川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)对NSCs增殖无影响(P>0.05)。川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中浓度)促进神经干细胞分化(P<0.05),促进Notch1、Tublin、caspase-3 mRNA表达(P<0.05),抑制Jagged1、Hes1、Sox2,Pax6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);高浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进神经干细胞凋亡(P<0.05),促进GFAP mRNA表达(P<0.05),抑制Ngn1 mRNA表达(P<0.01)。中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进Tublin蛋白及Ngn1 mRNA表达,抑制GFAP、Jagged1蛋白及GFAP mRNA表达(P<0.05,P<...     

丹参素对低氧低糖损伤神经细胞的影响

目的 评价丹参素对低氧低糖诱导人拟神经元细胞SH-SY5Y损伤的影响.方法采用细胞培养于人工无糖培养基、1.5% O_2和5% CO_2环境建立低氧低糖损伤SH-SY5Y细胞模型.以SRB方法测定存活细胞数,相差和荧光显微镜观察细胞凋亡,采用细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞受损伤程度,并测定了细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性以反映细胞氧化胁迫状态.结果 低氧低糖损伤24h,存活细胞数量明显减少,SH-SY5Y细胞皱缩、吖啶橙和溴化乙啶双染可见明显核皱缩、碎裂及凋亡小体出现,细胞培养上清LDH水平明显升高,细胞内MDA含量明显升高,SOD水平降低,表明细胞受到严重的氧化胁迫损伤.丹参素可抑制细胞内SOD活性的降低,对上述各损伤指标均有明显的干预作用,且具有浓度依赖性.结论 丹参素对低氧低糖所致SH-SY5Y神经瘤细胞损伤有明显保护作用,有望成为有临床应用价值的神经保护剂.     

火针干预脊髓损伤大鼠后血清对神经干细胞增殖分化的影响

[目的]研究离体状态下火针干预脊髓损伤大鼠后提取血清对神经干细胞增殖分化的影响。[方法]将15只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及火针组,相应干预3 d后取各组大鼠血清。从孕14天昆明小鼠胚胎脊髓组织中分离培养神经干细胞,同时采用上述各组血清进行培养,7 d后观察各组神经干细胞增殖与分化情况。[结果]神经干细胞在各组血清中均能存活、增殖并可向神经元分化,火针组神经干细胞增殖数目显著多于假手术组及模型组,且火针组神经元分化比例高于其余两组(P<0.05)。[结论]火针干预脊髓损伤大鼠后血清可促进神经干细胞增殖并向神经元分化。     

当归对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞增殖的影响

目的 探讨宫内缺氧对新生大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液的保护作用.方法 将孕期14 d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组.缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8 ml/kg(连续7d),后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2 h(连续3d孕期第14,15,16天);当归治疗组用250 g/L的当归注射液代替生理盐水,其余处理同缺氧组;对照组不缺氧,其余同缺氧组.孕鼠分娩后立即取新生鼠大脑组织,常规石蜡切片,经巢蛋白(nestin)免疫组织化学染色后行图像分析.结果 缺氧组新生鼠海马巢蛋白免疫组化阳性细胞的积分光密度(IOD)值较对照组增加[IOD缺氧组(14 806±4 636.8);IOD对照组(7 387±3191.7),P＜0.05];当归治疗组新生鼠海马巢蛋白免疫组化阳性细胞的IOD值较缺氧组减弱[IOD治疗组(9 859±2 386.4),P＜0.05].结论 一定程度的缺氧可刺激神经干细胞增殖;当归注射液对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞可能具有保护作用.     

补肾活血法调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

目的:探讨补肾活血汤及其拆方含药血清调控大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性的作用。方法:体外骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞,免疫荧光法鉴定细胞表面抗原,成骨及成脂诱导证实其多向分化潜能;实验分为补肾活血汤全方组、补肾组、活血组及空白对照组,运用补肾活血汤及其拆方含药血清干预第3代BMSCs 48h,并用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:MTT结果显示:体积分数5%及10%补肾活血汤全方含药血清均有促进大鼠BMSCs增殖的作用;流式细胞仪检测细胞周期显示:运用补肾活血汤含药血清干预后,处于增值分裂期(S+G2+M期)的BMSCs百分率增多,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血汤全方含药血清有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。     

清热化瘀方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的观察清热化瘀方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖的影响。方法 90只大鼠随机分为假手术组、模型组、清热化瘀组3组,采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠（MCAO）模型,观察大鼠缺血损伤后缺血半暗带区的细胞增殖。采用免疫组化法观察脑缺血再灌注后2 d、4 d、7 d、14 d、21 d五个时间点巢蛋白（Nestin）及5-溴脱氧尿苷（BrdU）免疫活性的变化。结果清热化瘀组大鼠在第2天、第4天、第7天的神经功能缺损评分明显优于模型组（P〈0.05）;模型组缺血半暗带Nestin和BrdU阳性表达分别于再灌注7 d和14 d达高峰（P〈0.05）,以后表达逐渐减弱;清热化瘀组可以明显增加缺血再灌注后第4天、第7天、第14天大鼠的Nestin阳性细胞表达（P〈0.05）;并可以明显增加缺血再灌注后第7天、第14天、第21天大鼠缺血半暗带的BrdU阳性细胞表达（P〈0.05）。结论脑缺血损伤可激活神经干细胞,促使其增殖和表达。清热化瘀方可以促进MCAO大鼠缺血半暗带神经干细胞的增殖。     

不同疗程电针干预对放射线照射小鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察不同疗程电针干预对放射性脑损伤小鼠海马区内源性神经干细胞增殖和分化的影响,探讨其改善放射性脑损伤的作用机制。方法:30日龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组、电针1组、电针2组和电针3组,每组10只。除对照组外,其他6组给予放射线照射(8 Gy)10 min制备放射性脑损伤模型,造模后3个电针组分别给予电针百会风府和双侧肾俞1周、2周和3周。用新物体认知实验检测各组小鼠认知功能,免疫组织化学法检测海马区5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的阳性表达,免疫荧光法检测海马区神经元核抗原(NeuN)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性表达。结果:与同时点对照组比较,各模型组小鼠在训练结束90 min和24 h时对新物体的探索时间均显著减少(P<0. 01);90 min时,模型3组小鼠的的认知指数显著下降(P<0. 05),24 h时,各模型组小鼠的认知指数均显著下降(P<0. 05);模型1组和模型2组小鼠海马区BrdU阳性细胞表达明显下降(P<0. 01);各模型组小鼠BrdU/NeuN双标阳性细胞数量均显著减少(P<0. 05),模型1组和模型3组BrdU/GFAP双标阳性细胞表达显著降低(P<0. 05)。与同时点模型组比较,各电针组在两个时间点对新物体的探索时间均明显增加(P<0. 05,P<0. 01);90 min时,电针3组的认知指数显著高于模型3组(P<0. 05),24 h时,电针2组和电针3组小鼠认知指数显著高于同时点模型组(P<0. 01);各电针组小鼠海马区BrdU阳性细胞、BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞均比同时点模型组显著增加(P<0. 05,P<0. 01,P<0. 001)。结论:不同疗程电针干预均可改善放射线照射小鼠的认知功能,可能与其促进小鼠海马区神经干细胞的增殖和分化有关。     

脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的作用

目的 探讨脑络欣通药物血清和左归丸药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cell, NSC)增殖分化的作用。方法 分别采用含10%脑络欣通药物血清和含10%左归丸药物血清的培养基培养大鼠胚胎NSC,观察其促增殖效应和诱导分化效应,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察。结果 脑络欣通药物血清和左归丸药物血清均可诱导绝大多数NSC分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。此外,两者还能在一定程度上促进培养的NSC生长。前者诱导NSC分化的进程虽比后者要慢,但诱导NSC向神经元方向分化的比率较高,其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近;后者促进NSC生长的效应较为显著。结论 脑络欣通和左归丸均能促进体外培养的NSC生长和分化,两者作用有一定差异;益气活血治法和补肾生髓治法对NSC进行诱导分化具有一定的可行性。     

牛磺酸对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞增殖的影响

目的:研究牛磺酸对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞增殖的影响及治疗缺血性脑损伤的作用机制。方法:采用开颅热凝闭法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分为正常组、假手术组、模型组与牛磺酸组,采用腹腔注射每天给予牛磺酸,采用5-溴脱氧尿苷(Brdu)免疫组化法观察脑缺血后3,7,14d与21d4个不同时相Brdu阳性细胞表达的数量。结果:脑缺血后不同时相缺血侧皮质、海马齿状回和纹状体均有Brdu阳性细胞表达,其中7d时各区的阳性细胞数量明显增加,分别为(18.65±4.38)、(25.63±3.58)、(19.46±2.98),具有统计学意义(P<0.05);不同时相牛磺酸组Brdu阳性细胞表达与模型组比较明显增加(P<0.05)。结论:牛磺酸可促进缺血后脑区Brdu阳性细胞数量的增加,提示牛磺酸对治疗脑缺血有重要作用。     

左归丸对体外培养新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

左归丸具有滋阴补肾功效.笔者的在体实验表明左旋单钠谷氨酸模拟肾阴虚证大鼠神经干细胞(Nerve Stemceu,NSC)增殖分化和凋亡与正常组有明显差异[1,2].为探讨左归丸以及左旋单钠谷氨酸所致肾阴虚模型中有关NSC增殖分化的作用及机制,本实验从神经干细胞增殖分化方面作以下探讨.     

灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg/kg),每天2次,连续注射10天。损伤用药组动物胃饲灵芝孢子。在脊髓损伤后2周和4周,用免疫荧光组织化学法检测两组动物脊髓中央管室管膜细胞的 BrdU、nestin、neurofilament(NF)、oligodendrocyte specific protein 和 glial fibrillary acidic protein(GFAP)标记物,并分析其增殖和分化情况。结果损伤用药组大鼠脊髓室管膜细胞 BrdU 阳性染色数量[(45.67±3.62)个]高于损伤不用药组[(29.91±3.68)个]。在脊髓白质中,有些 BrdU 阳性细胞同时表达 oligodendrocyte specific protein 或nestin 或 NF 或 GFAP。结论灵芝孢子能够促进大鼠受损伤脊髓中央管室管膜细胞增殖,少数增殖后的细胞能分化为神经干细胞、神经元...     

开心散含药血清对Aβ_(1-42)损伤的神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨开心散含药血清对人β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))损伤的神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:取6月龄C57BL/6小鼠40只,分成4组,空白组给予0.9%氯化钠溶液,其他组分别给予开心散水煎液12、24、48 g·kg~(-1)制备含药血清。原代培养新生C57BL/6小鼠海马NSCs,采用Aβ_(1-42)孵育24 h诱导NSCs的阿尔茨海默病(AD)细胞模型。细胞分为5组,分别为对照组、模型组及开心散含药血清高、中、低剂量组。对照组和模型组给予10%空白血清,给药组分别给予10%的开心散48、24、12 g·kg~(-1)组含药血清;CCK-8法检测NSCs活力;免疫荧光法(IF)检测增殖条件下Ki67阳性细胞数量,分化条件下胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、中分子量神经丝蛋白(NF-M)和硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)阳性细胞数量及占比。结果:与模型组比较,各组开心散含药血清均能提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs存活率,增加Ki67阳性细胞数量,并增加NF-M阳性细胞占比。结论:开心散含药血清能够提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs的存活率,拮抗NSCs增殖和分化能力的异常。     

鼠尾草酸对β-淀粉样蛋白损伤的神经干细胞增殖的影响

目的观察鼠尾草酸对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)损伤的神经干细胞的影响,为通过促进神经新生治疗Aβ损伤所致疾病提供理论依据。方法使用Aβ建立神经干细胞损伤模型,使用鼠尾草酸治疗神经干细胞,通过细胞计数法计算神经干细胞的增殖速度,噻唑蓝(MTT)测定神经干细胞活性,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)测定神经干细胞中Nestin m RNA及凋亡相关基因Caspase3 m RNA表达,免疫组化测定神经干细胞向神经元和星形胶质细胞的分化潜能。结果鼠尾草酸能增加神经干细胞的增殖速度,增加神经干细胞活力,减少神经干细胞Caspase3 m RNA表达,增加神经干细胞向神经元分化比例,逆转Aβ损伤造成的神经干细胞凋亡。结论鼠尾草酸促进神经干细胞增殖,促进神经干细胞向神经元分化,逆转Aβ对神经干细胞的损伤可能是由于抑制了凋亡基因表达。     

补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响

目的研究体外添加补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响。方法将弱精子症患者精子与补肾活血方含药血清共培养,应用精子运动CASA分析观察补肾活血方对精子运动能力的影响。结果与含药血清共培养后,运动精子率,前向性运动精子率、平均路径运动速度、曲线运动速度、精子头部侧摆幅度和鞭毛摆动频率均显著提高。结论体外添加补肾活血方含药血清能提高精子运动能力。     

电针督脉对脊髓损伤大鼠脊髓组织线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响

目的：观察电针督脉对脊髓损伤（SCI）大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型。电针组大鼠予以电针“大椎”“脊中”,30 min/次,1次/d,共14 d。用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)运动功能评分法评估大鼠后肢的运动功能;HE染色法、尼氏染色法观察大鼠损伤区脊髓组织病理变化及神经元数量;免疫荧光染色法检测大鼠损伤区脊髓组织中神经干细胞增殖标记物巢蛋白（Nestin）、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)及神经干细胞转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的阳性表达;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白的表达。结果：与同时点假手术组比较,模型组大鼠造模后BBB评分降低（P<0.001）;脊髓组织中神经元肿胀、破裂、坏死严重,尼氏小体溶解严重,神经元数量减少（P<0.001）;Nestin、OPA1、SOX2阳性表达及Nes...     

中医药对神经干细胞增殖分化作用的研究

神经干细胞的定向分化问题是神经干细胞移植治疗中的难点,目前还没有行之有效的办法。中医药在神经干细胞定向分化方面进行了一定探索,并取得一些进展,近年来的研究表明中药复方、单味中药及中药单体都有促进神经干细胞分化增殖的作用。当然这些研究多数还比较肤浅,有待进一步深化。     

黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的 观察黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响,并探讨其作用机理.方法 体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,Nestin 免疫细胞化学染色进行神经干细胞的鉴定,BrdU 标记鉴定增殖.采用稀释法检测黄芪甲苷高、中、低剂量组(6、0.6、0.06 μmol/L)对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.结果 Nestin 染色为阳性,BrdU 的增殖鉴定为阳性.与对照组相比,黄芪甲苷高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加.结论 黄芪甲苷能够明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用.     

益肾活血药对家兔血瘀模型纤溶系统影响的实验研究

目的:探讨益肾活血药对兔血瘀模型的作用。方法:短毛兔30只,随机分为健康组、模型组、益肾活血大剂量(大剂量)组、益肾活血小剂量(小剂量)组及血栓宁组5组,后3组用药15天后造模,各组取静脉血检测组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)、P-选择素(GMP-140)、纤维蛋白原(Fbg)及 D-二聚体(DD)。每组随机取1只内脏作病理检查。结果:t-PA、PAI、GMP-140、Fbg 及 DD 健康组与模型组比较,差异有显著性;大、小剂量组,血栓宁组与模型组比较,差异有显著性;大、小剂量组与血栓宁组比较,差异有显著性;大剂量组与小剂量组比较,差异无显著性。病理改变模型组较重,血栓宁组次之,大、小剂量组较轻,健康组无异常变化。结论:造模成功,益肾活血药大、小剂量组及血栓宁组对兔血瘀模型纤溶系统均有作用;大、小剂量组强于血栓宁组。病理改变符合血液检测变化。     

疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管新生相关基因表达的影响△

目的：观察疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α表达的影响。方法：从大鼠骨髓中获取单个核细胞,体外培养1周后,采用免疫荧光细胞化学和激光共聚焦显微镜鉴定,于培养体系中加入疏肝活血方及其拆方的含药血清,培养24h,Real—TimePCR方法检测EPCs中VEGF、HGF和HIF-1α的mRNA表达。结果：贴壁细胞培养诱导后具有内皮细胞的形态学和免疫学特征,Real—TimePCR检测结果发现,疏肝活血方含药血清能明显提高EPCs中VEGF、HGF、HIF—1α的mRNA表达量,与对照相比差异具有显著意义（P〈0．01）。结论：疏肝活血方能促进EPCs中血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α的表达,是该方促血管新生的机制之一。     

电针对阿尔茨海默病模型幼鼠海马内源性神经干细胞增殖的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型幼鼠海马内源性神经干细胞增殖的影响,探讨电针防治AD的作用机制.方法:将40只1.5月龄APP/PS1转基因雄性幼鼠随机分为电针组和模型组,每组20只;20只同月龄C57BL/6J雄性幼鼠作为正常对照组.电针组于"百会""风府""肾俞"行电针干预,断续波,频率10 Hz,电流强度...