雷公藤甲素预处理诱导Tregs细胞减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

Objective To investigate the effect and related mechanism of triptolide pretreatment to prevent from ischemia/reperfusion (I/R) injury in mice liver. Methods Sixty male C57BL/6 mouse were randomized into four groups (15/group): A:sham group with saline , B: sham group with triptolide, C: saline I/R group, D: triptolide I/R group. The mice were pretreated with either saline or triptolide (0. 1 mg/kg/d) through intraperitoneal (ip) injection for one week. The mouse partial liver model of I/R injury was established, and samples were collected at 24 h after the I/R injury. Results Serum ALT and AST levels were significantly decreased and histological damage was significantly alleviated in the triptolide I/R group as compared with the saline I/R group (P＜0.05), the concentration of MDA in the triptolide groups was significantly decreased, while SOD activity was significantly increased compared with that of the saline I/R group (P＜0.05). The percentages of CD4+ CD25+ regulatory T cells (Tregs) cells among CD4+ T cells in groups A, B, C, and D were(7. 55 ± 1.87)%, (12. 59±3. 87)%,(7. 85±1.07)%, and(12. 02±3. 16)% in liver tissue, respectively. The expression levels of Foxp3 mRNA were significantly higher in the triptolide I/R group than those of saline I/R group (P＜0. 05). ELISA showed that triptolide could significantly inhibit the levels of IL-6, IL-Iβ and TNF-αand promoted the level of IL-10 in the serum (P＜0.05). Conclusion Pretreatment with triptolide could effectively prevent from liver I/R injury, which may be related to the induction of Treg cells by triptolide, the increase in the level of IL-10 in serum, and the inhibition of IL-6, IL-1β and TNF-α production in serum.     

低剂量雷公藤甲素预处理减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的 探讨雷公藤甲素(TPT)预处理减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其作用机制.方法 将60只雄性C57BL/6小鼠分成4组,每组15只.(1)TPT手术组:手术方法参照Kobayashi法,术中夹闭肝门静脉左支、肝动脉左支及左肝管,90min后开放血管,建立小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型;(2)TPT假手术组:手术方式同TPT手术组,但术中不阻断血流,仅用生理盐水(NS)纱布覆盖切口90 min;(3)NS手术组:手术方式同TPT手术组;(4)NS假手术组:手术方式同TPT假手术组.两TPT组小鼠于术前1周开始腹腔注射TPT0.1 mg·kg-1·d-1,术前1 h加用1次,而两NS组同期仅腹腔注射等体积无菌NS.再灌注后24 h,检测各组小鼠肝功能和观察肝组织病理学变化,采用流式细胞术检测各组TH17细胞占单个核细胞的比例,采用实时聚合酶链反应(PCR)检测各组肝组织中IL-17和ROR-γt mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-6、IL-17和TGF-β的含量.结果 TPT手术组肝功能的损伤较NS手术组明显减轻(P＜0.05);NS假手术组、TPT假手术组、NS手术组和TPT手术组TH17细胞占单个核细胞的比例分别为(0.72±00.23)%、(0.41±0.18)%、(4.26±0.82)%和(1.77±0.53)%;两TPT组IL-17和ROR-γt mRNA的表达量以及外周血中IL-6、IL-17和TGF-β的含量,均明显低于相应的NS组(P＜0.05).结论 低剂量TPT预处理能够减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤,这可能与TPT预处理抑制小鼠体内Th17细胞分化、发育及其功能有关.     

枯否细胞与肝脏缺血再灌注损伤

休克、肝脏外伤及肝移植所致肝功能衰竭都与肝脏缺血再灌注损伤有关，其中枯否细胞（ＫＣ）的作用不容忽视。ＫＣ可因补体系的激活和钙超载或噬作用而激活，活化后的ＫＣ除主要释放活性氧外，还可入蛋白酶及各种细胞因子，介导对肝细胞的毒性作用，导致严重的肝脏再灌注损伤。干扰ＫＣ功能的药物可能具有重要的临床应用价值。     

肝脏缺血再灌注损伤机制和缺血预处理保护作用

缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)损伤是指缺氧器官细胞损伤在恢复氧供之后更加加重的现象。Toledo Pereyra 等在 1975 年首先认识到IR损伤是肝移植过程中一种重要病理损伤状态,可发生移植肝淤血、进行性血栓形成和/或器官坏死,导致移植失败。直到80年代中期,“再灌注损伤(reperfusion injury)”才逐渐在肝移植文献中应用。　　肝脏IR损伤可分为热缺血和冷保存缺血再灌注损伤。热 IR 损伤(warm ischemia reperfu sion injury)与肝脏外科、肝移植、低血容量性休克、毒性肝损害、静脉阻塞性疾病和 Budd Chiari综合征等普遍相关…     

枯否细胞和肝脏缺血再灌注损伤

目的 了解枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 采用文献回顾的方法对枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用加以综述。结果 活化后的枯否细胞可产生和释放多种介质直接或间接地影响肝脏微循环。结论 枯否细胞在肝缺血再灌注损伤中发挥了重要作用。     

肝脏缺血再灌注损伤的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科常见的病理生理过程,是集肝窦血管内皮损伤、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡与自噬等多种机制共同作用的结果,对于肝切除、肝移植等肝脏外科手术后肝功能恢复和围手术期安全具有显著影响.然而,迄今为止,其具体的损伤机制尚未完全阐明,在临床上也始终缺乏有效的干预手段.因此,对于肝脏缺血再灌注损伤发病机制以及防御举措的深入研究具有重要的临床意义.笔者结合近年来最新文献报道,对该领域的实验研究进展予以简要综述.     

亚低温对大鼠肝脏缺血/再灌注后细胞损伤的影响

对于亚低温能否在肝脏缺血/再灌注(I/R)后有效地抑制细胞凋亡和坏死,目前未明,本文报告大鼠肝I/R损伤模型上亚低温的研究结果。 材料与方法 1.实验动物及分组 健康SD大鼠24只,体重200～350     

瑞香素激活Keap1/NRF2通路减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

目的：探讨瑞香素对小鼠肝脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及机制。方法：构建小鼠70%肝脏IRI模型,将小鼠随机分为假手术组（Sham组）、瑞香素组（Dap组）、缺血再灌注组（IRI组）、缺血再灌注+瑞香素组（IRI+Dap组）,每组8只。Sham组和IRI组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液,Dap组和IRI+Dap组小鼠肝脏缺血前1 h腹腔注射Dap(1.5 mg/kg)。IRI术后12 h处死小鼠收集标本,检测血清转氨酶及炎症因子的表达水平,取肝组织行苏木紫-伊红（HE）染色观察肝组织病理损伤,通过免疫荧光检测肝组织炎症因子的表达,通过ELISA检测肝组织氧化应激相关因子表达,通过蛋白印迹实验检测肝组织NRF2/HO-1通路相关蛋白的表达。结果：和IRI组小鼠相比,IRI+Dap组小鼠肝脏IRI 12 h后,血清中ALT、AST、TNFα、CCL2的表达显著降低,肝组织坏死面积显著减小,肝组织中CD11b、Ly6g阳性炎症细胞浸润属相显著减少,肝组织中MDA水平显著降低、SOD、GSH水平显著升高,同时肝组织中Keap1表达显著降低、HO-1、p-NRF2表达显著升高。结论：瑞香素...     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

目的　探讨缺血预处理 (IPC)保护作用的发生机制。方法　建立大鼠部分肝脏热缺血再灌注模型。IPC采用肝脏缺血 10min ,再灌注 10min。结果　IPC后肝组织中腺苷和NO水平明显升高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 0 1) ,但IPC前应用腺苷A2 受体拮抗剂后NO的升高被抑制 (P<0 0 1)。缺血再灌注 (I/R) 2h后血清中TNF α、AST、ALT、LDH及W/D水平和假手术组相比明显增加 ,而IL 10含量降低 (P <0 0 1) ;IPC、I/R前加入腺苷、IPC前应用腺苷A1受体拮抗剂显著地降低TNF α释放和AST、ALT、LDH及W /D水平 ,提高IL 10含量 ,与I/R组相比差异显著 (P <0 0 1) ;但IPC前应用腺苷A2 受体拮抗剂 (IPC +A2 antag)和NO合成酶抑制剂NAME并没有能像IPC组那样有效降低TNF α、AST、ALT、LDH及W /D的水平 ,提高IL 10的含量 (P <0 0 1) ;而IPC前给IPC+A2 antag组提供NO前体精氨酸又获得和IPC组同样的结果 (P >0 0 5 )。结论　IPC引起细胞外腺苷水平升高 ,腺苷A2 受体活化 ,介导了NO合成增加 ,最终通过抑制效应器TNF α的释放、增加IL 10的合成来实现对缺血组织的保护作用。     

缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的：探讨缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肝脏细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型．将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术(S)、缺血再灌注(IR)、缺血后处理(IPo)3组，以缺血再灌注前反复多次的短暂预再灌注及停灌注作后处理，观察血清肝酶和肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平变化，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)及透射电镜观察肝细胞凋亡状态．并行肝组织病理形态学检查。结果：与IR组相比，IPo组血清肝酶水平及肝组织中MDA含量显著降低，而SOD和GSH活性则显著升高；再灌注后可见明显的肝实质细胞凋亡现象，IPo组凋亡指数较IR组显著下降，肝组织病理形态学损伤亦明显减轻。结论：IPo可通过抑制再灌注后氧自由基的过量生成而拮抗肝实质细胞凋亡的发生，从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

CD4+CD25+调节性T细胞对小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的影响

目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞在诱导自发性肝脏免疫耐受中的作用.方法 向受体和供体注射抗CD25抗体(PC61)后进行小鼠原位肝脏移植,观测其生存时间.术后20～30 d切取移植肝脏行HE染色,同时观察CD4+CD25+T细胞对CD4+T细胞和CD8+T细胞功能的影响.结果 去除受体而不是供体小鼠的CD4+CD25+T细胞可以导致肝移植排斥反应.而且,去除CD4+CD25+T细胞使移植物的白细胞浸润明显增多,组织损伤加重.同时,去除CD4+CD25+T细胞导致CD4+T细胞的增殖活性和CD8+T细胞的细胞毒活性明显增强.结论 受体来源的CD4+CD25+调节性T细胞在小鼠肝脏移植免疫耐受诱导中起重要作用.

Abstract：

Objective To examine the contribution of CD4+ CD25+ regulatory T cells to liver transplant tolerance. Methods After injection of anti-CD25 monoclonal antibody (mAb, PC61), mouse orthotopic liver transplantation was performed and survivals were determined. The paraffin-embedded sections of hepatic allografts were cut and stained with hematoxylin and eosin (HE). Furthermore, the effect of CD4+ CD25+ regulatory T cells on proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells was examined by depleting these regulatory T cells. Results Depletion of these cells in the recipients but not in the donors before liver transplantation caused rejection. Histological analyses of hepatic allografts with PC61 treatment showed extensive leukocyte infiltration and tissue destruction, whereas those in the control group showed minimal changes. Moreover, elimination of CD4+CD25+ T cells resulted in the enhancement of both proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells against donor-type alloantigen. Conclusions These results suggest that CD4+CD25+ regulatory T cells were important for tolerance induction to hepatic allografts.     

CD4+CD25+调节性T细胞/辅助性T细胞17在脓毒症大鼠中的作用

目的 观察CD4+ CD25+调节T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)细胞在脓毒症大鼠炎性免疫反应中的作用.方法 110只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症(CLP)组,采用改良的盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型.采用流式细胞术检测CD14+单核细胞表面人类白细胞抗原-DR基因(HLA-DR)表达率、Treg细胞及TH17细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17炎性因子蛋白表达.结果 与假手术组比较:(1)伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制,CD14+单核细胞HLA-DR表达率＜30％,IL-10/TNF-α比值(27.41 ±7.04比6.63 ±2.60)明显增高(P＜0.01).(2)术后96 h脓毒症大鼠Treg细胞[(11.91±3.88)％比(6.57±2.60)％,P＜0.01]和Th17细胞[(5.14±0.29)％比(2.85±0.07)％,P＜0.01]表达明显增高.(3)术后96 h脓毒症组前炎性细胞因子IL-6[(42.31±15.89) ng/L比(6.32 ±3.18) ng/L,P＜0.01]、IL-10[(69.89 ±20.78) ng/L比(13.58±5.37) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(5.03±3.10) ng/L比(2.77±1.10) ng/L,P＜0.01]、TGF-β[(4.99±2.01) ng/L比(1.88±1.07) ng/L,P＜0.01]、IL-17[(92.77±11.64) ng/L比(7.58±2.30) ng/L,P＜0.01]表达明显增高.结论 伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制;在大鼠脓毒症的发生发展中,Treg细胞介导的免疫抑制及Th17细胞介导免疫激活反应同时存在;脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致Treg细胞/Th17细胞失衡的原因之一.     

外源性IL-2对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞影响的实验研究

目的：探讨IL-2对CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的增殖及功能的影响。方法：提取B6小鼠脾脏细胞,流式细胞仪分离CD4＋CD25＋Tregs,将新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs与抗CD3单克隆抗体、同种同系抗原递呈细胞（APCs）及外源性IL-2共同培养,测定其增殖活性;并检测体外扩增后的CD4＋CD25＋Tregs的免疫抑制活性及其Foxp3的表达。结果：与外源性IL-2共同培养的CD4＋CD25＋Tregs增殖程度强烈,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs抑制CD4＋CD25-T细胞增殖活性的能力与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs相似（P〉0.05）。体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs的Foxp3表达与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs亦相似（P〉0.05）。结论：外源性IL-2能够消除CD4＋CD25＋Tregs的无反应状态,且体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs保持了其抑制活性。     

雷公藤内酯醇对大鼠肾缺血再灌注损伤时Toll样受体4表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TRI)对大鼠肾缺血再灌注损伤时肾组织中Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 随机将51只Wistar大鼠分为3组.(1)阴性对照组(n=15):游离双侧肾脏,切除右肾,缝合腹壁.(2)缺血再灌注组(n=18):实验过程与阴性对照组相同,但在切除右肾和游离左肾之后,将左肾动、静脉夹闭45 min,然后开通.(3)TRI处理组(n=18):肾缺血再灌注前3 d经大鼠腹腔注射TRI 0.4 mg/kg,每天1次,连续3 d,其他实验过程与缺血再灌注组相同.肾缺血再灌注1、3、5 d后,分别采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中TLR4 mRNA的表达水平;免疫印记法(Western blot)检测肾组织中TLR4表达水平.结果 肾缺血再灌注1、3、5 d后,缺血再灌注组和TRI处理组血清BUN及Cr均明显高于阴性对照组(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也明显高于阴性对照组(P＜0.05);但与缺血再灌注组比较,TRI处理组血清BUN和Cr明显降低(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也显著降低(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇可以减轻肾缺血再灌注损伤,其机制可能是通过抑制TLR4的表达而发挥作用的.     

调节性及辅助性T细胞在人类IgA肾病中的表达及意义

目的 探讨CD4+CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用。 方法 用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3（FOXP3）的表达。Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法。 结果 IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人[（2.14±0.82）％比（1.59±0.53）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.397，P ＜ 0.05），与eGFR呈负相关（r = -0.376，P ＜ 0.05）。IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[（2.57±0.72）％比（1.81±1.10）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.468，P ＜ 0.05）。IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（5.75±1.89比12.73±9.79，P ＜ 0.05），但与临床各指标间没有相关性。 结论 IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱。Treg在外周血中的增多以及以Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞对树突状细胞功能的抑制作用

目的研究慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）对树突状细胞（DCs）免疫功能的抑制作用,探讨治疗CHB的新方法。方法采用密度梯度离心法获得CHB患者和健康对照组（NC组）外周血单个核细胞（PBMC）;部分PBMC体外诱导培养获得DCs,部分PBMCs用特异性免疫磁珠分选获得CD4＋CD25＋Treg和CD4＋CD25-T细胞;不同来源的DCs和正常对照组CD4＋CD25-T细胞混合为反应细胞,将不同来源和不同比例的Treg分别加入到反应细胞中培养3 d,MTT法检测Treg抑制DCs的抑制指数（SI）,并在培养DCs的不同时间加入Treg,应用流式细胞术检测DCs表面共刺激分子CD80和HLA-DR的表达。结果来源于CHB患者及NC组的Treg均可抑制DCs的免疫作用,来源于CHB患者Treg抑制DCs能力显著高于NC,差异具有统计学意义（P ＜0.01）。不同比例的Treg均可抑制DCs的免疫功能,随着Treg比例的增高抑制作用也越明显,抑制指数亦越高。在DCs培养的不同时间加入相同比例的Treg,发现Treg对DCs表面分子CD80、HLA-DR的表达均有抑制作用,与对照组相比,差异具有统计学意义（P＜0.01）,同时发现加入Treg的时间越早,DCs表面分子表达降低越明显。结论 CHB患者Treg可显著抑制DCs免疫功能且呈时间和量的依赖,抑制DCs表面分子CD80和HLA-DR表达,可能是Treg抑制DC免疫功能的机制之一。     

树突状细胞和CD4+CD25+调节性T细胞在免疫耐受中的作用及关系

诱导免疫耐受具有高效、低毒、经济等优点,在器官移植中有着极其重要的意义.在建立免疫耐受中,树突状细胞(DC)起到克隆清除、克隆无能、表达T细胞抑制因子、选择性激活辅助T细胞和诱导调节性T细胞尤其是CD4+CD25+调节性T细胞的产生等作用.而CD4+CD25+调节性T细胞主要以DC为作用靶点,影响其分化成熟,抑制DC向...     

大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能鉴定

目的：研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的方法。方法：采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4^＋CD25^＋T细胞。首先采用藻红蛋白（PE）标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25^＋T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4^＋CD25^＋T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4^＋CD25^-T细胞的免疫抑制作用。结果：两次阳性分选后获得的CD4^＋CD25^＋T细胞纯度为（90.4±1.6）%,细胞存活率为（92.6±2.4）%。体外增殖实验表明,CD4^＋CD25^＋T细胞能明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）。结论：采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞。