加减下瘀血汤对人肾小球系膜细胞清道夫受体表达的影响

目的 :探讨加减下瘀血汤对人肾小球系膜细胞 (HMC)表面清道夫受体A(SR -A)表达的影响。方法 :通过采用体外培养HMC ,在佛波酯 (PMA)刺激SR -A上调后 ,用加减下瘀血汤含药血清对其进行干预 ,观察加减下瘀血汤对HMC表面SR -AmRNA表达水平及SR -A与配体结合能力的影响。结果 :(1)体外培养的HMC在PMA的刺激下SR -AmRNA水平明显增高 ,摄取乙酰化低密度脂蛋白 (AC -LDL)能力增强 ,其作用随药物浓度增加而增强 (P <0 .0 5 ) ;(2 )中、高浓度的加减下瘀血汤含药血清能下调PMA诱导SR -AmRNA水平的上调 ,低浓度含药血清作用不明显。且该作用随着药物浓度的增加、作用时间的延长而增强 (P <0 .0 5 )。结论 :加减下瘀血汤治疗肾病的机理之一 ,可能是通过抑制病理状态下HMC表面SR -A的高表达。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋...     

抑制血管紧张素Ⅱ1型受体对血管紧张素Ⅱ诱导的高血压肾病中肾脏纤维化和足细胞损伤的作用研究

目的 探究靶向抑制血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AGTR1)对血管紧张素Ⅱ诱导的高血压肾病中肾脏纤维化和足细胞损伤的影响.方法 将40只健康小鼠按随机数字表法分成正常对照组、生理盐水组、模型组和药物组,每组10只小鼠,正常对照组不进行处理,生理盐水组进行单侧肾切除并用微渗...     

白藜芦醇对TGF-β1诱导的足细胞凋亡及骨架分子损害的干预作用

目的:探讨白藜芦醇对肾足细胞凋亡和骨架蛋白异常的干预作用。方法:体外分化条件下培养小鼠足细胞10d,用转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)诱导作为研究模型,白藜芦醇干预,肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor hepatocyte,HGF)作为对照。流式细胞术检测足细胞线粒体膜电位以及Vimentin、Nestin等蛋白表达,采用western-blotting技术检测骨架蛋白α-actinin-4蛋白表达。用蛋白滤过试验检测单层足细胞的蛋白滤过功能。结果:TGF-β1可诱导足细胞线粒体膜电位显著降低,骨架蛋白Vimentin、α-actinin-4等表达水平显著下调,而Nestin表达显著增高。白藜芦醇干预可增高足细胞线粒体膜电位以及Vimentin、α-actinin-4等表达,对Nestin表达则差异无统计学意义;HGF对线粒体膜电位、Vimentin、α-actinin-4等差异无统计学意义,但可显著降低Nestin表达;白藜芦醇和HGF干预均可显著降低透过单层足细胞的蛋白滤过量。结论:白藜芦醇抑制TGF-β1诱导的足细胞骨架系统蛋白表达异常和细胞凋亡的作用,可能是其维持足细胞滤过屏障完整性的机制之一,HGF对足细胞损害的干预作用与白藜芦醇不同,机制尚不明确。     

树突状细胞相关的C型凝集素1在小鼠肾缺血再灌注中的作用及其机制

目的:探究树突状细胞相关的C型凝集素-1(Dectin-1)在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:C56BL/6雄性小鼠60只,随机数字表法分为假手术组、肾缺血再灌注损伤(RIRI)组、生理盐水组、昆布多糖(LAM)低剂量组(20 mg/kg)、LAM中剂量组(40 mg/kg)、LAM高剂量组(80 mg/k...     

阿霉素诱导的足细胞转分化中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D_3的干预作用

目的:探讨阿霉素诱导的足细胞转分化(EMT)中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D3干预作用。方法:以体外培养的小鼠足细胞系为研究对象,分6组进行实验:正常组(C组)、阿霉素组(即模型组,ADR组)、低剂量活性维生素D3组(LVD组)、高剂量活性维生素D3组(HVD组)、缬沙坦组(ARB组)、缬沙坦+高剂量活性维生素D3组(AHVD组)。各实验组干预24 h、48 h时通过RT-PCR检测β-catenin、TGF-βmRNA的表达,Western Bolt检测β-catenin蛋白的表达。结果:用药物干预24 h及48 h时,与正常对照组相比,ADR组足细胞β-catenin mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组(ARB组、LVD组、HVD组、AHVD组)β-catenin mRNA及蛋白表达均下调(P<0.05)。24 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01)。48 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,HVD组与AHVD组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01),而LVD组及ARB组无显著下降(P>0.05)。结论:活性维生素D3通过抑制信号转导通路中β-catenin、TGF-β的表达而抑制足细胞发生EMT。     

氟伐他汀联合氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制研究

目的 探讨氟伐他汀联合氯沙坦对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的人足细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及机制.方法 体外培养人足细胞株,采用不同浓度的AngⅡ(10-9～10-5mol/L)刺激人足细胞,另予氟伐他汀(10-7、10-6、10-5 mol/L)和(或)氯沙坦(10-7、10-6、10-5 mol/L)、ERK特异性阻断剂PD98059( 5× 10-5 mol/L)干预.Western印迹法检测VEGF、磷酸化(p)ERK1/2蛋白的表达.RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达.结果 AngⅡ刺激后,人足细胞VEGF mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.05),p-ERK1/2增加(P＜0.05).氟伐他汀、氯沙坦及PD98059均可下调AngⅡ诱导的VEGF mRNA和蛋白表达及ERK1/2磷酸化(P＜0.05),而氟伐他汀和氯沙坦联合干预较单独作用抑制效果更为显著(P＜0.01).结论 氟伐他汀和氯沙坦均可抑制AngⅡ诱导足细胞VEGF的过表达,且两者联合具有协同作用.抑制ERK信号通路可能是实现其联合作用的机制之一.     

糖肾平通过TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖＋LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究

也页目的：探讨糖肾平对高糖环境下脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）刺激足细胞上皮间质转分化的影响,并探讨其作用机制。方法：以体外培养大鼠肾小球足细胞为研究对象,以高糖（25 mmol/L）、LPS（1μg/mL）刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖＋LPS组、厄贝沙坦组、抑制剂组、糖肾平小、中、大剂量组。采用Western blotting及RT-PCR方法检测足细胞中转化生长因子-β1（ transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2/3、整合素连接激酶（ integrin-linked kinase, ILK）、CD2相关蛋白（CD2AP）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。结果：与正常组比较,高糖组和高糖＋LPS组足细胞TGF-β1、ILK、α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）,P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达明显增加（P〈0.01）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与高糖＋LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞P-Smad2/3、α-SMA蛋白表达明显减少（P〈0.01）,TGF-β1蛋白表达减少（P〈0.05）,TGF-β1,Smad2/3,α-SMAmRNA表达明显减少（P〈0.01）,ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）;糖肾平大、中、小各剂量组足细胞TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.01）,糖肾平大剂量组足细胞TGF-β1 mRNA表达减少（P〈0.05）,小、中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达均明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、大剂量组足细胞ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平大剂量组足细胞α-SMA蛋白及其mRNA表达减少（P〈0.05）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞CD2AP蛋白及其mRNA表达均明显增加（P〈0.01）。结论：糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、ILK蛋白及mRNA表达,降低P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达,升高足细胞标志物CD2AP蛋白及mRNA表达,降低间充质细胞标志物α-SMA蛋白及mRNA表达,通过抑制TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路的激活减少足细胞转分化,保护足细胞,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

射频消融联合亚砷酸局部治疗对兔肝VX2肿瘤MVD和VEGF表达的影响

目的探讨射频消融(RFA)联合亚砷酸(AA)局部治疗对兔肝VX2肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。方法建立新西兰兔肝VX2肿瘤模型28只,按随机数字表法随机均分为4组,分别给予AA(AA组)、RFA(RFA组)、RFA AA(RFA AA组)和生理盐水(对照组)治疗,于治疗后第14d处死所有实验动物,通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织MVD及VEGF的表达,并分析MVD与VEGF表达的相关性。结果对照组、AA组、RFA组及RFA AA组肿瘤组织MVD依次降低,分别为(38.50±0.44)、(23.07±0.47)、(18.65±0.39)和(11.36±0.36)个/HP,4组间两两比较均P<0.05;肿瘤组织VEGF表达阳性例数比也依次降低,分别为7/7、5/7、4/7和2/7,4组间两两比较均P<0.05。VEGF表达强度与MVD成正相关关系(r=0.47,P<0.01)。结论RFA AA联合治疗能减少肿瘤组织的MVD,抑制VEGF的表达。     

血管内皮生长因子及微血管密度与胃癌进展的关系

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及微血管密度（MVD）与胃癌临床病理因素的关系。方法：应用免疫组织化学（SP）方法测定胃癌及胃良性病变中VEGF表达及MVD。结果：胃癌组VEGF表达阳性率为75．0％，胃良性病变组为5．0％（P＜0．05），未浸润浆膜层者为50．0％，浸润浆膜层者为95．5％（P＜0．05），有淋巴民移者为82．8％，无淋巴结转移者为54．5％（P＜0．05），伴有远处转移者为100％，不伴有远处转移者为71．0％（P＜0．05），pTNM分期属，I，II期者为53．1％，Ⅲ，Ⅳ期者为89．6％（P＜0．05），胃良性病变的MVD显著低于胃癌组（P＜0．001），浸润深度达浆膜层，有淋巴结转移和远处转移及pTNM属Ⅲ，Ⅳ期者的MVD显著升高，其差异有显著性意义，VEGF表达与MVD明显相关，结论：VEGF上调及MVD增加对胃癌生长具有促进作用。     

参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者血清 VEGF、尿 EGF 的干预作用

目的：观察慢性肾小球肾炎（ CGN）脾肾亏虚证患者血清血管内皮生长因子（ VEGF）和尿表皮生长因子（EGF）的变化及参地颗粒的干预作用。方法：64例 CGN 脾肾亏虚证患者随机分为对照组和治疗组各32例,实际完成61例（对照组31例,治疗组30例）,并设正常组20例。治疗组口服参地颗粒,对照组口服氯沙坦钾片,疗程均为8周,观察治疗前后临床疗效、24 h 尿蛋白定量、尿红细胞计数、血清 VEGF 和尿 EGF 水平变化,并与正常组比较。结果：治疗组临床疾病总有效率和中医证候疗效总有效率均为86．67%,优于对照组的61．30%（P 〈0．05）;治疗组治疗后24 h 尿蛋白定量、尿红细胞计数均较治疗前降低（P 〈0．05）,而对照组治疗后24 h 尿蛋白定量较治疗前降低（P 〈0．05）,但尿红细胞计数降低不明显（P 〉0．05）;两组患者治疗前血清 VEGF 和尿 EGF 水平明显高于正常组（P 〈0．01）,治疗后两组血清 VEGF 和尿 EGF 水平均下降（P 〈0．05）,且治疗组优于对照组（P 〈0．05）。结论：CGN 脾肾亏虚证患者血清 VEGF、尿 EGF 水平上升,参地颗粒可显著降低患者血清 VEGF、尿 EGF 水平,降低中医证候积分,改善临床症状,其机制之一可能与其降低患者血清 VEGF、尿 EGF 水平有关。     

抗血管内皮生长因子抗体对实验性肝癌的生长抑制作用

目的了解抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体对人肝癌的生长抑制作用.方法在已建立的人肝癌裸鼠皮下种植瘤的瘤灶旁,注射抗VEGF抗体,观察肿瘤生长情况,用CD31的免疫组化方法检测肿瘤内部的微血管密度(iMVD),用原位末端转移酶标记技术检测凋亡的肿瘤细胞.结果实验结束后1周,实验组和对照组肿瘤大小(长×宽)是(26.46±19.81) mm2和(105.77±17.40) mm2(P<0.001),2周后是(45.20±23.02) mm2和(150.77±77.41) mm2(P<0.05),而此时肿瘤的iMVD是(2 311±120)个/mm2和(3 900±328)个/mm2 (P<0.001); 肿瘤细胞凋亡指数是15.31% 和 6.83%(P<0.005).结论抗VEGF抗体能通过抑制肿瘤微血管的生长,抑制实验性人肝癌的生长,其实质是增加了肿瘤细胞凋亡.     

The Effect of Continuous Elastic Outside Distraction on the Expressions of Vascular Endothelial Cell Growth Factor and Microvessel Density in Female Porcine Nipple

Background

We have proposed a method to correct the inverted nipple with good clinical results. The aim of the study presented here is to show the effect of continuous elastic distraction on the expression of vascular endothelial growth factor and microvessel density in the female porcine nipple. This article also explores the probable mechanism correction of inverted nipples.

Methods

Four female 3-month-old pigs each with 12 nipples were used. Four nipples of each minipig were used as control with the other eight nipples continuously distracted with prefabricated instruments. The nipples were excised at weeks 2, 4, 8, and 12 after distraction. Immunohistochemical staining was performed to observe the expression of vascular endothelial cell growth factor (VEGF) and CD34 in those tissues. The integral optical density of VEGF-positive cells and microvessel density (MVD) were also counted.

Results

The volumes of the nipples all increased after traction compared with those of the control group. The diameters and heights of the nipples showed significant changes (P < 0.01). In immunohistochemical staining, the expressions of VEGF and CD34 of all distracted groups were positive. The staining intensity of traction groups was moderate and that of the control groups was weakly positive. The integral optical density of VEGF-positive cells and MVD compared with the control group were significantly different (P < 0.01), and there was a significant positive correlation in MVD and VEGF.

Conclusion

Continuous elastic distraction can promote the expression of some growth factors in nipples.     

玉米须提取物对糖尿病足小鼠血管内皮相关因子及炎症因子的影响

目的：探讨玉米须提取物对糖尿病足小鼠模型血管内皮相关因子、炎症因子的影响。方法：昆明种小鼠 150 只, 适应性饲养 1 周,随机分成 5 组,30 只 / 组,分别为空白组、模型对照组、玉米须提取液高剂量组、中剂量组、低剂量组。空白组喂以标准饲料,其余组喂以高脂高糖饮食至实验结束。11 周后除空白组外均造模,造模前禁食 12 h,自由饮水,按每天 40 mg/kg 体重剂量,将链脲佐菌素（STZ）用浓度为 0.1 mmol/L 柠檬酸缓冲液（pH4.2）溶解,给小鼠做腹腔注射1 次 /d,连续 5 d。5 d 后,测量小鼠空腹 6 h 后血糖值,大于 11.1 mmol/L 者视为糖尿病模型造模成功,然后采用结扎小鼠股动脉形成肢体局部缺血的糖尿病足小鼠模型。除空白组和模型对照组外,其余 3 组玉米须提取物按照 400、200、100 mg/kg, 配成浓度为 20、10、5 g/L,以 0.2 mL/10 g 灌胃给药。给药第 30 天、给药后 1 h、禁食 12 h,小鼠尾部取血,观察小鼠用药前后的血糖、血管内皮相关因子、炎症因子的指标变化。结果：给药后玉米须提取物高、中、低剂量组与模型对照组相 比较均具有降低糖尿病足小鼠模型血糖的作用 (P<0.01),且呈现剂量依赖性,高剂量组要明显优于低剂量组的降糖效果; 给药后高、中、低剂量组与模型对照组相比较均具有降低 VEGF、ET-1 和提升 NO 的作用 (P<0.01),且呈现剂量依赖性, 高剂量组要明显优于低剂量组降低 VEGF、ET-1 和提升 NO 的作用;给药后高、中、低剂量组与模型对照组相比较均显著降低 CRP、IL-6、TNF-α 的作用 (P<0.01),且呈现剂量依赖性,高剂量组要明显优于低剂量组(P<0.05)。结论：玉米须提取物具有有效改善小鼠糖尿病足模型血糖、血管内皮相关因子、炎症因子的作用,且改善的效果随着剂量浓度的增高而增加。     

食管癌细胞诱导裸鼠肝血管内皮细胞E-选择素的表达

目的探讨食管癌细胞诱导裸鼠肝血管内皮细胞E-选择素(E-selectin)的表达,及其在食管癌肝转移中的作用。方法 Balb/c裸鼠12只,鼠龄6～8周,重量20～25g。将12只鼠随机分为对照组和实验组,每组6只。实验组鼠用食管癌细胞株EC9706悬液(5×106/0.02ml)注入脾包膜下,1h后切除脾;对照组同样行开腹手术,注射磷酸盐缓冲液(PBS)。注射8h后处死鼠取肝,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学链霉亲和素生物素标记(LsAB)法检测裸鼠肝血管内皮细胞E-选择素的表达。结果实验组食管癌细胞株EC9706(5×106个)注射到裸鼠脾内,8h后用RT-PCR可在肝脏检测到E-选择素mRNA的表达;免疫组织化学检测显示:肝窦血管胞浆和胞膜E-选择素蛋白表达呈阳性。而对照组肝脏未能检测到E-选择素mRNA表达,E-选择素蛋白表达亦呈阴性。结论食管癌细胞株EC9706能诱导裸鼠肝脏E-选择素mRNA及蛋白表达,表明食管癌细胞株EC9706可能在肝脏中停留并形成转移灶。     

三黄止血胶囊对大鼠肛管静脉丛血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的探讨三黄止血胶囊对大鼠肛管静脉丛血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法取40只SD大鼠按随机数字法分为5组。实验组三黄止血胶囊按156mg/kg的剂量,灌胃给药,每天3次。对照组龙血竭片按167mg/kg的剂量,灌胃给药,每天3次。空白组给生理盐水。分别于用药24h、48h后,实验组、对照组、空白组用颈髓脱位法处死大鼠,取肛门0.5cm内肛管组织做标本。取标本100mg,用ELISA法检测标本VEGF蛋白的表达。结果实验组VEGF蛋白的表达均低于对照组和空白组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论三黄止血胶囊可抑制大鼠肛管血管内皮细胞生长因子蛋白的表达。     

金氏痔疮膏对大鼠肛管静脉从血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的：观察金氏痔疮膏对大鼠肛管静脉丛血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其可能的治痔作用机制。方法：采用RT-PCR、ELISA法检测应用药物后大鼠肛管VEGF mRNA、VEGF表达的变化。结果：RT-PCR结果显示，大鼠肛管以表达VEGF 164 mRNA（563bp）为主；经金氏痔疮膏处理的大鼠肛管表达VEGF 164mRNA／β-acfin mRNA灰度值比值较对照组少；VEGF蛋白浓度较对照组低，且呈时间依赖性。结论：金氏痔疮膏在mRNA、蛋白水平均可抑制大鼠肛管血管内皮细胞生长因子表达。     

局部缓释血管内皮生长因子促进肠吻合口愈合的研究

目的探讨应用生物蛋白胶缓释血管内皮生长因子(VEGF)促进肠吻合口愈合的有效性。方法通过在兔盲肠穿孔建立腹腔感染的动物模型,12h后行肠切除及肠吻合。动物分成4组(每组32只),各组吻合口表面所涂试剂不同:生理盐水组、生物蛋白胶组、VEGF组及VEGF+生物蛋白胶组。于手术后第3、5、7及14天统计各组吻合口漏发生情况,测量未发生吻合口漏的动物的吻合口破裂压,检测吻合口组织羟脯氨酸含量及VEGF表达情况。结果生物蛋白胶组及VEGF组的吻合口漏总发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05),而VEGF+生物蛋白胶组则明显低于对照组(P0.05)。至术后第14天,VEGF+生物蛋白胶组的吻合口破裂压、吻合口组织羟脯氨酸含量及VEGF蛋白表达阳性细胞率(除VEGF组)均较其余3组明显升高(P0.05,P0.01)。结论应用生物蛋白胶局部缓释VEGF能够促进肠吻合口愈合,降低吻合口漏的发生率。