川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。      

24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制

目的 研究24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制.方法 利用MTT法进行细胞毒活性初筛;用荧光染色细胞形态学观察法、流式细胞术和蛋白质杂交技术从细胞和分子水平研究该化合物的细胞毒作用机制.结果 24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷可以抑制HepG2细胞生长,IC50值为13 μmol&#183;L-1.该化合物可以诱导HepG2细胞凋亡和G2/M细胞周期阻滞.进一步分子水平研究表明,该化合物可使PARP蛋白裂解,抗凋亡蛋白bcl 2下调,凋亡蛋白Bax上调,细胞周期素cyclinB和细胞周期素依赖性激酶cdc2表达下调.结论 24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷通过诱导细胞凋亡和G2/M细胞周期阻滞来发挥细胞毒作用,其凋亡机制涉及caspases家族激活,bcl 2下调和Bax表达上调,而G2/M周期阻滞与cdc2和cyclinB下调直接相关.     

奥沙利铂通过p53信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究奥沙利铂（L-OHP）对突变型肝癌细胞HuH-7、野生型肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,探讨p53信号通路相关蛋白在其中的作用。方法:MTT法检测L-OHP对HuH-7、HepG2细胞增殖的抑制效应;倒置显微镜观察L-OHP作用后2种细胞株形态的变化;流式细胞术检测L-OHP作用后细胞周期分布;Western blot法检测p53信号通路相关蛋白表达变化。结果:L-OHP能抑制HuH-7、HepG2细胞增殖,具有时间浓度依赖性（P<0.01）;L-OHP作用后,可观察到细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁;L-OHP能够诱导HuH-7、HepG2细胞阻滞在细胞周期的S期,S期细胞的比例随L-OHP作用浓度增加而明显增加（P<0.01）;L-OHP可激活p53信号通路,L-OHP改变2种细胞中p21、Bax、Bcl-2、p53、磷酸化p53（p-p53）蛋白表达（P<0.05）,但对HuH-7细胞p-p53的表达无明显影响。结论:L-OHP可通过激活p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与调控p53通路相关蛋白p53、p-p53、p21、Bax、Bcl-2的表达有关。     

抑制极光激酶活性对肝癌HepG2细胞周期、凋亡和自噬的影响

目的探讨极光激酶抑制剂Danusertib（Danu）对肝癌HepG2 细胞株增殖、细胞周期、凋亡和自噬的影响及其作用机制。 方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测Danu对各组细胞的增殖抑制率,确定Danu的半数抑制浓度（IC50）。采用流式细胞仪 检测Danu对HepG2细胞周期阻滞、凋亡及自噬的影响。采用Western blot检测细胞周期阻滞、凋亡及自噬相关效应蛋白和通 路蛋白的表达。采用氯喹抑制自噬以明确其所起作用。结果Danu能有效抑制HepG2 细胞增殖,24 h 和48 h 的IC50分别为 39.4 μmol和14.4 μmol。Danu通过上调p53及p21的表达和下调Cyclin B1及CDC2的表达引起HepG2细胞出现G2/M周期阻 滞和异倍体,通过上调Bax、Puma、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP及细胞色素C的表达和下调Bcl-xl 及 Bcl-2的表达引起HepG2细胞凋亡,通过激活上调AMPK信号通路和和抑制PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号轴引起HepG2细胞 出现自噬。采用氯喹抑制自噬后,能够增强Danu对HepG2细胞的促凋亡作用。结论Danu能够有效抑制肝癌HepG2细胞增 殖,引起G2/M细胞周期阻滞,导致细胞凋亡,具有良好的体外抗肿瘤效果。Danu能够引起细胞保护性自噬。     

奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制探讨

目的 :研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 :应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用 ;电镜观察细胞的形态改变 ;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况 ;免疫组织化学法检测突变型p5 3,Bcl- 2 ,Bax ,Fas等凋亡相关基因蛋白的表达。结果 :奥沙利铂对HepG2有明显的抑制作用 ,细胞阻滞于S期和G2 /M期 ,G0 /G1期细胞减少 ,作用 72h出现凋亡峰 ,电镜可以找到凋亡小体 ,免疫组织化学表明Bax表达增强 ,突变型 p5 3、Bcl- 2表达减弱 ,Fas表达无差异。 结论 :奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖及诱导凋亡作用 ,其机制与促凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

三羟异黄酮上调p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨三羟异黄酮(genistein)诱导肝癌细胞凋亡过程中p53信号通路的调控机制。方法MTT法检测Genistein对肝癌HepG2细胞的杀伤作用,流式细胞仪检测Genistein诱导的细胞周期变化和凋亡率,应用荧光底物法检测Caspase-3活性,Western blotting分析细胞p53蛋白、p21和Bax蛋白表达。结果MTT法检测表明,随着药物剂量的增加和作用时间延长,Genistein对HepG2的杀伤效果亦增加;细胞周期研究表明,Genistein能够阻滞细胞周期于G2/M期,随着药物处理浓度的增加,HepG2细胞处于G2/M期细胞的比例由对照组的(22.9±1.6)%增加到80μmol/L处理组的(63.8±2.4)%,各处理组G2/M期比例和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);凋亡研究和Caspase-3活性分析表明,Genistein能够显著诱导HepG2细胞凋亡,且具有作用时间依赖效应,随着药物作用时间延长,HepG2凋亡细胞比例由对照组的(1.6±0.5)%增加到72h处理组的(30.7±5.6)%,各处理时点凋亡细胞比例和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Caspase-3活性检测结果表明,Caspase-3相对活性随药物处理浓度增加而出现显著上调,由对照组的(100±2.5)%增加到80μmol/L处理组的(225.1±21.2)%,各处理组Caspase-3相对活性和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);Western Blotting检测表明,随着Genistein作用时间的延长,磷酸化p53水平上升,且p21和Bax水平上调。结论Genistein能通过抑制磷酸肌醇信号通路,上调磷酸化p53蛋白水平,激活其下游信号通路分子如p21和Bax的表达,从而阻滞细胞周期于G2/M期,并通过活化Caspase-3诱导肝癌细胞凋亡。     

奥沙利铂抗人肝癌细胞株QGY增殖及其机制的研究

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株QGY体外增殖的影响并探讨其机制,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据.方法采用人肝癌细胞株QGY作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的奥沙利铂对细胞增殖的抑制效应;光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白及凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂对QGY细胞的增殖均有抑制作用而且呈时间和剂量依赖性.光镜观察发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,呈现凋亡早期的形态学改变.电镜可见凋亡细胞及凋亡小体.流式细胞仪检测到细胞阻滞于细胞周期的S期和G2/M期,G0/G1期细胞减少及凋亡峰.奥沙利铂作用72 h后,免疫细胞化学表明cyclin A、Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂对QGY肝癌细胞的增殖都有一定的抑制作用,阻滞细胞周期于S期及G2/M期,它通过上调Bax的表达,下调MTP53、Bcl-2、Myc的表达而诱导细胞凋亡,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

德氮吡格对人肝癌细胞株增殖抑制的体外研究

目的:观察德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2增殖的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:运用MTT法检测德氮吡格对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期分布情况,Western blot分析cyclinB1和p34cdc2的变化.结果:德氮吡格作用SMMC-7721和HepG2细胞72h后,能抑制细胞增殖,呈剂量依赖性.流式细胞仪检测到两株细胞均有S期和G2/M期细胞增加,并且德氮吡格还能诱导HepG2细胞发生凋亡.Western blot发现CyclinB1表达在药物处理组明显降低,而p34cdc2则无明显改变.结论:德氮吡格能抑制肿瘤细胞增殖,可能通过调控CyclinB1表达将肿瘤细胞阻滞于G2/M期,从而达到抗肿瘤的效应.     

苦参碱通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱通过线粒体通路诱导Hep G2发生凋亡的机制。方法分别采用MTT法、PI染色法、流式细胞术检测苦参碱对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用;采用Western Blot检测苦参碱诱导肝癌Hep G2细胞抑凋亡蛋白Bid、Bcl-2的表达量。结果苦参碱可抑制Hep G2细胞的增殖作用和诱导凋亡,呈时间和剂量依赖性,并可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期。苦参碱可引起线粒体膜电位崩溃,同时诱导Bid、Bcl-2表达下调,Bax表达上调。结论苦参碱通过调节细胞内Bid、Bcl-2和Bax蛋白的表达,经线粒体信号转导途径诱导人肝癌细胞系Hep G2发生凋亡。     

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察细胞发生凋亡的情况,并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2蛋白的表达。同时观察细胞周期改变情况。结果:照射后48h,2Gy、4Gy和6Gy出现明显DNA降解("梯形结构"),但对照组及8Gy和10Gy无"梯形结构"出现。Bax和Bcl-2蛋白的表达在时间和剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,HepG2细胞中Bax表达显著上调,而Bcl-2表达明显降低。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期、S期阻滞,G2/M期阻滞峰值为正常的56倍,在6~48h阻滞"崩溃",细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:6MV-X射线照射HepG2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。4Gy照射引起的G2期阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。     

The Experimental and Clinical Study on the Effect of Curcumin on Cell cycle Proteins and Regulating kProteins of Apoptosis in Acute Myelogenous Leukemia

Because anti- cancer drugs can induce apopto-sis of both carcinoma cells and normal cells,peoplewant to find a new high effect and low cytotoxinone.Curcumin( C12 H3 6O5,Fw364.5 ) derives fromcurcumin longa linn and contains a main activity ofcurcuma.It has excellent effect of anti- cancer andpreventing cancer.FDA in USA has recommendedit into a new candidated drug which is used in the2 1 th century[1] .The anti- cancer role of curcuminmay be two aspectes:( 1 ) It controls developmentproces…     

蟾毒灵对CAPAN-2胰腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 研究蟾毒灵在胰腺癌CAPAN-2细胞系中的抗肿瘤作用,探讨其在胰腺癌中的抗肿瘤分子机制。方法 CCK-8法测定蟾毒灵对人胰腺癌CAPAN-2细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测蟾毒灵对细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting法检测蟾毒灵作用于CAPAN-2细胞后Caspase-3酶原(pro-caspase-3)、Bcl-2、Bax、CDC25C、cyclinB1、CDC2蛋白表达水平的变化情况。结果 蟾毒灵对胰腺癌CAPAN-2细胞有抑制增殖的作用,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵未能诱导CAPAN-2细胞凋亡,但经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞周期被阻滞在G2/M期;经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞中CDC25C、cyclinB1、CDC2等关键周期蛋白的表达量显著下降,但是pro-caspase-3、Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白的表达没有发生明显改变。结论 蟾毒灵可显著抑制胰腺癌CAPAN-2细胞增殖,通过诱导G2/M细胞周期阻滞而非诱导细胞凋亡,在CAPAN-2细胞中发挥抗肿瘤作用。     

阿法替尼联合Mithramycin A对人肝癌 HepG2细胞增殖､凋亡及基因表达的影响

目的:观察阿法替尼(afatinib)联合Mithramycin A(MIT)对人肝癌 HepG2 细胞增殖?凋亡的作用以及相关因子表达的影响?方法:将afatinib与MIT单独或联合作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法测定药物对细胞生长的抑制率,并运用倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化;以流式细胞技术测定药物对细胞周期和凋亡的影响;以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) 定量测定细胞内表皮生长因子受体(EGFR)?Sp1?Sp3以及增殖?凋亡相关因子 Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2?Caspase3?Caspase9和p53的表达变化?结果:afatinib与MIT均能有效抑制肝癌HepG2 细胞的生长,并且呈现时间依赖性,两药联合作用能明显增加抑制率(P均 < 0.05);联合用药48 h后,可诱导HepG2细胞产生G0/G1期阻滞并诱发凋亡,抑制作用及凋亡率均较单药组增高(P均 < 0.05);另外,给药72 h后,单药组均出现不同程度的Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2 mRNA 表达量下降,并伴有Caspase3基因上调?单用afatinib组同时出现Caspase9和p53的表达上调,MIT组检测到EGFR?Sp1和Sp3的同步减少,联合用药组以上改变较单药组明显(P均 < 0.05)?结论:afatinib联合MIT能有效抑制肝癌 HepG2 细胞增殖?促进凋亡,这可能与药物作用后Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2下调以及Caspase3?Caspase9和p53的表达上调相关?此项研究可能为以EGFR为中心的肝癌联合治疗提供新方向?     

DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌HepG2细胞凋亡及增殖的影响

目的 探讨DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术对人肝癌HepG2细胞凋亡以及Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5蛋白表达的影响。方法 体外培养HepG2细胞并分为9组：空白对照组（Con）,药物组（Drug）,药物联合超声组（Drug+US）,空白微泡组（MBs）,空白微泡联合超声组（MBs+US）,载药微泡组（DLLM）,载药微泡联合超声组（DLLM+US）,DR5介导的靶向载药微泡组（DR5-DLLM）,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组（DR5-DLLM+US）。Drug、Drug+US、DLLM、DLLM+US、DR5-DLLM、DR5-DLLM+US组中的多烯紫杉醇以IC50的药物浓度（5 nmol/L）给药,Con组加入0.5 mL生理盐水,超声以0.5 W/cm2的声强辐照45s,分组处理后,继续培养细胞24 h,分别用CCK-8、TUNEL、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,并检测Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 与其他组相比,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组对HepG2细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用和G2/M细胞周期阻滞作用更强（P<0.001）,且该组的Bcl-2 和 NF-κB mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.001）,而 DR5 和 Caspase-8 的 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P< 0.001）。结论 DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术可通过下调Bcl-2和NF-κB表达、上调Caspase-8和DR5表达,从而增强对人肝癌HepG2细胞周期阻滞、细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用,因此有望成为一种新型、有效的肝癌超声靶向治疗方法。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

马鞭草C部位使人绒癌JAR细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡

目的：观察马鞭草C部位(Verbena officinalis C)对人绒癌JAR细胞周期分布和凋亡的影响．探讨其诱导凋亡机制。方法：采用MTT比色法测定马鞭草C部位对JAR细胞增殖的影响；流式细胞仪检测其对JAR细胞周期分布和细胞凋广的影响：RT—PCR检测药物作用前后Bax和Bcl—2 mRNA表达变化。结果：马鞭草C部位抑制绒癌JAR细胞增殖，并呈明显时间和剂量效应关系。流式细胞仪结果显示，与对照组比较．40g/L马鞭草C部位处理48h后，使JAR细胞G2／M期增加154.3％，S期比例降低41．6％；JAR细胞凋亡率增加6．74倍。不同剂量马鞭草C部位处理JAR细胞48h后．BaX表达水平增加，Bcl—2表达水平下降．并呈剂量依赖性。结论：马鞭草C部位阻滞绒癌JAR细胞于G2／M期．通过改变Bax和Bcl—2表达，诱导JAR细胞凋亡。