嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.     

柴苓汤可增强环孢菌素A对给予氨基核苷嘌呤霉素大鼠肾脏的保护作用

柴苓汤临床用于治疗肾病综合征及肾小球肾炎,本次对柴苓汤能否增强环孢菌素A(CyA)治疗肾病的疗效进行了探讨。 材料和方法:选用SD系雄性大鼠,单次静脉给予氨基核苷嘌呤霉素(PAN)100mg/kg制作肾病模型,对照组给予生理盐水。造模1d后即开始经口给予柴苓汤(1.0g/kg),造模6d后口服CyA(10、20、40mg/kg)。根据造模后6、11、15d尿蛋白排泄量及造模后15d血中总胆固醇、甘油三酯和白蛋白水平判断肾脏病变程度。     

越婢汤和固精方对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠肾小球足细胞损伤的影响

目的探讨发汗解表法(越婢汤)与补肾固精法(固精方)治疗肾病综合征的疗效及可能机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组,每组10只。除正常组外其余各组大鼠采用单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷9 mg/100 g建立肾小球足细胞损伤大鼠模型。造模后第2天开始越婢汤组每天灌胃给予含生药越婢汤2.1 g/100 g,固精方组每天给予含生药固精方7.5 g/100 g,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,连续2周。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯,尿蛋白定量和尿肌酐,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达,观察肾小球病理改变及足细胞超微结构。结果与正常组比较,模型组大鼠尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯上升,血清白蛋白水平降低,尿蛋白肌酐比增加,肾组织TRPC5、TRPC6蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,越婢汤及固精方组血清尿素氮、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、尿蛋白肌酐比下降,白蛋白上升,肾组织TRPC5、TRPC6 mRNA亦降低(P<0.05)。越婢汤组血清白蛋白、尿酸水平、肾组织TRPC5 mRNA表达低于固精方组,而TRPC6 mRNA高于固精方组(P<0.05)。结论越婢汤、固精方可能通过调控肾组织TRPC5及TRPC6表达,减轻足细胞损伤,从而改善肾病综合征的低蛋白、高血脂表现。     

雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠足细胞分子Podocalyxin蛋白的影响

目的 研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾脏podocalyxin表达的影响,探讨其保护足细胞的作用机制.方法 采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组、雷公藤多苷组、雷至胶囊组及正常组,第5周末处死大鼠,光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化;West-Blot的方法检测肾皮质中podocalyxin的表达.结果 与模型组相比,用药组24h尿蛋白、血脂明显降低,同时podocalyxin蛋白表达明显提高,透射电镜显示足细胞足突病变不同程度改善;雷至胶囊组以上指标改善明显优于雷公藤多苷组.结论 podocalyxin与蛋白尿和足细胞形态密切相关;雷至胶囊保护足细胞机制之一是恢复肾小球足细胞podocalyxin的表达.     

柴黄益肾方对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠尿蛋白及纤溶功能的影响

目的:探讨柴黄益肾方提取物(CYE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠尿蛋白及纤溶功能的影响.方法:大鼠经颈静脉一次性注射PAN 5mg/100g体重制备大鼠肾病模型,于造模后第二天开始灌胃给药,连续给药21周后检测24小时尿蛋白含量,腹主动脉取血测定TPA、PAI、AT-Ⅲ纤溶功能. 结果:21周给药蒙诺与CYE均能显著降低尿蛋白,升高组织型纤溶酶原激活物活性(TPA),降低纤溶酶原活化物抑制因子(PAI),增强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ) 活性.结论:柴黄益肾方提取物能抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的大鼠肾病模型的尿蛋白排泄,并能改善纤溶功能.     

通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠FDP、DD、Plg及MDA的影响

目的：观察通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠纤维蛋白降解产物（FDP）、D-二聚体（DD）、纤溶酶原（Plg）及丙二醛（MDA）的影响。方法：颈静脉插管缓慢注入嘌呤霉素氨基核苷（PAN，50mg／kg）并于此后13、16、19天尾静脉追加注射PAN 5mg／kg制备大鼠肾病模型。于造模后第二天开始灌胃给药，连续30天，收集造模后第5、10、15、20、25和30天24小时尿测定尿蛋白排泄。于第31天处死全部大鼠，取血和肾组织进行相关的检查，同时监测FDP、DD、Plg以及MDA等指标。结果：通脉颗粒在减少蛋白尿，改善肾组织病理损害的同时，能够调节FDP、DD、Plg的纤溶活性及清除MDA。结论：通脉颗粒对嘌呤霉素氨基核苷大鼠肾病模型的治疗作用，可能与改善纤溶功能和促进过氧化脂质的清除有关。     

雷公藤多苷片治疗肾病综合征增效减毒作用系统评价

[目的]根据雷公藤多苷片治疗肾病综合征有效性和安全性的系统综述,评价雷公藤多苷片的增效减毒作用.[方法]制订检索策略,检索国内外数据库,经过多层筛选,保留符合纳入标准的原始研究,使用RevMan软件对其进行Meta分析.[结果]Meta分析结果表明,两组完全缓解率有显著性差异[RR=1.51,95％CI(1.33,1....     

雷公藤多苷片治疗肾病综合征增效减毒作用系统评价的再评价

目的对雷公藤多苷片治疗肾病综合征增效减毒作用进行疗效再评价,并对其系统综述进行方法学再评估。方法制定纳排标准和检索策略,筛选阳性药联用雷公藤多苷治疗肾病综合征的系统综述,用AMSTAR量表对其进行方法学评价,并用PRISMA声明对其进行报道质量评价,最后对结局指标进行再评价。结果根据评分自定义得出纳入的6篇系统综述方法学质量均为中等,其中报道质量有5篇为高水平,再评价结果表明与单用阳性药相比,阳性药联用雷公藤多苷片可增加肾病综合征患者的完全缓解率、可降低其24 h尿蛋白含量、降低不良反应发生率和复发率,提高疗效差异均有统计学意义。结论中、高等质量系统综述显示,雷公藤多苷片在与其他阳性药联用时,可能具有一定的增效减毒的作用。     

复方雷公藤汤对肾病大鼠肝脏减毒增效作用的实验研究

目的:借助复方雷公藤汤及其拆方对肾病大鼠的干预效应,考察雷公藤不同配伍对雷公藤的减毒增效作用;筛取治疗肾病综合征毒效关系最优化的中药小复方。方法:大鼠尾静脉注射阿霉素,复制微小病变肾病综合征模型。以复方雷公藤汤及其拆方实施干预,以强地松做阳性对照,检测生化指标、组织病理学指标。结果:与模型公藤组24 h尿蛋白(92.60±18.124 3)相比较,全方组(48.60±11.749 2)、雷芪组(53.20±13.206 1)、雷甘组(56.40±16.520)降低24 h尿蛋白;全方组TP 68.47±5.250 4、ALB 28.97±3.009 3、雷芪组TP 68.21±4.191 27、ALB 27.58±2.618 2、雷甘组TP 67.51±5.420 8、ALB 26.56±1.898 1与模型公藤组TP 58.98±4.8401、ALB 20.98±3.493 4均升高TP、ALB,与模型公藤组chol 1.487 0±0.647 1、TG 1.704 0±1.582 4相比较,全方组chol 0.786 0±0.134 4、TG 0.557 0±0.138 7、雷芪组chol 0.70±0.129 7、TG 0.650 9±0.120 3、雷甘组chol0.974 0±0.328 9、TG 0.668 0±0.184 5均降低;与模型公藤组AST 133.2±7.871 2、ALT 62.60±7.919 0相比较,全方组AST 72.70±10.144 0、ALT 41.80±8.966 6、雷甘组AST 84.20±5.633 2、ALT 38.20±5.846 2、雷金组AST 115.50±9.686 8、ALT 66.10±9.596 9、雷归组AST 128.7±10.739 9、ALT 61.60±8.821 7;差异显著(均P0.05)。雷公藤不同配伍组对肾脏组织形态学、超微结构上较对照组病理损害有不同程度减轻。全方组、雷甘组、雷何组肝脏组织形态学、超微结构上较对照组病理损害有不同程度减轻。结论:全方组、雷芪组、雷甘组起到增效作用。全方组、雷甘组、雷何组可减低雷公藤肝脏毒性。     

定心胶囊对房颤大鼠血清D-二聚体的影响

目的:通过探讨定心胶囊对房颤大鼠血清D-二聚体含量的影响,揭示益气养阴活血中药预防和治疗房颤的作用机制。方法:选用体重在200～250 g的健康雄性Wistar大鼠,建立慢性房颤的动物模型。将造模成功的30只大鼠随机分为3组:模型组、定心胶囊治疗组(16.2 g·kg-1.d-1)和维拉帕米对照组(4.5 mg·kg-1.d-1),另设一组正常对照组。用药4周后,观察各组房颤大鼠血清D-二聚体的变化。结果:大鼠房颤模型组与正常对照组比较,血清D-二聚体的含量明显增加(P<0.05)。定心胶囊治疗组和维拉帕米对照组与模型组比较,可以明显地降低血清中D-二聚体的含量(P<0.05)。定心胶囊治疗组与维拉帕米对照组对房颤大鼠血清中D-二聚体的改善程度相比前者优于后者(P<0.05),有统计学意义。结论:定心胶囊能够明显降低房颤大鼠血清D-二聚体的水平,是防治房颤的有效药物。     

雷公藤减毒研究述评

雷公藤在风湿免疫性疾病与肾脏疾病的临床疗效显著,但其毒副作用限制了其在许多领域的应用。其毒副作用主要表现在消化、生殖、血液、免疫等系统。因此,雷公藤制剂的减毒持效研究成为近年的焦点。作者对1999～2011年雷公藤减毒研究的相关文献48篇进行了检索分析。由文献可知传统上的雷公藤减毒方法包括剂型改革、炮制及中药配伍等。近年来出现的双向固体发酵技术可获取雷公藤新药材,为雷公藤减毒持效研究拓宽了思路,值得进一步推广应用。今后需将传统中医理论与现代药理药效机制结合,借助于现代检测方法,揭示其减毒持效的机制,为雷公藤制剂的新药研发提供依据。     

Antiangiogenic activity of Tripterygium wilfordii and its terpenoids

Ethnopharmacological relevance

Tripterygium wilfordii Hook. f. (Celastraceae) has been traditionally used as folk medicine for centuries in China for the treatment of immune-inflammatory diseases.

Aim of the study

This study aimed to assess the antiangiogenic activities which support the therapeutic use of Tripterygium wilfordii and its terpenoids for angiogenesis disease such as cancer.

Materials and methods

The ethanol extract of Tripterygium wilfordii and subsequent fractions were evaluated on an in vivo antiangiogenic zebrafish embryo model.

Results

Three antiangiogenic terpenoids were isolated by bioassay-guided purification, namely, celastrol (4), cangoronine (5) and triptolide (7). Among them, triptolide manifested the most potent antiangiogenic activity against vessel formation by nearly 50% at 1.2 μM. Semi-quantitative RT-PCR analysis revealed that triptolide dose- and time-dependently reduced the mRNA expression of angiopoietin (angpt)2 and tie2 in zebrafish, indicating the involvement of angpt2/tie2 signaling pathway in the antiangiogenic action of triptolide.

Conclusions

The discovery of an alternative pathway further confirms the value of ethnopharmacological investigations into traditional botanicals for leads for potential drug development.     

雷公藤抗炎免疫调节活性单体的研究进展

雷公藤化学成分复杂,为调研和概述雷公藤中主要已知单体成分的抗炎免疫调节活性和毒性以及药动学研究进展。作者检索了国内外近30年来关于雷公藤及雷公藤中单体成分药理学、毒理学和药代动力学研究的相关文献。研究证明雷公藤甲素等10多个成分具有抗炎和免疫调节作用。雷醇内酯、雷公藤碱戊、雷公藤内酯酮、去甲泽拉木醛更具有进一步药理学和毒理学研究的价值。     

白芍总苷对雷公藤多苷治疗狼疮性肾炎减毒增效作用的实验研究

目的 探讨白芍总苷(TGP)对雷公藤多苷(TG)治疗狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)小鼠的减毒增效作用.方法 取B6D2F1代杂交小鼠建立慢性移植物抗宿主病(cGVHD)LN小鼠模型,将成模小鼠随机分为3组,模型(LN)组、TG组、TG+TGP组,每组6只,另设正常对照组6只.TG组给予雷公藤多苷灌胃,剂量为30 mg·kg~(-1)·d~(-1);TG+TGP组给予雷公藤多苷及白芍总苷灌胃,剂量分别为30 mg·kg~(-1)·d~(-1)和200 mg·kg~(-1)·d~(-1),正常对照组和LN组分别给予等容量生理盐水灌胃,每日给药1次,各组给药方法及时间均相同,共计4周.实验结束时,观察并比较各组小鼠的24 h尿蛋白排泄率(UPE)、肝肾功能及肾脏病理改变.结果 与LN组相比,TG组、TG+TGP组小鼠的24 h UPE、尿素(BUN)、肌酐(SCr)显著降低(P＜0.05或P＜0.01),TG+TGP组显著低于TG组(P＜0.05或P＜0.01).与LN组相比,TG组小鼠的ALT、AST和MDA均显著增高(P＜0.01),SOD、GSH均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).与TG组相比,TG+TGP组的ALT、AST、MDA均显著降低(P＜0.01),SOD、GSH均显著增高(P＜0.01).TG+TGP组对LN肾脏病理改变的改善作用显著优于TG组(P＜0.05或P＜0.01).结论 TGP对TG治疗LN具有减毒增效的作用.     

归脾汤含药血清对雷公藤醇提物致骨髓细胞凋亡的保护作用

目的:观察归脾汤含药血清对雷公藤醇提物致大鼠骨髓细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养大鼠股骨骨髓细胞,经8mg?L-1的雷公藤醇提物作用后,加入5％,10％,15％,20％的归脾汤含药血清,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响;采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测对骨髓细胞凋亡率的影响.结果:与同等浓度的雷公藤醇提物组比较,15％,20％的归脾汤含药血清能显著升高骨髓细胞的存活率和增殖指数(P ＜0.05或P＜0.01),10％,15％,20％的归脾汤含药血清显著降低骨髓细胞凋亡指数(P＜0.05).结论:归脾汤含药血清能显著增加雷公藤醇提物作用后骨髓细胞的存活率,诱导骨髓细胞由相对静止期进入增殖活跃期,并减少细胞凋亡.     

不同氨基酸对雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的影响

以雷公藤不定根为材料,通过在MS培养基中添加不同浓度的天冬氨酸,异亮氨酸,半胱氨酸和精氨酸,研究其对雷公藤不定根生长和次生代谢产物含量的影响。结果表明：第3周添加0.25 mmol·L^-1天冬氨酸时,虽然不定根增长量为对照的80%,但不定根及培养液中雷公藤内酯醇含量分别为对照的1.36,1.3倍,雷公藤吉碱含量分别为对照的1.16,1.37倍,雷公藤次碱的含量分别为对照的1.22,1.63倍。第3周添加0.05 mmol·L^-1的异亮氨酸时不定根增长量为对照的97.3%,不定根及培养液中雷公藤吉碱分别为对照的1.02,1.27倍,雷公藤次碱的含量分别为对照的1.36,1.15倍。第1周添加0.25 mmol·L^-1半胱氨酸时,不定根增长量仅为对照的77.5%,但不定根中雷公藤内酯醇含量为对照的1.87倍。第2周添加1.00 mmol·L^-1半胱氨酸时,培养液中雷公藤次碱含量为对照的2.97倍。在第3周精氨酸浓度为0.5 mmol·L^-1时,不定根增长量为对照124.2%,雷公藤吉碱和次碱的含量分别为对照的1.3,1.4倍。     

类风湿性关节炎治疗中雷公藤的减毒增效措施的研究现状

雷公藤Tripterygium wilfordii系卫矛科雷公藤属植物,其药用历史悠久,应用广泛,被用于治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)。但雷公藤毒性较大,毒副作用限制了它的临床应用,主要表现在生殖系统、免疫系统、消化系统等。因此,开展雷公藤的减毒增效研究是十分必要的。本文通过查阅近年关于雷公藤及其制剂在类风湿性关节炎治疗中的研究文献,分别针对雷公藤的炮制减毒工艺,制剂剂型改良,复方中药配伍,联合西药和针灸配合等方面展开调研工作。雷公藤的炮制之法自古有之,主要有净制,羊血炮制,加热炮制,近年又出现了微博煨制及双向固体发酵等新方法,均能起到增效减毒的作用。雷公藤制剂剂型多样,多数口服后经肠道吸收,毒性较大,外用通过皮肤黏膜吸收毒性较小。因此通过剂型改良,可以有效减少药物对胃肠道的刺激时间,增强药物的吸收利用,增加生物利用度。常见剂型包括:栓剂,缓释片,滴丸剂和贴膏等。研究表明甘草配伍雷公藤,能加速雷公藤甲素等成分的代谢转换,降低毒性;配伍白芍能够减少肝损伤。合理的复方配伍也能降低雷公藤的毒副作用。除此之外,通过联合西药或配合针灸治疗均能对雷公藤起到减毒增效的作用。本文就以上几个方面,探讨了RA治疗中雷公藤的减毒增效措施进行整理归纳,以期能促进雷公藤在临床上治疗RA的有效应用。     

五味子藤茎提取物急性毒性试验及对小鼠试验性肝损伤的保护作用

目的:观察五味子藤茎提取物的对小鼠急性毒性反应及其对CCl4致小鼠肝损伤动物模型的保护作用。方法:测定最大给药浓度(0.40 g.mL-1),最大体积(0.04 mL.g-1)的2次ig对小鼠最大耐受量(MTD),并采用CCl4致小鼠急性肝损伤模型,观察五味子藤茎提取物低、中、高剂量(3.03,4.55,9.09 g.kg-1)对肝损伤小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)水平的影响。结果:五味子藤茎提取物对小鼠1次ig MTD为32 g.kg-1.d-1,五味子藤茎提取物各剂量组均能降低小鼠血清ALT,AST水平,与模型组比较,高、中剂量组差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论:五味子藤茎提取物毒性较低,对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较强的保护作用。     

宫炎平胶囊对大鼠的长期毒性试验

目的观察宫炎平胶囊对大鼠的毒性反应,评价其安全性。方法随机分为高、中、低剂量组(45.6、22.8、11.4g?kg-1体重)及生理盐水对照组,灌胃给药3个月,观察大鼠的毒性反应。结果停药时大鼠中、高剂量组红细胞、血红蛋白、血小板计数均明显下降,高剂量组中性白细胞明显下降;天门冬氨酸氨基转移酶均明显升高;总胆固醇、血脂、血糖、白蛋白、肌酐含量均明显下降;中、高剂量组血尿素氮含量升高。停药二周后上述指标均有效改善。病理组织学检查各脏器均未见损害或异常。结论宫炎平胶囊大鼠灌胃给药的阈剂量在生药量45.6g?kg-1体重范围;没有造成病理组织学改变,其功能性影响是可逆的。