人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

整合素α5β1介导细胞外信号调节激酶信号转导通路对A549细胞生长和侵袭的影响

背景与目的近年研究显示整合素α5β1作为整合素家族的重要部分与非小细胞肺癌的转移性、浸润性和低分化趋向密切相关.本研究应用整合素α5/β1 siRNA双链及ERK抑制剂PD98095干预人肺癌细胞A549,探讨整合素α5β1蛋白表达对A549细胞生长和迁移能力的影响及其细胞内信号转导机制.方法实验分为未转染组、脂质体组、整合素α5β1 siRNA染组和PD98095组四组.采用免疫印迹(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549中整合素α5β1蛋白和mRNA表达水平,Western blot检测A549中ERK1/2、MMP-9和caspase-3蛋白水平,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和Annexin-V FITC PI双染色法检测A549增殖和凋亡.结果整合素α5/β1 siRNA双链在抑制α5/β1蛋白和mRNA表达的同时,可以下调ERK的mRNA和蛋白表达,并抑制其磷酸化水平.整合素α5/β1 siRNA双链和PD98059均可以明显抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡和细胞内caspase-3蛋白表达,并抑制细胞内MMP-9蛋白表达.结论整合素α5β1可能通过介导的ERK信号转导通路参与了A549细胞的增殖和迁移调控.     

RNA干扰沉默 PIN1 对肺癌A549细胞增殖、细胞周期和成瘤的影响

目的： 应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中 PIN1 （protein interacting with N1MA1）基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。 方法: 构建靶向 PIN1 基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo,以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定沉默 PIN1 基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证 PIN1 基因在mRNA和蛋白水平的表达,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默 PIN1 的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况。 结果: 成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体,转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中 PIN1 mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了893%;蛋白表达同时也显著抑制。 PIN1 基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降（P<0.01）,细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示, PIN1 沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低（P<0.01)。结论: pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默 PIN1 基因的表达,从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。     

CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用及机制研究

目的:探讨CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞紫杉醇耐药的作用和分子机制。方法:采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞系并命名为A549/R,采用定量PCR和Western blotting检测耐药细胞和亲本细胞中CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,应用Lipofectamine 2000分别将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN及其对照质粒pcmv转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为高表达组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将CTEN干扰质粒siCTEN及其对照siNC转染至紫杉醇耐药细胞系A549/R细胞,分别为干扰组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549/R细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将TGF-β1干扰质粒siTGF-β1及其对照质粒siNC转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为干扰组和对照组,分别检测两组细胞中TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再分别用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。结果:成功构建在5 μg/mL紫杉醇中稳定生长的非小细胞肺癌耐药细胞系A549/R。定量PCR和Western blotting显示,CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白在紫杉醇耐药细胞系A549/R中的表达明显高于在其亲本细胞系A549中的表达;与对照组相比,高表达CTEN组的A549细胞中TGF-β1表达上升,细胞对紫杉醇的敏感性降低,细胞增殖增强;与对照组相比,低表达CTEN组的A549/R细胞中TGF-β1表达降低,细胞对紫杉醇的敏感性升高,细胞增殖减弱;在A549细胞中低表达TGF-β1后再过表达CTEN,其促进紫杉醇耐药及细胞增殖的作用也明显减弱。结论:CTEN具有促进非小细胞肺癌A549的紫杉醇耐药,促进细胞增殖的作用,其发生机制可能与上调TGF-β1的表达有关。     

肺癌细胞中RASSF4的高表达抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力

目的:探讨RASSF4在肺癌中的增殖和侵袭能力。方法:向肺癌细胞系H460和A549中导入RASSF4的cDNA质粒后,通过MTT、克隆形成实验、基质胶侵袭实验、流式细胞术等方法检测肺癌细胞的生长和侵袭能力。结果:RASSF4能够通过下调MMP2、MMP9和cyclinD1的表达,抑制肺癌细胞的侵袭、增殖及克隆形成能力。结论:RASSF4在肺癌细胞中通过抑制细胞生长及侵袭能力发挥重要的肿瘤抑制功能。     

APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)对人非小细胞肺癌细胞A549增殖能力的影响,为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法:使用脂质体转染法将重组表达质粒pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA和pOZN-HA-APE1导入A549细胞,免疫印迹检测APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:重组载体pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA转染细胞后,显著抑制A549细胞中APE1蛋白的表达,与对照组相比,增殖速率明显下降(P＜0.05),平板克隆形成显著减少(P＜0.05),并阻止细胞周期G0/G1期向S期转化,降低CDK2表达。而过表达APE1可增加A549细胞活力,促进细胞增殖,促进细胞周期G0/G1期向S期转化。结论:APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞A549生长具有抑制作用,为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

RACK1通过影响MCM7磷酸化促进肺癌细胞的增殖

目的:研究蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)基因沉默或过表达对大细胞肺癌细胞系H460及肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用脂质体转染法分别将针对RACK1基因的RACK1 siRNA和重组质粒pCMV-sport6-RACK1转入H460和A549细胞中.采用MTT法和集落形成实验分析RACK1基因对细胞增殖的影响,FCM检测其对细胞周期的影响;采用酵母双杂交法、免疫共沉淀法、激光共聚焦显微术及磷酸化蛋白免疫共沉淀法检测RACK1表达与肺癌细胞增殖之间的关系.结果:转染RACK1 siRNA后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显下调,细胞的增殖能力和集落生成数明显降低,S期细胞所占比例明显下降(P＜0.01);转染pCMV-sport6-RACK1后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显上调,细胞的增殖能力增强,倍增时间增加,集落生成数明显增多,S期细胞所占比例明显升高(P＜0.01).采用酵母双杂交法和免疫共沉淀法检测发现,RACK1与MCM7存在直接作用.RACK1进入细胞核内,与微小染色体维持蛋白7 (minichromosome maintenance protein 7,MCM7)特异性结合,促进MCM7蛋白磷酸化.结论:RACK1通过直接与MCM7结合促进MCM7蛋白磷酸化途径,继而促进肺癌细胞增殖.     

NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

LRRC3B在非小细胞肺癌中下调并与肺癌细胞增殖和侵袭能力相关

背景与目的已有的研究表明：在许多恶性肿瘤细胞中,LRRC3B表达显著下调,被视为肿瘤抑制蛋白。然而,在非小细胞肺癌中它的表达模式和生物学作用缺乏研究。人类癌症微阵列的研究显示LR-RC3B在乳腺癌和结肠直肠癌表达下调,提示LRRC3B参与致癌作用。本研究的目的是研究LRRC3B在非小细胞肺癌中的必到状态及其与肺癌增殖、侵袭和细胞周期间的相关性,探讨LRRC3B在调控肺癌细胞增殖、侵袭及细胞周期中的作用。方法应用Western blot和Realtime RT-PCR检测LRRC3B在几株肺癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平。应用MTT法检测对转染LRRC3B的A549和H460细胞系细胞增殖能力变化,应用集落形成实验以及细胞侵袭实验研究LRRC3B对细胞增殖和侵袭以及细胞周期进程的作用。肺癌细胞系H3255中转染LR-RC3B siRAN验证LRRC3B对细胞的增殖以及侵袭能力和对细胞周期进程的影响。结果与正常NHBE细胞系相比,NSCLC细胞系中LRRC3B蛋白表达量显著下调,特别是H460、H358、HCC827以及A549。A549和H460细胞系转染LRRC3B后,细胞增殖和侵袭能力受到抑制。LRRC3B抑制细胞周期进程,并下调cyclin D1和MMP9的表达。H3255细胞中敲除LRRC3B,细胞增殖和侵袭能力显著增强,同时与细胞周期及侵袭能力相关的蛋白cyclin D1和MMP9表达略微上调。结论 LRRC3B在肺癌细胞系中表达下调,而上调LRRC3B则能够抑制肺癌细胞增殖和侵袭能力,并抑制细胞周期进程,可能是未来肺癌治疗的一个新靶点。     

程序性死亡受体1和程序性死亡受体配体1在非小细胞肺癌组织中的表达情况及临床意义

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)和程序性死亡受体配体1(PD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法选择150例NSCLC患者的NSCLC组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两种组织中PD-1 mRNA和PD-L1 mRNA的相对表达量。采用免疫组织化学染色法检测NSCLC组织中PD-1和PD-L1的表达情况,分析PD-1和PD-L1表达情况与患者临床特征的关系。采用流式细胞术检测NSCLC组织和癌旁组织中CD4^+-PD-1、CD8^+-PD-1、CD14^+-PD-L1、CD68^+-PD-L1的表达水平。结果NSCLC组织中PD-1 mRNA和PD-L1 mRNA的相对表达量分别为(5.03±1.92)和(4.95±1.09),分别高于癌旁组织的(1.72±0.81)和(1.25±0.24),差异均有统计学意义(P﹤0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、有远处转移的NSCLC患者NSCLC组织中PD-1和PD-L1的高表达率均明显高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、高+中分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NSCLC组织中CD4^+-PD-1、CD8^+-PD-1、CD14^+-PD-L1、CD68^+-PD-L1的表达水平均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论PD-1和PD-L1在NSCLC组织中高表达,可能成为一种新的生物标志物,PD-1/PD-L1信号通路可能参与了NSCLC的免疫逃逸过程,对其逃逸机制进行研究可以为NSCLC患者的临床治疗提供新靶点。     

黏蛋白1多肽通过small-MUC1蛋白抑制肿瘤细胞生长

目的：探讨黏蛋白1（mucin 1,MUC1）串联重复序列多肽(简称黏蛋白1多肽,MUC1多肽)对肿瘤细胞生长抑制的作用机制。方法：MUC1多肽与多种肿瘤细胞Jurkat、Raji、U937、MCF7、SMMC7721及活化的T细胞、小鼠巨噬细胞RAW264.7共同培养,观察MUC1多肽对上述细胞生长的影响;建立BABL/c小鼠Jurkat细胞皮下移植瘤动物模型,应用MUC1多肽进行治疗;采用GST免疫沉降实验鉴定与MUC1多肽结合的肿瘤细胞表面蛋白。结果：MUC1多肽对Jurkat、Raji、U937、MCF7和SMMC7721细胞的生长均有抑制作用,对活化的T细胞和小鼠RAW264.7细胞生长无明显抑制作用。MUC1多肽对BABL/c小鼠皮下Jurkat细胞移植瘤的生长均有明显抑制作用（P<0.05）。GST免疫沉降实验显示,Jurkat 和MCF7细胞裂解上清中与MUC1多肽结合的蛋白可与两种抗MUC1串联重复序列抗体（GP1.4和HMPV）及抗胞内段抗体（Ab5）发生反应,相对分子质量大约115 000,提示可能是MUC1新的同种型,命名为small MUC1（sMUC1）。结论：MUC1多肽可通过与肿瘤细胞表面small MUC1蛋白的相互作用向细胞传导生长抑制信号     

长链非编码RNA ARAP1-AS1在肾透明细胞癌中的表达及作用研究

背景与目的：长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）ARAP1-AS1在多种肿瘤中异常表达,但其在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的作用尚不清楚。探讨ARAP1-AS1在ccRCC中的生物学作用。方法：通过GEPIA数据库分析ARAP1-AS1在ccRCC组织中的表达及其与临床病理学特征及患者生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测ccRCC组织及邻近的非肿瘤组织中ARAP1-AS1的表达水平。将患者分为ARAP1-AS1高表达组和低表达组,分析ARAP1-AS1的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系,并进行生存分析。通过细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验、transwell迁移实验及侵袭实验检测ARAP1-AS1对ccRCC细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达变化。采用BALB/c裸小鼠移植瘤模型分析ARAP1-AS1对ccRCC细胞体内成瘤能力的影响。结果：GEPIA数据库分析结果显示,ARAP1-AS1在ccRCC中高表达,且与患者肿瘤高分期及较差的生存率相关（P均<0.05）。RTFQ-PCR显示,ARAP1-AS1在ccRCC组织及细胞系中高表达,ARAP1-AS1的高表达与肿瘤大小和分期相关（P均<0.05）。ARAP1-AS1高表达患者的总生存率较差（P<0.05）。沉默ARAP1-AS1的表达可以抑制ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可以降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可使ccRCC细胞体内成瘤能力减弱,并使Ki-67增殖指数降低。结论：ARAP1-AS1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进ccRCC的进展。     

Up-regulation of C1GALT1 promotes breast cancer cell growth through MUC1-C signaling pathway

Aberrant glycosylation is frequently observed in cancers. Core 1 β1,3-galactosyltransferase (C1GALT1) is an exclusive enzyme in humans that catalyzes the biosynthesis of core 1 O-glycan structure, Gal-GalNAc-O-Ser/Thr, whose expression is commonly up-regulated during tumorigenesis. Little is known about the function of C1GALT1 in breast cancer. This study aims to determine the correlation between C1GALT1 expression and breast cancer clinicopathological features and roles of C1GALT1 in breast cancer malignant phenotypes. Public databases and our data showed that C1GALT1 mRNA and C1GALT1 protein are frequently up-regulated in breast cancer; and increased C1GALT1 expression correlates with higher histological grade and advanced tumor stage. Overexpression of C1GALT1 enhanced breast cancer cell growth, migration, and invasion in vitro as well as tumor growth in vivo. Conversely, C1GALT1 knockdown suppressed these malignant phenotypes. Furthermore, C1GALT1 modulates O-glycan structures on Mucin (MUC) 1 and promotes MUC1-C/β-catenin signaling in breast cancer cells. These findings suggest that C1GALT1 enhances breast cancer malignant progression through promoting MUC1-C/β-catenin signaling pathway. Unveiling the function of C1GALT1 in breast cancer opens new insights to the roles of C1GALT1 and O-glycosylation in tumorigenesis and renders the potential of C1GALT1 as a target of novel therapeutic agent development.     

膀胱移行细胞癌组织Notch-1和Jagged-1蛋白表达临床意义的探讨

增高,Notch-1和Jagged-1蛋白的阳性表达率均增高,P<0.05.复发组Notch-1和Jagged-1蛋白的阳性表达率均高于未复发组,差异有统计学意义,P<0.05.Notch-1和Jagged-1的表达强度之间呈明显正相关,r＝0.316,χ2＝5.200,P＝0.013.结论:Notch-1及其配体Jagged-1可能是判断膀胱癌生物学行为的重要指标.     

KiSS-1基因转染子宫内膜癌HEC-1B细胞系及其意义的研究

目的:构建KiSS-1基因质粒并将KiSS-1基因质粒导入子宫内膜癌细胞HEC-1B中,建立稳定、高效和低毒的转染方法,观察其转染率及表达情况。方法:采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将高纯度的KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后肿瘤细胞的KiSS-1 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白Metastine的表达。结果:1)使用重组的真核表达载体,将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌细胞中,并获得稳定表达。2)子宫内膜癌细胞KiSS-1基因转染前后表达水平有明显差异,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中KiSS-1 mRNA蛋白的相对表达量分别为0.1231±0.0366、0.1486±0.0287和0.5060±0.0198,Metastin蛋白的相对表达量分别为0.1549±0.0189、0.1497±0.0029和0.4469±0.0078,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=161.547,P=0.000;F=607.993,P=0.000。3)转染后的子宫内膜癌细胞的MMP-9 mR-NA表达下调,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中MMP-9 mRNA的相对含量分别为0.3576±0.0501、0.3500±0.0254和0.1677±0.0014,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=32.963,P=0.001。结论:利用脂质体作为载体将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌HEC-1B细胞是可行、有效和稳定的;转染后细胞的KiSS-1 mRNA表达明显增强,MMP-9 mRNA的表达明显降低;KiSS-1基因可能参与抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和转移,可考虑为子宫内膜癌基因治疗的一个有意义的基因。     

Differential induction of CYP1A1 and CYP1B1 by benzo[a]pyrene in oral squamous cell carcinoma cell lines and by tobacco smoking in oral mucosa

Polyaromatic hydrocarbons, including benzo[a]pyrene (BP), are major tobacco carcinogens. Their carcinogenic effects require metabolic activation by cytochrome p450 (CYP) enzymes. Relative CYP isoform expression is related to tissue-specific tobacco-related squamous cell carcinoma (SCC) susceptibility. There have been conflicting reports regarding relative CYP1A1 and CYP1B1 oral expression, and information regarding CYP1B1 expression in oral tissues is limited. To quantify BP- and tobacco-induced CYP1A1 and CYP1B1 expression in oral SCC cells and oral mucosa. Study Design: Real-time qPCR was performed to measure (1) BP-induced CYP1A1 and CYP1B1 mRNA expression in seven oral/other head and neck SCC cell lines (2) CYP1A1 and CYP1B1 mRNA expression in gingiva from 22 smokers and 24 nonsmokers. SCC lines exhibited either similar induction of both isoforms or preferential CYP1A1 induction (CYP1A1-to-CYP1B1 ratios 0.8–4.3). In contrast, gingival tissues from smokers exhibited preferential CYP1B1 induction. Marked interindividual variation in CYP1A1 and CYP1B1 expression was observed among smokers. In vitro conditions may not account for factors that modulate expression in vivo. Interindividual variation in inducible CYP1A1 and CYP1B1 expression may account in part for variation in tobacco-related oral SCC risk.     

ERCC1、BAG-1 及 BRCA1 基因在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨ERCC1、BAG-1和BRCA1基因mRNA在接受以铂类为基础辅助化疗的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者中的表达情况及其与预后的关系。方法 85例NSCLC患者中74例给予以铂类为基础的术后辅助化疗,采集全组患者的肿瘤组织和其中34例患者的癌旁组织,应用半定量RT-PCR法,检测其ERCC1、BAG-1和BRCA1基因mRNA的表达情况,回顾性分析患者的临床病理资料,探讨3个基因的表达与患者总生存期（OS）之间的关系。结果 ①ERCC1、BAG-1阴性表达的患者OS显著长于阳性表达的患者（P均=0.001）。ERCC1、BAG-1阴性表达的患者接受铂类化疗的疗效显著优于阳性表达的患者（P=0.002、P=0.001）。②BRCA1阴性表达的患者OS长于阳性表达的患者,但差异无统计学意义（P=0.057）。③多因素分析显示ERCC1、BAG-1可作为NSCLC患者接受铂类化疗的预后指标（P=0.027、P=0.022）。结论 检测ERCC1和BAG-1的表达可作为指导NSCLC患者术后接受铂类化疗及预后评估的指标。     

慢病毒介导的RNA干扰技术构建hOGG1和hMTH1基因缺陷细胞模型

目的：分别建立8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1（human 8-hydroxyguanine glycosylase,hOGG1）基因和8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶（human Mut T homlogue,hMTH1）基因缺陷细胞模型,为进一步研究两个基因的相互关系提供理想的研究平台。方法：利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA（small hairpin RNA,shRNA）转入人胚胎肾细胞（293FT）包装慢病毒,用所得到的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞（HFL）,杀稻瘟菌素筛选稳定表达的细胞株,荧光显微镜下观察慢病毒的包装效率和感染效率,Real-time RT-PCR鉴定基因干扰效果。结果：得到了滴度较高的慢病毒,感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA和hMTH1mRNA表达水平分别比正常HFL细胞下降了90%和60%。结论：通过慢病毒包装技术,成功构建hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型。     

cyclin D1和kip1在肾细胞癌组织中的表达

目的：采用免疫组化方法检测cyclin D1和kip1在肾细胞癌中的表达,以期获得评估肾细胞癌恶性程度及预后评价的指标.方法：将肾细胞癌肿瘤组织及正常组织用免疫组化方法进行染色,按半定量方法进行结果判定,结合临床资料进行分析.结果：cyclin D1和kip1在肿瘤组织与正常组织中的表达具有显著性差异（P＜0.01）.cyclin D1和kip1在不同性别组、年龄组和直径组肿瘤患者组织中的表达对比不具有显著性差异（P＞0.05）.cyclin D1和kip1在不同病理分级组肿瘤患者组织中的表达具有显著性差异（P＜0.01）.kip1表达与肿瘤分化程度呈正相关（r=0.40）.cyclin D1表达与肿瘤分化程度呈负相关（r=0.45）.结论：cyclin D1和kip1在肿瘤细胞的表达呈现一定规律,可以作为判断肾细胞癌肿瘤细胞分化程度及预后的重要指标,同时也为靶向治疗提供了更多的靶点选择.