热休克预处理对瘤苗免疫效果的影响

肿瘤疫苗的特异性主动免疫效应与热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）密切相关。ＨＳＰ具有抗原肽伴侣（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ）作用,ＨＳＰ作为一种载体结合肿瘤特异性抗原可诱导机体产生对其来源细胞具有杀伤活性的γδＴ细胞,表现出特异性的抗肿瘤免疫作用［１］。在体外培养条件下,热休克处理可诱导Ｈ２２肝癌细胞表面ＨＳＰ７０的表达［２］本文探索在Ｈ２２肝癌疫苗制备过程中,热休克预处理是否能增强小鼠Ｈ２２肝癌细胞瘤苗的特异性主动免疫效果。１ 材料与方法１．１ …     

NP9基因的克隆及对细胞周期素D1转录活性的影响

背景与目的：NP9基因是我们在鼻咽癌中克隆到的一个新的表达下调的基因(GenBank登录号：BF718797),为了进一步研究该基因的功能,我们构建了人NP9基因编码区序列的真核表达质粒,并研究其表达对细胞周期素D1(cyclinD D1)的影响。方法：通过核苷酸同源序列比较(BlastN)得到NP9 EST的同源cDNA,RT-PCR扩增其编码区序列并构建真核表达重组质粒pRe／CMV2-NP9,脂质体转染后G418筛选出稳定、高效转录NP9基因的细胞克隆;再通过脂质体转染cyclinD D1 promoter Luc和NF-kB—Luc质粒到稳定表达NP9基因的细胞克隆,测定荧光素酶的活性以确定NP9基因对cyclinD D1和NF-kB转录活性的影响;同时亚克隆：NP9基因编码序列到载体pEGFP—C1中,脂质体转染细胞以确定NP9蛋白在细胞中的定位。结果：融合的绿色荧光蛋白出现于细胞核。G418抗性克隆中,RT-PCR扩增证实部分克隆表达NP9基因,且强弱不同。表达NP9基因的细胞克隆在瞬间转染cyclinD D1 promoter Luc和NF-kB-Luc 48h后,荧光素酶的活性较其对照组分别下降46％和63％。结论：NP9蛋白在细胞核内表达;NP9基因通过抑制核转录因子NF-kB的转录活性下调cyclinD D1的表达。