MiR-125b对心肌梗死后成纤维细胞的调控机制研究

目的探讨微小核糖核酸125b(miR-125b)对成人心脏成纤维细胞(HCF-a)合成胶原、增殖、活化、迁移、凋亡的调控作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)通路的影响。方法体外培养HCF-a细胞,分为空白对照组和miR-125b模拟物转染组。采用RT-PCR和Western blot法检测胶原-Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白表达情况;采用MTT法检测HCF-a细胞增殖情况;采用Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,miR-125b过表达可明显上调Col-Ⅰ和Col-Ⅲ、α-SMA m RNA和蛋白的表达,促进细胞增殖、迁移和凋亡(P0.05)。另外,经RT-PCR检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达可明显促进TGF-β1 m RNA的表达水平(P0.05);经Western blot检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达对HCF-a细胞Smad2/Smad3蛋白磷酸化水平均有明显上调作用(P0.05)。结论Mi R-125b可以通过调控TGF-β1/Smad通路参与心肌纤维化进程。     

人参皂甙Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞增殖及细胞外基质的影响

目的为人参皂甙Rg1（G-Rg1）治疗肾纤维化提供依据。方法取对数生长期NRK52E细胞分为五组。对照组仅加入含血清的DMEM培养基;TGF-β1组及G-Rg1低、中、高剂量组均加入TGF-β1使终质量浓度为5ng/ml;G-Rg1低、中、高剂量组再分别加入G-Rg1使终质量浓度分别为10、20、40ng/ml。干预1、3、5天时MTT法测定各组细胞增殖率;干预5天时ELISA法测定细胞培养上清液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平。结果与对照组比较,细胞培养上清液Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平明显升高（P〈0.05）;细胞增殖率明显降低（P〈0.05）;与TGF-β1组比较,各G-Rg1干预组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平均明显降低（P〈0.05）;细胞增殖率明显升高（P〈0.05）。结论 G-Rg1可抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞增殖能力降低的作用,从而促进肾小管上皮细胞增殖,其机制可能与抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平有关;G-Rg1可用于肾纤维化的治疗。     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

硫化氢对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响

目的:观察硫化氢(H_2S)对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为四组(对照组、单独H_2S组、模型组及治疗组)。第28天行腹膜平衡试验;取壁层腹膜组织观察腹膜结构变化,检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况。检测大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA表达情况。结果:与对照组相比,模型组腹膜增厚伴血管增生、炎症细胞浸润增加,且间皮下α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著增加(P0.05);与模型组相比,治疗组腹膜形态明显改善,α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著减少(P0.05)。与对照组相比,模型组超滤量显著减少,腹膜通透性显著升高,治疗组大鼠腹膜转运功能显著改善(P0.05)。2.5%葡萄糖透析液刺激腹膜间皮细胞12h使肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA表达显著增加、上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著减少,同时MCP-1、IL-6、ICAM-1和TGF-β1 mRNA表达显著增加(P0.01);透析液中加入100μmol/L、300μmol/L NaHS可显著抑制上述炎症因子及纤维化因子表达(P0.01)。结论:在腹膜透析液中加入外源性H_2S可显著改善腹膜结构及功能损伤,并可部分逆转腹膜间皮细胞转分化,进而减少炎症因子和纤维化因子合成。     

转化生长因子-β1在自发性高血压大鼠肾脏的表达及与肾间质纤维化的关系

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾间质的沉积及其与肾间质纤维化的关系和培哚普利高血压肾间质纤维化的治疗作用.方法 SHR大鼠随机分为高血压组和治疗组,WKY大鼠为对照组.ELISA法测血清TGF-β1的浓度;免疫组织化学染色法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1在三组肾间质的沉积;半定量逆转录-聚合酶链反应观察TGF-β1 mRNA在三组肾脏的表达.结果三组血TGF-β1 浓度的差异无显著性(P＞0.05);高血压组肾间质Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1明显增加(P<0.01 or P<0.05),培哚普利能明显减少Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的沉积,显著降低TGF-β1 mRNA的表达(P<0.01 or P<0.05);Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达与肾间质TGF-β1的表达呈正相关(r分别为0.734、0.762,P<0.01),与血清中TGF-β1无关(r分别为0.069、0.180,P＞0.05).结论肾脏局部的TGF-β1参与了自发性高血压大鼠肾间质纤维化.培哚普利可能通过减少局部TGF-β1表达,来减轻肾间质纤维化.     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨外源性IL-10对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA表达的影响.方法:60只清洁级SD雄性大鼠,随机分为生理盐水对照组(N组,8只)、CCl4组(C组,28只)和IL-10干预组(I组,24只)3组,于造模第7周和第11周分别随机选取一批大鼠,分离肝星状细胞并提取总RNA,以半定量RT-PCR方法检测各组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA表达的水平.结果:随着肝纤维化的进展,C组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA的表达增加并呈增强趋势(与N组比较,P＜0.01;与第7周比较,Col-ⅠP＜0.01;Col-Ⅲ P＜0.05).造模第7周,Ⅰ组Col-Ⅲ mRNA的表达量低于C组(P＜0.01);造模第11周,两种胶原Ⅰ组的表达量均进一步下降(与C组比较,P＜0.01;与第7周比较,Col-ⅠP＜0.05;Col-ⅢP＜0.01),与正常组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:随着肝纤维化进展,肝星状细胞内Col-Ⅰ和Col-Ⅲ mRNA的表达增加,外源性IL-10能显著降低两者的表达.     

替米沙坦联合氨氯地平对乳鼠转化生长因子-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子(TGF)-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10~(-6)mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组),在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平),每组3份。观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平下降(P0.05),其中TE+AM组心肌成纤维细胞在G_0/G_1期、G_2/M期增殖较TE组、AM组显著,而TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平低于TE组、AM组。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及p27蛋白过度表达有关。     

米诺环素对急性心肌梗死大鼠心肌基质金属蛋白酶-2及转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达与心室重塑的关系及米诺环素的干预影响.方法结扎SD大鼠冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,随机分成心肌梗死对照组和米诺环素(30mg·kg-1·d-1)治疗组,2组又随机分为1、2和4周亚组;另设假手术组.应用免疫组化方法测定胶原的表达.用逆转录-聚合酶链反应法及免疫组化方法检测MMP-2、TGF-β1mRNA和蛋白表达情况.结果与假手术组相比,心肌梗死对照组MMP-2、TGF-β1的mRNA表达在各亚组明显升高(均P＜0.05),各亚组MMP-2、TGF-β1蛋白表达也均增高(均P＜0.05),非梗死区Ⅰ/Ⅲ胶原比例在2周和4周随之升高(均P＜0.05).而米诺环素治疗组MMP-2mRNA和蛋白表达在1、2和4周亚组,TGF-β1 mRNA和蛋白表达在1、2周亚组,均较心肌梗死对照组显著降低(均P＜0.05),Ⅰ/Ⅲ胶原比例在2周和4周亚组也显著降低(均P＜0.05).结论大鼠心肌梗死后心肌间质内MMP-2、TGF-β1的表达增高,非梗死区Ⅰ/Ⅲ胶原比例上升,是心室重塑发生发展的重要机制.米诺环素可通过抑制MMP-2、TGF-β1的表达,逆转Ⅰ/Ⅲ胶原比例改善心肌梗死后心室重塑.     

蛋白磷酸酶2Ac介导Smad3中间连接区去磷酸化促肾小管上皮细胞间充质转分化的研究

目的:通过蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)过表达和小干扰RNA质粒转染人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)后予以转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,观察PP2Ac对细胞外基质合成、肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)和Smad3中间连接区磷酸化的影响,探讨PP2Ac促肾间质纤维化的机制。方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组和质粒转染+TGF-β1组。采用RT-PCR和Western Blot法检测PP2Ac、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E选择素(E-cadherin)表达水平。采用Western blot法检测Smad3、Smad3中间连接区p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表达情况。结果:RT-PCR和Western Blot结果均显示:PP2Ac过表达质粒转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激24h后,PP2Ac表达较TGF-β1组升高,同时FN、Col-Ⅰ和a-SMA表达明显上调,E-cadherin表达下调;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞后再予TGF-β1刺激24h,较TGF-β1组,PP2Ac表达降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达减少,E-cadherin表达增高(P0.05)。Western Blot结果显示:TGF-β1刺激HK-2细胞1h时PP2Ac和Smad3中间区磷酸化的蛋白表达均达到峰值;HK-2细胞转染PP2Ac过表达质粒再予TGF-β1刺激1h后,与单纯TGF-β1刺激组比较,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表达均下降;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激1h后,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)蛋白表达均增加(P0.05)。结论:PP2Ac促进肾小管上皮细胞外基质的生成及EMT;PP2Ac介导肾小管上皮细胞Smad3中间连接区去磷酸化。     

MAPK信号通路在转化生长因子β1诱导心肌成纤维细胞趋化运动中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞趋化运动中可能的作用机制。方法 培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,将细胞随机分为空白对照组、TGF-β1组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(SP600125,10 μmol/L)组、P38MAPK抑制因子(SB203580,10 μmol/L)组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制因子(U0126,10 μmol/L)组,除空白对照组外,其余组均给与10 μg/L TGF-β1及对应抑制因子处理。MTT比色法测定心肌成纤维细胞增殖活性,Transwell小室检测心肌成纤维细胞运动能力,羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平,Western blot检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 TGF-β1可明显促进心肌成纤维细胞增殖活性、趋化运动能力及胶原含量,MAPK信号途径抑制因子干预后能够抑制这种增殖及趋化运动,并降低胶原含量(P＜0.05);ELISA结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的MCP-1、PAI-1水平升高(P＜0.05);Western blot结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的α-SMA、Col-1、MMP-9蛋白表达升高(P＜0.05)。结论 TGF-β可能通过激活MAPK信号通路促进心肌成纤维细胞的趋化运动,通过使用MAPK抑制剂能够一定程度的抑制心肌纤维化。     

宫颈癌患者外周血调节性B细胞数量及血清IL-10、TGF-β表达水平

目的探讨宫颈癌患者外周血调节性B细胞数量及血清白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β的表达水平。方法选择宫颈癌患者83例,同时选择健康志愿者59例为对照组。检测两组于不同临床分期CD19~+CD5~+/CD19~+B和CD19~+CD5~+CD1d~+/CD19~+B比例及血清IL-10、TGF-β表达情况。结果宫颈癌组CD19~+CD5~+/CD19~+B和CD19~+CD5~+CD1d~+/CD19~+B比例明显高于对照组(P0. 05);血清IL-10、TGF-β表达显著高于对照组(P0. 05);宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期组CD19~+CD5~+/CD19~+B和CD19~+CD5~+CD1d~+/CD19~+B比例显著低于Ⅲ期和Ⅳ期组(P0. 05);血清IL-10、TGF-β表达显著高于Ⅲ、Ⅳ期组(P0. 05)。结论外周血调节性B细胞及血清IL-10和TGF-β可能与宫颈癌进展相关。     

MicroRNA-195与TGF-β1/Smads信号通路在自发性高血压大鼠心脏重构中的作用

目的　探讨微小核糖核酸195（microRNA-195,　miR-195）、转化生长因子β1/Smads　（TGF-β1/Smads）信号转导通路及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在自发性高血压大鼠（SHR）心脏重构中的作用,血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）类药物干预对SHR心脏形态结构及表达上述因子的影响。方法　以8周龄雄性SHR大鼠16只及Wistar大鼠8只为研究对象,将SHR大鼠随机分为SHR贝那普利干预组（SHR干预组,n8）、SHR对照组（n8）,Wistar大鼠作为正常对照组;SHR干预组大鼠予灌服贝那普利10　mg/（kg·d）,SHR对照组大鼠和正常对照组大鼠予蒸馏水灌胃,干预8周;干预前后测鼠尾动脉血压,干预8周后股动脉放血处死大鼠,HE染色观察大鼠心脏形态学改变,实时荧光定量多聚酶链式反应（qRT-PCR）法检测大鼠心脏中miRNA-195的表达,　Western　blot检测转化生长因子β1（transforming　growth　factor　beta1,　TGF-β1）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、Smad蛋白3（small　mother　against　decapentaplegic　protein　three,　Smad3）、I型胶原（Col-Ⅰ）和Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）蛋白表达水平。结果　SHR大鼠心脏miRNA-195　、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ的表达量均高于Wistar大鼠（P<0.01或P<0.05）,SHR干预组大鼠心肌细胞较SHR对照组明显变小,细胞排列较其紧密有序,miRNA-195　、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ表达量均明显降低（P<0.01或P<0.05）。结论　MiRNA-195可能通过上调AngⅡ及TGF-β1/Smads信号转导通路促进SHR心脏重构;贝那普利干预可抑制miRNA-195表达,可能通过下调AngⅡ及TGF-β1/Smads信号转导通路抑制SHR心脏重构。     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的 探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用.方法 采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF.Bradford方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和PDE1A蛋白表达,Leica Qwin软件进行图像灰度分析.结果 1)TGF-β1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以TGF-β1 (10 ng/mL)诱导AF 24 h上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05).2)TGF-β1上调PDE1A蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β1(20 ng/mL)诱导AF 24 h PDE1A蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性PDE抑制剂IBMX和特异性PDE1A抑制剂IC86340均显著抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05).结论 PDE1A参与TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节.     

磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β_1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用。方法采用组织块贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF。Bradford 方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和 PDE1A 蛋白表达,Leica Qwin 软件进行图像灰度分析。结果 1)TGF-β_1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以 TGF-β_1(10 ng/mL)诱导 AF 24 h 上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05)。2)TGF-β_1上调 PDE1A 蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β_1(20ng/mL)诱导 AF 24 h PDE1A 蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性 PDE 抑制剂 IBMX 和特异性 PDE1A 抑制剂 IC86340均显著抑制 TGF-β_1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05)。结论 PDE1A 参与 TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节。     

大鼠Smad7真核表达质粒的构建及在肝星状细胞中的表达

目的:构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7对肝星状细胞HSC-T6的转染.并进一步研究其对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA达水平的影响.方法:采用基因重组技术将Smad7 cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1( ),构建大鼠Smad7真核表达质粒.脂质体介导转染HSC-T6细胞,分为正常对照组、空质粒组及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞,运用Western blot检测Smad7蛋白表达情况,RT-PCR检测Smad7、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平.结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功.Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较,Smad7 mRNA表达显著增加(1.053±0.009 VS 0.984±0.054,0.986±0.044,P<0.01或0.05),蛋白水平显著上调(0.083±0.02 VS0.058±0.050,0.056±0.064,均p<0.05:Smad7转染组TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达降低(0.961±0.013 VS 1.039±0.013,1.032±0.037;0.592±0.096 VS 0.767±0.085.0.770±0.090,均P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义.正常对照、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNAA达差异无统计学意义.结论:smad7可能参与TGF-β/smad信号转导,在一定程度上具有抗纤维化的生物学活性.     

激活素A和卵泡抑素对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原沉积的影响

目的探讨激活素A(Activin A)和卵泡抑素(FS)对体外培养的原代大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原沉积的影响。方法取出生24 h内Wistar乳鼠心肌成纤维细胞进行体外培养,分别向培养液中加入Activin A或FS+Activin A。应用MTT法检测细胞增殖情况,应用化学比色法检测培养液上清羟脯氨酸含量,RT-PCR法检测培养细胞Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达。结果与对照组相比,不同浓度Ac-tivin A组心肌成纤维细胞的OD值及羟脯氨酸含量明显增高(P<0.05～0.01),Col-Ⅰ及Col-ⅢmRNA表达水平明显升高。不同浓度FS组可降低心肌成纤维细胞的OD值及羟脯氨酸含量(P<0.05～0.01),下调Col-Ⅰ及Col-ⅢmRNA表达水平。结论 Activin A能够促进心肌成纤维细胞增殖及胶原沉积,提示Activin A可能在心肌间质纤维化的发生发展中起重要作用,FS能够拮抗Activin A诱导的心肌间质纤维化。     

替米沙坦和氨氯地平对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)及ROS的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10-6 mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平)。倒置显微镜下观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1(免疫荧光法测定)、ROS(荧光探针DCFH-DA分析)情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、ROS水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、ROS水平下降(P0.05)。TE+AM组与TE组、AM组相比心肌成纤维细胞在S期时增殖率下降,在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高更明显(P0.05),心肌成纤维细胞中TGF-β1水平低于TE组、AM组(P0.05)。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1过度表达及ROS过度生成有关。     

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对糖尿病肾脏疾病大鼠降糖作用及肾脏保护机制的研究

目的探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂药物卡格列净对DKD大鼠的肾脏保护作用和可能机制。方法 DKD大鼠随机分为模型组(Mod)、格列美脲组(Glim)、吡格列酮组(Pio)和卡格列净组(Can),每组10只,给药4周。正常大鼠10只为空白对照组(NC)。行OGTT检测FBG,以及尿蛋白总量(UTP)、尿尿素(UUN)、尿肌酐(Ucr)、BUN和Scr含量,计算Ccr。HE染色检测大鼠肾脏组织病理,免疫组织化学法(SP)、Western blot和RT-PCR测定大鼠肾脏中Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制剂1 (TIMP-1)和转化生长因子β(TGF-β)表达。结果 1～4周不同时间点比较,Glim、Pio和Can组血糖水平降低(P0.05)。给药1次,与Mod组比较,Glim、Pio和Can组血糖在0.5、1、2和4h降低(P0.01)。OGTT显示,各药物治疗组较Mod组血糖及曲线下面积(AUC)均降低(P0.01);Can组AUC低于Glim组和Pio组(P0.05)。与Mod组比较,Glim、Pio和Can组UTP、UUN、BUN和Ccr均不同程度降低(P0.05),Can组UTP、Scr和Ccr降低(P0.05)。Mod组肾小球系膜基质增多,Glim、Pio和Can组无明显改变。与NC组比较,DKD各组Col-Ⅳ、MMP-9、TIMP-1和TGF-β蛋白及mRNA的表达均较高(P0.05),Mod组Col-Ⅳ和TIMP-1蛋白及mRNA呈高表达(P0.05),MMP-9蛋白及mRNA的表达较低(P0.05);Glim组、Pio组Col-Ⅳ、MMP-9、TIMP-1和TGF-β蛋白及mRNA的表达与Mod组比较,差异无统计学意义(P0.05);而Can组MMP-9蛋白及mRNA的表达高于Mod组(P0.05),TIMP-1、TGF-β和Col-Ⅳ蛋白及mRNA的表达低于Mod组(P0.05),Can组Col-Ⅳ、TGF-β和TIMP-1蛋白及mRNA的表达均低于Glim组和Pio组(P0.05)。结论卡格列净能改善DKD大鼠的血糖水平,降低肾脏病理评分,其肾脏保护作用机制可能与下调TIMP-1、TGF-β和Col-Ⅳ的表达、上调MMP-9的表达相关。     

肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的观察肝豆扶木汤(GDFMT)对TX小鼠肝纤维化转化生长因子-β1(TGF-β_1)/Smad信号通路的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将24只雄性TX小鼠随机分为模型组、青霉胺组、GDFMT组,另设正常对照组。采用竞争性放免分析法检测血清肝纤维化透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)含量,免疫组化法观察肝组织TGF-β_1、Smad2和Smad7蛋白的表达。结果血清肝纤维化指标结果:与正常对照组比较,模型组血清肝纤维化HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均明显升高(P0.01);与模型组比较,青霉胺组和GDFMT组血清肝纤维化HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均降低(P0.05或P0.01);与青霉胺组比较,GDFMT组血清肝纤维化HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均降低(P0.05)。免疫组化法观察结果:与正常对照组比较,模型组TGF-β_1和Smad2蛋白表达明显升高,Smad7蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,青霉胺组和GDFMT组TGF-β_1和Smad2蛋白表达明显降低(P0.05),Smad7蛋白表达明显升高(P0.01);与青霉胺组比较,GDFMT组TGF-β_1和Smad2蛋白表达明显降低(P0.05),Smad7蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 GDFMT可以能降低TX小鼠肝纤维化血清学指标,具有良好的抗肝纤维化的作用,其作用机制可能是抑制TGF-β_1和Smad2蛋白的表达,上调Smad7蛋白的表达。     

母体缺氧上调胎兔颈动脉生长因子及细胞外基质表达

目的研究母体缺氧对新西兰胎兔颈动脉生长因子、细胞外基质表达及血管形态学的影响。方法同期怀孕的新西兰母兔[足月(30±1)d]随机分为对照组(21%O_2,n=5)、缺氧组(12%O_2,n=5),缺氧组于妊娠第10天开始采用缺氧箱进行缺氧暴露,每天2次,上、下午各4h,至妊娠第29天结束。妊娠第29天,母兔麻醉,剖宫取出胎兔,分离胎兔颈动脉,液氮中速冻后转移至-70℃保存备检,另保存胎兔颈动脉用于免疫组织化学检查和Masson染色。用免疫印迹检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、Smad3和结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达;实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测HIF-1α、TGF-β_1和CTGF mRNA表达水平;免疫组织化学技术检测颈动脉TGF-β_1、CTGF、Ⅰ型胶原蛋白(CollⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollⅢ)表达;Masson染色检测颈动脉胶原纤维含量及内中膜厚度。结果与对照组比较,母体缺氧组胎兔颈动脉HIF-1α(0.26±0.05比0.07±0.04)、TGF-β_1(0.68±0.08比0.51±0.11)、Smad3(0.47±0.04比0.26±0.02)和CTGF(0.81±0.09比0.53±0.12)蛋白表达增多,HIF-1α(1.62±0.37比1.00±0.18)、TGF-β_1(1.90±0.35比1.00±0.12)和CTGF(1.82±0.42比1.00±0.21)mRNA水平升高,及CollⅠ(0.35±0.02比0.27±0.02)、CollⅢ(0.26±0.02比0.22±0.03)表达增多(P0.05或P0.01);而Masson染色结果提示:胶原纤维含量、内膜和中膜厚度在两组之间的差异无统计学意义(均P0.05)。结论母体缺氧上调胎兔颈动脉TGF-β_1、CTGF、CollⅠ、CollⅢ的表达。