miR-299-5p靶向RRS1调控胃癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-299-5p(miRNA-299-5p)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(BGC-823、MKN45、MGC803)及正常胃上皮GES-1细胞中miRNA-299-5p、核糖体合成调控因子(RRS)1 mRNA表达水平,采用Western印迹法检测RRS1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miRNA-299-5p与RRS1的靶标关系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组BGC-823细胞增殖活力;流式细胞术检测各组BGC-823细胞凋亡情况。结果不同胃癌细胞株中miRNA-299-5p表达水平均低于GES-1细胞,而RRS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于GES-1细胞(P0.05)。miRNA-299-5p组GES-1细胞增殖活力显著低于miR-NC组(P0.05),miRNA-299-5p表达水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);与si-NC组相比,si-RRS1组BGC-823细胞增殖活力及RRS1蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05);RRS1是miRNA-299-5p的靶基因;与miR-299-5p+pcDNA组相比,miR-299-5p+pcDNA-RRS1组BGC-823细胞增殖活力显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论 miRNA-299-5p可抑制胃癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其主要通过靶向调控RRS1表达而发挥作用。     

miR-204-5p靶向JARID2调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖侵袭迁移的机制

目的研究miR-204-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤MUM-2B、正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-204-5p、JARID2的表达;将miR-204-5p组(转染miR-204-5p模拟物)、miR-con组(转染miR-con)、si-JARID2组(转染si-JARID2)、si-con组(转染si-con),miR-204-5p+pcDNA组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA)、miR-204-5p+pcDNA-JARID2组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA-JARID2),均用脂质体法转染至MUM-2B细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19相比,葡萄膜黑色素瘤MUM-2B中miR-204-5p表达显著降低,JARID2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-204-5p、敲减JARID2均可明显抑制MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭;miR-204-5p可靶向负调控JARID2的表达;过表达JARID2可逆转过表达miR-204-5p对MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论miR-204-5p可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向JARID2有关,将可为葡萄膜黑色素瘤的靶向治疗提供新靶点。     

LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

背景:LncRNA在胃癌中表达上调或下调,其在胃癌发生、发展中的作用机制尚未完全阐明。目的:探讨LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p表达来调控胃癌细胞增殖、迁移、凋亡的机制。方法:采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1和miR-497-5p的表达,Pearson法分析胃癌组织中DDX11-AS1与miR-497-5p的相关性。将胃癌HGC-27细胞随机分为NC组、si-con组、si-DDX11-AS1组、miR-con组、miR-497-5p组、si-DDX11-AS1+anti-miR-con组、si-DDX11-AS1+anti-miR-497-5p组。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告系统验证DDX11-AS1与miR-497-5p的靶向调节关系;蛋白质印迹法检测cyclin D1、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1表达显著升高(P 0.05),而miR-497-5p表达显著降低(P 0.05),DDX11-AS1与miR-497-5p呈负相关(r=-0.754,P 0.05)。干扰DDX11-AS1表达或上调miR-497-5p表达可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P 0.05),诱导细胞凋亡(P 0.05),cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著降低(P 0.05),cleaved caspase-3表达显著升高(P 0.05)。双萤光素酶报告实验证明DDX11-AS1可负向调控miR-497-5p的表达和活性。抑制miR-497-5p表达可逆转干扰DDX11-AS1表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论:干扰LncRNA DDX11-AS1表达能通过靶向结合并上调miR-497-5p的表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

miR-9-5p通过靶向FOXO1基因调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-9-5p通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)对食管癌Eca-109细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的调控作用。方法 在食管癌Eca-109细胞中分别转染miR-9-5p inhibitor和NC-inhibitor,分别设置为anti-miR-9-5p组和NC组,并设置未转染的细胞为Blank组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组细胞中miR-9-5p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。通过生物信息学在线软件预测miR-9-5p与FOXO1互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析miR-9-5p对FOXO1的调控作用。结果 anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中miR-9-5p的表达水平、OD值、侵袭和迁移细胞数均显著低于NC组和Blank组(P0.05)。miR-9-5p与FOXO1存在互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,miR-9-5p和FOXO1能够靶向结合。anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显高于NC组和Blank组(P0.05)。NC组和Blank组细胞中以上指标均无明显改变(P0.05)。结论 干扰miR-9-5p的表达可通过靶向FOXO1基因抑制食管癌Eca-109细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.     

miR-324-5 p通过靶向TRIP13基因调控宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的 探讨miR-324-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及调控机制.方法 培养正常宫颈细胞Ectl/E6E7和宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-324-5p和甲状腺激素受体因子(TRIP)13 mRNA表达,Western印迹...     

miR-708-5p靶向GAGE12I抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-708-5p靶向GAGE12I对胃癌(gastric cancer,GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 qRT-PCR检测miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中的表达;MTT法、克隆形成实验和Transwell小室法检测miR-708-5p和GAGE12I对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的影响;双荧光素酶报告基因实验验证miR-708-5p与GAGE12I之间的靶向关系; Western blot检测miR-708-5p对GAGE12I表达的影响;靶标回复实验验证GAGE12I对miR-708-5p抑制GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭作用的影响.结果 miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中低表达;上调miR-708-5p和沉默GAGE12I抑制GC细胞AGS增殖、迁移和侵袭; GAGE12I是miR-708-5p的靶基因,且miR-708-5p负性调节GAGE12I表达,过表达GAGE12I可部分逆转miR-708-5p对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 miR-708-5p可靶向GAGE12I抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.     

miR-548a-5p靶向HMBOX1调控肝癌细胞HepG2的凋亡研究

目的 探讨miR-548a-5p调控肝癌细胞HepG2凋亡的潜在机制.方法 通过miR-548a-5p mimics和miR-548a-5p inhibitor分别过表达和敲低miR-548a-5p,检测HepG2的凋亡水平.通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-548a-5p的潜在底物.通过siRNA和...     

miR-210-5p靶向ING4调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制

目的 研究miR-210-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制.方法 运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤M23、人正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-210-5p、生长抑制因子(ING)4的表达;将anti-miR-210-5p组(转染anti-miR-210-5p)、a...     

miR-325-3p靶向CLDN1调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移

目的 探讨微小核糖核酸-325-3p(miR-325-3p)靶向紧密连接蛋白1(CLDN1)调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的作用。方法 将对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721分为四组：阴性对照组、上调组、下调组和正常组。荧光显微镜观察各组细胞转染效率;细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖活性;侵袭小室(Transwell)实验检测各组细胞侵袭和迁移活性;实时-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-325-3p、CLDN1、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测各组CLDN1、ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2蛋白表达及p-ERK1/2水平;双荧光素酶报告基因检测验证miR-325-3p对CLDN1的作用。结果 阴性对照组、上调组和下调组细胞转染效率分别为(91.38±16.21)%、(92.17±15.93)%...     

miR-515-5p通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭

目的旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制。方法通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况。将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系。采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况。荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系。结果 miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调。过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力。结论 miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭。     

miR-129-3p靶向LPAR3调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨miR-129-3p靶向LPAR3调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR和Western blotting检测正常肝细胞HL-7702和3种肝癌细胞SMMC-7721、Hep G2和BEL-7402中miR-129-3p和LPAR3的表达情况。构建过表达miR-129-3p的SMMC-7721细胞株,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting检测LPAR3、Cyclin D1、MMP-2、PI3K和AKT蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western blotting验证miR-129-3p和LPAR3的靶向关系。结果与正常肝细胞相比,肝癌细胞中miR-129-3p的表达显著降低,LPAR3的表达显著升高。过表达miR-129-3p可抑制SMMC-7721的增殖、迁移和侵袭。LPAR3是miR-129-3p的靶基因,miR-129-3p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可部分逆转miR-129-3p对SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-129-3p通过调控LPAR3抑制PI3K和AKT蛋白的表达。结论 miR-129-3p通过靶向下调LPAR3抑制PI3K/AKT信号通路活化,进而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-105-5p靶向XAF1抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制

目的 探讨miR-105-5p对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制.方法 将宫颈癌细胞HeLa分为anti-miR-NC组、anti-miR-105a-5p组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-XAF1组、anti-miR-105a-5p+si-NC组、anti-miR-105a-5p+si-XAF1组;采...     

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

circCLK3通过靶向miR-654-5p促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

背景 最近的研究已经表明了环状RNA(circularRNA,circRNA)在包括结直肠癌在内的多种癌症进展中的重要调节因子的作用.然而, circCLK3的生物学功能及其调控结直肠癌进展的潜在机制尚不清楚.目的探究circCLK3对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的影响和潜在的分子机制.方法收集本院47例结直肠癌组织及癌旁组织, qRT-PCR法检测circCLK3、miR-654-5p的表达;体外培养SW620细胞并分为:si-circCLK3组、pcDNA-circCLK3组、miR-654-5p组、si-circCLK3+anti-miR-654-5p组及相应的对照组(si-NC组、pcDNA组、miR-NC组、sicircCLK3+anti-miR-NC组);采用CCK8、克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告分析circCLK3与miR-654-5p的靶向关系;采用Westernblot检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9蛋白表达.结果circCLK3在结...     

长链非编码RNA-UCA1通过靶向miR-873调控胃癌细胞增殖、侵袭迁移的分子机制

目的 探讨UCA1对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制.方法 将胃癌细胞SGC-7901分为si-con组、si-UCA1组、miR-con组、miR-873组、si-UCA1+anti-miR-con组和si-UCA1+anti-miR-873组;运用qRT-PCR检测胃癌细胞SGC-7901和胃黏膜上...     

LncRNA NNT-AS1通过靶向miR-496调控卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA NNT-AS1(LncRNA NNT-AS1)靶向微小核糖核酸(miR)-496抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA NNT-AS1与miR-496在卵巢癌细胞及正常卵巢上皮细胞中的表达;双荧光素酶报告基因检测LncRNA...     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-5195-3p促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)是否通过靶向调控miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 体外培养正常胃上皮细胞GES-1与胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CBR3-AS1、miR-...