利多卡因通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡抑制乳腺癌细胞增殖

目的 研究利多卡因能否通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡抑制乳腺癌细胞增殖。方法 将乳腺癌MCF-7细胞随机分为空白对照组（NC组），利多卡因组低、中、高剂量组（LIDO-L、M、H组）和LIDO-H+MCC950组，CCK-8法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪和免疫荧光染色检测细胞焦亡；蛋白质印迹和qRT-PCR法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达。结果 和NC组相比，LIDO-L组、LIDO-M组、LIDO-H组MCF-7细胞存活率、细胞侵袭数目均明显降低，细胞焦亡率、细胞中GSDMD阳性细胞数、细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达及m RNA表达均明显增加（P<0.05）。和LIDO-H组相比，LIDO-H+MCC950组细胞存活率和侵袭细胞数目明显增加，细胞焦亡率和GSMDM阳性细胞数明显减少，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 利多卡因可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和侵袭，其...     

长托宁抑制NLRP3炎症小体调节脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞极化改善脑损伤

目的 探究长托宁对大鼠脑缺血再灌注致脑损伤的保护作用及可能的机制。方法 30只SD大鼠随机分成假手术组、模型组及长托宁组,每组10只。水迷宫实验检测大鼠认知能力变化;HE染色观察脑组织形态学变化;TUNEL方法检测脑组织神经元细胞凋亡;免疫荧光检测脑组织小胶质细胞极化;ELISA方法检测脑组织炎症因子水平;Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达。结果 长托宁治疗增加脑缺血再灌注损伤大鼠认知能力,改善大鼠脑组织形态,降低脑组织神经元细胞凋亡水平、M2型小胶质细胞比例、IL-1β和IL-18水平及NLRP3、caspase-1和ASC蛋白表达水平,增加脑组织M1型小胶质细胞比例。结论 长托宁减轻大鼠脑缺血再灌注脑损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体有关。     

脂多糖通过NLRP3诱导并促进慢性鼻窦炎人鼻黏膜上皮细胞焦亡北大核心CSCD

目的革兰氏阴性菌能够诱发并加重慢性鼻窦炎(CRS)炎症反应,但病理机制有待进一步证实,而细胞焦亡被证实与细菌性炎症反应密切相关,因此本研究重点探讨来源于革兰氏阴性菌的关键成分脂多糖(LPS)是否能够通过诱导并加剧CRS患者鼻黏膜上皮细胞焦亡来促进CRS的炎症进展。方法利用临床上对照组和CRS组患者的鼻黏膜组织,采用IHC检测焦亡相关蛋白的表达。提取并培养正常原代人鼻黏膜上皮细胞(N-HNEpCs)和CRS原代人鼻黏膜上皮细胞(CRS-HNEpCs)。随后将2种细胞分为4组(对照组、LPS 1 mg/L组、LPS 5 mg/L组和LPS 25 mg/L组);CCK-8检测细胞存活率,EthD-I荧光染色结合GSDMD检测细胞焦亡,免疫荧光技术、Western blot、RT-qPCR检测炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1)的表达。结果IHC显示CRS患者鼻黏膜组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达相较对照组显著增加(P<0.01)。体外实验结果表明,不同浓度的LPS刺激均可降低N-HNEpCs和CRS-HNEpCs的存活率(P<0.05),并可增加EthD-I荧光染色阳性细胞数和焦亡关键蛋白GSDMD的表达(P<0.05),且呈现出剂量依赖关系;免疫荧光技术、Western blot和RT-qPCR结果均显示5 mg/L LPS刺激后,N-HNEpCs和CRS-HNEpCs内炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体的表达显著上调(P<0.05)。结论LPS可通过激活NLRP3炎症小体从而触发正常原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡,并可进一步促进CRS原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡进展,提示革兰氏阴性菌可能通过诱发鼻黏膜上皮细胞焦亡从而引起并加剧CRS病变。     

Caspase-1介导的细胞焦亡对脑出血大鼠神经损伤的影响

目的:观察胱天蛋白酶1(caspase-1)介导的细胞焦亡对脑出血大鼠神经损伤的影响。方法:(130只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血12 h组、脑出血24 h组、脑出血48 h组和脑出血72 h组,每组6只。在大鼠右侧纹状体注射自体非抗凝血建立脑出血模型。采用Western blot方法检测患侧纹状体内caspase-1和细胞焦亡执行蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达及活化情况。(2)54只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组和Ac-YVAD-CMK(caspase-1选择性抑制剂)给药组,每组18只。侧脑室注射Ac-YVAD-CMK 20 min后,建立脑出血模型。采用前肢放置实验、转角实验和改良神经功能缺损评分观察脑出血大鼠的神经功能变化;采用HE染色、干湿比重法和Fluoro-Jade C(FJC)染色观察神经损伤情况;采用Western blot法检测caspase-1、GSDMD、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的表达;采用免疫荧光双标及免疫荧光和TUNEL共染色的方法,观察神经元和小胶质细胞焦亡情况。结果:与脑出血组比较,Ac-YVAD-CMK给药组大鼠的神经功能显著改善(P0.05),神经细胞肿胀减轻,固缩坏死细胞数量减少,病灶侧基底脑组织水肿明显缓解(P0.05),FJC染色阳性细胞的数量显著减少(P0.05),caspase-1和GSDMD的活化片段及IL-1β和IL-18蛋白表达水平均显著下降(P0.05),GSDMD和TUNEL阳性小胶质细胞数量显著减少(P0.05)。结论:抑制caspase-1介导的细胞焦亡可以减轻脑出血大鼠的神经损伤。     

迷迭香酸抑制NLRP3炎性小体的活化对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马区神经元凋亡的影响

目的探究迷迭香酸对NLRP3炎性小体活化的影响,从而进一步探究其对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马神经元凋亡的影响。方法采用控制性皮层撞击损伤(CCI)模型法建立大鼠创伤性颅脑损伤模型,将小鼠随机分成5组,加药组分别腹腔注射5、10、20 mg/kg迷迭香酸,然后评估大鼠的神经功能缺陷评分;计算各组大鼠脑含水率及脑指数;苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑组织海马区神经元病理学变化;TUNEL检测神经元凋亡情况;尼氏小体染色观察神经元损伤情况;蛋白印迹法检测各组大鼠脑前额叶脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、Caspase-3的蛋白表达水平;试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS),超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。结果与健康对照组比较,脑损伤模型组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著升高(P0.05),神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著升高(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05)。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著降低(P0.05),海马区神经元病变范围及程度减轻,海马区神经元损伤程度减轻。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著降低(P0.05);SOD含量显著升高(P0.05)。结论迷迭香酸可抑制NLRP3炎性小体的活化和海马区神经元凋亡并减轻创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤。     

NLRP3炎性小体促进脓毒症致急性肾损伤的机制研究

目的 探讨NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在脓毒症致急性肾损伤中的作用及其可能的机制。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、MCC950组和Ac-YVAD-CMK组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺术建立脓毒症大鼠模型,MCC950组和Ac-YVAD-CMK组大鼠造模后分别腹腔注射MCC950 10 mg/kg和Ac-YVAD-CMK 5 mg/kg,对照组大鼠仅探查肓肠。ELISA法检测尿素氮、肌酐、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、IL-1β、IL-18含量;Western blot检测肾损伤分子-1(KIM-1)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)和半乳糖结合蛋白Galectin-3表达;HE染色观察大鼠肾组织病理学变化;PAS染色观察大鼠肾小管损伤情况。结果 与对照组相比,模型组大鼠肾组织病理学评分、尿素氮、肌酐、NGAL、IL-1β、IL-18、糖原沉积水平及KIM-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD和Galectin-3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与...     

富氢水抑制NLRP3炎症小体改善创伤性脑损伤小鼠炎症反应

目的 探讨富氢水对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠炎症反应及对NLRP3炎症小体的影响.方法 30只SPF级C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、创伤性脑损伤模型组(TBI)及富氢水治疗组(HRS),每组10只.除Sham组外,其余各组小鼠均采用Feeney氏自由落体法...     

细胞焦亡在脑缺血再灌注损伤中的研究进展

细胞焦亡(Proptosis)是近年来发现的一种程序性细胞死亡形式,主要依靠炎症小体激活部分Caspase家族蛋白(Caspase-1/4/5/11),切割其下游的Gasdermin-D(GSDMD)蛋白后,定位到细胞膜上形成孔洞,最终导致细胞膜破裂,并释放出细胞内容物及炎性因子等.目前研究表明,细胞焦亡参与了脑缺血再灌注的损伤过程.本文着重探讨细胞焦亡在脑缺血再灌注损伤中的机制及相关药物治疗进展,以期为缺血性脑卒中的防治提供一定理论依据.     

中脑黑质多巴胺神经元对适当剂量鱼藤酮毒性损伤的特殊敏感性

目的:探索中脑黑质多巴胺神经元对适当剂量鱼藤酮毒性损伤是否具有特殊敏感性。方法:采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法建立大鼠中脑黑质多巴胺神经元损伤模型,进行中脑黑质和纹状体酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色加尼氏染色;同时通过HE染色及尼氏染色方法分别观察心、肝、脾、肾等重要胸腹腔脏器及海马、顶叶皮质的形态学变化。结果:中脑黑质TH免疫染色和尼氏染色结果显示组间中脑黑质致密区以外部位尼氏小体数目无差异;大脑顶叶皮质和海马尼氏染色及胸腹腔重要脏器HE染色结果表明各组大鼠均未出现相应部位损伤。结论:低剂量颈部皮下注射鱼藤酮能选择性诱导中脑黑质多巴胺神经元损伤,说明中脑黑质多巴胺神经元对鱼藤酮具有高度敏感性。     

雪胆乙素通过抑制小鼠巨噬细胞中AMPK活性抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡

目的 本研究旨在探索雪胆乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法利用第一信号（LPS）刺激巨噬细胞,再以第二信号（ATP）激活NLRP3炎症小体;采用Western blot检测caspase-1、GSDMD等蛋白的表达水平;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平;免疫荧光染色检测雪胆乙素对LPS+ATP诱导的ASC斑点形成的影响;碘化丙锭（PI）染色法检测细胞死亡。结果 我们发现雪胆乙素处理能够抑制ATP诱导的巨噬细胞中ASC斑点的形成,并抑制LPS+ATP刺激下巨噬细胞中caspase-1的切割及活化;进一步抑制成熟IL-1β释放至培养液上清中;同时,雪胆乙素也能够明显抑制巨噬细胞中GSDMD-NT的形成以及细胞焦亡。另外,雪胆乙素能够抑制AMPK的磷酸化,而AMPK的激动剂AICAR促进成熟IL-1β的释放,以及可以明显逆转雪胆乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论 雪胆乙素可能通过抑制巨噬细胞中AMPK的活性而抑制NLRP3炎症小体活化与细胞焦亡。     

NLRP3通过下调claudin-1增加早期蛛网膜下腔出血大鼠血脑屏障通透性

目的:研究NLRP3炎性小体在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤(EBI)过程中对血脑屏障(BBB)的影响.方法:36雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH组(SAH)和NLRP3抑制剂MCC950处理组(SAH+MCC950),利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用尾静脉注射给予SAH大鼠MCC95...     

细胞焦亡与肾脏疾病的关系研究进展

细胞焦亡(pyroptosis)是具有凋亡和坏死特征的一种新型程序性细胞死亡。为了探究细胞焦亡在肾脏疾病中的机制,该文比较在急性肾损伤、慢性肾脏疾病以及糖尿病肾病模型中相关细胞焦亡蛋白表达情况。综述发现,在病理肾组织中,NLRP3、Caspase蛋白表达上调并切割消皮素D(gasdermin D, GSDMD)蛋白,使相应细胞的细胞膜破裂,随即释放炎性因子IL-1β和IL-18,诱导细胞焦亡。由此,在许多肾脏疾病中NLRP3-Caspase-GSDMD-IL-1β/IL-18参与其中并介导炎症反应,加重疾病的发展。现就细胞焦亡机制与肾脏疾病的关系进行阐述。     

长托宁介导NLRP3炎性小体调控IKKβ/IKKα/NF-κB通路抑制脊髓损伤大鼠细胞焦亡

目的 探索长托宁对脊髓损伤大鼠细胞焦亡的影响及可能机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤模型组（Allen’s法建立SCI大鼠模型）和长托宁治疗组（PHC组,腹腔注射长托宁2mg/kg,连续给药14 d）。各组大鼠进行运动功能（BBB）评分;HE、尼氏染色观察脊髓病理学变化;ELISA检测IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18的含量变化;TUNEL检测脊髓细胞凋亡;Western blot方法检测NLRP3、procaspase1、pro-IL1β、IKKβ、IKKα、P-IKKβ、P-IKKα、NF-κB的表达水平。结果 长托宁减轻SCI大鼠脊髓损伤,抑制炎症反应,抑制IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18释放,抑制细胞凋亡,下调炎症小体相关蛋白表达水平,降低NLRP3、pro-caspase1、pro-IL1β表达水平,抑制IKKβ/IKKα/NF-κB信号通路活性。结论 长托宁减轻SCI大鼠炎症反应,抑制NLRP3炎性小体,与调控IKKβ/IKKα/NF-κB通路有关。     

吡咯喹啉醌对D-半乳糖致衰老大鼠海马神经元的影响

目的观察吡咯喹啉醌(PQQ)对D-半乳糖(D-gal)致大鼠海马神经细胞衰老的影响。方法用大剂量D-gal致大鼠脑老化模型,侧脑室注射PQQ,50 d后行脑组织切片H-E染色和尼氏染色,观察海马神经元的形态学变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用TBA法和Fenton反应测海马组织自由基含量;W estern b lot观察C-FOS蛋白的表达。结果D-gal处理组鼠海马神经元胞体变小,尼氏小体的吸光度值(A)降低,细胞凋亡率和自由基含量增加,C-FOS蛋白的表达降低;而同时PQQ处理后,与对照组相比海马神经元的胞体变大,尼氏小体的A值增加,自由基含量和神经元的凋亡率无明显增加,PQQ剌激了C-FOS蛋白的表达。结论PQQ能延缓D-gal引起的大鼠海马神经细胞衰老。     

甘草附子汤加减方通过抑制GSDMD介导的焦亡治疗CIA大鼠的作用机制研究

目的：探讨甘草附子汤加减方（GCFZD）抑制gasdermin D (GSDMD)介导细胞焦亡途径对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的治疗效果。方法：SD大鼠尾跟部注射由牛Ⅱ型胶原与弗氏佐剂混合形成的乳化剂，构建CIA大鼠模型并对其关节炎指数进行评估，将成功诱发关节炎的30只雄性SD大鼠随机分为模型组、甘草附子汤低（4 g/kg）、中（8 g/kg）和高（16 g/kg）剂量组及甲氨蝶呤（1 mg/kg）组，每组6只，连续给药30 d。测定大鼠的体重、关节炎指数和足爪肿胀指数；X线影像学观察骨质破坏和软组织厚度改变；HE染色观察脾脏和关节组织病理学改变；番红O-固绿染色观察关节软骨改变；TUNEL染色观察关节内细胞焦亡发生情况；Western blot测定TLR4、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白表达；real-time PCR和ELISA测定IL-1β、IL-6和IL-10细胞因子表达。结果：与模型组相比，GCFZD治疗显著改善CIA大鼠软组织肿胀和骨质破坏，降低脾脏和胸腺指数；HE染色结果显示，GCFZD治疗减轻CIA大鼠脾脏和踝关节组织病理学改变；番红O-固绿染色结果...     

人参皂苷Rg1通过抑制NLRP3炎症小体途径减轻氧糖剥夺/复供后小胶质细胞炎症反应

目的 探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法 将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组：无处理组（Con）,氧糖剥夺/复供组（OGD/R）,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组（剂量分别为0.1、0.2、0.4 mmol/L,简称Rg1L、Rg1M、Rg1H）,MCC950对照组（0.05 mmol/L,MCC950）。采用CCK8法检测细胞增殖;免疫荧光和免疫印迹法检测经不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950作用48 h后,BV-2小胶质细胞内NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。ELISA检测BV-2小胶质细胞培养液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平。结果 与Con组比较,经缺氧缺糖/复供处理的BV-2小胶质细胞胞质内可见明显的Iba-1绿色荧光表达;OGD/R处理BV-2小胶质细胞2 h后,加入不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950培养48 h后,细胞增殖率呈现明显的下降趋势。OGD/R组呈现明显的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达。Rg1L、Rg1M、Rg...     

川芎嗪抑制CIRI大鼠小胶质细胞活化发挥抗炎作用机制的实验研究

目的观察川芎嗪对脑缺血再灌注(CIRI)大鼠脑组织中小胶质细胞活化的调控作用,阐述川芎嗪通过抑制小胶质细胞焦亡的发生而发挥其对CIRI大鼠的抗炎作用机制。方法用SD大鼠建立CIRI模型,分为假手术组、模型对照组、川芎嗪组、阳性对照组。对各组大鼠进行神经功能缺损评分;TTC染色测定梗死灶体积;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中IL-1β、IL-6及TNF-α的水平;免疫荧光法检测半暗带脑组织中Iba-1、NLRP3的共表达;Western blot检测半暗带脑组织中ASC、Caspase-1、Pro-Caspase-1、GSDMD的表达水平。结果与假手术组比较,其余3组神经功能缺损评分、梗死灶体积、血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1/NLRP3双阳细胞数、ASC、Caspase-1、Pro-Caspase-1、GSDMD的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,川芎嗪组、阳性对照组大鼠神经功能缺损评分、梗死灶体积、血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1/NLRP3双阳细胞数、ASC、Caspase-1、Pro-Caspase-1、GSDMD的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。与阳性对照组比较,川芎嗪组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1/NLRP3双阳细胞数、ASC、Caspase-1、GSDMD的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论川芎嗪具有改善CIRI大鼠神经功能缺损症状,控制梗死灶扩大,抑制炎症因子分泌的保护作用,该作用可能是通过抑制小胶质细胞内焦亡的发生来实现的。     

PPARγ激动剂吡格列酮减少大鼠创伤性脑损伤后的神经损伤和胶质增殖

目的:研究PPARγ激动剂吡格列酮(Pio)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)所致皮层损伤的神经保护作用。方法:SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、TBI后溶剂处理组(vehicle+TBI组)、TBI后Pio治疗组(Pio+TBI组)、TBI后Pio治疗加PPARγ拮抗剂组(Pio+T0070907+TBI组)。采用CCI方法制备大鼠TBI损伤模型;neutralred染色测定脑皮层损伤体积;脑组织切片NeuN、OX-42、GFAP免疫组化染色分别显示Pio对皮层损伤周围区神经元形态和数量变化以及对小胶质细胞和星形胶质细胞活化程度的影响。结果:大鼠CCI损伤引起皮层损伤周围区神经元数量大量丢失和小胶质细胞、星形胶质细胞过度活化增殖以及胶质瘢痕形成;Pio治疗显著减小了皮层损伤体积和神经元数量的减少,同时降低了小胶质细胞和星形胶质细胞的增殖活化;而T0070907逆转了Pio的上述作用。结论:Pio可能通过PPARγ抑制大鼠损伤皮层小胶质细胞和星形胶质细胞的过度增殖活化,降低炎性反应,从而减小了皮层损伤体积,增强了损伤神经元的存活和修复作用。     

细胞焦亡参与脑缺血再灌注损伤的初步研究

目的:探讨细胞焦亡在脑缺血再灌注后不同时点海马和皮质区的变化,从NLRP3炎症小体介导的经典焦亡途径探讨其机制,分析细胞焦亡在脑内不同部位损伤中的作用。方法:SD大鼠随机分成假手术组(sham组)与模型组(MCAO/R组),模型组又分为脑缺血再灌注6 h组(MCAO/R 6 h组)、12 h组(MCAO/R 12 h组)和24 h组(MCAO/R 24 h组)。右侧改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。采用神经功能评分、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法和形态学观察评价神经细胞损伤程度;TUNEL和caspase-1免疫荧光双染检测细胞焦亡;Western blot法检测NLRP3、cleaved caspase-1、pro-caspase-1和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果:脑缺血再灌注后不同时间均出现神经功能损伤,TTC染色显示随着再灌注时间的延长,脑梗死体积逐渐增大(P0.05)。海马CA1区及皮质区出现组织结构疏松,间质水肿,神经细胞排列紊乱,胞核染色加深,细胞核碎裂,细胞数量减少等细胞死亡的典型形态学特征。免疫荧光双染检测表明,脑缺血再灌注后不同时点均出现细胞焦亡现象,海马CA1区和皮质区在再灌注12 h和24 h时最明显(P0.05)。Western blot检测结果表明,NLRP3介导细胞经典焦亡通路中的NLRP3、cleaved caspase-1和pro-caspase-1、IL-1β蛋白表达在脑缺血再灌注后均不同程度上调,NLRP3蛋白在海马区再灌注12 h和24 h表达明显增高(P0.05),皮质区再灌注6 h表达明显增高(P0.05);pro-caspase-1蛋白在海马区再灌注各个时点表达均明显增高(P0.05),皮质区再灌注24 h表达明显增高(P0.05);cleaved caspase-1蛋白在海马区再灌注12 h表达明显增高(P0.05),皮质区再灌注24 h表达明显增高(P0.05); IL-1β蛋白表达在海马区再灌注24 h明显增高(P0.05),皮质区再灌注6 h表达增高(P0.05)。结论:细胞焦亡参与了脑缺血再灌注后神经细胞损伤,经典焦亡途径在海马和皮质区均发挥重要调控作用,以海马区尤为明显,提示海马区是脑缺血再灌注后细胞焦亡和炎症反应诱发的继发性神经损伤的主要部位。     

Apelin-13通过e NOS/NO促进糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达

目的探讨血管活性多肽apelin-13是否通过eNOS/NO途径影响糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达。方法以8周龄C57/BL小鼠作为对照组小鼠;以8周龄kkAy小鼠作为2型糖尿病小鼠模型。给糖尿病小鼠皮下埋植缓释泵,持续灌注apelin-13处理14 d,剂量为30μg/(kg·d)或apelin-13和L-NAME[NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME,eNOS抑制剂,剂量为10 mg/(kg·d)]共同处理14 d。用无创尾压法检测各组小鼠处理前后的血压值;取血检测血糖和糖化血红蛋白;取腹主动脉,进行HE染色,显微镜下观察血管形态学改变,免疫组织化学染色分析小鼠主动脉内eNOS和细胞焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平。结果与对照组相比,糖尿病组小鼠主动脉中eNOS含量明显升高(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平升高,经过apelin-13处理后,糖尿病小鼠血管壁eNOS含量进一步升高(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平也随之升高(P<0.05),给予eNOS抑制剂L-NAME之后,糖尿病小鼠主动脉eNOS含量降低(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平也随之降低(P<0.05)。结论Apelin-13可能通过eNOS/NO途径促进糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达,导致糖尿病小鼠血管结构损伤和功能。