淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

木犀草素抗肿瘤活性研究

目的研究木犀草素对不同肿瘤细胞的细胞毒性。方法正常培养的肺腺癌细胞(A549)、乳腺癌细胞(MCF-7,MDA-MB-231)及血管内皮细胞(HUVECs)经不同浓度的木犀草素(20,40,80,160μM)分别处理24和48 h,倒置显微镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率;吖啶橙染色观察细胞核凝集和片段化;Hoechst 33258检测细胞凋亡;荧光探针DCHF检测细胞内活性氧(ROS);Western blotting检测procaspase-3和LC3B的表达。结果木犀草素以剂量依赖的方式抑制肿瘤细胞增殖,上调MDA-MB-231、MCF-7、A549细胞内的ROS和自噬特异标志物LC3-Ⅱ的水平,活化caspase-3的表达。结论木犀草素可能通过诱导凋亡和自噬抑制肿瘤细胞增殖。     

纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物对人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响

目的:研究纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物在体外对人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响。方法:用不同剂量组对体外培养的MCF-7细胞分别干预12、24、36、48、72h后,用MTT法观察其对MCF-7细胞的生长影响。结果:1纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物作用MCF-7细胞12、24、36h,其浓度5、10、20、40mg/L(除24h 10mg/L外)均表现出对MCF-7细胞稳定的抑制作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05);2纯种发酵淡豆豉异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用,在一定浓度、作用时间有依赖关系,与大豆异黄酮抑制作用相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:纯种发酵淡豆豉有明确的抗乳腺癌的作用,其24h IC50为(7.58±1.57)mg/L。     

黄芪注射液在生理量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:探讨黄芪注射液在生理剂量雌二醇环境下对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响.方法:实验设细胞对照组,他莫昔芬对照组和生理剂量雌二醇环境下5个不同剂量的黄芪注射液组.用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡率,DAN ladder观察凋亡条带.结果:各剂量组黄芪注射液均无促MCF-7细胞增殖效应,且随作用时间延长,均能抑制MCF-7细胞增殖(P＜0.05),并呈剂量依赖性.在质量浓度为2×10-1～2×10-4 g/mL时,各剂量黄芪注射液作用24 h均可使MCF-7细胞周期阻滞于G0/G1或S期(P＜0.05).高剂量(2×10-1g/mL)黄芪注射液作用72 h可诱导MCF-7细胞凋亡.结论:一定剂量范围内的黄芪注射液可抑制激素受体阳性乳腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞的有丝分裂于G0/G1或S期.     

白毛藤对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨Bcl-xl、p53基因在白毛藤诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。方法:不同浓度白毛藤作用于MCF-7细胞48h后,荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bcl-xl、p53基因表达量的变化。结果:白毛藤能诱导MCF-7细胞凋亡,并且上调p53和降低Bcl-xl表达。结论:白毛藤抑制人乳腺癌MCF-7细胞细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与激活p53、抑制Bcl-xl表达有关。     

重楼提取物对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的:检测重楼提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖情况的影响。方法:使用醇回流提取方法和半仿生方法提取重楼的提取物,然后将提取物作用于乳腺癌细胞MCF-7细胞,使用MTT方法检测乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况。结果:本研究中高浓度的重楼提取物对乳腺癌细胞MCF-7的增殖具有明显的抑制作用,浓度最大的重楼提取物对MCF-7细胞的增殖情况影响最为明显,而且,作用时间为48 h时对MCF-7增殖的抑制效果更为明显。两种提取方法相比较,半仿生方法提取的重楼提取物对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用要优于醇回流提取方法提取的重楼提取物。结论:重楼提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有一定的抑制作用,而且半仿生方法提取的重楼提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制效果更为明显。     

三黄煎剂降低ROS促进乳腺癌他莫昔芬耐药细胞凋亡的实验研究

目的探讨三黄煎剂对MCF-7他莫昔芬耐药(MCF-7/TAMR)细胞ROS水平和凋亡的影响。方法建立MCF-7/TAMR细胞系,采用CCK-8法检测他莫昔芬对乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/TAMR增殖的影响,并检测耐药指数;同时检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR增殖的影响。免疫荧光法评价MCF-7、MCF-7/TAMR及各给药组的ROS的水平;流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡情况;Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞凋亡相关蛋白表达对的影响。结果成功构建了MCF-7/TAMR细胞株,不仅在形态上发生了改变,而且对他莫昔芬的抵抗能力得到了增强,其RI指数为(3.61±0.35)(P0.05),三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞株有明显的抑制作用,IC50值为(4.28±0.06)mg/m L,能够降低耐药细胞株的ROS水平,同时能够下调MCF-7/TAMR细胞的Bcl-2活性,上调Ba X/Bak,促使MCF-7/TAMR细胞产生凋亡。结论三黄煎剂通过降低乳腺癌MCF-7TAMR细胞内的ROS水平,抑制乳腺癌MCF-7TAMR细胞增殖并促进乳腺癌MCF-7TAMR细胞凋亡。     

黄芪含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的实验研究

目的:研究不同浓度黄芪含药血清对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用以及Bcl-2蛋白表达的影响,初步探讨黄芪的植物雌激素效应情况.方法:采取MTT法观察不同含药血清组对人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间段(24h,48h,72h)的增殖活性,检测细胞周期及细胞凋亡率,检测细胞凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达.结果:黄芪含药血清可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并且呈现不同剂量的梯度性;不同浓度黄芪含药血清均不能诱导细胞的凋亡;但黄芪高剂量组可以明显的增加G0/G1期比例;黄芪含药血清可以上调Bcl-2蛋白的表达.结论:黄芪含药血清可以抑制MCF-7细胞的增殖;高剂量组可以使MCF-7固定在G0/G1期;可部分上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡.     

扶正消瘤方对人乳腺癌MCF-7干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:观察扶正消瘤方含药血清对人乳腺癌MCF-7干细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用体外悬浮培养乳腺癌MCF-7干细胞作为研究对象,中药灌胃方法制备大鼠含药血清;实验设计为空白对照组,无药血清模型组、中药等效量组、中药1倍量组、中药2倍量组共5组;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,荧光免疫细胞化学法检测细胞凋亡情况。结果:中药含药血清等效剂量组、中药1倍剂量组和中药2倍剂量组对人乳腺癌MCF-7干细胞的抑制率均明显高于空白对照组和无药血清组(P0.05);与空白对照组及无药血清组比较,扶正消瘤方含药血清组人乳腺癌MCF-7干细胞凋亡明显增多。结论:扶正消瘤方能明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导其细胞凋亡。     

异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的研究异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法体外培养MCF-7细胞,分为对照组及不同浓度异乌药内酯处理组。采用MTT实验检测异乌药内酯对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色法检测异乌药内酯对MCF-7细胞周期、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白表达情况。结果异乌药内酯以时间和剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡;能够将MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,诱导线粒体膜电位去极化;上调cleaved Caspase-3和促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导MCF-7细胞的凋亡。结论异乌药内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

芒柄花苷的体外抗乳腺癌作用及机制研究

目的研究芒柄花苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法采用不同浓度芒柄花苷处理乳腺癌细胞MCF-7,噻唑盐(MTS)染色检测细胞活力,Ed U检测细胞增殖能力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western-blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和基质蛋白酶(MMP)-9的表达。结果芒柄花苷剂量和时间依赖性的抑制MCF-7细胞的生长。MCF-7细胞经芒柄花苷干预后,Ed U阳性细胞数减少、侵袭及迁移细胞数减少和Hoechst阳性细胞数增加。芒柄花苷作用MCF-7细胞,可上调Bax的表达和下调Bcl-2、PCNA和MMP-9的表达。结论芒柄花苷可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、诱导凋亡和减少侵袭,其机制可能分别涉及调节PCNA、Bcl-2/Bax和MMP-9的表达。     

补骨脂酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞S期周期阻滞及机制研究

目的研究补骨脂酚对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用及其机制。方法采用噻唑蓝法(MTT法)考察补骨脂酚对MCF-7细胞生长的影响;采用流式细胞术检测补骨脂酚处理后细胞周期分布情况及活性氧(ROS)的产生;利用荧光显微镜观察补骨脂酚对MCF-7细胞核的影响;采用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚作用下MCF-7细胞凋亡、周期相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白的表达;引入ROS清除剂及MAPK家族蛋白抑制剂考察其在补骨脂酚作用下对MCF-7细胞生长抑制率和细胞周期相关蛋白表达的影响。结果补骨脂酚可以呈时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,其抑制作用明显强于阳性药5-氟尿嘧啶。补骨脂酚可诱导MCF-7细胞产生ROS,同时上调p-p53及p21蛋白表达水平,下调细胞周期相关蛋白CDK2和CyclinA2表达水平,进而引起细胞发生S期阻滞。而上述影响可被ROS清除剂Tiron逆转,表明ROS参与补骨脂酚诱导的S期阻滞。加入p38MAPK抑制剂SB203580后,细胞产生的ROS水平降低,表明ROS的产生依赖于p38MAPK途径。结论补骨脂酚抑制MCF-7细胞增殖的作用与其引起细胞发生S期阻滞有关,ROS参与S期阻滞过程。     

七叶皂苷钠通过抑制AKT,ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

探讨七叶皂苷钠对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。运用MTT法检测七叶皂苷钠对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学变化;DAPI染色后在荧光显微镜下检测细胞核变化;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(PARP,cleaved caspase-8,pro-caspase-3)和细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)及其共同上游激酶SRC的磷酸化变化情况。结果显示,不同浓度七叶皂苷钠作用于乳腺癌MCF-7细胞后,以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞增殖;诱导细胞凋亡(典型的凋亡形态学变化、细胞核改变和细胞凋亡率显著增加);细胞凋亡相关蛋白PARP切割增加,cleaved caspase-8表达增加,pro-caspase-3表达减少进一步验证了七叶皂苷钠的凋亡诱导作用;七叶皂苷钠显著抑制细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)的磷酸化,其共同上游激酶SRC的活化亦显著下降。结果表明,七叶皂苷钠通过抑制SRC的活化,阻断信号向下游信号分子AKT,ERK的传递,抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,诱导细胞凋亡。     

消癌平注射液联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨消癌平注射液联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用及机制。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,以不同浓度的消癌平注射液联合紫杉醇进行干预,并与消癌平注射液、紫杉醇单药组进行比较,采用MTT法、细胞克隆实验和LDH检测细胞增殖和细胞毒性,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的产生,RT-PCR检测Mfn2 mRNA的表达。结果:消癌平注射液可显著抑制MCF-7细胞的增殖和克隆,增加LDH的释放,且消癌平注射液联合紫杉醇组较紫杉醇单药组作用更为显著;消癌平注射液可显著增加ROS的生成,但联合用药组与单药组相比无统计学差异;消癌平注射液可上调Mfn2 mRNA的表达,并显著提高紫杉醇引起的Mfn2 mRNA低表达。结论:消癌平注射液联合紫杉醇可能会通过调控Mfn2 mRNA的表达,引起线粒体功能损伤并抑制乳腺癌细胞的增殖,对紫杉醇抗乳腺癌发挥增效作用。     

复方三金胶囊抗乳腺癌细胞增殖作用的体外研究

目的:观察复方三金胶囊对人乳腺癌(MCF-7)细胞生长的抑制作用并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测复方三金胶囊对MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测复方三金胶囊对MCF-7细胞凋亡和周期的影响,Western-blot法检测复方三金胶囊对MCF-7细胞中凋亡相关蛋白PLK1的表达。结果:复方三金胶囊对MCF-7细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为390.38μg·ml-1;复方三金胶囊诱导细胞凋亡作用明显,并呈现明显的量效关系;复方三金胶囊对细胞周期的影响主要表现在低浓度时为S期阻滞,高浓度时为G0/G1期阻滞;复方三金胶囊可明显抑制MCF-7细胞中PLK1蛋白的表达。结论:复方三金胶囊体外实验可明显抑制MCF-7细胞的增殖,其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,抑制PLK1蛋白表达有关。     

白藜芦醇对Hepa 1-6肝癌细胞凋亡和ROS的影响

目的:观察白藜芦醇对小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)作用。方法:MTT比色法检测白藜芦醇对Hepa 1-6细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测活化型Caspase-3;2',7'-二氯氢化荧光素乙二脂(DCF-DA)染色法结合荧光酶标仪检测细胞内ROS的产生。结果:与对照组比较,20、40、80μmol/L白藜芦醇作用24、48、72 h均可显著抑制肝癌Hepa1-6细胞增殖,呈一定的时间与剂量依赖性。不同浓度白藜芦醇作用48 h可促使Hepa 1-6细胞凋亡,呈现细胞凋亡形态改变,同时伴有活化型Caspase-3及ROS的产生。结论:白藜芦醇可以抑制Hepa 1-6细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,可能与Caspase-3活化及细胞内ROS水平升高相关。     

黄芪注射液合用TAM对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:黄芪注射液与TAM合用对雌激素受体阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡的影响。方法:实验分为空白对照组,TAM对照组和与TAM合用5个不同剂量的黄芪注射液组。MTT法检测增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡率,DAN ladder观察凋亡。结果:与TAM合用,各剂量黄芪注射液均呈现抑制MCF-7细胞增殖的效应(P0.05),随着作用时间延长,72 h其效应呈剂量依赖性。高剂量黄芪注射液作用72 h诱导MCF-7细胞凋亡。与TAM合用24 h,2×10-1g/mL剂量组阻滞细胞周期于S期(P0.05),2×10-2g/mL剂量组阻滞细胞周期于G0/G1期(P0.05)。结论:与TAM合用,黄芪可抑制雌激素受体阳性的乳腺癌细胞增殖,一定剂量范围内可诱导其凋亡,阻滞细胞的有丝分裂于S或G2/M期。     

银杏叶提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:探讨银杏叶提取物(EGB)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及半胱氨酸蛋白酶(Caspases)-3表达的影响.方法:将质量浓度为0,10,20,40,80,160 mg·L-1的EGB作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞上,培养24h或48 h,然后应用四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;酶联免疫吸附法(ELISA)检测Caspases-3蛋白表达.结果:EGB对MCF-7细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为83.65 mg· L-1.经流式细胞仪检测表明,EGB能使MCF-7细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着质量浓度的增加,MCF-7细胞凋亡率明显增加(P＜0.05或P＜0.01).EGB能增强MCF-7细胞Caspases-3蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论:EGB能有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞Caspases-3蛋白表达,诱导MCF-7细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖.     

康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞,分为对照组和康莱特不同浓度组(10、20、40μL/mL)。RPMI-1640培养基培养24 h后药物处理,采用MTT法检测康莱特注射液对MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Hochest荧光染色法检测细胞核变化,ELISA及Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果康莱特注射液作用12、24、48 h对MCF-7细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01);与对照组比较,康莱特注射液作用48 h后G1/G0、G2/M期细胞比例增加(P0.001,P0.01),S期细胞比例下降(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.05,P0.001),Bcl-2蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显升高(P0.01,P0.001)。结论康莱特注射液能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制与降低Bcl-2蛋白表达和增加Bax蛋白活性有关。     

白花丹素对乳腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的观察白花丹素对乳腺癌细胞凋亡及自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用不同浓度白花丹素作用于乳腺癌MCF-7和BT549细胞,CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测细胞内LC3B蛋白表达,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、LC3B、AMPK和p-AMPK蛋白表达。结果不同浓度白花丹素可抑制乳腺癌MCF-7和BT549细胞生长,抑制细胞克隆形成,其IC50分别为15.9μmol/L和13.51μmol/L;16、32μmol/L白花丹素处理后,MCF-7细胞MMP降低,ROS水平升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax、LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。使用AMPK抑制剂(10μmol/L Dorsomorphin)或自噬抑制剂(5 mmol/L 3-MA)与白花丹素(32μmol/L)同时处理MCF-7细胞后,LC3BⅡ、p-AMPK蛋白表达较单独使用白花丹素(32μmol...