上皮型钙黏蛋白在胰腺癌中的表达和作用

目的：研究上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）在胰腺导管腺癌中的表达及临床意义。方法：收集我院2001年1月至2006年6月间手术切除的60例胰腺导管腺癌石蜡标本,制成组织芯片,应用EnVision免疫组化技术检测上皮型钙黏蛋白的表达,结合临床病理资料进行分析。结果：正常胰腺组织细胞膜上皮型钙黏蛋白染色强阳性,癌细胞膜染色降低或缺失,上皮型钙黏蛋白表达在正常组织和癌组织中有显著差异（P〈0.01）。37例（61.7%）胰腺癌上皮型钙黏蛋白表达降低,上皮型钙黏蛋白表达降低与肿瘤转移、组织分化程度、TNM分期和预后密切相关（P〈0.05）。结论：上皮型钙黏蛋白表达降低可能是评判胰腺癌恶性程度、转移和预后的较好指标。     

中下段直肠癌E-钙黏附素表达与淋巴结微转移的关系研究

目的:分析中下段直肠癌E-钙黏附素(E-cadherin)表达与淋巴结微转移的关系。方法:应用CK-20免疫组化技术,对56例中下段直肠癌中661枚淋巴结微转移状况进行检测,同时观察肿瘤组织中E-钙黏附素的表达情况。结果:HE染色检测出29例中的190枚淋巴结呈转移,其CK-20免疫组化检测均呈阳性,后者在该29例中另检出12例55枚淋巴结呈阳性;在27例HE染色未检出淋巴结转移者中,有8例12枚淋巴结免疫组化检测呈阳性。20例(36%)67枚(10%)淋巴结检出微转移。中下段直肠癌E-钙黏附素表达阴性率为44.6%(25/56)。中下段直肠癌E-钙黏附素表达阴性与浸润深度(P=0.028)、分化程度(P=0.012)和淋巴结转移(P=0.007)密切相关。20例检测出淋巴结微转移的癌组织中14例(70%)E-钙黏附素表达阴性,而36例未检测出淋巴结微转移的癌组织中仅有11例(30.6%)E-钙黏附素表达阴性;二者差异有统计学意义(P=0.004)。结论:中下段直肠癌E-钙黏附素表达下调参与了淋巴结微转移的发生。     

E-cadherin和Slug在胃癌组织中的表达及意义

目的：探讨胃癌患者肿瘤组织中E-cadherin及Slug的表达与肿瘤病理特征及预后的关系。方法：免疫组化检测82例胃癌患者瘤组织E-cadherin及Slug的表达,并分析它们与患者的病理特征及生存时间的关系。结果：E-cadherin保留表达率为47.6%,Slug阳性表达率为39.0%。E-cadherin的表达率差异与患者的N分期有关,Slug的阳性表达率差异与患者的性别、T分期及N分期有关（均P<0.05）;在E-cadherin表达保留组,Slug的表达与N分期、M分期、静脉侵袭、血行性转移和腹膜复发有关,而在E-cadherin表达降低组,Slug的表达与T分期有关（均P<0.05）;E-cadherin表达保留患者5年生存率高于E-cadherin表达降低患者（79.5% vs. 60.5%）,Slug阳性患者的5年生存率低于Slug阴性患者（59.4% vs. 74.0%）（均P<0.05）;E-cadherin表达保留组中,Slug阳性患者5年生存率低于阴性患者分别为（48.4% vs. 87.5%）（P<0.05）,而E-cadherin表达降低组中,Slug阳性及阴性患者生存率无统计学差异（58.3% vs. 68.4%）（P>0.05）。结论：E-cadherin及Slug的表达主要与胃癌TNM分期有关;E-cadherin表达保留的患者中Slug的阳性表达对不良预后有预测意义。

     

Krüppel 样转录因子 9 在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Krüppel样转录因子9(KLF9)在胰腺癌中的表达并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数、预后的关系。方法:收集200例配对的胰腺癌组织与癌旁组织标本,分别用RT-PCR(28对)、Westernblot(4对)和免疫组化(全部标本)检测KLF9的表达,分析KLF9的表达水平与患者临床病理参数以及生存率的关系。结果:RT-PCR结果显示,在28例配对标本中,21例(75%)胰腺癌组织中KLF9m RNA的表达水平明显低于其癌旁正常胰腺组织。Westernblot结果显示,与癌旁正常胰腺组织比较,胰腺癌组织中KLF9蛋白表达水平明显下调。免疫组化显示,在胰腺癌组织中KLF9的染色强度明显减弱。与患者临床病理参数关系分析结果显示,KLF9的表达水平与肿瘤的分化程度(P=0.008)和血管侵犯(P=0.006)有关。生存分析显示,KLF9阳性表达患者1、2、3年总生存率明显高KLF9阴性表达患者(41%、31%、16%vs.18%、6%、6%)、中位生存时间明显长于KLF9阴性表达患者(21.05个月vs.11.82个月)(均P0.05)。结论:KLF9在胰腺癌中表达下调,且可能与不良预后密切相关。     

胰腺癌转移抑制相关基因的研究进展

恶性肿瘤的侵袭与转移是由一系列基因调控系统所组成，单纯某种机制难以将基因完全归类，故目前尚无概念明确的“肿瘤转移抑制基因”，仅认为一部分能够抑制肿瘤转移的基因，称为肿瘤转移抑制相关基因(metastasis—suppressor gene)。反之，称为肿瘤转移促进相关基因(metastasis-enhance gene)。肿瘤抑制相关基因主要是抑制     

E－cadherin在胃癌及其转移淋巴结中的免疫组化研究

目的：探讨E－cadherin(E-cad)在胃癌原发灶的表达与其生物学行为及淋巴结转移规律的关系,方法：采用免疫组化（SABC）法观察E－cad在10例正常胃组织和68例胃癌原发灶中的表达情况,对胃癌标本行系统病理学检查,结果：正常胃组织均显示清楚的细胞膜染色,胃癌原发灶及淋巴结转移灶中E－cad异常表达率分别为52．9％（36／68）和63．2％（24／38）（P＞0．05）,均和正常胃组织有显性差异（P＜0．01）,E－cad异常表达率与胃癌类型无关（P＞0．05）和PTNM分期及淋巴转移密切相关（P＜0．05）,结论：E－cad基因为一肿瘤抑制基因,是反映胃癌生物学行为,预测胃癌转移潜能有价值的指标。     

LSD1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白在结肠癌中的表达及其意义

目的：探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（LSD1）、E-钙黏蛋白（E-cad）、N-钙黏蛋白（N-cad）在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：收集2006年2月—2008年12月于中南大学湘雅医院行手术切除的结肠癌标本108例,采用免疫组化技术检测结肠癌组织中LSD1、E-cad、N-cad的表达,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果：全组LSD1、E-cad、N-cad的阳性表率达分别为66.7%（72/108）,85.2%例（92/108）、41.7%（45/108）。LSD1在较晚TNM分期、远处转移的结肠癌组织中的表达率明显增高,而E-cad则相反（均P<0.05）,N-cad的表达在各项临床病理因素分组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。LSD1与E-cad在结肠癌组织中的表达呈明显负相关（r=-0.318,P=0.001）,与N-cad的表达无明显相关性（r=0.182,P=0.06）。LSD1的阳性表达组和E-cad的阴性表达组患者总生存率明显低于各自的阴性表达组与阳性表达组（均P<0.05）,N-cad表达与否与患者总生存率无明显关系（P=0.410）。结论：LSD1和E-cad的表达与结肠癌的转移有密切关系,阳性表达LSD1和阴性表达E-cad的结肠癌预示预后不良。     

E-cadherin和nm23-H1的表达及其临床意义在胰腺癌

目的探讨上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和转移抑制基因（nm23-H1）表达与胰腺癌侵袭转移的关系。方法应用免疫组织化学技术SP法，检测31例癌组织中E-cadherin和nm23-H1的表达水平。结合肿瘤的侵袭转移能力、分化程度和分期等进行分析。结果31例胰腺癌组织中E-cadherin和nm23-H1的表达强度均低于对照的胰腺组织；E-cadherin和nm23-H1的表达强度与胰腺癌的远处转移能力密切相关；胰腺癌中E-cadherin和nm23-H1的表达具有明显正相关。结论E-cadherin和nm23-H1的表达水平能反映胰腺癌的侵袭转移能力。两种蛋白的表达水平之间呈明显正相关。联合检测两种蛋白在胰腺癌组织中的表达，对临床判断胰腺癌的预后可能有一定的意义。     

TAp63在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨TAp63在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别real-time PCR和Western blot检测TAp63 m RNA与蛋白在21例胰腺癌及其配对癌旁组织、3种胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、Bx PC3)及正常胰腺细胞(HPDE6-C7)中的表达;用TAp63-si RNA转染PANC-1细胞后,观察TAp63 m RNA与蛋白表达的变化,并用MTT和Brd U法检测转染后PANC-1细胞的增值情况。结果:胰腺癌组织中TAp63 m RNA表达量明显低于癌旁正常胰腺组织(t=2.572,P=0.0158);TAp63m RNA与蛋白在3种胰腺癌细胞株中的表达量均明显低于正常胰腺HPDE6-C7细胞(均P0.05)。与未处理的PANC-1细胞比较,转染TAp63-si RNA后的PANC-1细胞TAp63 m RNA与蛋白明显降低,但细胞增殖与DNA合成能力均明显增强(均P0.05)。结论:TAp63在胰腺癌组织与细胞中表达降低,且表达量越低,细胞生长能力越强。     

奥曲肽对胰腺癌细胞Survivin表达的调节

目的　将生长抑素受体 2 (SST2R)基因转染至胰腺癌细胞株PC 3细胞 ,探索奥曲肽对转染SST2R基因前后PC 3细胞凋亡抑制因子 (Survivin)表达量的调节作用。方法　采用脂质体将SST2R基因转染至PC 3细胞 ,免疫细胞化学检测其转染效果。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法半定量检测不同浓度 (0 .10、0 .2 0、0 .40、0 .80mg/L)奥曲肽对PC 3细胞转染SST2R基因前后Survivin表达量的调节。结果　转染SST2R基因PC 3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽 (0 .2 0、0 .40、0 .80mg/L)作用下分别为0 .5 5 2± 0 .0 5 9、0 .465± 0 .0 5 0、0 .3 96± 0 .0 68,未转染SST2R基因PC 3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽 (0 .2 0、0 .40、0 .80mg/L)作用下分别为0 .745± 0 .0 93、0 .667± 0 .0 66、0 .63 7± 0 .0 80 ,相同剂量奥曲肽对转染组PC 3细胞Survivin表达量的下调作用更为明显 (P <0 .0 5 )。结论　生长抑素用于PC 3细胞其效果不佳可能与其SST2R下调有关 ,转染SST2R基因后可增加胰腺癌细胞SST2R的表达量 ,同时下调了Survivin表达量 ,它可增强生长抑素对胰腺癌细胞株杀伤力。     

MKK4腺病毒载体的构建及其对胰腺癌细胞增生和浸润能力的影响

目的 观察MKK4对胰腺癌细胞增生和浸润能力的影响.方法 采用Western blot检测常见胰腺癌细胞株中MKK4的表达;构建MKK4的腺病毒载体,感染不表达MKK4的胰腺癌细胞株,采用胸腺嘧啶标记法观察外源性MKK4表达对细胞增生能力的影响,采用体外细胞浸润实验观察外源性MKK4表达对细胞浸润能力的影响.结果 在胰腺癌细胞株AsPC1、BxPC3、Hs766T、MiapaCa2、Pancl中,MKK4在AsPC1和BxPC3细胞中表达缺失.成功构建MKK4的腺病毒载体.以腺病毒LacZ感染作对照,通过胸腺嘧啶标记法观察到AsPC1、BxPC3细胞感染MKK4腺病毒后,细胞增生能力增加53%、61%(P＜0.05);通过体外细胞浸润实验观察到细胞浸润能力增强(8.2±2.7)倍、(15.7±1.6)倍(P＜0.01).结论 MKK4在胰腺癌细胞中表达可增加其增生和浸润能力,具有潜在癌基因作用.     

基质金属蛋白酶-9和色素上皮衍生因子在胰腺癌侵袭转移中的作用

目的 观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和色素上皮衍生因子(PEDF)基因表达在胰腺癌(PC)侵袭转移中的作用。方法 应用免疫组织化学法检测35例胰腺癌标本中癌细胞的MMP-9和PEDF的表达,统计分析两种分子标记物与胰腺癌细胞MMP-9和PEDF的表达。结果 胰腺癌组中MMP-9和PEDF表达率分别为71.4％和34.3％,MMP-9高表达率和PEDF低表达率与浸润范围、淋巴转移和远处转移呈正相关(P＜0.05)。MMP-9与PEDF表达呈负相关(P＜0.01)。结论 MMP-9在胰腺癌侵袭转移中起促进作用,PEDF可抑制肿瘤生长,PEDF低表达可能通过上调MMP-9的表达,从而促进胰腺癌的侵袭转移。     

缺氧微环境对胰腺癌细胞发生上皮向间叶转化的诱导作用

目的 探讨胰腺癌细胞在缺氧微环境中通过发生上皮向间叶转化(EMT)从而获得侵袭性表型的可能机制.方法 在缺氧微环境下培养胰腺癌细胞Pane-1、Transwell侵袭小室对比检测细胞在缺氧微环境下侵袭能力的变化情况.Western blot、免疫荧光检测缺氧对Panc-1细胞上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测缺氧对EMT诱导因子Snail表达的影响.将编码HIF-1α cDNA的真核表达载体pCD-NA 3.1-HIF-1α瞬时转染Panc-1细胞,Western blot检测HIF-1α对E-cadherin、vimentin表达的影响.结果 常氧组细胞每高倍镜视野穿透数为(84±3)个,缺氧组为(121±5)个,差异有统计学意义(P<0.01).Panc-1细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对值分别为(0.59±0.04、54.00±0.05、0.45±0.10、0.36±0.03);vimentin蛋白的相对值分别为:(0.36±0.05、0.41±0.04、0.48±0.06、0.58±0.05),缺氧同常氧组比较差异有统计学意义(P<0.05).缺氧微环境下Panc-1细胞Snail mRNA的表达量升高,在缺氧第3天后差异具有统计学意义(P<0.05).Panc-1细胞转染HIF-1α前后,E-cadherin蛋白的相对值分别为0.63±0.05、0.47±0.07;Vvi-mentin蛋白的相对值分别为0.47±0.07、0.32±0.04,转染前后差异有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧微环境可能通过活化HIF-lα、Snail等转录因子,促进胰腺癌细胞发生上皮向间叶转化,产生侵袭性表型.     

成纤维细胞生长因子5对胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响

目的:观察成纤维细胞生长因子5 (FGF5)对人胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响。方法:利用高表达FGF5的人胰腺癌PANC-1细胞系(北京大学第一医院外科大肠癌实验室提供),通过短发卡RNA(shRNA)稳定转染技术,构建FGF5低表达细胞系PANC-1-FGF5 -,并以未转染质粒和转染对照粒的PANC...     

乙酰肝素酶2 mRNA和蛋白在胰腺癌中的表达及其意义

目的探讨乙酰肝素酶2（Hpa2）mRNA和蛋白在胰腺癌中的表达及其意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学染色法检测54例胰腺癌组织中Hpa2mRNA和蛋白的表达。结果正常胰腺组织中Hpa2mRNA及蛋白均未检出，胰腺癌组织中Hpa2mRNA的表达及患者的年龄（〈60岁20／27：≥60岁24／27）、性别（男26／30：女18／24）、肿瘤的直径（〈2cm15／20：≥2cm29／34）均无关（P〉0．05），在临床分期高的肿瘤（35／39，89．74％）中的表达明显高于分期低（9／15，60．00％），包膜完整（6／12，50．00％），临近组织无浸润（7／12，58．33％）和无远处淋巴结转移（4／10，40．00％）者（P〈0．05）。Hpa2蛋白的表达与患者的年龄（〈60岁21／27：≥60岁22／27）、性别（男23／30：女20／24）、肿瘤的直径（〈2cm17／20：≥2cm26／34）均无关（P〉0．05），而Hpa2蛋白在临床分期高（35／39，89．74％），包膜不完整（37／42，88．09％），浸润临近组织（38／42，90．48％），有淋巴结转移（39／44，88．64％）的肿瘤中的表达明显高于分期低（8／15，53．33％），包膜完整（6／12，50．00％），临近组织无浸润（5／12，41．66％）和无淋巴结转移（8／26，30．77％）肿瘤中的表达（P〈0．05）。结论Hpa2mRNA和蛋白与肿瘤的临床分期、包膜完整与否、浸润临近组织、远处淋巴结转移有关，可以作为判断侵袭、转移的指标。     

血管形成抑制剂3TSR对胰腺癌的治疗作用

目的探讨应用血管形成抑制剂3TSR治疗胰腺癌的疗效。方法在体外培养条件下观察3TSR(1μmol/L)、键择(Gem,1μmol/L)和3TSR+Gem(1μmol/L 3TSR,1μmol/L Gem)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。24只免疫缺陷雌鼠胰腺原位接种胰腺癌细胞后,随机分为4组,分别腹腔注射生理盐水(0．2 ml),3TSR(3mg/kg体重)、Gem(150mg/kg体重)和3TSR+Gem(3mg/kg体重3TSR,150mg/kg体重Gem),连续3周后,观察肿瘤体积、肿瘤坏死面积、肿瘤微血管。结果体外培养时3TSR对胰腺癌细胞无增殖抑制及诱导凋亡的作用,3TSR+Gem在体外无协同作用。体内实验时3TSR组、Gem组和3TSR+Gem组肿瘤体积较对照组明显降低；3TSR治疗组肿瘤坏死面积百分比为(53．46±3．23)%,较对照组扩大94．5%；Gem组肿瘤坏死面积百分比明显减小,为(6．75±1．60)%,但3TSR+Gem组肿瘤坏死面积百分比较单纯Gem治疗组明显增加；3个处理组肿瘤平均微血管数分别为31．8±10．9、47．0±17．0、36．9±8．3；微血管面积分别为(289．3±128．7)、(408．7±185．3)、(278．4±150．3)μm~2；微血管密度(3．4±0．9)%、(6．0±1．7)%、(3．7±1．3)%,均显著低于对照组(P＜0．05)。结论3TSR能抑制肿瘤新生血管形成,具有显著减少肿瘤体积、肿瘤血管和增加肿瘤细胞坏死的作用,但与化疗药物Gem合用没有明显提高胰腺癌的治疗效果。