姜黄素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肝癌细胞（QGY）细胞增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法测定姜黄素在不同浓度，不同时间对QGY的抑制作用，流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY的抑制作用。流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY细胞的生长，其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系，72h的中效浓度（IC50）为49.50μmol/L，流式细胞仪分析证实姜黄素能使QGY细胞聚积在S期，电镜观察发现姜黄素可导致细胞变性。坏死，诱导细胞凋亡。结论 姜黄素可干扰QGY细胞的周期分布，具有细胞毒作用。抗增殖，诱导细胞凋亡的作用。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）在体外对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用CCK-8比色法检测不同浓度（25、50、100、200μmol/L）RSG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;实时荧光定量PCR法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果RSG对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率与浓度呈正相关。肝癌HepG2细胞的凋亡率与RSG浓度呈正相关;与对照组比较,加药组S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高（P均〈0.05）。100、200μmol/L RSG组的凋亡细胞较对照组明显增加,且浓度越高增加越显著。RSG干预肝癌HepG2细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调,而Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达上调。结论RSG可通过激活PPARγ、调节Bcl-2和Bax的水平而在体外抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡。     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

Nimesulide联合奥沙利铂对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂Nimesulide联合奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响.为肝癌的药物治疗提供依据.方法:预实验筛选Nimesulide有效终浓度与不同浓度L-OH P(0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L)联合处理肝癌细胞48 h;另外选取L-OHP有效终浓度与Nimesulide筛选的浓度单独或联合处理肝癌细胞24 h、48 h、72 h;采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:不同浓度Nime sulide及L-OHP对SMMC-7721表现出一定程度的生长抑制作用,并呈剂量依赖性.Nimesulide(50μmol)或L-oHP(1 mg/L)单用时可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,选用Nimesulide 50μmol/L与L-OHP(0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L)联合使用时,联合抑制作用呈现协同作用(Q＞1.15).L-OHP 1 mg/L、Nimesulide 50 μmol/L及两药联合处理SMMC-7721细胞24h、48 h、72 h,各处理组各时间点对肝癌细胞的抑制作用随着时间的延长而增大,并且两药联合作用有协同作用(Q＞1.15).流式细胞仪检测分析发现两种药物均可有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,且在上述浓度联合应用时具协同效应.结论:Niruesulide与L-OHP对人肝癌细胞株SMMC-7721均有抑制增殖和促进凋亡作用,而且两者联合应用有协同作用.     

TRB3对人肝癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3（TRB3）在肝癌（HCC）细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法:免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达;体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达,同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后：CCK8...     

环氧合酶-2对人肝癌细胞增殖和凋亡的调节作用

目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在肝癌细胞中表达,探讨COX-2抑制剂celecoxib对肝癌细胞增殖和凋亡的作用．方法:免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究COX-2在肝癌细胞株中表达;MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响;透射电镜及流式细胞仪观察 celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响及MDR1／P-gp表达的变化;用RTPCR 方法检测Survivin mRNA药物处理后表达的变化．结果:celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈时间和剂量依赖性．celecoxib作用HepG2 48 h抑制率为70．98％±0．67％(200 μmol／L)、 47．93％±1．08％(100 μmol／L);Bel-7402为 57．29％±0．67％(200 μmol／L)、43．84％± 0．86％(100 μmol／L);同样浓度但作用20 h, HepG2为45．51％±1．35％(200 μmol／L), 14.35％±1．55％(100 μmol／L);Bel-7402则为34．35％±0．63％(200 μmol／L),15．35％± 0．88％(100 μmol／L),不同浓度以及不同作用时间相比均有显著差异(P<0．01);100 μmol／L celecoxib作用24,48,72,96 h的肝癌细胞凋亡率分别为12．2％±2．44％,4．0％±1．67％,20．4％±4．38％,57．9％±5．74％(HepG2)和3．0％± 1．05％,18．5％±3．51％,29.3％±3．25％,48．4％±4．77％(Bel-7402),与对照组相比有显著差异(P<0．01);细胞周期分布改变,G0／G1期细胞比例增加,24,48,72 h分别为:44．17％±1．01％,59．60％±0．61％,62．7％±1．22％ (HepG2)和47．80％±0．41％,58．60％±0．46％, 78．40％±1．95％(Bel-7402),与对照组比较有显著差异(P<0．01);对照组PCNA蛋白表达呈强阳性( ),经药物处理后表达减弱,并随时间延长而显著;HepG2中COX-2蛋白表达明显弱于Bel-7402,药物处理后表达也不同．Survivin在肝癌细胞株中呈高表达状态, celecoxib作用48 h mRNA表达降至零,而72 h 后表达水平又有上升;两株肝癌细胞中经 celecoxib处理后,MDR1／P-gp表达有降低的趋势(Bel-7402),或是基本上不受影响(HepG2)．结论:COX-2抑制剂celecoxib体外对肝癌细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖,并诱导凋亡,使细胞周期阻滞于G1／S期．COX-2与P-gp,Survivin表达密切相关．     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平;采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%,经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,下降了30.6%和48.6%;经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后,S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%,（P=0.00）,早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%,（P=0.03）,而在48h后,S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%,早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%,（P=0.00）;SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平,下调bcl-2基因mRNA水平;经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02）,（P=0.01）和（1.09±0.21）,（P=0.00）,而在处理48 h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01）,（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

介入治疗对兔VX2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究介入治疗对肿瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法建立兔VX2肝癌的动物模型,将实验动物分为介入组和对照组,用TUNEL法观察肿瘤细胞凋亡情况,采用原位杂交和免疫组化法检测凋亡和增殖相关基因bcl-2、bax及PCNA的表达情况.结果(1)介入组凋亡指数明显高于对照组,两组的细胞凋亡率分别为62.6 ±32.21%和21.4±10.43%(P＜0.05);介入组PCNA为38.80±15.73%,对照组为68.54±24.43%,前者显著低于后者(P＜0.05);(2)介入组bcl-2表达率为10.34±6.66%,显著低于对照组的24.5±11.53%(P＜0.05),而介入组bax的表达率为58.27±38.33%,显著高于对照组的32.13±23.76%(P＜0.05).bcl-2和bax基因mRNA表达与蛋白的表达相一致.结论抑制肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡是介入治疗肝癌的重要机制之一.     

siRNA干扰纤维蛋白原α链基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

背景：纤维蛋白原（FG）是由肝细胞合成、分泌的糖蛋白。除凝血和纤溶外,FG在细胞增殖、血管发生、肿瘤的发生、进展和转移中亦发挥重要作用。肝细胞癌患者血浆FG水平显著高于健康人。目的：观察以RNA干扰技术抑制FG仅链（FGA）基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建FGAsiRNA干扰质粒,将重组质粒pU6．FGAsiRNA稳定转染入人肝癌细胞株HepG2,同时设置空质粒载体pU6转染组作为对照。以RT－PCR、蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平验证干扰效果,以CCK－8实验和流式细胞术检测各组HepG2细胞的增殖和凋亡情况。结果：FGAsiRNA转染组HepG2细胞FGAmRNA和蛋白表达明显低于空载体转染组,细胞增殖显著受抑（P〈0．001）,细胞凋亡显著增加（P〈0．001）。结论：RNA干扰技术能有效下调人肝癌细胞的FGA表达,抑制肿瘤细胞生长增殖并促进其凋亡。FGA可能成为肝细胞癌治疗的潜在靶点之一。     

siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的将靶向MDM2的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,观察转染后细胞内p21基因的表达变化及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法将人工合成的针对MDM2基因的siRNA片段通过LipofectamineTM 2000转染人肝癌细胞HepG2。实验分为MDM2 siRNA转染组、阴性对照组、脂质体组、正常对照组。分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中MDM2、p21的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果与其他3组比较,siRNA转染组细胞中MDM2 mRNA及蛋白表达减少（P〈0.01）,而p21 mRNA及蛋白表达增高（P〈0.01）。HepG2转染MDM2 siRNA后,增殖能力减弱,凋亡显著。结论 MDM2基因可能通过影响p21控制肝癌细胞的生长。     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的观察雌激素受体β（ERβ）过表达对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆（SW480-C1-ERβ）。RT—PCR及WesternBlot鉴定ERβ的过表达。以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞（SW480-pEGFP—C1）作为对照,在无雌激素或有雌激素作用的条件下,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT—PCR方法检测凋亡相关基因survivin和Bax表达。结果SW480和SW480-pEGFP—C1细胞中ERβ mRNA和蛋白表达较低,而稳定转染的SW480-C1-ERβ细胞中ERβmRNA和蛋白表达明显增加。在有或无雌激素作用的条件下均可发现,与SW480细胞或SW480-pEGFP—C1细胞比较,SW480-C1-ERβ细胞增殖速度减慢,凋亡率明显增高,survivin表达减低,Bax表达增高;在SW480-C1-ERβ细胞中,有雌激素作用者较无雌激素作用者以上变化更明显。结论ERβ过表达可以同时以配体非依赖性和配体依赖性的方式抑制细胞增殖和增加细胞凋亡,可能与调控凋亡相关基因survivin和Bax表达有关。     

姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及凋亡的影响

目的进一步探讨姜黄素的抗肿瘤作用机制。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用不同时间肝癌Hepl细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测Hepl细胞凋亡率以及各周期时相变化。结果姜黄素作用后Hepl细胞增殖抑制率明显升高,呈时间剂量效应关系;15μmol／L作用后,C0＋G1期细胞显著增多,而G2＋M期细胞显著减少,细胞凋亡率增高（P均〈0．05）。结论姜黄素可有效抑制Hepl细胞的生长和增殖,且具有明显的量效关系;其机制可能为干扰细胞周期进程,促进细胞凋亡。     

紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的观察紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,分别置入5、10、20 nmol/L紫杉醇共同培养48 h（实验组）,另设阴性对照组。采用MTT法测定细胞增殖活性;Ho-echst33342荧光染色法观察紫杉醇处理后细胞形态的变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫组织化学法检测细胞中凋亡相关蛋白cFLIP、Survivin、Caspase-3的表达。结果紫杉醇浓度分别为5、10、20 nmol/L时,细胞增殖活性分别为0.51±0.02、0.49±0.05、0.38±0.09,与阴性对照组（0.61±0.07）比较P〈0.05或〈0.01;荧光显微镜观察可见典型的细胞凋亡形态学改变,以20 nmol/L紫杉醇作用最明显;DNA琼脂糖凝胶电泳显示,实验组细胞均可见典型的＂梯状＂条带;与阴性对照组比较,实验组能显著抑制cFLIP、Survivin蛋白的表达,促进Caspase-3蛋白的表达（P〈0.05或〈0.01）。结论紫杉醇可能通过下调cFLIP、Survivin蛋白的表达及上调Caspase-3蛋白的表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

AKR1B10基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Western Blot法验证HCC患者癌组织与癌旁组织中AKR1B10蛋白表达差异。使用慢病毒分别敲减HepG2及Huh7细胞中的AKR1B10,分为对照组和AKR1B10敲减组(shAKR1B101#、shAKR1B102#)。采用AnnexinV-APC/PI双染法、细胞克隆实验、皮下移植肿瘤的方法检测敲减AKR1B10后HCC细胞凋亡、克隆形成、皮下成瘤体积的变化。过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA以及Western Blot检测敲减AKR1B10后HCC细胞内活性氧(ROS)以及p-ATMser1981、γ-H2AX、c-Caspase-3和c-RARP等蛋白的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果CCLE数据库提示AKR1B10 mRNA在HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞;Oncomine数据库显示,与癌旁组织相比,HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达增加了10倍以上;UALCAN数据库提示AKR1B10基因在HCC组织中高表达;本研究的6例HCC患者中AKR1B10在HCC组织中的表达高于癌旁组织。与对照组相比,AKR1B10敲减组中HCC细胞的克隆形成能力明显下降(P值均<0.001),细胞凋亡率明显增加(P值均<0.001)。与对照组相比,AKR1B10敲减组ROS的水平升高,DNA损伤指标p-ATMser1981、γ-H2AX蛋白,细胞凋亡指标c-Caspase-3和c-RARP蛋白增加。此外,在BALB-c/Nude小鼠模型中,从异体移植后第13天开始,与对照组相比,AKR1B10敲减组肿瘤体积明显缩小(P值均<0.05)。结论AKR1B10可能是治疗HCC的有效治疗靶标。     

B7-H1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨B7-H1在人肝癌组织中的表达情况及其对肝癌Hep G2细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法采用组织化学染色方法观察肝癌组织和癌旁正常组织中B7-H1的表达情况。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞,并通过RTPCR和Weatern印迹方法检测肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达情况。敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达后,采用MTT方法检测肝癌Hep G2细胞的增殖情况,并采用Annexin V/7-AAD双染的方法检测肝癌Hep G2细胞的凋亡水平。结果与癌旁正常组织相比,肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞后,肝癌Hep G2细胞中-B7-H1的表达水平均显著降低。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的增殖能力均显著降低,与对照组相比差异显著(P0.01)。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的凋亡均显著升高,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高,且B7-H1可促进肝癌Hep G2细胞的增殖能力,并抑制肝癌Hep G2细胞的凋亡水平,提示肝癌组织中高表达的B7-H1与肝癌的发生和发展密切相关。     

剔毒护肝颗粒含药血清对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药剔毒护肝颗粒剂(TDHGG)含药血清对人肝癌bel-7402细胞生长及凋亡的影响.方法:应用MTT比色法检测TDHGG对肝癌细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:肿瘤细胞抑制率与药物剂量呈直线相关;流式细胞仪检测结果显示含药血清大、中、小剂量处理组,肝癌细胞的凋亡率分别为23.9%、18.1%、5.8%,明显高于对照组(P＜0.05),其中G0/G1期细胞数增加,G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论:TDHGG含药血清可抑制人肝癌bel-7402细胞的生长,并可干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡.     

人巨细胞病毒对培养人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 :探讨人巨细胞病毒 (CMV)在动脉粥样硬化发生和发展中的作用。　　方法 :采用流式细胞计数仪观察了人 CMV对离体培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖和凋亡的影响。本实验分为 5组 ,分别为正常对照组 ,肿瘤坏死因子细胞凋亡组 ,无血清培养细胞凋亡组 ,CMV感染 肿瘤坏死因子细胞凋亡组 ,CMV感染 无血清培养细胞凋亡组。　　结果 :实验发现无血清培养和肿瘤坏死因子诱导的细胞凋亡率较正常对照组升高 ,而 CMV感染的细胞凋亡率明显降低 ;细胞计数的结果表明 CMV感染后 3天的 HUVEC细胞数是未感染的 5倍。流式细胞仪的检测结果表明 :CMV感染细胞的增殖指数明显高于正常对照组 ,CMV可使细胞耐受无血清培养条件 ,保持细胞增殖。　　结论 :人 CMV感染 HUVEC后能够改变 HUVEC的细胞增殖过程 ,抑制细胞凋亡 ,HUVEC的过度增生及 HUVEC感染引起的炎性反应可能影响内皮细胞的功能 ,甚至破坏内皮细胞 ,导致血栓形成、脂质代谢紊乱 ,最终形成动脉粥样硬化。     

芒果甙对肝癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导

目的 观察芒果甙对人肝癌细胞株BEL-7404的毒性和诱导凋亡作用及对细胞周期的阴滞作用，探讨芒果甙作为肿瘤化学预防药物的可能性，方法 用MTT法观察芒果甙对人肝癌细胞株增殖的抑制作用。用光学显微镜观察芒果甙对细胞的毒性作用。以流式细胞仪检测芒果甙对细胞凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果 不同浓度的芒果甙在不同时间对肝癌细胞株均有毒性作用，并随浓度升高和作用时间的延长而毒性作用增强，凋亡也随之增加，芒果甙阻滞肝癌细胞周期于G2/M期，20μmol/L芒果甙作用24h后上述效果开始明显。结论 芒果甙对肝癌细胞株有明显的毒性作用。能诱导肝癌细胞凋亡和阻滞细胞周期于G2/M期具有潜在药用价值。值得进一步深入研究。     

靶向cyclinE小干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:以cyclinE基因编码区为靶位,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,观察转染后对HepG2细胞的影响.方法:针对cyclinE基因序列构建表达siRNA的真核表达载体pSilencer3.1-H1hygro,利用脂质体Metafectene转染CyclinE基因高表达的肝癌细胞株HepG2.流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot法观察转染后细胞cyclinE基因表达.结果:成功构建了表达siRNA的真核质粒载体,转染后cyclinE基因mRNA及蛋白表达水平分别下降了79%和65%.结论:靶向cyclinE基因的siRNA可有效沉默HepG2细胞高表达的cyclinE基因,从而抑制肝癌细胞的增殖并促进凋亡.