急性出血坏死性胰腺炎肝损伤Toll样受体2/4mRNA的表达变化

目的研究急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肝损伤Toll样受体（TLR）2／4 mRNA表达的变化规律。方法采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠（TAC）注射制造AHNP肝损伤动物模型。动物分为假手术组（S组）、胰腺炎组（P组）。RT—PCR方法检测不同时间点肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达变化。结果P组大鼠3h肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达开始增高,伤后6～12h肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达迅速达到峰值（P〈0.05或P〈0．01）,肝损伤加重（P〈0.05或P〈0.01）。S组变化不明显。结论AHNP肝组织内TLR2和TLR4的基因表达上调。肝组织内TLR2和TLR4的基因表达增高可能在AHNP肝脏损伤的发生、发展中起作用。     

一氧化氮对重症急性胰腺炎肺损伤Toll样受体2/4表达的影响

目的 观察一氧化氮（NO）对重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤Toll样受体（TLR）表达的影响。方法 动物分为假手术组、胰腺炎组、氯喹（CQ）治疗组和L-精氨酸（L-Arg）治疗组；实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TLR2／4mRNA表达。结果SAP大鼠肺组织TLR2／4表达明显增高（3h：0．787±0．751、1．512±1．794E-2：6h：1．086±1．738、2．097±3．735E．2；12h：1．113±6．141、2．957±2．620E-2），肺损伤加重（P〈0．05或P〈0．01）。以CQ抑制肺组织中TLR2／4表达后（3h：0．313±5．491E-2，0．005±1．419E-3；6h：0．488±7．442E．2，0．010±1．518E-3；12h：0．883±8．911E-2，0．024±2．760E-3），肺损伤减轻（P〈0．05或P〈0．01）。给予L-Afg治疗后，肺组织NO浓度明显升高，TLR2／4表达降低（0．656±3．972 E-2，1．501±6．111 E-2；0．260±0．891 E-2，0．732±5．135 E-2；0．126±0．914 E-2，0．414±1．678E-2），肺损伤程度减轻（P〈0．05或P〈0．01）。结论 肺组织内TLR2／4表达在SAP肺损伤中明显上调，肺组织损伤加重；NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2／4表达从而减轻肺组织损伤。     

Toll样受体4在大鼠胰腺组织的特异性分布表达

目的 探索Toll样受体4(TLR4)在大鼠胰腺组织的特异性分布表达。方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化SP方法，检测Wistar大鼠胰腺组织中TLR4 mRNA及TLR4蛋白的分布表达。结果通过RT-PC R方法(31个循环)，从正常大鼠胰腺组织检测到549bp目的基因片段。免疫组化方法检测到大鼠胰腺内有TLR4表达，主要位于胰管上皮、血管、微血管内皮及胰岛组织，胰腺外分泌腺泡细胞未见TLR4表达。结论 TLR4在大鼠正常胰腺组织内有分布表达，主要定位于上皮组织(胰管上皮)和内皮组织(动脉、静脉及微血管内皮)，提示大鼠胰腺内、外分泌部均具有天然免疫TLR4参与胰腺病理生理的相关受体基础。     

人骨髓间充质干细胞褪黑素受体的表达及其意义

目的:检测体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone mesenchymals stromal cells;BMSCs)褪黑素受体的表达;并探讨其意义.方法:10例12～18岁志愿者;分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓;肝素抗凝.采用密度梯度离心法分离BMSCs.体外培养并传至P3代进行表型鉴定.抽提细胞总RNA;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测褪黑素受体MT1、MT2 mRNA的表达;同时应用免疫组化染色方法检测细胞MT1、MT2蛋白的表达.结果:分离的单个核细胞经培养至P3代;使用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;体外培养细胞的表型与BMSCs的表面标志相符.细胞抽提总RNA以MT1和MT2两种受体的RT-PCR扩增产物电泳呈阳性条带;免疫组化结果显示细胞存在MT1和MT2蛋白的表达.主要分布在细胞膜和细胞浆;呈棕褐色阳性颗粒;而细胞核上未见阳性颗粒.结论:人BMSCs中存在褪黑素受体MT1、MT2的表达;它是褪黑素作用的靶细胞.这为进一步研究BMSCs褪黑索信号通路提供了实验基础.     

中药胰必清对急性出血坏死性胰腺炎急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4的影响

目的 观察TLR4在急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠肺泡巨嗜细胞的表达及应用胰必清(YBQ)治疗前后的变化.方法 建立大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型,动物分组:A组(假手术对照组)、B组(AHNP组)、C组(AHNP+YBQ组)、D组(AHNP+DEX组)、E组(AHNP+YBQ+DEX组).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测3、6、12、24 h各个时间点各组支气管肺泡灌洗液肺泡巨噬细胞中TLR4表达的变化.结果 C组肺泡巨噬细胞3、6、12、24 h Toll样受体4(TLR4)mRNA表达为0.54、0.65、0.65、0.54,E组为0.55、0.67、0.69、0.55,与血液中内毒素含量相一致,随时间的延长而逐渐升高,6～12 h左右达高峰,与时间明显相关.两组与B组比较,含量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胰必清能通过调节AHNP-ALI时肺泡巨噬细胞中TLR4 mRNA的表达来改善急性肺损伤.     

骨髓间充质干细胞对急性重症胰腺炎大鼠的炎症抑制作用及对TLR4/NF-κBp65通路的关系

背景与目的:急性重症胰腺炎(SAP)为临床常见急危重症之一,炎症反应在其发生发展中发挥重要作用.目前认为骨髓间充质干细胞(MSC)移植具有修复SAP胰腺组织损伤潜能,但具体功能尚不清楚.本研究在SAP大鼠模型上探讨骨髓MSC对SAP炎症的抑制作用及机制.方法:分离、培养、鉴定SD骨髓MSC,并制成1.0×106/mL的...     

骨髓间充质干细胞对大鼠慢性胰腺炎炎性因子的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠慢性胰腺炎(CP)炎性因子的影响。方法 将80只SD大鼠随机分为空白组(20只,注射无菌生理盐水),模型组[20只,尾静脉注射二丁基二氯化物(DBTC)制作大鼠CP模型],假治疗组(20只,尾静脉注射DBTC制作大鼠CP模型后,输入和BMSCs等量的无菌生理盐水)和治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射体外培养的同种异体BMSCs)。80 d后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠胰腺中白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-d、转化生长因子(TGF)-β水平。结果 治疗组中IL-1 (652.326±36.424) ng/L,IL-6(8.347±1.094) ng/L,IL-8( 352.487±69.340) ng/L,rGF-β(0.020±0.006) μg/L,均低于假治疗组与模型组(P＜0.05),IL-10(603.799±89.374) ng/L,TNF-α( 507.450±90.130)μg/L则高于假治疗组和模型组(P＜0.05)。模型组和假治疗组之间IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 同种异体BMSCs的输入可以降低CP中促炎因子的水平,提高抗炎因子的浓度,有助于减轻CP的炎症反应,减缓甚至阻止CP的发展。     

骨髓间充质干细胞对大鼠慢性胰腺炎中星状细胞的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性胰腺炎(CP)中星状细胞(PSC)的活化、增殖和分化的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为空白组(20只,注射无菌生理盐水)、模型组[20只,尾静脉注射二氯二丁基酯(DBTC)制作大鼠CP模型]、治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射体外培养的同种异体GFP-MSCs)、假治疗组(20只,于CP模型制作成功后尾静脉注射等量的无菌生理盐水).取大鼠胰腺检测PSC活化表达的Desmin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,组织中Ⅰ、Ⅲ胶原含量及白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF) -β1表达水平.结果 治疗组PSC表达的Desmin、GFAP、α-SMA,组织中Ⅰ (0.135±0.030) ng/g、Ⅲ胶原含量(0.029±0.008) ng/g,TGF-β1 (0.020±0.006) μg/L浓度均低于假治疗组(P＜0.05),但IL-10 (603.799±89.374) g/ml,TNF-α(507.45±90.13) μg/L均高于假治疗组(P＜0.05),后者与模型组之间的差异无统计学意义(P＞0.05),空白组未见明显异常.结论 BMSCs可以通过对细胞因子的调控减少PSC的活化,抑制其增殖及分化,降低细胞外基质的沉积.     

骨髓间充质干细胞对急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对急性胰腺炎(AP)大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响,探讨其减轻胰腺炎的作用机制.方法 采用腹腔注射L-精氨酸建立大鼠AP模型.SD大鼠随机分4组:AP未治疗组(24只);MSCs移植组(24只);p38MAPK抑制组(24只)和正常对照组(6只).流式细胞术检测MSCs表面标记物;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测胰腺组织p38MAPK mRNA表达变化;同时观察组织形态学改变.结果 (1)未治疗组大鼠在建模后1h时胰腺组织p38MAPK mRNA表达显著升高并达到顶峰(P＜0.01);移植MSCs后表达明显降低,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)未治疗组血清炎性因子水平分别为:肿瘤坏死因子(TNF)-α(614.8 ±54.6)ng/L、白细胞介素(IL)-1(3040.5±506.4)ng/L、IL-17(4.5±0.4)U/L,胰腺组织中性粒细胞趋化因子(CINC)和单核粒细胞趋化因子(MCP-1)染色阳性率均明显升高(P＜0.05);移植MSCs后,CINC、MCP-1染色阳性率显著下降,血清炎性因子水平分别为:TNF-α( 277.5±60.8)ng/L、IL-1( 1056.2±563.1)ng/L、IL-17(1.2±0.4)U/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)胰腺组织苏木素-伊红(HE)染色显示,未治疗组有大量炎性细胞浸润,胰腺细胞破坏明显,腺体结构紊乱,而移植组仅见少量炎性细胞浸润,细胞偶有破坏,排列整齐,结构有序.结论 急性胰腺炎时,胰腺组织内p38MAPK mRNA表达上调,胰腺组织损伤严重.MSCs移植可以明显抑制p38MAPK mRNA表达,降低胰腺组织内趋化因子和血清炎性因子水平,从而减轻胰腺损伤.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒索性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA和Toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重200～220g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12),对照组(C组)、LPS组和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组～P3组).C组腹腔注射生理盐水2ml;LPS组腹腔注射LPS 8mg/kg;P1组～P3组分别腹腔注射LPS 8 mg/kg和盐酸戊乙奎醚0.3、1.0和3.0 mg/kg.给药结束后6 h时开胸,心室取血,并取肺组织,采用ELISA法测定血清TNF-α和Ib-6的浓度,RT-PCR法测定肺组织TLR4 mRNA和TLR2 mRNA 的表达水平,并观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、P1组～P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均升高(P<0.05);与LPS组比较,P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P1组比较,P2组和P1组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05);P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).P2组和P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组.结论 盐酸戊乙奎醚可通过下调肺组织TLR4 mRNA和耵JR2 mRNA的表达,降低炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

Toll-样受体2，4mRNA在急性出血坏死性胰腺炎肺损伤中的表达变化

目的研究急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肺损伤中Toll-样受体（TLR）2/4mRNA表达的变化规律.方法建立AHNP肺损伤动物模型.动物分为假手术组（S组）、胰腺炎组（P组）.计算各组肺组织学评分和肺损伤指数以评价肺损伤的程度;RT-PCR方法检测不同时间点肺组织TLR2和TLR4mRNA表达的变化.结果肺组织TLR2和TLR4mRNA在S组仅有低表达,在P组3h表达开始增高,伤后6～12h该两指标表达达到峰值（P＜0.05或P＜0.01）,而S组变化不明显.结论AHNP时,肺组织内该两种基因的表达上调;肺组织内TLR2和TLR4的基因表达增高可能在AHNP肺损伤的发生、发展中起作用.     

急性坏死性胰腺炎大鼠肠道黏膜屏障功能的损害及肠道细菌移位

目的观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时肠道黏膜屏障的变化和肠道细菌移位。方法选择SD大鼠，逆行胰胆管穿刺法诱导制备大鼠ANP模型并分为两组，分别为假手术组（SO）和坏死组（ANP）。术后24h，观察大鼠ANP模型的回肠黏膜通透性、回肠绒毛高度和黏膜厚度的变化，测定血浆D-乳酸浓度和血浆内毒素水平，并行脏器细菌培养。结果ANP组血浆内毒素水平较SO组升高（P〈0．01），细菌培养SO组均无阳性，ANP组细菌培养总阳性率为55．6％，其中以腹水细菌培养阳性率最高，为75．0％，菌种鉴定主要为肠球菌和变形杆菌。ANP组24h后血浆D-乳酸浓度高于SO组，差异有统计学意义（P〈0.01）。ANP组24h回肠黏膜发生病理形态学的改变，从绒毛高度和黏膜厚度测量值上观察发现ANP组肠壁明显变薄。结论本组实验中，大鼠ANP时的回肠黏膜病理形态学的变化提示ANP大鼠肠道的机械屏障明显受损；血浆D-乳酸浓度的显著上升，证明它可从功能上反映ANP大鼠肠道屏障功能的损害。大鼠ANP时的内毒素水平和脏器细菌培养阳性率的升高，证明内毒素血症和肠道细菌移位是由于早期肠道通透性升高和肠道屏障受损所致。     

急性出血坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜PIgR的表达变化

目的了解急性出血坏死性胰腺炎（acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis,AHNP）时肠黏膜多聚免疫球蛋白受体（polymeric immunoglobulin receptor,pIgR）表达变化及意义。方法将60只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和AHNP组,每组各30只,采用胰胆管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液诱导大鼠AHNP模型。假手术组行开腹手术翻动肠管后关腹。造模成功12h后处死大鼠,收集胰腺和小肠标本,进行病理检查,检测小肠内容物分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A,sIgA）含量,用Western blotting法检测小肠黏膜pIgR蛋白的表达。结果与假手术组比较,急性出血坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜和胰腺发生病理损伤,小肠内容物sIgA含量显著下降（P〈0.05）,小肠黏膜pIgR的表达水平显著降低（P〈0.001）。sIgA与pIgR显著正相关（P〈0.01）。结论急性出血坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜pIgR表达下调在sIgA所介导的肠黏膜免疫屏障功能障碍中可能起重要作用。     

急性出血坏死性胰腺炎死亡因素的分析(附112例报告)

目的探讨急性出血坏死性胰腺炎（ＡＨＮＰ）的死亡因素。方法将１１２例病人分为死亡组和存活组,对有关预后指标进行对比和统计学处理。根据ＣＦ或术中所见将胰腺坏死的程度分为轻,中,重三级。比较每个级别保守治疗和手术治疗死亡率的差异及两种手术方式死亡率的差异。结果病人的平均年龄、性别比、发病时间极为相近。早期休克、早期ＡＲＤＳ及体温、血象和血糖值显著升高的发生率在两组间差异无显著意义与死亡有关的主要因素为：①胰腺坏死严重;②治疗方案不当;③手术方式不妥。结论对胰腺轻度和中度坏死的病例宜以保守治疗为主。对重度坏死的病例应先严格保守治疗４８～７２小时,无效果者宜及时中转手术治疗。术前需纠正休克或成人呼吸窘迫综合症（ＡＲＤＳ）,术中应充分游离胰腺,并行十二指肠造瘘。如此可明显降低病人的死亡率和各种并发症的发生率,最大限度地保留胰腺内外分泌功能。     

早期应用L-精氨酸治疗急性出血坏死性胰腺炎的实验研究

目的: 探讨早期应用L-精氨酸对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)的治疗作用. 方法: 经大鼠胰胆管注射牛磺酸钠制备AHNP模型,分别静注L-精氨酸、生理盐水、山莨菪碱;观察血清淀粉酶、白介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)改变及胰腺的病理改变. 结果: 应用L-精氨酸后,能升高血NO浓度,清除氧自由基,降低血清IL-6水平,降低血清淀粉酶,改善胰腺病变,其作用优于山莨菪碱. 结论: 早期应用一定剂量的L-精氨酸对AHNP具有一定的治疗效果.     

乌司他丁区域动脉灌注治疗急性出血坏死性胰腺炎的研究

目的　观察乌司他丁 (UTI)对急性出血坏死性胰腺炎 (AHNP)大鼠的治疗作用。方法　 96只AHNPSD大鼠分成 4组 ,A组 :对照 ;B组 :区域动脉生理盐水 ;C组 :静脉UTI组 ;D组 :区域动脉UTI。 6、2 4h测血清淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶 (PL)A2、超氧化物歧化酶 (SOD)、内毒素、丙二醛 (MDA)、血栓烷 (TX)B2、6 Keto PGF1、可溶性白细胞介素 (sIL) 2受体 (R)、肿瘤坏死因子(TNF) α、IL 6、IL 8。结果　D组的血清淀粉酶、脂肪酶、PLA2、sIL 2R、TNF α、IL 6、IL 8、内毒素、MDA和TXB2 /6 Keto PGF1α低于其他组 ;SOD高于其他组 (P <0 .0 5 )。结论　区域性动脉灌注UTI对AHNP大鼠具有良好的治疗作用 ,能清除释放入门静脉血内的细胞因子和氧自由基 ,稳定TXB2 /6 Keto PGF1α的比值 ,减轻胰腺腺泡细胞超微结构的破坏。     

急性坏死性胰腺炎肾损伤的机制及早期生长抑素治疗后的影响

目的 探讨急性坏死性胰腺炎早期肾损伤的发病机制及早期生长抑素治疗后的改变。方法 用３．５％牛磺胆酸钠经胰胆管逆行注射２．５ｍｌ／ｋｇ建立大鼠ＡＮＰ模型，观察生长抑素治疗前后血中炎性介质和细胞因子的变化和肾病理变化。结果 ＡＮＰ早期体内内毒素，淀粉酶，磷脂酶Ａ２，ＴＮＦ－α，ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＩＬ－１２升高，生长抑素治疗后明显降低，两组差别有显著性意义。