CD4~+CD25~+调节性T细胞的研究现状

调节性T细胞(Treg)是体内一类具有免疫调节功能的特殊T细胞群,根据其产生和表型分为不同的亚群,不同的Treg亚群与自身免疫性、移植免疫、肿瘤、感染、呼吸道等疾病的发生和进展密切相关。本文对不同Treg亚群的特征、作用及其与上述疾病的关联进行了介绍。     

严重多发伤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的变化及意义

目的 观察严重多发伤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg细胞)的变化及意义.方法 40例严重多发伤患者于伤后1,3,5,8 d流式细胞仪检测各组患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比率的变化,ELASA法检测血清中IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,并与健康组进行对比.结果 CD4+细胞在伤后1～8 d均明显低于健康组(P＜0.01),CD8+细胞在伤后5～8 d明显高于健康组(P＜0.05或P＜0.01).严重多发伤患者伤后5 d外周血中CD4+CD25highTreg细胞比率开始升高,与伤后1,3 d比较,差异有统计学意义(P＜0.01);伤后8 d仍持续升高,与伤后5 d比较,差异有统计学意义(P＜0.05).患者外周血IFN-γ浓度持续下降,而患者外周血IL-10浓度则持续上升.结论 Treg细胞比率在严重多发性创伤后明显升高,更重要的是,其在减少Th1类细胞因子分泌及抑制创伤免疫等方面发挥了重要的作用.     

2Gy60Coγ射线照射诱导调节性T细胞的辐射凋亡机制

目的 分析2 Gy ⁶⁰Co γ射线照射对小鼠调节性T细胞存活率的影响,并初步探讨Treg细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax与CD39表达之间的关系。方法 用2 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺、脾脏中的淋巴细胞,计数细胞数后利用流式细胞仪对Treg细胞亚群的凋亡率、CD39及凋亡相关因子的表达进行分析。结果 受照后Treg细胞较CD4+FOXP3-T细胞的存活率高,胸腺和脾脏中Treg细胞存活率的时间效应关系不同;受照后Treg细胞凋亡率增加,以照后4 d增幅最为显著(t=-3.6、-7.4, P<0.05);受照后胸腺与脾脏中Bax/Bcl-2的比值变化规律不同,前者中该比值增加,以照后4 d增加最为显著(t=-3.4, P<0.05),而脾脏中该比值于照后4 d减小(t=2.4, P<0.05);受照后4 d胸腺Treg细胞中CD39表达上调(t=-6.6, P<0.05),而脾脏中表达下调(t=2.6, P<0.05)。结论 受照后Treg细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值的变化规律与CD39的表达规律基本一致。     

不同剂量60Co γ射线对小鼠淋巴细胞及其调节性T细胞亚群的影响

目的 分析不同剂量照射对小鼠淋巴细胞及其调节性T细胞亚群数量和表型的影响。方法 用不同剂量⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺和脾脏中的淋巴细胞,计数各样本细胞数后利用流式细胞仪分析CD4+T细胞和CD4+FOXP3+CD25+Treg细胞亚群的比例。结果 小鼠受照后胸腺细胞和脾脏细胞呈剂量依赖性减少,在照后4 d降至最低(F=118.08、144.01,P<0.05)。较高剂量照射后,胸腺中Treg细胞数随时间逐渐减少,而脾脏中该细胞亚群逐渐恢复;较低剂量照射后,胸腺中Treg细胞数有所增加。与0 Gy组相比较,Treg细胞比例随剂量增加而增加(胸腺中F=5.16、89.44、3.01,P<0.05;脾脏中F=52.02、32.13、27.45,P<0.05)。结论 不同剂量引起淋巴细胞及其Treg细胞亚群的辐射响应不同,其中Treg细胞亚群对较高剂量照射具有显著的辐射抗性,而低剂量照射可能诱导Treg细胞成熟分化或迁移。此外,淋巴细胞及其亚群的不同时间效应,也表明淋巴细胞成熟分化规律的差异。     

严重烧伤大鼠CD4+ CD25++/Foxp3调节性T细胞与内毒素的变化

严重烧伤导致内毒素血症，与此同时，机体存在免疫调节功能的紊乱。目前对烧伤后内毒素引起的机体免疫功能失衡的研究大多集中在细胞因子和炎症介质上，对细胞免疫功能在此过程中的作用阐述较少。范骏等证明小鼠烧伤后肠Peyer’s结淋巴细胞数量减少，功能低下，而这种免疫抑制的机制尚不清楚。     

重症肌无力患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达

目的：观察免疫治疗对重症肌无力（MG）患者外周血CD4＋CD25^＋T淋巴细胞表达的影响。方法：应用四色流式细胞术对MG30例（观察组）治疗前后和30例健康者（对照组）外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋、CD25^＋ T淋巴细胞亚群等表达进行检测，以CD2。抗原荧光强度10的细胞定义为CD25^high细胞，分析其百分率和荧光强度，并结合临床资料进行相关分析。结果：观察组治疗前外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^high、CD25^＋占总淋巴细胞的比例与正常对照组无显著差异（P〉O．05），但CD4^＋＋细胞数较正常增高（P〈0．05）；经类固醇激素或经胸腺切除治疗后，外周血CD4^＋CD25^＋、CD／CD25^high与治疗前及对照组比较，差异显著（P〈0．05）。结论：经免疫治疗后的MG患者外周血中存在高比例的CD4^＋CD25^＋表达，可能与病情缓解有关。     

2 Gy γ射线照射对小鼠调节性T细胞和Th17细胞及其免疫平衡的影响

目的 观察2 Gy γ射线照射对小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法 50只C57BL/6雄性小鼠随机数字表法分为对照组和照射组,照射组小鼠接受2 Gy γ射线一次性全身照射(剂量率为164.94 Gy/min),对照组行假照射。于照射后1、3、7、14和28 d检测外周血象的变化;流式细胞仪分析外周血、胸腺及脾脏调节性T细胞(Treg细胞)和脾脏Th17细胞数量的改变。结果 受照后小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数降低(t=8.89～33.54, P<0.05)。小鼠外周血Treg略有升高;胸腺Treg在照后1、3 d显著高于对照组(t=-6.45和-10.59, P<0.05),至28 d明显低于对照组(t=5.34, P<0.05);脾脏Treg在照后1～14 d显著高于对照组(t=-6.82～-3.89, P<0.05)。脾脏Th17细胞于照后1 d出现显著增高,3 d达到最大值(t=-2.42, P<0.05),较脾脏内Treg增长更为明显。Treg/Th17比值在照后1～14 d降低,差异有统计学意义(t=4.02～8.04, P<0.05),导致Treg/Th17平衡模式向Th17方向明显偏移。结论 Treg/Th17免疫平衡失调在辐射所致免疫功能损伤中可能扮演重要角色。     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

目的 观察不同剂量X射线照射后不同时间小鼠脾细胞中调节性T细胞和叉头状转录因子(Foxp3)的表达变化,探讨X射线对调节性T细胞以及相关因子Foxp3的影响。方法 112只雄性ICR小鼠,随机平均分为低剂量(0.075 Gy)组和高剂量(2 Gy)组,用X射线深部治疗机分别进行0.075和2 Gy全身照射,于照射后0、4、8、16、24、48和72 h处死,取脾脏,分别应用流式细胞术和RT-PCR法检测调节性T细胞和Foxp3的表达水平。结果 0.075和2 GyX射线全身照射后,小鼠脾细胞CD4+CD25+Treg 细胞百分比均在照射后8 h达高峰,随后一直保持较高水平,高于照射前水平(2 Gy,在8、16、48、72h时,t=4.65、4.28、3.71、2.88,P<0.05; 0.075 Gy,在8、16、24、72h时,t=8.73、10.55、4.21、4.65,P<0.05)。Foxp3在mRNA水平,0.075 Gy照射后变化不明显,而2 Gy照射后于24 h形成峰值。Foxp3在蛋白质水平,0.075 Gy照射后并未有显著变化;而2 Gy照射后于16 h形成峰值,随后略有下降,但仍保持较高水平。结论 调节性T细胞及相关分子Foxp3的不同变化可能成为高、低剂量X射线诱导不同免疫效应的原因之一。     

产后甲状腺炎妇女外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平分析

目的分析产后甲状腺炎(PPT)妇女外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平。方法连续选择2011年1月—2012年12月在我院门诊新确诊的PPT妇女(PPT组)31例,另有29例同期分娩未发生PPT的妇女为对照组。入选对象同期接受外周血调节性T细胞(CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg)和辅助性T细胞(CD+3、CD+4、CD+8、CD+4/CD+8)检测。结果 PPT妇女外周血CD8+表达水平明显低于对照组(P<0.01),而CD+4/CD+8比值明显高于对照组(P<0.05)。PPT妇女外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg均明显低于对照组(P均<0.05~0.01)。结论PPT妇女存在明确的外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达。     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

Objective To observe the changes in expressions of spleen regulatory T cells (Tregs)and the related factor forkhead box protein-3 (Foxp3) after irradiation with different doses of X-ray in mice at different times,and to elaborate the effects of X-rays on regulatory T cells and Foxp3.Methods 112male ICR mice were randomly divided into 2 groups and irradiated by X-rays at the doses of 0.075 and 2 Gy,respectively.The mice were killed at 0,4,8,16,24,48,and 72 h post-irradiation and the spleens removed.Flow cytometry was used to detect the percentage of CD4 + CD25 + Treg and protein expression of (Foxp3),and RT-PCR was used to exmiamine the mRNA expression of Fox3.Results Compared with those before irradiation,the CD4 + CD25 + Treg positive rates began to increase and peaked at 8 h post-irradiation with 0.075 Gy at 8,16,24,72 h(t = 8.73,10.55,4.21,4.65 ,P ＜ 0.05) and 2 Gy at 8,16,48,72 h(t = 4.65,4.28,3.71,2.88,P ＜ 0.05),and then slightly decreased,but still remained at high levels.The mRNA protein levels of Fox3 did not change significantly after exposure to the dose of 0.075 Gy,but began to significantly increase at 8 h after exposure to the dose of 2 Gy.However,the Foxp3 protein level began to increase 4 h post-irradiation,peaked at 16 h,and then slightly decreased,but still ramained at high levels (t =2.59,3.37,3.70,3.20,P＜0.05).Conclusions The changes in expressions of Tregs and Foxp3 after high- and low-dose X-ray irradiation may be used to explain the differences in immune effects induced by ionizing radiation at different doses.     

CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在Graves病中的变化及临床意义

目的 通过观察Graves病患者外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(Treg)数量的变化,探讨Graves病发生的免疫学机制.方法 采用流式细胞术检测90例Graves病患者和50名正常人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的比例,同时测定甲状腺功能指标及甲状腺自身抗体水平.采用t检验进行组间比较,采用线性相关分析法分析CD4+CD25+CD127-Treg与甲状腺功能指标的关系.结果 90例Graves病患者与50名正常人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的比例分别为1.39％±1.09％和4.59％±1.14％,两者间差异有统计学意义(t=16.4,P＜0.01).CD4+CD25+CD127-Treg数量与促甲状腺激素受体抗体水平呈负相关(r=-0.24,P＜0.05),与总三碘甲状腺原氨酸、总甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体水平呈负相关(r=-0.62、-0.65、-0.56、-0.71、-0.50、-0.15,P均＜0.01).结论 Graves病患者CD4+CD25+CD127-Treg 数量减少,且CD4+CD25+CD127-Treg数量与甲状腺功能指标及甲状腺自身抗体水平关系密切,提示CD4+CD25+CD127-Treg数量减少可能与Graves病的发病有关.CD4+CD25+CD127-可能是人CD4+T 细胞中Treg的特异性标志物.     

内毒素作用下淋巴细胞中CD4＋CD25＋调节性T细胞变化及连翘对其的影响

目的探讨不同时间点内毒素（LPS）对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatory T cell,Treg）的影响及连翘（forsythia suspensa,FS）干预后CD4＋CD25＋调节性T细胞的变化。方法体外培养Wistar大鼠脾脏淋巴细胞,分为对照组、LPS（10ng/ml）组、LPS（10ng/ml）＋多黏菌素B组（10ng/ml）、LPS（10ng/ml）＋连翘（12．5、25、50mg／ml）组,分别于3、6、12h收集标本．流式细胞术检测CD4＋CD25＋调节性T细胞在淋巴细胞中的百分比,荧光定量RT—PCR法检测Foxp3mRNA表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测TNF—a、IL-10分泌水平。结果脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg的百分比和Foxp3mRNA的表达在12h较3、6h明显升高（P〈0．01）;TNF—a、IL-10的分泌随时间点的延长均显著升高（P〈0．01）;随连翘剂量增加,TNF-a、IL-10分泌水平,Foxp3mRNA表达和CD4＋CD25＋Treg百分比均明显降低（P〈0．05）。结论内毒素参与并诱导了CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的变化,其随内毒素作用时间延长呈上升趋势。连翘能显著降低CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的百分比。     

肾移植后诱导活化高表达CD25的CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的表型特点与免疫调节功能

目的 探讨肾移植受者活化并表达不同强度CD25的CD4细胞的表型特征和功能特点.方法依据CD25的表达水平,应用流式细胞仪将9例行初次亲属活体肾移植受者的外周血CD4~+ T细胞分为CD25~-、CD25高表达(CD25~(high))和CD25低表达(CD25~(low))3群,并比较3群细胞叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度.经免疫磁珠法和CD4~+ CD25~+调节性T细胞分选试剂盒分选得到受者外周血CD4~+ CD25~-、CD4~+ CD25~(high) T细胞,分别作为反应细胞,以Co~(60)γ射线照射灭活的供者外周血单个核细胞(PBMC)作为刺激细胞,建立体外单向混合淋巴细胞培养系统.采用半定量RT-PCR检测系统中IL-2 mRNA的表达.结果 在肾移植术后受者3群细胞中,FoxP3的表达以CD4~+ CD25~(high)细胞最高(93.7%±3.58%),其次是CD4~+CD25~(high)细胞(16.4%±6.8%),CD4~+ CD25~-细胞最低(1.8%±1.1%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01);CTLA-4表达以CD4~- CD25~(high)细胞最高(80.8%±7.9%),其次是CD4~- CD25~(low)细胞(22.9%±6.5%),CD4~- CD25~-细胞最低(4.1%±2.4%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01).在混合淋巴细胞培养中,CD4~- CD25~(high)细胞受移植抗原刺激后不表达IL-2 mRNA;按照1:2比例加入CD4~- CD25~(high)细胞后,CD4~-细胞表达的IL-2 mRNA平均被抑制了60%.结论 肾移植受者所有活化T细胞的表面均有CD25表达,高表达CD25的细胞群具有调节性T细胞的表型特点,为CD4~+ CD25~(high)曲调节性T细胞.     

妊娠期肝内胆汁淤积症产妇外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达分析

目的：分析妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）产妇外周血调节性T细胞和辅助性T细胞表达水平。方法：连续选择近期入院分娩的23例ICP产妇,入选对象均接受了外周血调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg和CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg）和辅助性T细胞（CD＋3、CD＋4、CD＋8、CD＋4/CD＋8）检测,并与同期住院正常怀孕产妇（对照组,20例）相同测试结果比较。结果：调节性T细胞检测数据比较中,ICP组血清CD4＋CD25＋Treg和CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg水平明显低于对照组（P均〈0.05～0.01）。辅助性T细胞检测数据比较中,ICP组血清CD＋4/CD＋8表达水平明显高于对照组,而CD＋8表达水平则显著低于后者（P均〈0.05～0.01）。结论：ICP产妇存在着外周血调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达。     

进行期寻常型银屑病患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞分析

目的 检测进行期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的水平. 方法 选择进行期寻常型银屑病住院患者56例和健康者16例,取外周抗凝全血,采用流式细胞术方法,检测外周血CD4+CD25+ Treg的水平,并统计和分析其特点和意义. 结果进行期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+ Treg占CD4+淋巴细胞的比例为(2.65±0.73)%,健康对照组为(6.11±0.93)%.两组比较差异有统计学意义(P﹤0.001). 结论 CD4+CD25+ Treg水平降低可能与寻常型银屑病免疫学发病机制有关.     

非小细胞肺癌患者外周血CD4+CD25+T细胞和 TGF-β1的相关性分析

目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和TGF-β1(血清转化生长因子β1)的相关性及意义.方法:分别采用流式细胞技术和ELISA法检测40例非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞数量及TGF-β1的表达水平.结果:非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和TGF-β1的表达水平明显高于对照组(P＜0.05).肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞与TGF-β1的表达成正相关.结论:非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞数量的增多可能诱导TGF-β1表达水平的增高.     

抗CD25单克隆抗体对肾移植受者CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的影响

目的 评价抗CD25单克隆抗体对肾移植受者术后早期CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞(CD4~+ CD25~(high)Treg)的影响.方法 2007年2-9月接受初次亲属活体供肾移植的受者41例,根据是否使用抗CD25单克隆抗体(商品名daclizumab)分为抗体组(21例)和对照组(20例).其中抗体组在肾移植术前2h及术后第14天分别给予抗CD25单抗各50mg.在移植前及移植后第13、17、60天分别留取肝素抗凝外周血15ml.应用流式细胞仪测定两组受者外周血CD4~+T细胞和CD4~+ CD25~(high)Treg比例的变化,半定量RTPCR检测CD25 mRNA的表达变化.结果 肾移植术后13、17、60d抗体组的CD25~+ T细胞占CD4~+ T细胞的比例(20%±8%、13%±7%、24%±9%)低于对照组(45%±6%、41%±5%、40%±6%),差异有统计学意义(P<0.05).抗体组术后第17天CD4~+ CD25~(high)Treg占CD4~+ T细胞的比例为4.40%±0.26%,明显低于对照组(8.56%±0.36%,P<0.01);而术后13、60d抗体组CD4~+ CD25~(high)Treg所占比例分别为7.00%±0.47%、3.75%±0.19%,与对照组(分别为8.04%±0.32%、3.66%±0.31%)比较差异无统计学意义(P>0.05).抗体组CD25 mRNA相对表达水平在给予第二次抗体前(术后第13天)为1.65±0.22,术后第17天为1.84±0.27,两者间差异无统计学意义(P>0.05).对照组术后第17天CD25 mRNA相对表达水平为1.70±0.23,与抗体组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 两剂共100mg抗CD25单抗仅一过性地降低CD4~+ CD25~(high)Treg,不会影响其活化扩增,无损于术后早期的免疫耐受诱导及维持.     

子痫前期患者蜕膜中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的Foxp3表达

目的初步探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在子痫前期患者胎盘附着处蜕膜中表达及其临床意义。方法选择子痫前期30例和正常晚期妊娠30例,采用免疫组化法检测蜕膜CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3的阳性表达率,分析比较两组检测结果。结果蜕膜中Foxp3在子痫病例组及正常对照组的阳性表达率分别为16．67％和66．67％,子痫病例组Foxp3阳性表达率明显低于正常对照组（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3在子痫前期患者蜕膜组织中阳性表达率减低,其免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡、受损,免疫排斥作用增强,导致子痫前期的发生。     

Graves病与CD4^＋CD25^＋CD127^-调节性T细胞相关性研究

Graves病是常见自身免疫性疾病,其发病机制不清楚。CD4^＋CD25^＋T细胞是新近发现的一群调节性T细胞,专职免疫无能和免疫抑制,其与自身免疫性疾病有密切关系。为研究调节性T细胞与Graves病的关系,笔者对33例Graves病患者血中高表达CD25,同时低表达CD127的CD4^＋调节性T细胞进行检测,现报道如下。     

亚致死剂量γ射线照射后小鼠脾脏CD95阳性淋巴细胞变…

目的 观察γ射线照射后小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的变化规律与ＣＤ９５（Ｆａｓ）表达的关系。方法 采用ＰＩ染色及双荧光流式细胞术研究了不同剂量γ射线照射后不同时间，小鼠脾脏淋巴细胞凋亡及ＣＤ９５表达的规律。结果 小鼠脾脏淋巴细胞地不同剂量照射的凋亡敏感性差异有显著性，４Ｇｙ照射后凋亡率最高（在２～６Ｇｙ之间观察），淋巴细胞表面Ｆａｓ的表达随照射后细胞凋亡率的变化而改变，结论脾脏淋巴细胞在辐射后表现阳明显的