曲古抑菌素A通过p53转录激活途径诱导尤文肉瘤细胞凋亡

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制.方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）测定细胞增殖抑制率.流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化.免疫印迹法（Western-blot）检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶（cleaved-PARP）,p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达.实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响.结果：TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加.TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平.另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生.结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡.     

HDAC1 siRNA转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的:多项研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株有抑制增殖和诱导凋亡作用.而HDAC抑制剂对HDAC Ⅰ型和Ⅱ型均有抑制作用,在非小细胞肺癌细胞株中尚未明确HDACs中哪一类受抑制能影响肿瘤生长.本研究通过HDAC1 siRNA转染肺腺癌细胞株A549,观察HDACs中HDAC1对肺腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,明确HDAC1在肺腺癌细胞生长中的作用.方法:MTT法检测不同时间点HDAC1 si RNA转染对A549细胞体外增殖的影响,流式细胞术检测RNA干扰后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化.结果:HDAC1 siRNA转染A549细胞后,HDAC1在转录和表达水平均下降,组蛋白H4乙酰化表达增高.siRNA干扰后A549细胞的体外生长抑制呈时间依赖性,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论:HDAC1 siRNA转染能有效地抑制HDAC1在A549细胞中的表达,增加A549细胞中组蛋白的乙酰化,并影响A549细胞相关生物学行为,抑制肺腺癌细胞的生长,为HDAC1基因治疗应用于肺腺癌奠定了基础.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞的实验研究

  目的   目的: 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA) 体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的作用, 并探讨其可能机制。   方法  体外应用SAHA作用于人卵巢癌SKOV3细胞, MTT法检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平, 实时定量PCR方法检测p21、Bcl-2和Bax基因mRNA表达。   结果  经SAHA作用后的人卵巢癌SKOV3细胞生长受到抑制, 细胞凋亡增加(各实验组与对照组比较, 均P < 0.05), 呈剂量依赖性; 同时细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加, p21基因和Bax基因mRNA表达增加(各实验组与对照组比较, 均P < 0.05), 呈剂量依赖性, Bcl-2基因表达无明显变化(各实验组与对照组比较, 均P > 0.05)。   结论  SAHA体外可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖和诱导SKOV3细胞凋亡, 提高组蛋白乙酰化水平, 增加p21和Bax基因表达可能是其作用机制之一。      

TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究

目的观察曲古抑菌素A(tricho-statin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制。方法BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达。结果TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000)。TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调。结论TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一。     

三氧化二砷和曲古抑菌素A协同诱导HL-60细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60凋亡过程中的协同作用.方法 采用MTT法检测As2O3和(或)TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达.结果 As2O3和TSA联用较单独用药能明显抑制细胞,引起细胞周期阻滞和凋亡,Bax基因表达升高,Bcl-2基因表达降低,Bax/Bcl-2比值升高.结论 As2O3和TSA均能够引起HL-60凋亡,二者具有协同效应,其机制是引起细胞周期阻滞,且上调Bax与Bcl-2比值.     

曲古抑素A下调Bcl-2水平经线粒体途径诱导耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡

背景与目的 以铂类为基础的联合化疗是非小细胞肺癌目前首选的治疗方案,然而由于铂类药物的毒副作用和耐药的发生,限制了铂类药物的广泛应用.曲古抑素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂,能诱导肿瘤细胞生长抑制、分化、凋亡,并可以增强多种肿瘤细胞对铂类药物敏感性.本研究探讨TSA诱导耐顺铂人肺腺癌A549/CDDP细胞株凋亡的作用及机制.方法 中性红法测定TSA对A549/CDDP细胞毒性,荧光显微镜观察细胞DNA的变化,流式细胞仪分析细胞周期及线粒体膜电位的变化,分别转染Bcl-2表达质粒过表达Bcl-2和利用siRNA干扰Bcl-2表达.Western blot分析凋亡相关蛋白的变化.结果 TSAX对A549/CDDP细胞的IC50是(446.59±27.32)nmol/L,随着TSA浓度升高A549/CDDP细胞生长率明显下降.细胞凋亡在浓度为(125-500)nmol/L TSA处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.流式细胞仪检测发现TSA阻断细胞于S期,线粒体膜电位降低.Western blot结果显示,TSA处理细胞后,Bcl-2蛋白水平下降,而Bax表达上调,同时观察到caspase-3被激活.转染Bcl-2表达质粒可以抑制TSA诱导的细胞凋亡,而沉默Bcl-2表达可以增加细胞对TSA的敏感性.结论 TSA可能通过线粒体途径诱导A549/CDDP细胞凋亡.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对结肠癌细胞系HCT116和SW480增殖、周期和凋亡的影响,并对其分子作用机制进行初步探讨.方法:将不同浓度SAHA分别处理结肠癌HCT116和SW480细胞后,MTT法检测SAHA对HCT116和SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测HCT116和SW480细胞周期和细胞凋亡率,罗丹明(rhodamine) 123和二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HCT116和SW480细胞线粒体跨膜电位(Aψm)和活性氧(ROS)水平,Real-time PCR和Western blotting法检测乙酰化组蛋白3(Ac-H3)、p21、CyclinD1、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平.结果:SAHA作用于HCT116和SW480细胞48 h后,细胞增殖被抑制、细胞周期G1期比率升高、凋亡率升高(均P＜0.05),线粒体跨膜电位显著下降、细胞内ROS产生增多(均P＜0.05).与对照组比较,SAHA处理组p21和Bax mRNA增多、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达量减少(均P＜0.05),相关蛋白Ac-H3、p21和Bax增多,CyclinD1和Bcl-2减少(均P＜0.05).结论:SAHA抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其机可能与调节p21、CyclinD1和Bcl-2家族基因的表达、促进组蛋白乙酰化有关.     

PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡影响的机制探讨

  目的  探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期及凋亡的影响及分子机制研究。  方法  应用不同浓度PXD101处理培养的乳腺癌细胞株MCF-7, 通过赛唑蓝比色(MTT)法和平板克隆形成实验检测药物对细胞增殖的影响; HoechSt33342荧光染色法观察细胞形态变化; 流式细胞仪PI染色法检测细胞周期变化以及AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况; Westen blot检测p21、CyclinB1、PARP、Bcl-2以及Bax的蛋白表达。  结果  PXD101以剂量时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖; 荧光显微镜观察发现细胞核碎裂, 出现凋亡小体; 0、0.1、1、10μmol/L PXD101作用24 h后, G₂/M期细胞比例增加, 分别为(12.66±1.55)%、(20.63±1.32)%、(23.20±1.82)%、(32.19±2.37)%(P < 0.05), 凋亡细胞也增加(P < 0.05);p21表达增多, CyclinBl表达减少, PARP剪切明显增加, Bcl-2表达减少, Bax表达增加。  结论  PXD101在体外条件下能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖, 诱导细胞周期阻滞及凋亡, 并呈剂量依赖性。      

曲古抑菌素A抑制人脑肿瘤细胞增殖及提高p21和p27蛋白表达

背景和目的：研究提示组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A能诱导细胞凋亡,本研究拟探讨曲古抑菌素A对人脑肿瘤细胞的杀伤作用和机制。材料和方法：选用两种人脑肿瘤细胞株,一株为p53突变型的人胶质瘤细胞株T98G,另一株为p53野生型的人神经母细胞瘤细胞株SKNSH;采用SRB细胞毒测定方法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态,用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪定性和定量分析肿瘤细胞凋亡情况,应用Western印迹分析TSA作用前后,肿瘤细胞中高度乙酰化的组蛋白H3,H4,内源性p53蛋白,乙酰化p53蛋白,以及细胞周期相关蛋白p21,p27的变化。结果：TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制肿瘤细胞增殖,并引起高度乙酰化的组蛋白分子H3和H4集聚;用320nM的TSA作用肿瘤细胞24小时,即发生显著的肿瘤细胞凋亡;TSA刺激肿瘤细胞48小时内,p21和p27蛋白表达显著增强,其中p21蛋白水平在4小时后时即明显升高,8小时达高峰;p27蛋白水平升高发生在8小时后,而内源性p53蛋白水平和乙酰化的p53蛋白水平未发生变化。结论：TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人脑肿瘤细胞生长,其抗肿瘤生长机理可能是通过上调p21和p27蛋白水平实现的,而不受内源性p53基因状态和蛋白改变的影响。     

Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞系A549、NCI-H1299细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:以不同浓度的Vacquinol-1作用于A549和NCI-H1299细胞,应用CCK-8法检测其对细胞增殖能力的影响;以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）作用于细胞,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;Western blotting法检查凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化情况。结果:CCK-8结果显示Vacquinol-1能显著抑制A549、NCI-H1299细胞的增殖能力;并且流式细胞术检测结果显示Vacquinol-1能诱导A549、NCI-H1299细胞的凋亡;Western blotting结果显示Vacquinol-1促进A549、NCI-H1299细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:Vacquinol-1能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,并且通过激活线粒体通路诱导细胞凋亡。     

PAGE5对非小细胞肺癌细胞生长、凋亡和侵袭能力的影响

目的：探讨前列腺相关基因5（PAGE5）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法：采用实时定量PCR和Western blot方法检测37例NSCLC及其癌旁组织中PAGE5的表达;采用MTT法、流式细胞术、Transwell以及Western blot法检测转染PAGE5 siRNA对A549和H1299细胞生长、凋亡、侵袭以及Bax、Bcl－2和MMP－2表达的影响。结果：在37．84％（14／37）的肺癌组织样本中PAGE5基因表达上调。转染PAGE5 siRNA的A549和H1299细胞生长无明显变化、细胞凋亡显著增加、侵袭能力显著下降（P＜0．05）,Bax蛋白表达显著上调,Bcl－2和MMP－2蛋白表达显著下调（P＜0．05）。结论：PAGE5可能通过调控Bax、Bcl－2及MMP－2蛋白的表达影响NSCLC细胞的生长、凋亡与侵袭,有望成为肺癌诊断标志物及潜在的治疗靶点。     

青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的:探究青藤碱(SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P<0.05)。结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。     

Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A（TSA）促结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A（TSA）促结肠癌细胞凋亡的作用和机制。方法:选取结肠癌HCT116细胞和SW620细胞，体外培养并采用浓度梯度TSA处理。MTT法观察TSA对细胞的IC50和活力的影响；Western blot和免疫荧光染色观察TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中Ku70、acetyl-Ku70蛋白水平及胞内分布的影响；流式细胞术检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡的影响；Western blot检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:MTT结果显示TSA可浓度依赖性抑制结肠癌HCT116细胞和SW620细胞活力且其IC50值分别为1.023 μmol/L和1.076 μmol/L（P<0.05）；Western blot和免疫荧光染色结果显示TSA可显著上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中acetyl-Ku70的蛋白水平并促进其核转入（P<0.05）；流式细胞术结果表明TSA可促进结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡（P<0.05）；此外，Western blot结果显示TSA可明显上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05）。结论:结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中，TSA可能通过增强Ku70乙酰化并促进其核转入，发挥促凋亡作用，为以Ku70翻译后修饰调控为靶点的肿瘤治疗提供新策略和理论依据。     

顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究顺铂在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法测定顺铂对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪和Hochest33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测HPVE6的mRNA水平表达;WesternBlot测定HPVE6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表达。结果:顺铂抑制Hela细胞生长呈时效和量效关系;经10μg/ml顺铂分别在12、24、36、48小时作用Hela细胞,亚G1峰与对照组有显著性差异;RT-PCR提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的mRNA水平表达逐渐降低;WesternBlot提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低,p53、p21和Bax蛋白水平表达逐步升高,Bcl-2的表达无变化。结论:顺铂通过抑制HPVE6的表达,恢复p53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

防己诺林碱对肺癌H1299和A549细胞的作用及其分子机制研究

目的 探究防己诺林碱在肺癌中的作用及其分子机制。方法 MTS法检测经10、15、20、30、40和60 μM/L防己诺林碱处理的肺癌H1299和A549细胞的增殖情况,通过Caspase3、Caspase8和Caspase9活性检测试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。Western blot检测MAPK信号通路(p-Akt、PI3K、mTOR和Akt蛋白)、增殖和转移(MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1和P21蛋白)、周期和凋亡(Cyclin D2、Bcl2、MCL-1、Bax和p53蛋白)相关蛋白的表达情况,通过Real-time PCR检测PI3k、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2、MCL-1、Bax、Bcl2和TP53基因表达情况。结果 防己诺林碱会抑制肺癌H1299和A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase3、Caspase8和Caspase9酶活性。经防己诺林碱处理后,PI3K、p-Akt、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2蛋白表达降低,P21、MCL-1、Bax和p53蛋白表达升高,并且表现为剂量依赖性,但对Akt蛋白表达无影响;PI3K、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2基因表达降低,TP53、MCL-1和Bax基因表达增加。结论 防己诺林碱通过调控MAPK信号通路、增殖和转移、周期和凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

SK-7041, a new histone deacetylase inhibitor, induces G2-M cell cycle arrest and apoptosis in pancreatic cancer cell lines

A novel hybrid synthetic histone deacetylase inhibitor, SK-7041, was synthesized from hydroaxamic acid of trichostatin A (TSA) and pyridyl ring of MS-275. TSA and SK-7041 both induced apoptosis and G2-M cell cycle arrest in pancreatic cancer cell lines. The expressions of p21 and cyclin D2 were up-regulated and that of cyclin B1 was down-regulated by TSA or SK-7041. The expression levels of Mcl-1 and Bcl-XL but not those of Bcl-2, Bax, and Bak were suppressed by TSA or SK-7041 treatment. SK-7041 or TSA induced apoptosis and G2-M cell cycle arrest by up-regulating p21 and down-regulating cyclin B1, Mcl-1, and Bcl-XL.