miR-9-5p通过靶基因ADAMTS18调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的研究miR-9-5p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测ADAMTS18和miR-9-5pmRNA的表达,Western印迹检测ADAMTS18蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-9-5p与ADAMTS18的调控关系。结果与人正常支气管上皮细胞HBE相比,在肺癌细胞A549组中ADAMTS18的mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05),miR-9-5p表达量显著上升(P0.05);抑制miR-9-5p可以抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-9-5p靶向负调控ADAMTS18的表达;过表达ADAMTS18可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制ADAMTS18逆转了下调miR-9-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-9-5p通过靶向ADAMTS18基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-9-5p是肺癌分子诊断和治疗的潜在靶点。     

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒载体(LV-NC)转染至肺癌细胞A549、H1299中,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测miR-342-3p和NUCKS1的靶向关系,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果肺癌组织及肺癌细胞A549和H1299中miR-342-3p表达水平降低,NUCKS1表达水平升高(P0.05)。miR-342-3p靶向调控NUCKS1。miR-342-3p过表达后,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数降低,NUCKS1表达水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p通过靶向下调NUCKS1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移。     

槐角黄酮通过调控miR-188-5p/PRMT5基因表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的研究槐角黄酮对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5和miR-188-5p mRNA的表达,Western印迹检测PRMT5、增殖相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1和p21、迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-188-5p与PRMT5的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡。结果槐角黄酮可抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移和增殖,且呈显著的剂量依赖性;槐角黄酮可以促进A549细胞中miR-188-5p表达,抑制PRMT5表达;双荧光素酶报告系统实验结果表明,miR-188-5p靶向调控PRMT5的表达;过表达miR-188-5p和抑制PRMT5均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制miR-188-5p逆转了槐角黄酮对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论槐角黄酮通过miR-188-5p靶向PRMT5基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。槐角黄酮对肺癌具有潜在治疗作用。     

miR-1226靶向MUC1对非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性的影响

目的研究miR-1226对非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养NSCLC细胞株人肺癌耐吉非替尼细胞株(PC9GR)和人肺腺癌细胞(PC-9);将PC-9组细胞设置为正常组,PC9GR细胞随机分为对照组、miR-1226 mimic组和miR-1226 NC组,并进行转染;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染后各组细胞miR-1226及黏蛋白1(MUC1)mRNA表达情况;采用蛋白印迹分析法检测转染后各组细胞MUC1蛋白表达情况;采用MTT法检测转染后各组细胞对吉非替尼的敏感性;Transwell法检测转染后各组细胞的侵袭能力;采用双荧光素酶报告实验验证miR-1226与MUC1的靶向关系。结果与正常组相比,对照组和miR-1226 NC组PC9GR细胞miR-1226表达水平显著降低(P<0.05),IC50值、MUC1 mRNA及MUC1蛋白相对表达量、细胞侵袭数量显著升高(P<0.05);与对照组和miR-1226 NC组相比,miR-1226 mimic组PC9GR细胞miR-1226表达水平显著升高(P<0.05),IC50值、MUC1 mRNA及MUC1蛋白相对表达量、细胞侵袭数量显著降低(P<0.05);与MUC1-3′UTR-WT+miR-1226 NC组比,MUC1-3′UTR-WT+miR-1226 mimic组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-1226过表达可能通过靶向下调MUC1表达,提高人非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性。     

非小细胞肺癌组织miR-34a的表达及其对H1299细胞增殖的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中miR-34a的表达情况及其对NSCLC细胞系H1299增殖的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在NSCLC组织和NSCLC细胞系H1299中的表达情况。克隆形成实验及MTT增殖实验检测miR-34a对NSCLC细胞系H1299增殖能力的影响;生物信息学方法预测miR-34a可能的功能性靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的功能性靶基因。Western印迹检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果相比正常组织而言,NSCLC组织和细胞系H1299中miR-34a表达均显著下降(P0.05);转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05),而转染miR-34a抑制剂可增加NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05)。生物信息学预测显示Notch1是miR-34a可能的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299中Notch1的表达。结论 miR-34a可通过调节Notch1的表达,进而抑制NSCLC细胞的增殖。     

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-143通过靶向调控HK2的表达抑制急性髓系白血病细胞迁移和侵袭的分子机制

目的研究miR-143在急性髓性白血病(AML)中的表达及miR-143过表达对AML细胞迁移和侵袭的影响,并深入探讨miR-143调控AML发展的作用机制。方法 qRT-PCR检测AML患者血浆和细胞系HL60、K562中miR-143和己糖激酶(HK)2 mRNA的表达;Transwell小室法分析miR-143过表达对HL60迁移和侵袭的影响;生物信息学预测miR-143和HK2的靶向关系,并利用双荧光素酶报告分析加以验证;Western印迹分析miR-143对HK2蛋白表达的调控。结果与正常对照相比,miR-143在AML患者血浆和细胞系中的表达水平显著降低(P0.05);通过转染miR-143 mimics可显著促进HL60细胞中miR-143的表达(P0.05);miR-143过表达可显著抑制HL60细胞的迁移和侵袭能力(P0.05);HK2能够与miR-143发生靶向结合;HK2在AML患者血浆和细胞系中出现明显的高表达(P0.05),miR-143可抑制HK2蛋白表达。结论 miR-143通过靶向HK2抑制AML细胞的迁移和侵袭能力。     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

miR-138-5p通过靶向SETD6基因调控Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的探究miR-138-5p通过靶向赖氨酸甲基转移酶(SETD6)基因调控Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制。方法qRT-PCR、Western印迹检测正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7细胞中miR-138-5p、SETD6的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测转染后Hep3b细胞中CyclinD1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验及Western印迹检测miR-138-5p与SETD6的联系。结果与人正常肝细胞L02比较,肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7中miR-138-5p的表达水平显著降低,SETD6水平显著升高(P<0.05),选择Hep3b细胞进行后续实验;与NC、miR-con组比较,miR-138-5p mimics组miR-138-5p的表达水平显著升高,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2水平显著降低(P<0.05);与NC、si-con组比较,si-SETD6组中SETD6蛋白水平显著降低,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2水平显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学软件预测显示,miR-138-5p与SETD63'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,miR-138-5p与SETD63'UTR区域特异性结合,Western印迹进一步检测显示miR-138-5p与SETD6直接结合负向调控SETD6的表达;与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-con组比较,过表达miR-138-5p后,miR-138-5p组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著降低,与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到miR-138-5p及SETD6的双重调控,miR-138-5p可能通过调节SETD6的表达调控Raf/MEK/ERK通路进而调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,可为肝癌患者分子靶向治疗研究提供思路。     

长链非编码RNA PCGEM1靶向miR-433-3p调控结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)PCGEM1影响结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法甲四基偶氮唑蓝(MTT)法测定HT-29细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证PCGEM1基因的转录活性,qRT-PCR检测PCGEM1和miR-433-3p mRNA表达。结果 qRT-PCR结果表明,与正常对照NCM460细胞相比,结直肠癌细胞HT-29中PCGEM1表达显著升高(P0.05),miR-433-3p表达显著下降(P0.05);下调PCGEM1表达可以抑制HT-29细胞增殖、迁移和侵袭;过表达miR-433-3p可抑制结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移、侵袭;PCGEM1参与负向调控miR-433-3p的表达;抑制miR-433-3p表达逆转了下调PCGEM1表达对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 PCGEM1通过下调miR-433-3p表达诱导结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

miR-219a-5p通过调控NEK6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨miR-219a-5p对视网膜母细胞瘤(RB)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测人RB细胞Y79与正常人视网膜血管内皮细胞ACBRI-181中miR-219a-5p和NEK6 mRNA的表达,Western印迹检测NEK6蛋白表达。分别转染miR-219a-5p mimics和si-NEK6至Y79细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测周期蛋白依赖性激酶(CDK)1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-219a-5p和NEK6的靶向关系。结果 Y79细胞中miR-219a-5p低表达,NEK6 mRNA和蛋白高表达。miR-219a-5p过表达或抑制NEK6表达可抑制Y79细胞增殖、迁移和侵袭,下调Y79细胞CDK1、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达。miR-219a-5p在Y79细胞中靶向负调控NEK6表达,NEK6过表达可逆转miR-219a-5p过表达对Y79细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-219a-5p调控NEK6表达抑制Y79细胞的增殖、迁移和侵袭能力,是治疗RB的新靶点。     

miR-183通过抑制CAND1促进前列腺癌病理进程

目的探究miR-183通过对CAND1的调控机制影响前列腺癌的病理进程。方法定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌患者及各株细胞系中miR-183表达量;观察前列腺癌患者临床病理特征及外周血中miR-183表达量;荧光素酶报告基因法分析miR-183与CAND1的调控机制;qRT-PCR及Western印迹检测miR-183与CAND1的调控作用;qRT-PCR检测CAND1在前列腺癌肿瘤组织中mRNA表达量;CCK8法、Transwell及流式细胞实验检测miR-183与CAND1的细胞增殖、迁移及周期S期相关性。结果前列腺癌组织样本中miR-183表达量明显高于癌旁正常组织,前列腺癌细胞株(PC3、Tsu-Pr1、DU145、22RV1、LNCAP)的miR-183表达量明显均高于RWPE-1,不同Glcason评分、TNM分期、淋巴结转移、远处转移的患者比较,差异具有统计学意义(P<0.05);前列腺癌CAND1表达量明显低于癌旁正常组织,(PC3、Tsu-Pr1、DU145、22RV1、LNCAP)前列腺癌细胞株的CAND1表达量明显均低于RWPE-1,过表达miR-183抑制CAND1 mRNA和蛋白表达量,miR-183抑制物促进CAND1 mRNA和蛋白表达量(P<0.05);miR-183 mimic转染组PC3增殖、迁移及S期细胞数均明显升高,miR-183 mimic+CAND1转染组PC3增殖、迁移及S期细胞数均明显降低(P<0.05)。结论过表达miR-183能抑制CAND1而促进前列腺癌的发展,miR-183有可能成为前列腺癌诊断与预测的潜在生物标志物。     

LncRNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-16-5p表达对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及机制

目的研究LncRNA MCM3AP-AS1对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和潜在机制。方法以BEAS-2B为对照组,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MCM3AP-AS1和miR-16-5p RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western印迹检测增殖蛋白CyclinD1、p21和p27及迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-14,双荧光素酶报告系统验证MCM3AP-AS1和miR-16-5p的关系。结果与对照组相比,肺癌细胞系A549、SPC-A1和NCI-H460中MCM3AP-AS1表达量均显著升高(P0.05),miR-16-5p表达量显著下降(P0.05);抑制MCM3AP-AS1表达和过表达miR-16-5p均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;MCM3AP-AS1靶向负向调控miR-16-5p的表达;抑制miR-16-5p表达逆转了下调MCM3AP-AS1表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 LncRNA MCM3AP-AS1通过靶向miR-16-5p调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。MCM3AP-AS1是肺癌潜在分子靶点。     

miR-185通过靶向BRCA1抑制三阴乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的探讨miR-185是否通过靶向人类乳腺癌易感基因(BRCA)1抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭及其抗肿瘤机制。方法采用Target Scan软件预测miR-185靶基因、将野生型或突变型E2F6的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(E2F6-wt或E2F6-mut)并分别与miR-185模拟物(miR-185 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)、抗miR-185寡核苷酸序列(miR-185-LNA)及其无关对照寡核苷酸序列(control)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因E2F6、qRT-PCR检测转染后靶基因的mRNA表达水平、Western印迹检测转染后靶基因的蛋白表达水平。MTS和Transwell验证不同转染后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生长增殖活性和侵袭能力。结果在共转染miR-185mimics和E2F6-wt、scramble和E2F6-wt两组中,miR-185组荧光素酶活性强度降低了约41.3%(P<0.05)。转染miR-185后,E2F6的蛋白和mRNA水平均显著下调,BRCA1的蛋白和mRNA水平均显著上调(P<0.05)。在细胞增殖试验中,转染miR-185后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长速度显著低于scramble组(P<0.05);与vector组比,BRCA1组可显著抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长(P<0.05),且miR-185+BRCA1组比BRCA1组对细胞生长的抑制作用更加明显(P<0.05)。Transwell侵袭实验中,转染miR-185和BRCA1组在36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(100±6)和(100±9),而对照组即转染scramble和转染vector组穿膜细胞数分别为(210±13)和(180±14),即miR-185和BRCA1能明显抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-185通过靶向调控BRCA1表达而抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭。     

下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌H322细胞侵袭迁移并诱导凋亡

目的探讨miR-20a对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响和机制。方法 Realtime PCR方法分别检测miR-20a在正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中的表达变化。在肺癌H322细胞中转染miR-20a inhibitor,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western印迹检测ZNF259、C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、C-Caspase-9、MMP-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测ZNF259可能为miR-20a的靶基因,利用双荧光素酶活性系统鉴定靶向关系。在肺癌细胞中共转染miR-20a inhibitor、ZNF259 siRNA,同样使用上述方法测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化,评估ZNF259 siRNA对下调miR-20a调控肺癌细胞的影响。结果肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中miR-20a的表达水平明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B,且H322细胞中miR-20a的表达水平最高。miR-20a inhibitor能够下调肺癌细胞中miR-20a的表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,促进细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达,减少细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶活性鉴定结果显示,ZNF259为miR-20a的靶基因,且下调miR-20a提高肺癌细胞中ZNF259蛋白表达水平。ZNF259 siRNA可以逆转下调miR-20a后的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化。结论下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。     

硝呋齐特对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨硝呋齐特(nifuroxazide)对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的nifuroxazide处理肺腺癌A549细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察nifuroxazide对细胞增殖的影响;流式细胞术观察nifuroxazide对细胞凋亡的影响;采用Transwell小室观察nifuroxazide对细胞迁移及侵袭的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nifuroxazide对微小RNA-219-5p(miR-219-5p)表达的影响;观察抑制miR-219-5p表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果nifuroxazide处理A549细胞后细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05),随浓度增加其抑制作用逐渐增强(P<0.05);nifuroxazide作用于A549细胞后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),miR-219-5p与Bax的表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl2表达水平显著降低(P<0.05);抑制miR-219-5p的表达可逆转nifuroxazide对A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。结论硝呋齐特可通过上调miR-219-5p的表达诱导A549细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。