低氧与去铁敏对移植供肝作用的对比性研究

目的 对比研究低氧预处理及去铁敏预处理对移植供肝保护作用的特点,探索一种适合指导临床的供肝保护方法.方法 SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、自体肝移植组(AT组)、去铁敏预处理组(DP组)与低氧预处理组(HP组).检测各组术后24 h血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)、肝组织形态学改变并检测肝组织中低氧诱导因子-1(HIF-1a)及丙二醛(MDA)的含量.结果 与S组相比AT组、DP组、HP组术后血清ALT、AST、ALP明显升高,DP组、HP组与AT组相比血清ALT、AST、ALP显著降低,肝形态异常变化减轻,肝组织中HIF-1a蛋白含量升高,MDA含量下降(P<0.05).结论 在肝移植术前行DP,可以起到与HP相似的供肝保护效果,但DP更适合指导临床.     

用于再灌注损伤研究的两种肝移植模型的筛选

目的:筛选一种用于研究肝移植过程中缺血再灌注损伤的大鼠肝移植模型.方法:将SD大鼠随机分为假手术组(S组)、原位肝移植组(OLT组)与自体肝移植组(AT组).比较各组大鼠手术时间、存活率及术后24 h血清中总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,观察肝组织形态学改变.结果:与S组相比OLT组、AT组术后血清TB、ALT、AST升高明显,AT组较OLT组术后存活率明显提高,血清TB、ALT、AST及TNF-α含量明显降低,肝形态异常变化减轻(P<0.05).结论:自体肝移植模型手术简单、成功率高、可比性强,且排除了免疫损伤的影响,更好地反映了肝脏缺血再灌注损伤的病理生理过程,比较适宜作为肝移植缺血再灌注损伤研究的动物模型.     

去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠肠道TLR4表达的影响

目的：探讨低氧预适应（HP）对大鼠自体肝移植后肠道TLR4蛋白表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、自体肝移植（AT）组和低氧预适应＋AT（HP）组3组,每组24只,采用改良的自体肝移植模型。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1、6、12 h处死大鼠取小肠标本,抽血检测血清ALT及AST水平,采用免疫组化法测定各组小肠组织TLR4蛋白表达情况,及应用逆转录-聚合酶反应（RT-PCR）检测小肠组织TNF-αmRNA的含量。结果：HP组血清ALT、AST水平,小肠组织TLR4蛋白表达及TNF-αmRNA的含量均显著低于AT组,但均高于NC组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：HP通过下调肝移植大鼠小肠组织TLR4蛋白的表达,进一步抑制TLR4信号转导通路,减少TNF-α等细胞因子的合成与释放,从而减轻对移植肝功能的损伤。     

白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

摘要：探讨白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的防护作用。将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、缺血再灌注组（I/R组）、I/R加生理盐水处理组和I/R加白藜芦醇处理组。观察肝脏缺血40 min再灌注1，3，6，12h后血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及肝组织丙二醛（MDA）含量的变化以及肝组织病理学改变。结果示肝脏I/R后血清ALT，AST及肝组织MDA含量均显著升高，肝脏缺血再灌注前用白藜芦醇15 mg/kg者，血清ALT，AST及肝组织MDA含量均明显降低，且肝组织病理学损害明显减轻。结果表明白藜芦醇对肝脏I/R损伤具有保护作用     

氨溴索对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨氨溴索对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（I/RI）的保护作用及其机制。方法：18只雄性Wistar大鼠被随机均分为假手术组、肝I/RI模型组（模型组）、氨溴索预处理+肝I/RI模型组（氨溴索预处理组）。肝I/RI模型采用阻断入肝血流30 min后再灌注方法诱导,氨溴索预处理组于缺血前20 min尾静脉注射氨溴索（100 mg/kg）,而模型组给予等体积生理盐水。术后6 h处死大鼠,检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平和肝组织病理学改变,同时检测肝组织超氧化物岐化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,丙二醛（MDA）含量,caspase-3的活化水平。结果：与假手术组比较,模型组与氨溴索预处理组血清ALT和AST水平明显升高（均P<0.05）;肝组织出现明显的病理学改变;肝组织SOD和GSH含量明显下降,而MDA水平明显升高（均P<0.05）;肝组织caspase-3活化水平明显升高（均P<0.05）。与模型组比较,氨溴索预处理组以上各项指标的变化均明显减弱（均P<0.05）。结论：氨溴索预处理能减轻大鼠肝脏I/RI,机制可能与其调控抗氧化和抗凋亡信号通路有关。     

缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的肝损伤的机制研究

目的：探讨缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的肝损伤的作用机制,为外科防治缺血再灌注损伤提供策略。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组（SO组,仅手术显露肠系膜上动脉）、缺血再灌注组（IR组,阻断肠系膜上动脉60min,再灌注120min）、缺血后处理组（IP组,阻断肠系膜上动脉60min后行3个循环的灌注30s/阻断30s,再持续灌注117min）,每组12只。建立模型2h后采集各组大鼠动、静脉血及部分小肠、肝组织,检测血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,测定血清及肝组织内丙二醛（MDA）、髓过氧化酶（MPO）水平,光学显微镜下观察小肠及肝脏病理学改变,免疫组织化学法检测肝脏组织中核因子κBp65（NF-κBp65）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化。结果与SO组比较,IR组小肠、肝脏病理损伤加重,肝组织NF-κBp65和HIF-1α的表达显著升高,血清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、IL-10、ALT和AST水平升高;与IR组比较,IP组小肠、肝脏损伤减轻,肝组织NF-κBp65表达下降而HIF-1α的表达显著升高,血清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、ALT和AST水平均显著下降,血清IL-10水平增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论缺血后处理可以促进抗炎因子的激活,抑制NF-κB信号通路调控的炎症级联反应,上调HIF-1α的表达,减轻小肠缺血再灌注引起的肝损伤。     

异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,体重180～220 g,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)吸人纯氧30 min,间隔30 min后仅开腹;肝脏缺血再灌注组(IR组)吸入纯氧30 min,间隔30 min后行肝脏缺血60 min,再灌注4 h;异氟醚预处理组(Iso组)吸入1.4%异氟醚30 min,间隔30 min后行肝脏缺血60 min,再灌注4 h.于再灌注4 h时处死大鼠,留取肝脏及腹主动脉血5ml.测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度,血清及肝组织匀浆上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,肝组织髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,观察肝组织病理学改变.结果 与S组比较,IR组、Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平明显升高,肝组织TNF-α含量升高,肝组织MPO活性升高,MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01),肝组织病理损伤明显;与IR组比较,Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平降低,肝组织TNF-α含量降低,肝组织MPO活性降低,MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01),肝组织病理损伤程度减轻.结论 1.4%异氟醚预处理可明显减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制TNF-α的释放、减少中性粒细胞在肝组织的浸润有关.     

去铁胺在大鼠自体肝移植术后余肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡的作用及机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(D组)32只,注射用水对照组(C组)32只和假手术模型(S组)32只.分别于术后0.5、2、6、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平;做病理组织学检查,免疫组织化学检测缺氧诱导因子(HIF)-1α、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1及bcl-2蛋白的表达,TUNEL测定细胞凋亡.结果 在各个时间点,D组血清ALT及AST水平及IL-1、TNF-α蛋白表达量和凋亡指数明显低于C组(P<0.01),而HIF-1α和bcl-2蛋白表达量明显高于C组(P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡具有保护作用,其作用机制部分可能与促进HIF-1α表达上调,从而降低炎性因子水平,促进bcl-2表达达到抑制细胞凋亡的作用.     

七氟醚预处理对右肝癌切除患者肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨七氟醚预处理对右肝癌切除患者肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：择期全麻下行右肝癌手术切除患者40例．ASAI或II级,术中经第一肝门阻断．血流阻断时间10～30min．随机分为2组（n=20）：缺血再灌注组（IR组）和七氟醚预处理组（S组）。两组麻醉维持期间均保持脑电双频谱指数40-50。s组麻醉诱导后吸入1MAC七氟醚（呼气末浓度）．30min后洗脱15min。于麻醉诱导前（T0）、缺血再灌注即刻（T1）、1h（T2）、6h（T3）抽血测血清中谷丙转氨酶（ALT）．谷草转氨酶（AST）,乳酸脱氢酶（LDH）的含量以及肝脏组织匀浆中丙二醛（MDA）含量和超氧化物岐化酶（SOD）活性,并行肝组织病理学观察。结果：与麻醉诱导前比较．两组缺血再灌注即刻．1h、6h血清ALT．AST,LDH含量均显著增加（P〈0．05）;与IR组比较,s组肝脏缺血再灌注后相应各时点血清ALT．AST、LDH含量均降低．肝组织匀浆MDA含量减少,SOD活性增加（P〈0．05）;肝组织病理学损伤减轻。结论：七氟醚预处理对右肝癌切除患者肝脏缺血再灌注损伤有保护作用．可能与其抑制氧自由基生成．减少脂质过氧化有关。     

Protective effects of deferoxamine mesylate preconditioning on pancreatic tissue in orthotopic liver autotransplantation in rats

Background

Deferoxamine mesylate is known to ameliorate tissue ischemia-reperfusion injury. This study was designed to explore the impact of deferoxamine mesylate preconditioning (DMP) on pancreatic tissue and its possible effects during orthotopic liver autotransplantation.

Methods

A modified orthotopic liver autotransplantation model was used to simulate pancreatic ischemia-reperfusion injury. Sprague-Dawley rats (0.25-0.30 kg) were randomly divided into normal control, autotransplantation (AT), systemic deferoxamine mesylate preconditioning (SDMP), and partial deferoxamine mesylate conditioning (PDMC) groups. The SDMP group was injected with deferoxamine mesylate (75-90 mg; 300 mg/kg), via the celiac artery at 24 and 48 hours before surgery. During surgery, the PDMC group underwent liver perfusion by means of deferoxamine mesylate solution (20 ml; 0.6 mmol/L) rather than Ringer's lactate solution, with no prior preconditioning. At 6, 24, and 48 hours after surgery, the rats were sacrificed to sample their pancreatic tissues for the expression of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and malondialdehyde (MDA) content. The samples were subjected to blood chemistry analyses, light and transmission electron microscopic morphological studies, and quantitative measurement of HIF-1α expression.

Results

The serum levels of amylase, lipase, and MDA in SDMP and PDMC groups were significantly lower than those in the AT group at 6, 24, and 48 hours after orthotopic liver autotransplantation (P < .05). Light and electron microscopic analyses showed much more severe pancreatic injury in the autotransplantation than in the SDMP and PDMC groups. The HIF-1α expression was increased in the SDMP and PDMC groups more than in the autotransplantation group (P < .05).

Conclusions

Deferoxamine mesylate preconditioning protected pancreatic tissue in orthotopic liver autotransplantation in rats. Inhibition of oxidative toxic reactions and up-regulated expression of HIF-1α protein are possible mechanisms.     

潘生丁对实验大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的探讨潘生丁对肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型。将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、潘生丁预处理组,观察各组血浆肝酶及透明质酸(HA)水平变化和肝组织中丙二醛(MDA)、内皮素(ET-1)含量,并行肝组织病理形态学检查。结果与缺血肝组织相比,潘生丁预处理组肝酶的漏出、血浆HA水平及肝组织中MDA、ET-1的含量明显降低(P<0.01)。肝组织病理学损伤亦明显减轻。结论潘生丁预处理可明显改善肝微循环,减轻肝缺血再灌注损伤。药物预处理可为临床提供一种安全有效的预处理方法。     

缺血预处理对大鼠肝细胞凋亡及HIF-1α和Survivin蛋白表达的影响

目的:观察缺血预处理(IP)对缺血再灌注(IR)损伤引起的肝细胞凋亡及对调控基因Survivin、HIF-1α蛋白表达的影响,探讨IP对鼠肝IR损伤保护作用的机制。方法:将90只SD大鼠分为假手术(SO)组10只、IR组和IP组各40只。SO组术中只牵拉分离肝十二指肠韧带,操作完成后关腹;IR组阻断十二指肠韧带,造成缺血30min;IP组缺血30min前持续5min缺血及5min再灌注。IR组及IP组分别于再灌注2、6、12和24h后各处死10只动物,取肝脏标本;SO组于术后2h取肝组织标本。检测细胞凋亡指数(AI)及Survivin、HIF-1α蛋白表达水平。结果:IR组、IP组AI较SO组明显增加(P<0.05),相同时相点IP组较IR组细胞AI明显降低(P<0.05)。IR组、IP组Survivin、HIF-1α蛋白表达先升后降,6h左右达高峰;HIF-1α(除24h时)和Survivin蛋白表达在相同时相点IP组较IR组高(P<0.05)。结论:IP对肝组织IR损伤的保护作用机制之一可能是通过上调HIF-1α、Survivin蛋白的表达抑制细胞凋亡,从而发挥肝脏保护作用。     

低氧预适应诱导肝脏HIF-1α高表达对自体原位肝移植大鼠JNK信号转导通路的影响

目的 检测低氧诱导因子α(HIF-1α)在自体原位肝移植大鼠肝脏的表达情况,探讨HIF-1α在JNK信号转导通路中的作用机制.方法 采用单纯随机抽样法将96只SD大鼠分为正常对照组、自体肝移植组、低氧预适应+自体肝移植组,每组32只.正常对照组:仅开腹分离血管,不作其他处理;自体肝移植组:采用经门静脉灌注法建立稳定的70%自体原位肝移植模型;低氧预适应+自体肝移植组:术前用8%氮氧混合气体低氧预处理90min,其他处理同自体肝移植组.分别于术后1、2、12、24h检测大鼠血清ALT、AST水平,免疫组织化学染色法测定大鼠肝脏组织HIF-1α的表达,RT-PCR检测c-Jun mRNA表达水平,Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白表达水平.多组比较采用方差分析,两组比较采用t检验.结果 术后1、2、12、24 h,低氧预适应+自体肝移植组大鼠血清ALT和AST水平显著低于自体肝移植组,但高于正常对照组,差异有统计学意义(F=2631.371、1177.642、810.383、682.848,743.618、1095.522、375.995、580.613,P＜0.05).自体肝移植组大鼠术后各时相点HIF-1α蛋白的表达水平明显低于低氧预适应+自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=191.737,284.482,459.419,213.782,P＜0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后1、2、12 h c-Jun mRNA表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=66.211,53.169,9.645,P＜0.05),术后24 h c-Jun mRNA表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=1.100,P＞0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后各时相点Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=23.133,31.158,14.347,29.043,P＜0.05).结论 肝移植大鼠低氧预适应后HIF-1α的高表达可能通过抑制JNK信号通路的持续激活,下调Cleaved Caspase-3蛋白的表达,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

Genistein预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨genistein预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
方法：54只SD大鼠完全随机分成3组。A组为I/R组:70%热缺血60 min及再灌注;B组为I/R
 genistein（GST）预处理组;C组为假手术组。于成模后2,6,12 h取大鼠血清和肝组织,检测血清AST,ALT浓度和肝组织MDA浓度,免疫组化法检测肝组织casepase-3蛋白的表达,光镜下观察肝脏组织病理变化。
结果：与I/R组相比,genistein预处理血清中AST及ALT浓度明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。肝组织casepase-3蛋白表达及MDA浓度显著降低（均P＜0.05）。
结论：genistein预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注具有保护作用,其机制与清除氧自由基,抑制细胞凋亡有关。     

低氧预适应对自体肝移植大鼠肝细胞EGR-1表达的影响

目的 探讨低氧预适应对大鼠肝移植术后早期生长反应因子1(early growth response factor-1,EGR-1)的影响.方法 采用门静脉灌注的大鼠自体肝移植模型:A组:低氧预适应大鼠自体肝移植组;B组:大鼠自体肝移植组;C组:正常大鼠对照组.比较大鼠自体肝移植术后肝脏组织病理学改变、肝组织中低氧诱导因...     

N-乙酰半胱氨酸预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 18 例肝血管瘤手术患者随机分为3 组(n=6):对照组(C0)、NAC 预处理组(PR)和NAC 后处理组(PO),其中PR和PO 组分别于肝门阻断前和开放后给予NAC 120 mg/kg.三组患者均于切皮前(T0)、肝门阻断开放后1 h(T1)及6 h(T2)抽血检测谷丙转氨酶活性(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,并于肝门阻断开放后1 h(T1)取肝组织测定丙二醛(MDA)含量及核因子κB(NF-κB)活性.结果 肝门阻断开放后1 h(T1)和6 h(T6),各组的ALT 和AST 水平均明显高于肝门阻断前(T0)水平(P<0.01);与对照组相比,PR 和PO 组的MDA 含量在肝门阻断开放后1 h(T1)明显减少(P<0.01),但NF-κB 的活性仅在PR 组显示有明显的降低(P<0.01).结论 NAC 预处理可有效防治肝脏缺血再灌注损伤,其机制与抑制再灌注后NF-κB 的启动激活有关.