非放射性标记的原位杂交技术及其应用

核酸原位杂交技术就是利用碱基序列已知的带有标记的核酸探针与组织切片、细胞或染色体上待测同源核酸进行杂交,从而对样品中待测核酸进行定性、定位和相对定量分析的一种研究方法。依标记物性质不同,可分为放射性和非放射性。前者标记的原位杂交技术虽有较高灵敏度,但它却有不稳定、相对不安全、自显影时间长、废物难以处理及昂贵等缺点,故发展了一种较灵敏、安全、快速、简便及价廉的非放射性标记的原位杂交技术。本文较详细地介绍了它的原理、方法、发展过程、不同的标记检测体系的比较以及应用。     

组织细胞的原位杂交技术

组织细胞的原位杂交技术是指利用碱基序列已经明了的、带有标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸进行杂交,从而对组织细胞中的待测核酸进行定性、定位和相对性定量分析的一种研究方法。其基本原理是:两个核酸分子的碱基序列如果互补,就可形成稳定的杂交分子。这一方法目前已广泛应用于组织细胞中mRNA以及病毒DNA和RNA的检测,它在病毒学、神经生物学、组织胚胎学、内分泌学以及病理学中均有着良好的应用前景。     

染色体原位杂交

基本原理 核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nucleic acids or in situ nu-cleic acids hybridization)是利用硷基序列已知的带放射性或非放射性标记的核酸探针,依硷基互补配对原理,通过放射自显影或非放射检测体系(免疫酶促显色反应和荧光系统等),在组织切片、细胞、间期核及染色体等标本上对待测核酸进行定性、定位及相对定量分析的一种方法,一般称之为原位杂交。Pardue及Gall首先在细胞学标本上建立了此种方     

FISH与传统细胞遗传学方法在产前诊断中应用的比较

1．FISH的原理 荧光原位杂交技术（FISH：fluorescence in situ hybridization）是原位杂交技术的一个分支，是一种高度灵敏、高特异性以及分辨率强的基因和染色体分析技术，它通过标记核酸探针（已知碱基顺序）与细胞内的末知待测的核酸按碱基互补配对原则进行特异性原位结合（即杂交），然后通过荧光显色，直接观察和确定细胞核中或染色体上的核酸序列的有无、相互位置和相对量关系。     

FISH在产前诊断应用中应注意的相关事项和几点建议

FISH技术的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。FISH现被广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。     

原位杂交及其医学应用

原位杂交技术为核酸顺序在细胞水平的定位与测定提供了直接方法。1969年Gall等首先进行了细胞学水平上的DNA-RNA分子杂交。随着方法学的改进,应用放射标记探针与中期染色体的原位杂交发展到可以直接定位单拷贝基因或DNA顺序及细胞内存在的20个转录单位以上的RNA。然而细胞遗传学高分辨技术的应用,更进一步使特异的DNA顺序得到染色体上的精细定位。这样,原位杂交将细胞遗传学与分子遗传学紧密地结合起来,得以涉足双方在研究和应用上的一些新领域。     

FISH检测乳腺癌石蜡组织切片酶消化时间的优化

荧光原位杂交(fluorescence in situ-hybridization,FISH)作为20世纪80年代末在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的非放射性原位杂交技术,通过直接或间接将荧光标记DNA特异性探针与靶细胞中同源序列的核酸杂交,实现对目的 DNA片段或基因的定量和定位分析,目前被人们普遍认为是检测Her-2基因是否活化的"金标准"。但     

全自动荧光原位杂交仪实验条件的优化及与手工方法的对比

<正>近年来,荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)广泛应用于分子靶向治疗、肿瘤诊断、鉴别诊断以及肿瘤预后评估方面~([1])。FISH技术通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧光显微镜下观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的探针信号,以获得细胞核内染色体(或染色体片段)上基因状态的信     

荧光原位杂交技术的研究进展

DNA荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization简称FISH)技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA序列位置的方法.该项技术自20世纪70年代后期问世以来已经在很多领域有广泛的应用.在近几年里,FISH有了日新月异的发展.本文就FISH技术的发展史、方法作一简要综述.     

一种改进的制作原位杂交后染色体G带的方法

近来,已成功地建立了通过放射性探针对中期染色体的原位杂交进行直接绘制单拷贝基因即DNA序列的方法,但本文作者使用已发表过的方法,从来没能从赘生的或持续培养的细胞中得到再现的染色体带。因此,他们建立了一个简便、可再现染色的过程,此过程可通过放射性乳胶来分析这类染色体标本。这一方法是过去用于高分辨G带分析外周血淋巴细胞的改进。改进后的方法已成功地应用到杂交和放射自显影后,对纤维母细     

结合原位杂交基因图、利用胰酶/EDTA诱导染色体显带

本文介绍了一种结合原位杂交法,利用胰酶/EDTA诱导染色体显带的简易且能重复的方法。由同步化或非同步化的正常人外周血淋巴细胞和经培养的单层成纤维细胞制备染色体标本。用~3H标记的DNA探针杂交和放射自显影测定以后,将染色体标本放在     

采用原位杂交进行单拷贝DNA序列的染色体定位

用标记核酸探针与染色体上的DNA序别进行原位杂交,是用于真核细胞基因定位工作的一项强有力技术。但直到最近,采用~3H或~(125)I标记核酸探针进行原位杂交的“标准”方法,敏感性差,仅适用于对染色体上     

荧光原位杂交新技术在恶性血液病听研究进展

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是以非放射性物质标记核酸探针，根据核酸杂交原理，在间期核和分裂中期染色体上检测特异性ＤＮＡ序列的一种新技术，由于它克服了放射性原位杂交（ＲＩＳＨ）的一些弊端，具有快速，准确，灵敏，经济等优点，现已应用于肿瘤生物学，产前诊断和基因突变等诸多领域，因恶性血液病常规制备染色较大难度，成功率不高，检出较低等问题，而ＦＩＳＨ技术既可以分析中期核染色体，又能用于间期染色质，故该技术对恶     

用直视绒毛活检和染色体DNA探针确定胎儿性别

本文报道了孕早期用胎儿镜在超声指导下,经宫颈绒毛活检获得绒毛标本,并对其进行DNA分析,产前确定胎儿性别的新方法。随着分子遗传学的发展,已有可能用染色体特异性探针在分子水平上进行核型分析.分子杂交法已证明,男胎Y染色体有特异的DNA顺序.它位于Y染色体长臂远侧的异染色质区,经放射性探针杂交后,作放射自显影检查,可出现一明显的深带(3.4kb),此即Y     

用荧光原位杂交(FISH)技术检测5例性分化异常患者标记染色体的来源

目的确定标记染色体的来源以协助常规细胞遗传学诊断。方法按细胞遗传学方法制备标本。应用CEPY光谱橙、CEPX光谱绿双色探针，标本经孵浴，消化，固定，洗片，脱水，变性，杂交，复染。结果发现5例性分化异常患者中，3例标记染色体为代表Y染色体的红色信号，另2例标记染色体为代表X染色体的绿色信号。结论提示荧光原位杂交技术提高了对标记染色体的识别能力，从而协助常规细胞遗传学诊断，也为临床治疗性分化异常患者提供依据。     

荧光原位杂交技术研究在染色体异常中的应用

目的建立稳定的荧光原位杂交技术并用于染色体异常的研究.方法用地高辛标记的PY3.4探针、X-α着丝粒探针、生物素标记的特异区域单拷贝序列21q22.3探针对3例正常男性、3例正常女性及2例turner综合征、2例21三体综合征标本进行了原位杂交.结果间期细胞和分裂相中可见特异的荧光点.结论 FISH技术不仅可用于中期分裂相,还可在间期细胞显示杂交信号,是当今的一项分子细胞遗传学先进技术.     

原位杂交:用于基因定位和RNA检测

原位杂交可使核酸顺序直接在细胞标本上显现。目前,在短时间放射自显影照射后,原位杂交可用于检测每个细胞的一个或二个拷贝所出现的染色体顺序或每个细胞少于20个转录本的RNA。用高特异活性三磷酸核苷~3H和~(35)S放射标记核酸探针杂交可获得高度敏感性。原位杂交用于检测和(或)定位真核细     

非放射性标记核酸探针的研究进展

原位核酸杂交已成为当今分子病理学研究的一个重要手段。该技术的核心是制备带有可检测标记物的DNA或RNA探针。鉴于放射性标记探针在使用上的某些不便,促使非放射性标记探针的开发与应用有了长足进展。本文拟就目前国际上几种有代表性的     

荧光原位杂交新技术在恶性血液病中的研究进展

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是以非放射性物质标记核酸探针，根据核酸杂交原理，在间期核和分裂中期染色体上检测特异性ＤＮＡ序列的一种新技术。由于它克服了放射性原位杂交（ＲＩＳＨ）的一些弊端，具有快速、准用、灵敏、经济等优点，现已应用于肿瘤生物学、产前诊断和基因突变等诸多领域。因恶性血液病常规制备染色体有较大难度，成功率不高，检出率较低等问题。而ＦＩＳＨ技术既可以分析中期核染色体，又能用于间期染色质，故该技术对恶性血液病研究有着特殊的应用价值，可发现一些新的染色体畸变包括染色数目、结构变化以及用以往一些常规细胞遗传学技术不能确认的微小染色体异常。现就ＦＩＳＨ在恶性血液病中的研究进展作一简要综述。     

原位杂交细胞化学技术的特异性及非同位素标记途径

<正> 已有不少利用原位杂交细胞化学技术(Hybridocytochemistry)显示机体组织特别是神经系统内特定序列核酸的报道。研究可以在细胞水平,也可以在染色体水平进行。此技术于1969年由Pardue和Gall、John最早建立,最初由于分子克隆技术的限制,只限用于用常规生化手段能够分离、提纯的序列如小鼠卫星DNA、病毒DNA及核糖体RNA,并且同位素是主要的核酸标记物,因当时技术方法落后,敏感性差。因此,在