苯并(a)芘对大鼠睾丸支持细胞连接蛋白基因表达的影响

[目的]探讨苯并(a)芘(BaP)对大鼠原代培养睾丸支持细胞的连接蛋白(connexin 43、occludin、ZO-1、N-cadherin)基因mRNA表达的影响及可能机制. [方法]取出生21d SD大鼠睾丸组织,分离支持细胞,细胞分离后,均按照1.5×106个/mL浓度接种于细胞培养板中.培养48h后,以0、1、10、50、100 μmol/L浓度的BaP同时染毒于原代培养的大鼠支持细胞12h,每个剂量设置6个平行孔.检测支持细胞活力、凋亡蛋白caspase-3活性,以及连接蛋白基因的mRNA表达. [结果]在BaP 50 μmol/L时,支持细胞活力降低(和对照组相比,P＜0.01);在BaP 10 μmol/L时caspase-3活性升高,连接蛋白connexin 43、occludin、和ZO-1基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P＜0.05).在BaP 100 μmol/L时连接蛋白N-cadherin基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P＜0.05).加入caspase-3抑制剂后,BaP所诱导的连接蛋白基因表达下降,且随caspase-3活性变化而发生改变. [结论]BaP能诱导大鼠支持细胞连接蛋白mRNA表达下降,BaP诱导的caspase-3活性上升是调节连接蛋白mRNA表达下降的可能机制.     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制。方法用H2O2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化。结果与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P<0.05)和凋亡率下降(P<0.01),并可抵抗H2O2诱发的PC12细胞Caspase-3活性增强(P<0.01)。结论葡萄籽原花青素可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3活化有关。     

镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和p53表达关系

目的研究镉致细胞凋亡过程中Caspase-3和p53表达的变化,探讨Caspase-3和p53基因在镉致细胞凋亡中的作用。方法离体培养的转化人胚肾293细胞以40μmol/L氯化镉分别处理0~24h,N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Caspase-3特异性三肽抑制剂(Z-DEVD-fmk)预处理组分别在镉处理前以5mmol/LNAC和10μmol/LZ-DEVD-fmk预处理24h和1h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测Caspase-3和p53水平,流式细胞Anexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率。结果40μmol/L镉处理293细胞,6~24hCaspase-3基因mRNA水平显著增高,0~24h内p53基因mRNA无显著变化。40μmol/L镉处理293细胞,6~24h内Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著增强,与镉处理24h组比较,NAC预处理组Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著减弱(P<0·01),Z-DEVD-fmk预处理组无明显变化(P>0·05);40μmol/L镉处理293细胞,p53蛋白在6~24h表达增强(P<0·01),与单纯镉处理24h组比较,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组p53蛋白表达无显著变化(P>0·05)。结论Caspase-3基因在镉诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响机制研究

目的探讨马鞭草总黄酮诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及机制。方法采用不同质量浓度的马鞭草总黄酮处理体外培养的肝癌HepG-2细胞,CCK-8检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法分析Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Apaf-1和Survivin蛋白表达水平;比色法检测caspase-3、caspase-9相对活性,caspase-3、caspase-9抑制剂(Ac-DEVD-CHO和Z-LEHD-FMK)验证相关的调控信号通路。结果与对照组比较,马鞭草总黄酮呈剂量依耐性抑制肝癌HepG-2细胞的活性,促进HepG-2细胞凋亡,能提高Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1蛋白水平,降低Survivin蛋白水平,能增加caspase-3、caspase-9的活性,差异均有统计学意义(P0.05),马鞭草总黄酮对Caspase-8蛋白水平影响不明显,差异无统计学意义(P0.05);caspase-3、caspase-9抑制剂能逆转马鞭草总黄酮对HepG-2细胞的活性的抑制(P0.05)。结论马鞭草总黄酮诱导细胞凋亡可能与增强Caspase-3、Caspase-9酶相对活性有关。     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡的影响

目的 研究RNA干扰Caspase-3基因对镉致转化人胚肾293细胞凋亡的影响,探讨Caspase-3基因在镉致细胞凋亡中的作用.方法 选择转化人胚肾293细胞进行体外培养,以小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)处理细胞36 h后,再以40 μmol/L氯化镉分别处理12～24 h,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测Caspase-3基因表达水平和蛋白表达水平,以流式细胞仪Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 40μmol/L氯化镉处理转化人胚肾293细胞12 h后,Caspase-3基因mRNA水平显著增高,相对分子质量为20 kDa的活性亚单位条带显著增强;24 h后,细胞凋亡率显著增加(n=4,P＜0.01),RNA干扰显著抑制镉诱导的细胞Caspase-3基因mRNA和相对分子质量为20 kDa的蛋白表达水平,使细胞凋亡率显著降低(n=4,P＜0.01).结论 体外实验表明,RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡具有明显的抑制作用,Caspase-3基因在镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡过程中起着重要的作用.     

醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶-6、-9活性的影响

目的了解醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶(caspase)-6、-9活性的影响.方法 PC12细胞分别不同时间(12、24、36、48、60、72 h)暴露于不同浓度的醋酸铅(0、62.5、125.0、20.0、500.0 μmol/L),用比色法检测其caspase-6、-9的活性.结果 PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅24h可见caspase-6活性升高,48h达高峰(为对照组的5.75倍,P＜0.01),至72 h仍高于对照组(P＜0.01).PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅12 h,caspase-9活性已升高,36 h达高峰(约为对照组的7.48倍,P＜0.01),至60h已降至与对照组无差别的水平.PC12细胞暴露于不同浓度的醋酸铅48h(caspase-6)和36 h(caspase-9),可见caspase-6、-9活性具有浓度依赖性的增加.结论醋酸铅可引起caspase-6、-9活性的升高.     

白藜芦醇通过TFEB调节细胞自噬的机制研究

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和TFEB总蛋白水平以及TFEB在核提取液中的水平;荧光显微镜观察GFP-LC3融合蛋白在细胞内分布;荧光定量PCR检测TFEB及其靶基因mRNA水平。结果白藜芦醇处理24 h后HeLa细胞活性降低,激活型Caspase-3蛋白水平增加。白藜芦醇处理增加细胞LC3-Ⅱ蛋白水平,在12h达到高峰,且呈剂量依赖性变化,同时GFP-LC3荧光在细胞内呈点状聚集。白藜芦醇处理增加总细胞和核提取液中TFEB蛋白水平,并增加TFEB自身mRNA及其靶基因mRNA水平。结论白藜芦醇可能通过TFEB在转录水平调节细胞自噬。[营养学报,2019,41(4):374-378]     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

分型基因芯片检测疟原虫的研制及应用

目的 研制快速检测间日疟原虫和恶性疟原虫等并可进行分型的基因芯片。方法 筛选疟原虫高度保守而且具有种属特异性的瓣RNA基因片断为探针，制备疟原虫诊断和分型的基因芯片；检测时提取标本中的疟原虫核酸，用不对称PCR技术进行扩增和荧光标记，然后与检测芯片杂交，进行扫描和分析。结果 建立的疟原虫检测芯片能特异和敏感的对间日疟原虫和恶性疟原虫诊断及分型。结论 成功制备用于疟原虫快速侦检和分型的基因芯片，对疟疾的预防和控制具有重要意义。     

纳米级与微米级二氧化硅粉尘对小鼠胚胎毒性的比较研究

目的比较研究纳米级(nm-)与微米级二氧化硅粉尘(μm-SiO2)对小鼠胚胎的影响,并观察胚胎Connexin32(Cx32)和Cx40基因有无点突变改变。方法5个实验组(零剂量粉尘组、μm-SiO250mg/m3组、μm-SiO2200mg/m3组、nm-SiO250mg/m3组、nm-SiO2200mg/m3组)共25只雌性小鼠,妊娠0日(E0)至E17日连续呼吸道染尘,观察妊娠期间母鼠体重变化,E18日取出胚胎,观察胚胎发育情况,并采用常规聚合酶链式反应(PCR)、聚合酶链式反应-单链构像多态性(PCR-SSCP)技术对胚胎的Cx32和Cx40基因进行点突变检测。结果E18日,各染尘组的母鼠体重均显著低于对照组;各染尘组的胚胎数、活胎数、胚胎体重显著低于对照组,nm-SiO2200mg/m3组活胎数显著低于nm-SiO250mg/m3组和μm-SiO2200mg/m3组,nm-SiO2200mg/m3组胚胎体重显著低于μm-SiO2200mg/m3组;nm-SiO2200mg/m3组死胎率和吸收胎率均显著高于对照组。Cx32和Cx40基因经检测未发现有突变者。结论SiO2粉尘具有小鼠胚胎毒性,微米级粒子粒径改变为纳米级后,毒性作用增强,且纳米级SiO2粉尘对小鼠胚胎有致死作用。两种粒径的二氧化硅粉体均未发现有致Cx32和Cx40基因点突变。     

贵州省神经管畸形与基因多态性及环境因素关系

目的探讨贵州省神经管畸形(NTDs)高发的可疑危险因素,揭示多因素在NTDs发生中的作用。方法采用1:1匹配的病例对照研究,选取9个地区(州、市)63所医院NTDs患儿的母亲110例和正常儿母亲110人进行问卷调查和血样采集,采用PCR-RFLP和PCR产物测序验证HKⅡ基因第15外显子C736G、INSR G6244A基因多态性、PC-1 K121Q基因多态性;运用SPSS16.0软件进行单因素及多因素logistic回归分析。结果χ²检验分析发现,INSR G6244A在病例组和对照组中的基因型频率分布有统计学差异(P<0.05),HKⅡ基因第15外显子和PC-1 K121Q基因多态性在两组间的基因频率分布无统计学差异(P>0.05);多因素条件logistic回归分析显示,妊娠剧吐、食用发芽土豆、妊娠期糖尿病和INSR G6244A基因多态性与NTDs的发生相关,OR及其95%CI 分别为3.62(1.46～8.95)、4.01(1.65～9.72)、3.65(1.41～9.48)、3.10(1.52～6.33);母亲高文化程度是NTDs的保护因素,OR及其95%CI 为0.45(0.28~0.73)。结论贵州省NTDs发生的主要危险因素为母亲妊娠剧吐史、食用发芽土豆、妊娠期糖尿病和INSR G6244A 基因多态性,而母亲高文化程度是其独立保护因素。     

生长期缺锌对大鼠海马Egr家族基因表达影响

目的 研究锌缺乏对生长期大鼠海马Egr家族(Egr1、Egr2、Egr3、Egr4)基因表达的影响,探讨缺锌影响学习记忆的基因转录调节机制.方法 选取刚出生的Sprague-Dawley大鼠3窝,每窝1只母鼠、10只仔鼠,3窝母鼠与仔鼠体重相近,仔鼠雌雄各半;随机分为3组:缺锌组(ZD)、配饲组(PF)、对照组(ZA),实验期60 d;用实时荧光定量PCR检测大鼠海马Egr家族(Egr1、Egr2、Egr3、Egr4)mRNA的表达.结果 大鼠海马Egr1、Egr3、Egr4基因表达在3组大鼠间差异有统计学意义(F值分别为13.631,24.435,21.825,),ZD组(2.44×10~(-3),8.72×10~(-3),1.88×10~(-2))表达量低于PF组(3.13×10~(-3),1.60×10~(-2),2.68×10~(-2))、ZA组(3.96×10~(-3),1.92×10~(-2),3.53×10~(-2)),且PF组低于ZA组;海马Egr2基因表达在各组间差异无统计学意义.结论 缺锌使海马锌指蛋白Egr1、Egr3、Egr4基因表达下调,是影响海马学习记忆的机制之一.     

基因芯片在妊娠相关疾病研究中的应用

基因芯片技术以信息量大、处理速度快、所需样品少、污染少等优点被广泛用于药物的筛选、新药的研制开发、疾病的诊断。该文通过几个方面对基因芯片在妊娠相关疾病中的应用加以综述。     

二噁英对HepG2和SPC-Al细胞P53和P38 MAPK基因表达的影响

[目的] 探讨二(口恶)英(TCDD)对人体肝癌细胞株(HepG2)和肺腺癌细胞株(SPC-A1)中P53基因和P38 MAPK基因表达的影响,并研究剂量与效应的关系.[方法] 用常规的细胞培养方法,利用RT-PCR方法对2种基因进行表达,并以β-actin作为内对照.对基因表达的强度进行比较分析.[结果] P38 MAPK基因在2种细胞中都有表达,在HepG2中,P38 MAPK基因表达随浓度1、 5、 10、 20 nmol/L增加先抑后扬(表达值分别为0.900、 0.820、 1.260、 0.898,P＜0.05),而在SPC-A1中差异无显著性(表达值分别为0.898、 0.919、 0.808、 0.846,P＞0.05).P53基因在人体肝癌细胞株(HepG2)中有表达,并随浓度增加而上调(表达值分别为0.764、 0.890、 1.099、 1.218、 1.405,P＜0.05)而在肺腺癌细胞株(SPC-A1)中未见表达.[结论] 二英对人体肝癌细胞株(HepG2)中P53基因和P38 MAPK基因有诱导作用,在肺腺癌细胞株(SPC-A1)中仅见对P38 MAPK基因有诱导作用,P53蛋白未见阳性表达.     

副溶血弧菌毒力基因和保守基因研究进展

对副溶血弧菌的毒力基因及其保守基因的研究现状进行综述,可从分子水平对鉴定副溶血性弧菌和确定菌株的毒力提供参考。     

韶关地区1242例新生儿耳聋易感基因筛查结果分析

目的研究韶关地区新生儿耳聋易感基因携带情况,为开展遗传咨询和建立耳聋防控体系提供科学依据。方法采用多重PCR联合导流杂交技术检测1 242例新生儿的4个耳聋基因的13种突变位点。结果耳聋基因携带者共检出53例(4. 27%,53/1 242),其中SLC26A4检出24例(1. 93%,24/1 242); GJB2检出19例(1. 53%,19/1 242); mt DNA检出8例(0. 64%,8/1 242); GJB3检出2例(0. 16%,2/1 242)。结论韶关地区人群最主要的耳聋基因是SLC26A4,IVS7-2A>G为其突变热点;其次是GJB2基因,235delC为其突变热点。对新生儿人群进行耳聋易感基因筛查,有助于遗传性耳聋的早发现、早干预,具有良好的临床应用价值。     

基于三维脑基因表达图谱的基因挖掘方法研究

目的为了研究帕金森氏病发病机理,探索从多元三维脑基因表达图谱的基因芯片数据中提取帕金森氏病的基因的方法。方法用一种统计学方法对小鼠基因芯片数据进行初步筛选及标准化,将实验数据分成两个集合,计算基因表达数据的标准差并按升序排列,选出排名最靠前的数个基因(本实验选取基因总数的10%),并对其进行评估。结果选出的这18个基因为更好的研究帕金森氏病发病机理提供了一个思路,且该基因挖掘方法也适合其他疾病机理的研究。     

陕西汉族人群细胞连接蛋白Cx37基因多态性分布

目的探讨心血管疾病相关的细胞连接蛋白37（Connexin37，Cx37）基因C1019T多态性在陕西汉族人群的分布。方法采用聚合酶链一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术，对116例无血缘关系的健康陕西汉族人的染色体进行检测，分析基因型频率、等位基因频率分布，并与其他种族进行比较。结果Cx37基因C1019T等位基因频率为：C=68．5％，T=31．5％；基因型频率为：C／C=63．8％，C／T=30．2％，G／G=6．0％；其中男性等位基因频率为：C=76．1％．T=23．9％；基因型频率为：C／C=59．2％，C／T=33．8％，G／G=7．0％；陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率和等位基因频率在男女之间差异无统计学意义，与瑞典人群相比差异有统计学意义（P〈0．05），而与日本、我国台湾人群相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率及等位基因频率与东方人种无差异，而有别于西方人种。