葛根中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选分离及质谱分析

目的建立液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Q Exactive MS)和半制备液相色谱(Semi-preparative HPLC)联用技术对葛根药材中黄嘌呤氧化酶抑制剂进行快速筛选分离及鉴定的新方法。方法实验以黄嘌呤氧化酶作为生物靶分子,以超滤技术为研究手段筛选酶抑制剂,采用Semi-preparative HPLC技术分离纯化筛选所得到的活性成分,利用核磁共振波谱技术对单体活性成分进行进一步结构鉴定。结果从葛根药材中筛选并分离出5个纯度均大于90%的活性成分(葛根素、葛根素-6"-O-木糖苷、大豆苷、6"-O-乙酰基大豆苷和大豆苷元)。结论利用液相色谱-超滤-质谱-半制备高效液相色谱联用技术可以快速鉴定、筛选、分离葛根药材中活性化合物。此方法对于筛选黄嘌呤氧化酶酶抑制剂具有快速和灵敏等优势,为痛风等治疗药物的筛选与开发提供了科学有效的技术支持。     

利用分子印迹技术分离葛根异黄酮

目的:研究M IP对葛根素的吸附机理并进行Scatchard分析。方法:以葛根素为模板分子,丙烯酰胺为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)为交联剂,制备了葛根素分子印迹聚合物(M IP)。结果:表明M IP对葛根素有两类结合位点。用葛根素M IP对葛根提取物进行了分离。结论:HPLC分析结果表明分离产物中主要含有葛根素及其它两种异黄酮成分。     

大孔树脂对葛根总黄酮的吸附及分离纯化研究

以三峡库区丰富的葛根为材料,研究葛根黄酮的分离纯化工艺。方法利用柱层析技术,比较了4种大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的效果。结果用AB-8树脂柱进行吸附洗脱,洗脱液为60%乙醇,流速2.4 ml/min,得到的葛根总黄酮(以葛根素计)纯度为53.5%,AB-8树脂的吸附容量为103.2 mg/g。结论建立了AB-8大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的适宜条件,发现AB-8大孔吸附树脂在葛根总黄酮的分离纯化中有好的表现。     

大孔吸附树脂对葛根中葛根素的分离纯化工艺研究

目的:葛根素是葛根中含有的一种异黄酮类化合物,具有扩张心脑血管,降低心肌氧耗,改善心肌收缩功能等功效。实验采用大孔吸附树脂法考察葛根中葛根素的分离纯化工艺条件,为研制治疗冠心病的新型药物奠定实验基础。方法:采用大孔吸附树脂法,以葛根素和出膏率为综合指标,对6种不同类型的树脂进行考察,优选最佳树脂及纯化条件。结果:选取AB-8型树脂,70%乙醇洗脱,径高比为1∶3,洗脱流速为1mL/min,药材与树脂用量比为1∶7,洗脱剂用量为4BV,纯化后的葛根素纯度可达60.2%。结论:采用大孔树脂法分离纯化葛根中葛根素,证明该法具有简便、快速、准确等优点,为其工业化生产奠定了良好基础。     

利用大孔吸附树脂从葛根中分离与纯化大豆苷

目的 从葛根中获取高强度的大豆苷样品.方法 用大孔吸附树脂进行分离,反复结晶进一步纯化.结果 D101树脂适宜于大豆苷分离,30%乙醇洗脱液放置析出白色沉淀,以甲醇结晶2～3次,得针状晶体,该晶体HPLC测定大豆苷.结论 该方法操作简单易行,成本低,分离大豆苷纯度高,安全性能好.纯度92.4%,收得率为3%.     

琼脂凝胶微球纯化葛根素的工艺研究

葛根素是葛根中黄酮类物质主要活性成分,该研究以葛根素粗品为原料,利用廉价易得的琼脂制备琼脂凝胶微球键合β-环糊精分离介质(AG-β-CD),结合AB-8大孔树脂进行前处理,以高回收率分离纯化得到高纯度的葛根素。以葛根素纯度和回收率以及相关杂质的色谱纯度为考察指标,对4种不同性质的大孔树脂ADS-7(强极性)、ADS-17(中极性)、ADS-21(极性)和AB-8(弱极性)进行分离效果筛选以及工艺优化,并对AG-β-CD纯化工艺优化和验证。结果表明,优选弱极性树脂AB-8作为葛根素粗品的前处理树脂效果最佳,通过8%乙醇洗脱15 BV后,葛根素纯度为87.68%的回收率达到89.66%;通过琼脂凝胶微球键合β-环糊精分离介质进行纯化,流动相15%乙醇,承载量(上样量与柱体积之比)1.33 g·L~(-1),上样浓度8 g·L~(-1),流速1 m L·min~(-1)时,葛根素纯度高于95%的回收率达到97%以上。     

大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮和葛根素的工艺优选

目的:优选大孔吸附树脂分离、纯化葛根总黄酮和葛根素的工艺。方法:考察AB-8,D-101,HPD-100,S-8 4种不同极性吸附树脂对葛根中总黄酮和葛根素的静态吸附及解吸性能,筛选树脂型号;以葛根素、总黄酮转移率和纯度为指标,通过单因素试验考察其吸附和洗脱条件。结果:选用AB-8型大孔吸附树脂,优选的工艺条件为上样液质量浓度1.0 g.mL-1,葛根与大孔树脂质量比1∶2,径高比1∶6,用2 BV水洗除杂,加2 BV 80%乙醇以2 mL.min-1洗脱。转移率均>92%,所得葛根总黄酮纯度达80%,葛根素质量分数25%。结论:AB-8型大孔树脂用于富集葛根总黄酮和葛根素效果最佳,是一种理想的分离纯化介质,且优选的工艺操作简单、方法可靠。     

前荷叶碱单体的分离鉴定

目的:分离及鉴定前荷叶碱单体。方法:采用超临界CO2萃取技术从莲子心中提取亲脂性成分,用柱层析技术进行分离纯化,对得到的单体化合物用高效液相色谱(HPLC)、薄层层析(TLC)、气相色谱-质谱分析(GC-MS)进行鉴定。结果:将莲子心超临界CO2萃取物用柱层析分离后可获得单一成分,经HPLC、TLC、GC-MS鉴定后,纯度高,为前荷叶碱单体,其总得率为0.0154‰。结论:用超临界CO2萃取技术,结合柱层析分离纯化,可从莲子心中分离得到前荷叶碱单体。     

白屈菜红碱、血根碱单体的分离和鉴定

目的:分离及鉴定白屈菜红碱和血根碱单体.方法:采用柱色谱分离技术对白屈菜红碱和血根碱进行分离纯化,通过HPLC进行鉴定.结果:采用柱色谱法可获得单一成分,经HPLC鉴定为白屈菜红碱和血根碱单体,纯度分别为98.6％,95.7％.结论:采用柱色谱技术可从博落回中提取、分离到高纯度的白屈菜红碱和血根碱单体.     

葛根中大豆苷的高速离心分配色谱法分离纯化

目的应用高速离心分配色谱法(FCPC)分离纯化葛根中的大豆苷。方法以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水(5:1:0.5:5)作为两相溶剂系统,上相为流动相,下相为固定相,转速1400 r/min,流速3.0 m L/min,检测波长254 nm,采用ascending模式进行分离制备,化合物的结构由质谱及核磁共振谱鉴定。结果从1.0 g葛根粗提物中分离得到16.3 mg大豆苷,纯度经HPLC分析为96.5%。结论该方法适合于葛根中的大豆苷的高效分离制备。     

吴茱萸次碱的制备方法

目的以吴茱萸为原料,研究简单、快速、高效的分离、纯化吴茱萸次碱的制备方法。方法采用85%乙醇提取,硅胶柱层析分离,甲醇重结晶纯化吴茱萸次碱,薄层鉴别(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、核磁方法检查纯度。结果吴茱萸次碱经TLC检查与对照品一致,无杂质斑点,经HPLC检测纯度达98.5%以上,经核磁鉴定。另外经考察,确定色谱条件为Waters C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测波长225、290、215、365 nm;流动相乙腈-水溶液(50∶50);进样量10μL;柱温35℃;体积流量1.0 m L/min。结论吴茱萸次碱对照品已达到中药质量检测用化学对照品技术要求,所采取的分离、纯化方法简单、安全、可行性强,成本低、效率高,可用于吴茱萸药材及其制剂的质量控制。     

龙胆中龙胆苦苷的分离纯化

目的建立龙胆中高纯度龙胆苦苷的快速分离纯化方法。方法坚龙胆药材的乙醇提取液经AB-8大孔吸附树脂柱进行粗分,乙醇-水系统进行梯度洗脱,30%乙醇溶液洗脱下来的流份粗龙胆苦苷部分冷冻干燥后经MCI树脂柱进一步纯化,洗脱剂为乙醇-水,所得的龙胆苦苷的纯度经高效液相色谱进行检测。结果在此条件下,可以分离得到纯度大于97%的龙胆苦苷。结论该法简便、快速、低毒、所得产物纯度高,适用于分离较高纯度的龙胆苦苷及龙胆苦苷标准品的制备。     

采用高效液相色谱法测定心脉通口服液中葛根素的含量

目的 :建立心脉通口服液中葛根素的含量测定方法。方法 :采用高效液相色谱法 ,使用C₁₈柱 ,流动相为甲醇-水(含0.5%醋酸)(2 5∶75) ,检测波长250nm。结果 :此方法线性关系良好 ,平均加样回收率为 97.8%。结论 :方法简便可靠 ,精密度高 ,分离度好 ,可用于心脉通口服液的质量控制。     

高速逆流色谱法分离制备波棱瓜子中波棱芴酮

目的:建立了常规柱色谱结合高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化波棱瓜子中波棱芴酮的方法。方法:首先采用聚酰胺和硅胶柱色谱富集波棱芴酮,再用HSCCC进行分离制备,HSCCC最佳溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶9∶6∶8,V/V),上相为固定相,下相为流动相,从200mg富集物中一次分离得到80mg纯度为98.3%的波棱芴酮,所得产物经ESI-MS和NMR鉴定结构。结论:本方法所得产物纯度高,重现性好,适合于波棱芴酮的制备型分离。     

Purification of Puerarin from Pueraria lobata by FCPC versus HSCCC Using Small-volume Columns

Objective To develop an efficient method for separating and purifying puerarin from the roots of Pueraria lobata.Methods Separation by fast centrifugal partition chromatography(FCPC)was processed with a biphasic solvent system composed of ethyl acetate-n-butanol-water(2:1:3).The separation conditions were determined as follows:sample loading of 10 mg,flow rate of 2 mL/min,rotation speed of 2200 r/min,ascending mode,and detection wavelength of 254 nm.High speed countercurrent chromatography(HSCCC)was used as a comparative method with the rotation speed of 800 r/min,flow rate of 2.0 mL/min,and sample loading of 10 mg in tail-to-head mode.Results Puerarin was obtained by FCPC with a resolution of 0.90 and a purity above 99%,while a resolution below 0.50 and a purity below 90%by HSCCC.Compared with HSCCC,FCPC has the advantages with higher purity and better resolution.Conclusion FCPC is a powerful method to separate and purify puerarin.     

高效液相色谱法测定冠脉宁片中葛根素含量

目的：为进一步控制冠脉宁片的质量,建立HPLC法测定冠脉宁片中葛根素的含量。方法：采用回流提取法制备供试溶液,高效液相色谱法测定葛根素含量,色谱条件：Hypersil BDS C18柱,流动相为甲醇-水（25∶75）,检测波长250nm,流速为1.0 mL/min,柱温20℃。结果：葛根素在0.348 0-1.392 0μg范围内线性关系良好（r=0.999 6）,平均回收率为99.79%,RSD=0.42%（n=6）。结论：所建立方法简便可行,专属性强,重现性好,可用于冠脉宁片的质量控制。     

从银杏叶中制备聚戊烯乙酸酯

目的：研究银杏聚戊烯乙酸酯的制备技术,方法：以石油醚为提取溶剂,获得的石油醚浸膏经硅胶吸附能除去大部分极性较大的杂质;再经制备TLC分离、脱蜡、制备TLC纯化得到聚戊烯乙酸酯同系物的混合物,结果经HPLC外标法测定其同系物的纯度为84％。结论：该方法简易行,大大降低了工作量。     

表面分子印迹技术在分离桂枝茯苓胶囊中PGG的应用

五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-五-O-没食子酰葡萄糖,PGG)是桂枝茯苓胶囊中的一个主要活性成分,具有多种生物学与药理学活性,但其传统的分离纯化工艺较复杂,效率低,溶剂用量大,污染环境,而分子印迹技术(molecular imprinting technique,MIT)是近年来发展起来的一种新的分子识别技术,其制备的分子印迹聚合物具有特异性结合位点,对目标分子的分离有较高的选择吸附性,能克服以上传统分离技术的缺点。该研究以PGG为模板,采用分子印迹技术制备PGG表面分子印迹聚合物(surface molecularly imprinted polymer,SMIP),并对其吸附性能进行了研究,同时以该聚合物为填料自制色谱柱,从桂枝茯苓胶囊甲醇提取物中分离制备PGG,经HPLC检测质量分数达90.2%。该方法可用于从桂枝茯苓胶囊复方中快速大量制备PGG,有利于减少中药复方分离过程中有机溶剂的使用,环境友好,且操作简便,为中药及复方活性成分的分离纯化提供了一种新的思路和方法。