骨髓基质细胞在气电纺丝蛋白纤维支架上早期粘附的研究

目的检测大鼠骨髓基质细胞在气电纺蚕丝蛋白纳米纤维支架上的早期粘附状况,研究其基本生物学性能.方法将具有良好生物性能的蚕丝蛋白通过气流高压静电纺丝工艺制成纳米纤维,并且通过激光共聚焦显微镜对骨髓基质细胞在气电纺蚕丝蛋白纳米纤维支架表面的早期粘附进行观察.结果骨髓基质细胞对气电纺蚕丝蛋白无纺织物表现出良好的亲和性,细胞在材料表面4h即形成了稳定的粘附,并有部分细胞开始在材料表面铺展,铺展细胞数与粘附细胞数的比率为75.9%,而对照组仅为49.63%.结论气电纺蚕丝蛋白纳米纤维支架具有良好的亲和性,提示其作为骨组织工程材料的可能性.     

含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性

目的利用MTT法评价含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性。方法将制备好的含锶量分别为0％、1％、5％和10％的4种磷酸钙骨水泥材料的浸提液培养L929细胞，1、3和5d后采用MTT比色法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料浸提液作用后的生长情况。结果细胞在不同含锶量的磷酸钙骨水泥材料浸提液培养条件下，其细胞相对增殖率在92.6％-103.1％之间，含锶磷酸钙骨水泥材料的细胞毒性评级为0级或1级；随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性有略微增大的趋势。结论含锶量不同磷酸钙骨水泥材料具有较好的细胞亲和性，没有明显的细胞毒性。     

鼻咽癌细胞肝转移亚株的建立

目的 建立鼻咽癌细胞肝转移亚株,研究鼻咽癌肝转移机制。方法 利用裸鼠体内传代的方法获得肝转移细胞亚株,并用体内和体外实验来观察其侵袭转移能力。结果 经体内反复筛选得到肝转移能力高的亚株5-8F-H3B-EGFP．其侵袭性、运动性以及形成肝转移灶的能力均大于母系5-8F-EGFP,并具有较高的肝脏亲和性。结论 该亚株的建立为今后研究鼻咽癌肝转移的分子机制奠定了基础。     

RGD修饰的聚乳酸-羟基乙酸骨组织工程材料的研究进展

[摘要]PLGA骨组织工程支架在骨损伤修复和再造方面有着重要的应用,但由于PLGA亲水性差,不利于种子细胞在支架上的粘附和增殖。RGD肽修饰PLGA支架后,材料的细胞亲和性可得到有效改善,促进种子细胞粘附和增殖。本文就近年来RGD修饰的PLGA骨组织工程材料的相关研究作一综述。     

小鼠肝癌H_(22)细胞与正常肝细胞低密度脂蛋白受体的分析研究

为观察小鼠肝癌Ｈ２２细胞及正常肝细胞ＬＤＬＲ对人ＬＤＬ的结合，并对这两种细胞内移及降解人ＬＤＬ的功能进行分析比较，用１２５Ｉ标记ＬＤＬ，对上述细胞ＬＤＬＲ进行受体饱和分析和单点分析。结果表明：（１）Ｈ２２细胞及正常肝细胞可通过其ＬＤＬＲ结合、内移、降解人ＬＤＬ；（２）Ｈ２２细胞及正常肝细胞ＬＤＬＲ对人ＬＤＬ的亲和性和特异性相同，但Ｈ２２细胞Ｂｍａｘ明显增多；（３）两种细胞对人ＬＤＬ的非特异性结合差异不明显，内移及降解人ＬＤＬ的能力亦相同。提示小鼠肝癌Ｈ２２细胞ＬＤＬＲ数目增多，亲和性及特异性未变，对ＬＤＬ的内移和降解功能亦未改变。     

胶原蛋白-几丁聚糖三维骨架构建组织工程血管的可行性

目的 研究胶原蛋白——几丁聚糖构建的三维支架在血管组织工程研究中的可行性。方法 以Ⅰ型胶原蛋白和几丁聚糖为生物材料，体外预构具有三维结构的支架，观察支架的空间立体结构；将培养的种子细胞（人平滑肌细胞和纤维细胞）种植于支架，观察材料与细胞的生物相容性和抗收缩性，并测定材料中DNA含量和胶原蛋白含量。结果 应用相分离技术制备的支架，具有均匀的三维结构和丰富的交通孔，种植种子细胞后可以形成良好的细胞黏附和生长，且选用的支架材料可以抵抗细胞收缩引起的材料变形；培养2、4、6周的材料中，DNA含量和胶原蛋白含量随培养时间延长而明显增加。结论构建的胶原蛋白——几丁聚糖三维支架具有结构均匀、细胞生物相容性好的特点，并具有一定的物理强度，可以应用于血管组织工程研究。     

组织工程化皮肤支架的研究进展

本文综述近年来国内外关于皮肤支架材料的研究现状 ,说明只要通过一定的手段对现有材料进行物理或化学的表面改性 ,提高生物材料对细胞的表面亲和性和相容性等 ,即可达到组织工程支架对材料的要求。     

生物载体用聚醚型聚氨酯多孔材料的研究

分别以1,4-丁二醇（1,4-BDO）、三乙醇胺、二羟甲基丁酸（DMBA）为扩链剂制备了一系列适合细胞培养的聚氨酯泡沫载体材料（PUF）,并且以仓鼠卵巢细胞进行细胞培养.对PUF的发泡工艺及配方进行了研究.同时,对材料的力学性能、耐老化性能、亲疏水性能、生物毒性以及材料的细胞亲和性进行了研究.结果表明,该法制得的PUF具有良好的细胞相容性,可用于细胞培养.     

乳酸和乙醇酸共聚物膜的细胞亲和性实验研究

目的:制作具有较好亲和性、利于细胞黏附的组织工程支架材料。方法:制作改性后的PLGA膜Ⅰ(乳酸和乙醇酸共聚物膜)、PLGA膜Ⅱ、PLGA膜Ⅲ,分别测定其吸水率、接触角并进行细胞培养及倒置相差显微镜下观察细胞黏附情况。结果:细胞与PLGA膜4h时就可以发生黏附,8h时大量细胞贴壁,且细胞分布均匀,伸展良好;24～48h间完成贴壁生长,铺满PLGA膜,4天后细胞生长良好。结论:PLGA膜具有较好的细胞亲和性,它的表面有利于细胞的黏附,是一种较好的组织工程支架材料。     

蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞毒性的实验研究

目的研究不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细袍的毒性及其影响细胞增殖的因素。方法采用组织块培养法体外原代培养鼠胚表皮细胞，用直接接触法和浸提液法体外培养鼠胚表皮细胞，MTT比色法检测其在不同蚕丝蛋白材料上的增殖活力和细胞相对增殖率，进行毒性分析；并用活细胞计数法观察不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞生长的影响。结果鼠胚表皮细胞在1、2、4、5、7、8、10号各型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力与细胞对照组相当（P〉0.05）；在3、6、9号化学交联或HY-823交联型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力均低于细胞对照组（P〈0．05）；而在11号蚕丝蛋白材料其增殖活力显著低于细胞对照组（P〈0．01）。1、7号丝胶材料细胞毒性分级为0级（无毒），2、3、4、5、6、8、9、10号各型蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为1级（轻微毒），而11号蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为2级（中度毒）。活细胞计数结果与MTT检测结果基本相一致。结论除11号蚕丝蛋白材料外，1～10号各型蚕丝蛋白材料无明显细胞毒性，能支持鼠胚表皮细胞正常生长，具有良好的细胞相容性。     

转染Ad-hBMP2的脂肪干细胞与壳聚糖/磷酸三钙复合物支架的相容性

目的探讨转染腺病毒骨形态发生蛋白(Ad-hBMP2)基因的脂肪干细胞(ADSCs)与壳聚糖/磷酸三钙(CTCP)复合物支架的相容性,以期为ADSCs修复骨缺损寻找理想的组织工程骨支架材料。方法将壳聚糖与磷酸三钙进行复合制成CTCP复合物材料,再将其与转染Ad-hBMP2的ADSCs(密度1×106/mL)复合培养,进行细胞复合物支架的一般与超微形态学观察,观察细胞粘附能力、增殖活力,RT-PCR及Western blot测定成骨细胞骨钙素和Ⅰ型胶原水平。结果 CTCP支架孔径200～350μm,孔隙率83%;电镜显示转染Ad-hBMP2的ADSCs与CTCP复合物在体外培养期间支架无塌陷及形变,且其在支架上粘附、增殖良好,并能分泌细胞外基质如骨钙素和Ⅰ型胶原等;随着培养时间延长,骨的组织学特征日益明显。结论 CTCP支架具有适宜的孔结构和良好的生物相容性及骨诱导作用,可以作为骨组织工程较理想的支架材料,且与转染Ad-hBMP2的ADSCs相结合更易形成组织工程骨。     

新型生物玻璃支架细胞相容性的实验研究

目的探讨新型生物玻璃支架BG-20的细胞相容性,为组织工程支架材料的选择提供依据。方法将骨髓基质干细胞（BMSc）与BG-20体外复合培养,进行形态学观察、细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）测定。结果BMSc能贴附在BG-20上,增殖、生长不受影响,且BG-20有一定的促细胞增殖的作用。ALP测定结果BG-20组与对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论BG-20具有良好的细胞相容性,能作为BMSc的载体用于组织工程骨的构建。     

大鼠睾丸支持细胞、生精细胞及管周细胞的体外团聚研究

用5、10、15、20和25天龄大鼠睾丸曲细精管分离细胞制成悬液,在体外经固体琼脂培养和旋转培养,得到圆球状和索状细胞团聚体,其主要由支持细胞组成,管周细胞包绕在支持细胞外周。10天龄以前组,在团聚体中可见到部分生精细胞,15天龄以后组的生精细胞全部位于团聚体外.表明新生大鼠睾丸支持细胞、管周细胞及生精细胞间仍保留着部分胚胎期的识别和选择性粘附能力。     

双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性

【目的】 研究双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性?【方法】 组织块培养法培养原代人牙周膜细胞?MTT法测胶原支架不同浓度浸提液的细胞毒性?将人牙周膜细胞与支架材料三维培养,通过扫描电镜?组织切片观察其复合情况,并检测三维培养后细胞碱性磷酸酶(ALP)?羟脯氨酸(HYP)的分泌情况? 【结果】 不同浓度材料浸提液毒性评级为0 ~ 1级?细胞与支架复合培养后,细胞在支架上黏附?增殖良好,支架材料内部细胞分布均匀,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部?细胞与胶原支架复合培养24 h后,细胞的ALP活性与对照组无明显差异(P > 0.05),复合培养48?72 h后,细胞的ALP活性高于对照组(P < 0.05)?复合培养24?48?72 h后,细胞的HYP活性均高于对照组(P < 0.05)?【结论】 双层胶原支架具有良好的生物相容性,可进一步应用于牙周组织工程的研究?     

CD3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。     

气管上皮嗜银细胞和5-羟色胺免疫反应细胞的定位

用银染色及免疫组织化学ＰＡＰ法，对狗、家兔、豚鼠、大鼠、小鼠气管粘膜上皮内嗜银细胞和５－羟色胺（５－ＨＴ）免疫反应（ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｏｎ）细胞的分布及形态进行观察。结果显示：５种动物气管上皮中均可见散在的嗜银细胞，家兔气管内嗜银细胞密度较大，而狗、大鼠的较少。５－ＨＴ－ＩＲ细胞仅见家兔、豚鼠、小鼠的气管粘膜上皮。气管中的内分泌细胞可分为开放型和闭合型，并可见旁突伸至邻近细胞。相邻切片观察未     

CML自体树突状细胞对CML白血病细胞作用的研究

目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)自体树突状细胞 (DC)对费城 (Ph)染色体细胞的作用。方法　采用液体培养法从 4例 CML 慢性期患者外周血单个核细胞 (PBMNC)中培养出 DC及 T细胞 ,而后将 DC加 IL- 2或 IL- 2激活的 T细胞 ,分别与自体 PBMNC及 K5 6 2细胞共同孵育 6 h,行常规染色体测定 ,分析自体及 K5 6 2 Ph+染色体细胞残存率。结果　从 4例 CML 患者 PBMNC中培养出约 3× 10 5～ 2× 10 6 PBMNC的自体 DC;DC加 IL-2激活的 T细胞比单用 IL- 2激活的 T细胞对自体 Ph+染色体细胞的杀伤作用强 (P<0 .0 0 1) ;DC激活的自体 T细胞对自体 Ph+染色体细胞的杀伤作用强于对 K5 6 2 Ph+染色体细胞的杀伤作用 (P<0 .0 0 1)。结论　 DC激活的 T细胞能有效抑制 Ph+染色体细胞 ;CML 患者 DC激活的自体 T细胞对自体 Ph+染色体细胞特异性的杀伤作用可能受到主要组织相容性 (MHC)的限制     

GDF-5对大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察生长分化因子-5(GDF-5)对体外培养的大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖的影响,为进一步研究在体内局部添加GDF-5以促进损伤肌腱愈合及改善外源性愈合所致粘连打下基础.方法 MTT法测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞增殖率的影响;流式细胞仪测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞凋亡率的影响.结果 GDF-5可以明显促进肌腱细胞的增殖,而对腱鞘滑膜细胞的增殖率的作用较弱.对两种细胞的凋亡无明显影响.结论 添加一定浓度的GDF-5后肌腱细胞增殖率较腱鞘滑膜细胞提高更为明显,而凋亡并未发生改变.     

脑胶质瘤/树突状细胞融合瘤苗的制备与鉴定

目的:制备树突状细胞(DC)融合瘤苗,观察其防治胶质瘤的疗效,并探讨其作用机制。方法:诱导正常人外周血来源DC,在PEG作用下将其与原代培养胶质瘤细胞融合,通过双荧光标记法检测融合率、MTT比色法检测融合疫苗体外杀伤脑胶质瘤细胞的细胞毒作用。结果:融合瘤苗免疫荧光检查阳性,其激活的CTLs对胶质瘤的杀伤作用显著高于对照组,而且杀伤活性随着效靶比的增加而增加。结论:PEG法可有效制备DC与胶质瘤细胞融合瘤苗,融合瘤苗是一种更为有效的以DC为基础的抗胶质瘤方法。