N-乙酰半胱氨酸对大鼠肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制。方法60只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(P组),只开腹不阻断肝血流,I/R组和I/R-NAC组均阻断大鼠肝70%的血流,45min后恢复再灌注,其中I/R-NAC组再灌注前5min经尾静脉注射NAC300mg/kg。在再灌注后1、3、6、24h时,采取血液及肝组织,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、脂多糖(LPS)、Toll样受体4(TLR4)mRNA及其蛋白的表达。结果I/R组和I/R-NAC组ALT、AST及LPS的含量均在6h达高峰,但组内在各时间点比较,ALT、AST及LPS含量的差异并无统计学意义(P>0.05);I/R组同一时间点的ALT、AST及LPS含量均高于I/R-NAC组(P<0.05)。I/R组肝组织TLR4mRNA的表达从再灌注3h起明显增强(P<0.01),并维持高表达,而I/R-NAC组TLR4mRNA的表达在各时间点无显著变化(P>0.05)。I/R组和I/R-NAC组TLR4蛋白表达在再灌注1、3h时类似于P组,但在6、24h时显著增强。结论TLR4参与了肝缺血-再灌注损伤的病理过程,NAC可通过抑制TLR4mRNA表达而减弱肠源性内毒素血症对肝脏的损伤。     

Hsp27在脂多糖预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白27(Hsp27)在脂多糖(LPS)减轻小鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤中的作用及其机制。方法实验动物为雄性C57BL/6小鼠,将小鼠分为4组:对照假手术组,IR组,LPS预处理组和Hsp27干扰后LPS预处理组。小鼠肝脏IR损伤通过血清ALT和AST水平,肝脏组织病理情况和凋亡相关蛋白Bax的表达评价。小鼠肝脏内Hsp27的干扰通过门静脉内注射包装有干扰Hsp27表达的短发夹RNA的重组腺病毒100μl来靶向抑制Hsp27的表达。结果 1、与IR组相比,LPS预处理组小鼠ALT和AST水平明显下降(P0.05),肝组织损伤明显减轻。2、与IR组相比,LPS预处理组小鼠Hsp27蛋白显著增加,凋亡相关蛋白bax显著降低。3、LPS预处理肝脏IR后,肝脏Hsp27干扰小鼠ALT和AST水平较Hsp27未干扰组显著升高(P0.05),肝组织损伤明显加重,同时凋亡相关蛋白bax显著增加。结论 Hsp27在LPS预处理可减轻肝脏缺血再灌注损伤中具有重要作用,可能与Hsp27减少细胞Bax凋亡蛋白表达相关。     

Toll样受体4在小鼠下肢缺血再灌注血管损伤中的作用

目的:探讨下肢缺血再灌注血管损伤过程中Toll样受体4(TLR4)的作用。方法:(1)缺血再灌注损伤实验:采用橡皮圈绕扎法建立小鼠下肢缺血再灌注模型,将C57BL/6J小鼠随机分为模型对照组(control)和缺血再灌注模型组(IR);(2)TLR4实验:将小鼠缺血再灌注模型分为野生(WT)模型组和TLR4基因敲除(TLR4-/-)模型组。(3)RT-PCR及免疫组织化学技术检测血管组织中TLR4及炎症相关因子HMGB1、TNF-α、IL-6的表达;TUNEL技术检测血管壁细胞凋亡情况。结果:缺血再灌注损伤实验中,IR组血管组织的TLR4、HMGB1、TNF-α和IL-6的表达及凋亡情况较control组明显升高(P0.01);TLR4基因敲除后,IR组管壁炎症因子的表达及凋亡情况明显减轻(P0.01)。结论:TLR4可介导炎症反应和诱导凋亡加重小鼠下肢缺血再灌注损伤。     

HMGB1/Caspase-1/GSDMD信号轴介导肝细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1/Gasdermin D(GSDMD)信号轴介导肝细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)中的作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、IRI 2 h组、IRI 6 h组、IRI 12 h组、甘草酸(GA)+Sham组和GA+IRI 12 h组(每组8只);将AML12细胞大致均匀地分为Sham组、IRI 12 h组、GA+Sham组和GA+IRI 12 h组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中IL-1β和IL-6信使核糖核酸(mRNA)水平;比较各组小鼠肝脏缺血病理学评分和细胞凋亡情况;采用免疫组织化学(免疫组化)法检测各组小鼠肝组织中HMGB1的表达情况;采用蛋白质印迹法检测小鼠肝组织和AML12细胞中HMGB1、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达水平。结果与Sham组比较,IRI后各组小鼠血清中ALT、AST、IL-1β、IL-6水平,以及小鼠肝组织中的IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均升高(均为P<0.05),且随着再灌注时间的延长呈明显的时间依赖性。与Sham组比较,IRI后各组小鼠肝脏缺血病理学评分和肝细胞凋亡率均升高(均为P<0.05)。免疫组化结果显示,IRI后HMGB1在肝组织中的表达明显增多,且在2~12 h内随着时间延长而增多。蛋白质印迹法结果显示,在体内和在体外,与Sham组比较,IRI 12 h组HMGB1、Caspase-1和GSDMD蛋白相对表达量均升高;与IRI 12 h组比较,GA+IRI 12 h组HMGB1蛋白相对表达量升高,Caspase-1和GSDMD蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论肝细胞可能通过释放HMGB1激活Caspase-1/GSDMD通路,从而触发肝细胞发生焦亡,导致肝脏IRI,而通过GA抑制HMGB1的胞外释放可减轻肝脏IRI。     

大鼠肠道缺血再灌注损伤对远隔组织Toll样受体4内源性配体表达的影响

目的 研究大鼠缺血再灌注损伤和淋巴液引流后,Toll样受体4(TLR4)的内源性配体高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达以及远隔组织的损伤.方法 24只健康雄性SPF级SD大鼠被随机分为假手术组(Sham)、肠道缺血再灌注组(I/R)和肠道缺血再灌注+淋巴液引流组(I/R+引流),每组8只.在肠道缺血再灌注损伤后检测远隔器官肺、肝和肾脏的损伤程度,肠道以及远隔器官肺、肝脏中TLR4内源性配体HMGBI的表达.结果 HE染色以及HMGB1免疫组织化学染色结果显示I/R组和I/R+引流组损伤较Sham组重,L/R组细胞出现大量黄染,表明I/R损伤时HMGB1的表达增加,而I/R+引流组的大鼠损伤显著轻于I/R组.Western blot检测显示I/R组的空肠、回肠、肝脏和肺组织中的HMGB1表达显著增加,其HMGB1/β-actin灰度值分别为0.3145±0.0549、1.7352±0.3280、1.4443±0.0926、3.1382±0.4202;引流淋巴液可以减轻损伤,其HMGB1表达均显著降低(P＜0.05),HMGB1/β-actin灰度值分别为0.1745±0.0327、1.1083±0.2098、1.1862±0.1221、2.1095±0.1993.结论 大鼠肠道缺血再灌注损伤时,肠道和远隔组织的损伤与TLR4的内源性配体HMGB1表达增加呈正相关.淋巴引流能阻断"肠-淋巴"途径,减少肠道来源的HMGB1对肠道以及远隔组织的损伤.     

海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探讨海藻糖是否对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用及其相关机制。方法C57BL/6J小鼠数字随机分为无缺血组、缺血再灌注组、海藻糖处理组和生理盐水对照组,缺血90 min后于再灌注的0h和6h,收集血液和肝组织,通过分离血清测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)肝功能指标及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-2(IL-2)炎症因子水平和肝组织病理改变研究海藻糖在肝脏缺血再灌注损伤中的作用;AML12小鼠肝细胞系构建缺糖缺氧-复糖复氧细胞模型,分为实验组和对照组,实验组根据给予的海藻糖浓度不同分为低剂量组和高剂量组,对照组无海藻糖,收集细胞,流式细胞仪检测凋亡水平以研究海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响,蛋白印迹法检测Caspase-3、Cleaved Caspase-3和Bcl-2蛋白水平以研究海藻糖在肝脏缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的分子机制。结果体内动物实验显示肝脏缺血再灌注后,缺血再灌注组ALT、AST及TNF-α、IL-1β和IL-2等肝功能指标及炎症因子水平升高(P<0.05),且肝组织发生坏死;而在给予海藻糖处理后,ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-2等水平较生理盐水对照组降低且肝组织坏死面积也减少(P<0.05)。体外细胞实验显示与对照组相比,实验组肝细胞凋亡水平下降;且实验组活化的促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3水平下降、抗凋亡蛋白Bcl-2水平升高。结论在体内和体外条件下海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过抑制肝脏缺血再灌注损伤诱导的炎症发生和抑制Caspase-3的活化并促进Bcl-2的表达,减轻细胞凋亡,从而保护肝脏缺血再灌注损伤。     

Toll样受体2/4在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤时的表达及肾康注射液的保护作用

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)的可能机制及肾康注射液(SKI)的保护作用。 方法采用高糖高脂饮食诱导6周联合小剂量链脲佐菌素的方法建立DM大鼠模型,将造模成功的SD大鼠随机分为糖尿病肾缺血再灌注组(DMIR)、糖尿病肾缺血再灌注SKI治疗组(DMIR＋SKI)、糖尿病假手术组(DMS)和正常对照组(NCS)。DMIR＋SKI组大鼠应用SKI[6.0 g/(kg·d)]干预8周,其它组用等量生理盐水。应用右肾切除联合左肾动脉夹闭45 min后再灌注24 h的方法诱导肾IRI。最后,抽血、留取肾组织。ELISA法检测大鼠血清高迁移率族蛋白(HMGB1)水平;免疫组化方法检测肾组织HMGB1、Toll样受体(TLR)2和TLR4的表达;免疫印迹法和实时定量PCR法检测肾组织TLR2、TLR4、髓样分化因子88 (MyD88),核因子-κBp56 (NF-κBp56)的表达。 结果DMIR组大鼠血清HMGB1水平,肾小管HMGB1、TLR2和TLR4的表达以及肾组织TLR2、TLR4、MyD88和NF-κBp56的蛋白及mRNA水平均明显高于DMS组(P<0.01);经过SKI干预治疗8周,DMIR＋SKI组大鼠的上述指标均明显低于DMIR组(P<0.01)。 结论SKI可通过抑制TLR2/4炎症反应通路,减轻DM大鼠肾IRI炎症反应而起到肾脏保护作用。     

肢体远隔缺血预处理对肝脏手术中血清TNF-α和HMGB1水平的影响

目的探讨肢体远隔缺血预处理对肝脏手术中血清TNF-α和HMGB1水平的影响。方法 60例择期行肝部分切除手术的患者,ASAⅠ或Ⅱ级,随机分成两组:RIPC组(R组)接受右上肢缺血预处理,对照组(C组)不进行预处理。分别于肝脏缺血前10min(T_0)、再灌注后1h(T_1)、6h(T_2)、24h(T_3)、48h(T_4)经中心静脉导管采集血样测定TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平。结果与T_0比较,T_1~T_4时两组血清TNF-α、HMGB1及AST、ALT水平均明显升高(P0.05)。与C组比较,T_1~T_4时R组TNF-α、HMGB1及AST、ALT水平均明显降低(P0.05)。结论肢体远隔缺血预处理用于肝脏部分切除术中,能够减轻肝脏缺血-再灌注损伤程度,可能与缓解肝脏缺血-再灌注时血清TNF-α、HMGB1的释放,减轻全身炎症反应有关。     

小鼠肝缺血再灌注后Toll样受体2在缺血肝组织中的激活及其意义

目的　探索小鼠肝缺血再灌注后缺血肝组织中Toll样受体 2 (TLR2 )的激活及其与肝功能损伤之间的关系。方法　缺血再灌注损伤组 (I/R组 ),假手术对照组 (S组 )均采用实时荧光定量多聚酶链反应检测肝组织中TLR2mRNA及TLR2蛋白的表达,同时检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子α(TNF α)及门静脉血清内毒素 (endotoxin, EN)水平。结果　肝脏部分缺血1h再灌注 4h后,I/R组与S组小鼠缺血肝组织TLR2 mRNA的表达 (ΔCt值 )分别为 1. 0 6±0. 9 1和5. 0 8±1. 3 2, 两组间差异有显著性 (P < 0. 0 1 ),I/R组缺血肝组织TLR2 蛋白的表达 (OD值 )( 4 3 3. 9 1±2 5. 5 3 )水平较S组 ( 1 0 2. 8 6±1 3. 5 8 )显著升高 (P< 0. 0 1 )。I/R组门静脉血清TNF α[ ( 1 1 2. 5 2±1 4. 4 1 )pg/mL]较S组 [ ( 5. 9 6 ±4. 4 3 )pg/mL]显著升高 (P < 0. 0 1 );I/R组ALT[ ( 8 4 8. 3 3±2 7 1. 3 7 )U/L]较S组 [ ( 4 2. 3 9±1 4. 7 5 )U/L]显著升高 (P < 0. 0 1 );而门静脉血清内毒素水平组间差异无显著性 (P> 0. 0 5 )。结论　TLR2mRNA及蛋白在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝组织的表达增强, 此变化伴有TNF α的升高及肝功能的损伤。     

同种异体骨髓间充质干细胞保护大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的研究

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用。方法取10只健康Wistar大鼠骨髓,体外分离、培养间充质干细胞,对其进行生物学鉴定,并对门静脉途径移植入肝脏的间充质干细胞行4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色示踪。建立大鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型,将32只雄性Wistar大鼠随机分成假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、维生素C治疗组(VC组)及BM-MSCs组,每组8只,分别于再灌注24 h后取材,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,肝脏组织总超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,并对肝脏组织行HE染色观察病理学改变,TUNEL法检测肝脏凋亡指数(AI)。结果体外分离的BM-MSCs生长稳定,增殖旺盛,表达CD29及CD44,不表达CD34及CD45;大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型稳定,在肝脏组织切片内见间充质干细胞定植,多位于肝小叶中央静脉周围。VC组和BM-MSCs组的AST、ALT、MDA和AI均较I/R组低(P<0.05),SOD均较I/R组高(P<0.05);BM-MSCs组的AST、ALT、MDA和AI均低于VC组(P<0.05),SOD高于VC组(P<0.05)。结论 BM-MSCs可通过减轻氧化应激损伤和抑制肝细胞凋亡,来保护大鼠肝脏热缺血再灌注损伤。     

异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性sD大鼠30只,体重200～250 g,随机分为5组(n=6),假手术组(Ⅰ组)仅开腹;缺血再灌注组(11组)肝脏缺血1 h再灌注4 h;缺血后处理组(Ⅲ组)肝脏缺血1 h后,再灌注10 8,缺血10 8,重复6次进行缺血后处理;异丙酚后处理组(Ⅳ组)肝脏缺血1 h后经尾静脉注射异丙酚10 mg/kg,随后静脉输注异丙酚40 mg·kg~(-1)·h~(-1) h;异丙酚后处理+缺血后处理组(V组)肝脏缺血1 h后进行异丙酚后处理及缺血后处理.于再灌注4 h时测定血清ALT活性、肝组织MDA含量、SOD活性、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平,电镜下观察肝细胞超微结构.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量升高,肝组织Bcl-2蛋白表达上调,Ⅲ组-Ⅴ组肝组织SOD活性升高,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅴ组肝组织Bax蛋白表达上调(P<0.05或0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性升高,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P<0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅳ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低(P<0.05或0.01).Ⅲ组-Ⅴ组肝组织病理学损伤较Ⅱ组明显减轻.结论 异丙酚后处理联合缺血后处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,与异丙酚后处理单独应用时效果相同,其机制可能与抑制肝组织脂质过氧化反应及细胞凋亡有关.     

Bcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的观察人Bcl-2(hBcl-2)基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法将包含hBcl-2基因阅读框架(0·7kb)的核苷酸亚克隆至Psectag2A载体,脂质体转染balb/c小鼠胎肝细胞(BNL.CL2),经门静脉移植入balb/c小鼠(2×106细胞)。移植72h后左肝后叶常温下缺血45min后再灌注8h,比较测定凋亡细胞,血清ALT、AST、LDH,以及组织学的改变。结果转染hBcl-2基因的balb/c小鼠在肝脏缺血再灌注后ALT(P<0·05或0·01)、AST(P<0·05)、LDH(P<0·05)、凋亡细胞(P<0·05)均较对照组显著降低,组织学改变减轻。进行缺血再灌注的各组细胞损伤均以细胞凋亡为主(P<0·05或0·01)。结论hBcl-2基因修饰的肝细胞移植对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,主要通过抑制缺血再灌注后的细胞凋亡。     

Kallistatin对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护及机制研究

目的:探讨Kallistatin对大鼠肝缺血再灌注后肝损伤的保护作用及机制。方法:建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,随机将Wistar大鼠分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、空壳腺病毒组(O组)和Kallistatin组(K组)。测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平评价肝功能。HE染色观察肝组织病理学改变。TUNEL法观察肝细胞凋亡情况。Westen-blot法检测肝组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达。结果:与S组比较,I/R组AST、ALT水平明显升高(P<0.05),病理损伤严重,Cas-pase-3和Bax表达也相应增加(P<0.05),而Bcl-2表达减少(P<0.05)。与I/R组比较,K组各项指标均明显改善(均为P<0.05)。O组与I/R组间无明显差别(P>0.05)。结论:Kallistatin对大鼠肝脏缺血再灌注后具有明显的保护作用,其机制可能通过促进Bcl-2表达、抑制Bax表达实现。     

依达拉奉对肝缺血再灌注损伤逆转作用的研究

目的研究依达拉奉影响肝脏缺血再灌注过程中TNF-α的表达情况,探讨依达拉奉对肝脏缺血再灌注损伤的逆转作用。方法将80只Wistar大鼠编号,根据计算机产生随机数字,前40为一组,后40为一组,分为实验组和对照组2组,建立常温下部分肝缺血再灌注损伤动物模型。在肝脏缺血再灌注损伤开始前1 h和开始时对实验组大鼠给予依达拉奉注射液10 ml,对照组则给予同等容量的生理盐水。分别于再灌注后0、1、2及4 h测定肝脏脂质过氧化物酶(LPO)和肝脏谷草转氨酶(AST)浓度;应用RT-PCR法检测肝组织TNF-αmRNA含量,并测定肝组织和血清中TNF-α水平;应用TUNEL染色法检测缺血肝组织的细胞凋亡情况。结果再灌注后1、2及4 h,实验组大鼠肝脏LPO及AST浓度均明显低于对照组(P<0.001);实验组再灌注后1 h时肝组织TNF-αmRNA表达量、肝组织和血清TNF-α含量均明显升高且达峰值,但均明显低于对照组(P<0.05);再灌注后各时相实验组肝细胞凋亡率明显升高,但均明显低于对照组(P<0.05)。结论依达拉奉能抑制氧化应激反应,从而降低肝缺血再灌注损伤;并显著减少炎性细胞因子TNF-α的产生,抑制炎性反应的发生,减少肝细胞的凋亡。     

TLR2/4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤肝脏的表达及意义

目的观察Toll样受体2／4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤中肝脏的表达，并分析其与肝功能损伤的关系。方法通过夹闭BALB／c小鼠肝门，复制小鼠全肝缺血再灌注损伤模型。采用Western blot方法定量检测缺血肝叶中TLR2／4蛋白的表达变化，并检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶（pALT）、肿瘤坏死因-α（TNF-α）及门静脉血清内毒素（endotoxin，EN）水平。结果与假手术组（sham-operated group，SH组）相比：（1）全肝缺血20min并行再灌注后，缺血再灌注组（ischemic／reperfusion group，I／R组）血清ALT在再灌注1h即明显升高，且在再灌注3h时较1h时明显升高；（2）I／R组缺血肝脏TLR2／4蛋白的表达（OD值）明显升高，TLR2蛋白的表达在再灌注3h较1h明显高；而TLR4蛋白的表达以再灌注1h时水平最高。（3）I／R组中门静脉血清TNF-α在再灌注1h即开始高，在再灌注3h达高峰。（4）门静脉血清内毒素水平明显升高（与SH相比，P〈0．01），但I／R组在不同灌注时间点之间无显著性差异（P〉0．05）。结论TLR2／4蛋白表达的上调参与了小鼠全肝脏缺血再灌注中肝脏的损伤。     

百里醌预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的探讨百里醌(TQ)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及分子机制。方法建立大鼠肝脏IRI模型,肝脏缺血再灌注前,实验大鼠进行百里醌给药预处理。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,检测肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等酶活性;蛋白印迹法(Western blotting)检测肝脏组织凋亡相关蛋白。实验设3组:假手术组(Sham组,n=10)、缺血再灌注组(IRI组,n=10)、百里醌预处理+肝缺血再灌注组(TQ+IRI组,各亚组n=10)。结果与Sham组比较,IRI组大鼠血清ALT、AST水平显著增高,TQ+IRI组ALT、AST较IRI组明显降低(P0.05)。IRI组与Sham组比较,大鼠肝脏组织中GPX、GSH、SOD含量均明显下降(P0.05),而MDA含量显著增高(P0.05);TQ+IRI组与IRI组比较,GPX、GSH、SOD含量均显著上升(P0.05),MDA含量下降(P0.05)。百里醌预处理能下调肝脏IRI的Bax、裂解的胱天蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、Cleaved-caspase-9表达,阻断肝细胞凋亡。结论百里醌可能通过调控肝细胞氧化应激诱导的细胞凋亡进而在肝脏IRI中发挥肝脏保护作用。     

内质网应激分子伴侣GRP78在大鼠缺血再灌注损伤肝脏中的表达

目的:观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠缺血再灌注损伤肝脏组织中的表达水平.方法:将24只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组,单纯肝缺血组(肝缺血30 min+再灌注0h),再灌注6h组(肝缺血30 min+再灌注6h)和再灌注12h组(肝缺血30 min+再灌注12h).分别检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)和门冬氨酸转氨酶(AST)水平;肝组织病理学、凋亡情况及GRP78 mRNA表达水平.结果:与对照组比较,各实验组大鼠肝缺血后出现明显的肝组织损伤,且随着再灌注时间的延长损伤加重,表现为血清ALT和AST水平升高,明显的肝组织病理学改变,肝细胞凋亡率增加,各组间计量指标的差异均有统计学意义(均P＜0.05).大鼠肝组织GRP78 mRNA变化趋势与上述指标一致,缺血后表达明显上调,且随着再灌注时间延长而逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:缺血再灌注损伤肝脏组织中GRP78表达上调,但其具体作用还有待于探明.     

Toll样受体4蛋白在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达及与肝脏损伤的关系

肝脏缺血再灌注损伤常见于肝脏移植、失血性休克、创伤等情况,其发生机制复杂,尚未完全明确。我们通过动态观察小鼠肝脏部分缺血再灌注情况下,不同的灌注时间点,Toll样受体4(TLR4)蛋白在缺血肝叶的表达变化,探讨TLR4的激活机制及其信号系统在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。 一、材料与方法 1.材料:一抗TLR4多克隆抗体(Santa Cruz),二抗兔抗羊单克隆抗体(博士德公司),硝基蓝四氮唑/5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸盐(NBT/BCIP)显色试剂盒     

落新妇苷通过下调caspase-3、-8、-9蛋白的表达来减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨落新妇苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD大鼠,分为Sham组(假手术组)、HIRI组(缺血再灌注组)、落新妇苷(低剂量组、中剂量组、高剂量组),建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,分别于再灌注4 h、8 h、16 h后取血液及肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);光镜下观察肝细胞显微结构变化;免疫印迹试验(Western Blot)分析肝组织中IL-1、caspase-3、-8、-9的表达;流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。应用SPSS l5.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差(±s)表示,对各组大鼠血清ALT、AST,肝组织中IL-1、caspase-3、-8、-9蛋白的表达及细胞凋亡情况进行比较采用单因素方差分析和t检验,以P0.05、P0.01为差异有统计学意义。结果 HIRI组ALT和AST水平升高,而药物组明显降低。光镜结果显示药物组肝细胞损伤明显减轻。Western Blot结果显示,高剂量组IL-1、caspase-3、-8、-9蛋白的表达较HIRI组明显减轻。高剂量组的细胞凋亡率也较HIRI组降低。结论落新妇苷预处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其作用机制可能与其抑制caspase-3、-8、-9的表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义.方法 以野生型小鼠C3h/Heouj及TLR4缺失小鼠C3h/Hej复制全肝脏缺血再灌注损伤模型,分别于缺血20 min再灌注1 h,6 h时经支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)获取肺泡巨噬细胞和肺泡灌洗液,采用免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞表面TLR4的表达,并以鲎试剂内毒素检测试剂盒和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灌洗液中内毒素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.同时检测肺组织湿/干重比值、肺组织髓过氧化物酶(myeloperosidase,MPO)的含量以及计算肺组织学评分.结果 (1)与假手术组小鼠相比,野生型小鼠(C3h/Heouj)在缺血再灌后各时间点肺泡巨噬细胞Toll样受体4蛋白表达升高,6 h强于1 h,且支气管肺泡灌洗液中TNF-α的水平明显升高,肺组织湿/干重比值持续升高,MPO的含量持续增加(P＜0.05).(2)与C3h/Heouj小鼠相比,C3h/Hq组小鼠在再灌注后支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量明显降低(P＜0.05),肺损伤明显减轻(P＜0.05),肺组织湿/干重比值及MPO的含量明显下降(P＜0.05).(3)各组小鼠缺血再灌注后1 h肺泡灌洗液中内毒素水平与假手术组相比,差异无统计学意义(P＜0.05),而在6 h时则明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠全肝缺血再灌注过程中,肺泡巨噬细胞表面Toll样受体4激活,并与肺功能损伤有关.