补肾活血法调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的:探讨补肾活血汤及其拆方含药血清调控大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性的作用。方法:体外骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞,免疫荧光法鉴定细胞表面抗原,成骨及成脂诱导证实其多向分化潜能;实验分为补肾活血汤全方组、补肾组、活血组及空白对照组,运用补肾活血汤及其拆方含药血清干预第3代BMSCs 48h,并用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:MTT结果显示:体积分数5%及10%补肾活血汤全方含药血清均有促进大鼠BMSCs增殖的作用;流式细胞仪检测细胞周期显示:运用补肾活血汤含药血清干预后,处于增值分裂期(S+G2+M期)的BMSCs百分率增多,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血汤全方含药血清有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。     

补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.     

黄芪甲苷和三七总皂苷配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠海马NSCs的保护作用

目的探讨黄芪甲苷(AS)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经干细胞(NSCs)的保护作用。方法无血清法培养新生大鼠海马NSCs,将NSCs分为对照组、缺糖缺氧-再灌注(OGD-R)组、AS和PNS配伍组。对照组常规培养,OGD-R组无糖缺氧处理后常规孵育,AS和PNS配伍组在OGD-R基础上用AS和PNS干预培养。比色法测定NSCs的乳酸脱氢酶(LDH),MTT法测定NSCs存活率,DAPI染色检测NSCs凋亡,Nestin/Brd U染色检测NSCs增殖。结果与对照组比较,OGD-R组NSCs的存活率及DAPI核染、Nestin/Brd U阳性反应显著降低,LDH漏出率显著升高(P0.01)。与OGD-R组比较,AS和PNS组NSCs的存活率、DAPI核染、Nestin/Brd U阳性光密度、面密度及细胞数显著增多,LDH漏出率显著降低(P0.01)。结论 AS和PNS可提高OGD-R新生大鼠海马NSCs的存活率,抑制NSCs凋亡,促进NSCs增殖。     

补肾活血方含药血清对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨补肾活血方对小鼠肢芽细胞向软骨细胞分化增殖的影响。方法分离12.5天小鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,同时用补肾活血方含药血清进行干预。采用MTT法检测肢芽细胞的增殖活性,阿尔新蓝染色检测肢芽细胞分化为软骨细胞能力,RT-PCR法检测肢芽细胞中Col2a1、Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平。结果与空白对照组比较,补肾活血方含药血清组在24 h、48 h和72 h 3个时间点均能显著促进小鼠肢芽细胞增殖。微团培养6 d后,阿尔新蓝染色结果显示补肾活血方含药血清组软骨细胞集落形成增加。RT-PCR结果显示补肾活血方含药血清组肢芽细胞Col2a1 mRNA表达水平增加,而Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA表达下调。结论补肾活血方含药血清可能通过β-catenin信号通路促进小鼠胚胎肢芽细胞的增殖与分化。     

地黄饮子含药血清对海马脑片SDF-1的影响

目的:探讨地黄饮子对大鼠海马脑片SDF-1蛋白的影响。方法:SD大鼠18只,用乙醚麻醉大鼠,分离海马组织,培养2周后,分为对照组(HOTC组)和低氧缺糖组(OGD组)。采用地黄饮子含药血清培养海马脑片,观察地黄饮子含药血清对海马脑片SDF-1的影响。结果:研究发现用地黄饮子含药血清培养大鼠脑片,能明显提高缺血、缺氧组脑片SDF-1蛋白、CXCR4含量,与对照组比较具有显著差异,说明地黄饮子能促进缺血区SDF-1的表达,进一步促进低氧低糖区脑组织神经再生能力。结论:地黄饮子含药血清能有效提高缺血缺氧区脑片SDF-1含量,进一步改善脑组织缺血缺氧能力,通过SDF-1/CXCR4信号通路促进脑组织神经再生能力。     

扶正活血不同组方大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响

目的:观察不同扶正活血组方大鼠的含药血清对肝星状细胞增殖的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常血清对照组(简称正常组)、秋水仙碱对照组(简称阳性组)、扶正活血组(1号、2号、3号组)共5组,每组6只,HSC-T6细胞复苏后常规培养,采用MTT法观察药物对HSC-T6细胞增殖的影响。结果:与正常对照组比较,扶正活血各方组大鼠高浓度含药血清对HSC-T6增殖抑制率具有明显抑制作用(P﹤0.01)。结论:扶正活血不同组方大鼠含药血清对HSC增殖均有不同程度的抑制作用。     

紫癜肾Ⅰ号方含药血清对体外培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及活性氧产生的影响

目的:探讨紫癜肾Ⅰ号方含药血清对体外培养大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及活性氧产生的影响。方法:以不同剂量的紫癜肾Ⅰ号方含药血清体外培养大鼠肾小球系膜细胞,采用MTT法检测培养细胞的增殖能力,羟胺法检测培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)水平,比色法检测培养上清液清除活性氧(ROS)能力。结果:紫癜肾Ⅰ号方含药血清能显著抑制体外培养rGMC的增殖,提高培养上清液SOD值水平及清除活性氧单位值,且作用与药物浓度正相关。结论:紫癜肾Ⅰ号方可通过抑制GMC的过度增殖活化、下调ROS生成而减轻紫癜性肾炎(HSPN)的肾小球系膜增生。     

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法：体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-［4,5-dimethylthylthiazol-2-yl］-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果：与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论：高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

益肾降浊方防治慢性肾衰肾组织纤维化的机理研究

目的:观察益肾降浊方对5/6肾切除慢性肾衰(CRF)大鼠肾组织TGF-β_1、BMP-7及体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(MC)和肾间质成纤维细胞(FC)增殖情况,探讨益肾降浊方治疗慢性肾功能衰竭的机理。方法:采用动物模型和细胞培养的方法。清洁级7周龄雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、CRF模型组、CRF对照组、CRF治疗组。分别进行手术造模并予不同药物治疗后,免疫组化法观察肾组织TGF-β_1、BMP-7;体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(GMC)、肾间质成纤维细胞(RIF),制备各组含药血清,细胞给药后MTT法测定细胞增殖情况。结果:益肾降浊方可降低CRF大鼠血清BUN、SCr(P0.05),降低残余肾组织中TGF-β_1而提高BMP-7(P0.05);肾组织HE染色结果示肾组织纤维化减轻;益肾降浊方含药血清能抑制体外培养SD大鼠GMC和RIF的增殖(P0.05)。结论:益肾降浊方能够有效地减缓慢性肾衰肾组织纤维化发展,是防治慢性肾衰的有效方药。     

冠通方及其拆方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:通过冠通方及其拆方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响研究,探讨冠通方防治再狭窄的部分作用机制.方法:每组SD大鼠每天给药剂量分别为冠通方组23.75 g·kg-1,活血祛瘀组8.75 g·kg-1,益气养阴组5 g·kg-1,清热化痰组10 g'kg-1,连续给药7d,制备冠通方及其各拆方含药血清,将大鼠VSMC分为6组(每组6个复孔),空白组加5％正常大鼠血清,模型组加5％正常大鼠血清及10-6mol· L-1的AngⅡ,冠通方及各拆方组在每组分别加入5％含药血清及10-6mol·L-1的AngⅡ,孵育48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;结果:血管平滑肌细胞模型组早期细胞凋亡率(0.36 ±0.14)％,晚期细胞凋亡率(1.02±0.86)％与空白对照组早期细胞凋亡率(2.22±0.43)％,晚期细胞凋亡率(1.29±0.57)％相比,细胞凋亡率均明显降低(P＜0.01).与模型组相比早期、晚期细胞凋亡率冠通方组为(23.4±0.95)％,(9.1±0.69)％、活血祛瘀组为(8.08±0.54)％,(18.6±1.48)％、益气养阴组(16.9±0.79)％,(4.38±0.90)％、清热化痰组(5.9±0.99)％,(11.5±0.71)％,早期及晚期凋亡率均明显升高(P＜0.05);结论:冠通方抑制VSMC的增殖与影响其周期、诱导其凋亡有关;且冠通方组作用优于其拆方组.     

补阳还五汤通过调节自噬促进OGD/R损伤大鼠NSCs增殖、分化能力

目的:探讨补阳还五汤(BDT)对神经干细胞(NSCs)糖氧剥夺/复氧(OGD/R)损伤后增殖、分化的影响.方法:从SD大鼠海马区域分离培养NSCs,将细胞随机分为5组,分别为常氧组,模型组,BDT组,雷帕霉素(Rapa)组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合BDT组,常氧组和模型组使用20％空白血清,BDT组使用...     

中药补肾方对体外培养软骨细胞影响

目的 为了解中药补肾方对体外培养软骨细胞的作用.方法 取Wistar大鼠关节软骨,将软骨细胞分离传代后,分为补肾方含药血清组和对照组,置入37 ℃,50 ml/ L 的CO2培养箱内培养7 d 后,采用MTT 法检测细胞增殖; TUNEL 法检测各组软骨细胞的凋亡.结果 中药补肾方高、中、低剂量组细胞增殖均高于对照组( P<0. 05) ;中药补肾方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于对照组( P<0. 05) .结论 中药补肾方可促进软骨细胞增殖与抑制软骨细胞的凋亡.     

开心散含药血清对Aβ_(1-42)损伤的神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨开心散含药血清对人β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))损伤的神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:取6月龄C57BL/6小鼠40只,分成4组,空白组给予0.9%氯化钠溶液,其他组分别给予开心散水煎液12、24、48 g·kg~(-1)制备含药血清。原代培养新生C57BL/6小鼠海马NSCs,采用Aβ_(1-42)孵育24 h诱导NSCs的阿尔茨海默病(AD)细胞模型。细胞分为5组,分别为对照组、模型组及开心散含药血清高、中、低剂量组。对照组和模型组给予10%空白血清,给药组分别给予10%的开心散48、24、12 g·kg~(-1)组含药血清;CCK-8法检测NSCs活力;免疫荧光法(IF)检测增殖条件下Ki67阳性细胞数量,分化条件下胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、中分子量神经丝蛋白(NF-M)和硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)阳性细胞数量及占比。结果:与模型组比较,各组开心散含药血清均能提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs存活率,增加Ki67阳性细胞数量,并增加NF-M阳性细胞占比。结论:开心散含药血清能够提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs的存活率,拮抗NSCs增殖和分化能力的异常。     

Fas与FasL在芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨Fas与Fas L在芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)凋亡中的作用。方法:芪白平肺胶囊含药血清和空白血清的制备。大鼠PASMCs的培养及a-SMA细胞免疫荧光鉴定。MTT法筛选最佳含药血清及最佳低氧时间。正式实验根据MTT结果分为常氧对照组,低氧模型组,最佳含药血清组,含药血清作用最佳低氧时间后,TUNEL-FITC/DAPI法检测各组PASMCs凋亡情况,Western Blot法检测各组PASMCs的Fas与Fas L蛋白表达变化。结果:与低氧模型组比较,芪白平肺胶囊含药血清可明显促进低氧大鼠PASMCs的凋亡,但细胞内Fas与Fas L蛋白表达较模型组无显著差异。结论:芪白平肺胶囊含药血清能有效抑制低氧大鼠PASMCs增殖作用,促进其凋亡,但Fas/Fas L死亡受体通路可能不参与芪白平肺胶囊含药血清诱导低氧大鼠PASMCs凋亡的调控。     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。     

不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

田麻益智颗粒对谷氨酸损伤的原代海马神经元的保护作用

目的:通过观察田麻益智颗粒含药血清对GLu损伤的胎鼠海马神经元的保护作用,探讨田麻益智颗粒对脑损伤神经元的保护机制。方法:取孕7 d Wistar大鼠的胎鼠海马,进行体外培养,并对培养的神经干细胞进行神经元鉴定。部分细胞开始贴壁,贴壁细胞呈圆形结果培养24 h后,大部分细胞己经贴壁生长:分化3 d后神经元胞体增大,突起延长并出现分枝,形成稀疏的网络,7d胞体大,突起长,分枝连接成网,相互联系增多细胞成熟。MTT结果表明,田麻益智颗粒含药血清保护组与Glu损伤模型组相比细胞活性明显升高(P<0.05)。平均值,田麻益智颗粒中剂量组对Glu损伤的神经元细胞保护作用与尼莫地平组的保护作用接近,优于正常组及模型组。说明田麻益智颗粒含药血清对Glu损伤海马神经元有保护作用。免疫荧光结果半定量分析结果标记CAMKII的神经元细胞中,统计分析结果表明正常组平均灰度值为148.6±9.88、保护组灰度值151.0±12.37低于Glu损伤组171.5±6.87(P<0.05),说明保护组中CAMKII的含量与正常组接近,并且较Glu损伤模型组少,中剂量组田麻益智颗粒对谷氨酸损伤神的海马神经元的有较好的保护作用。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾清热活血方含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、周期及P-β-catenin表达的影响

目的:观察健脾清热活血方对人结肠癌SW480细胞凋亡、增殖、周期及P-β-catenin蛋白的影响,探讨该方防治结肠癌可能机制。方法:培养人结肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、不同浓度健脾清热活血方含药血清及PI3K阻断剂LY294002干预24 h,MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期,免疫荧光染色法检测P-β-catenin核内转位。结果:健脾清热活血方含药血清组细胞增殖抑制率及凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);同时S期细胞比例显著升高、G1期细胞比例显著降低(P0.05)。健脾清热活血方含药血清组及LY294002组细胞P-β-catenin以膜表达为主,而空白对照组P-β-catenin以膜表达缺失及核内表达增加为主。结论:健脾清热活血方可能通过调控P-β-catenin核内转录,阻滞SW480细胞周期于G1期,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,从而发挥防治结肠癌的效用。