋白水平与NSCLC的组织类型无关(P>0.05),但和TNM的分期有关:Ⅲ期、Ⅳ期MMP-9mRNA表达及MMP-9蛋白水平均明显高于Ⅱ期(P>0.05)。经相关性分析,MMP-9mRNA表达与其基因启动子甲基化密度变化成正相关(R=0.79,P<0.05);MMP-9含量与其基因启动子甲基化密度变化成正相关(R=0.82,P<0.05);MMP-9含量与MMP-9mRNA的表达成正相关(R=0.77,P<0.05)。结论 NSCLC患者MMP-9基因启动子处于低甲基化状态,其通过增强MMP-9mRNA表达及促进MMP-9蛋白分泌在肿瘤的发生发展中发挥作用。