大豆甙元对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法 :用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用动力学法测定细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果 :大豆甙元在 1× 10 3 mol/L范围内 48h和 72h ,1× 10 5mol/L 96h及 1× 10 7mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论 :大豆甙元体外能提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

红曲提取物对体外培养成骨细胞的作用研究

目的：研究红曲不同提取物对体外培养大鼠成骨细胞（ROB）增殖、分化的影响。方法：采用新生大鼠颅骨分离培养ROB,MTT法测定细胞增殖,碱性磷酸酶（ALP）试剂盒法测定ALP活性,观察红曲提取物对ROB增殖、分化的作用,同时考察了MTT法和ALP试剂盒法中细胞数和吸收值之间的线性关系。结果：10^-2和10^-3mg/ml的水提物能刺激ROB的增殖（P〈0.05）,10^-3mg/ml的水提物还能提高ROB的ALP活性（P〈0.05）;10^-2和10^-3mg/ml的95%乙醇提取物对ROB的增殖与分化均有明显的促进作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论：红曲水提物和95%乙醇提取物均能促进ROB骨形成过程中增殖、分化,95%乙醇提取物作用效果显著。     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响1

目的：研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：取SD大鼠48只，随机将大鼠分为A组（空白组）、B组（倍美力组）、C组（普拉固组）、D、E、F组（红曲高、中、低剂量组）六组，按10ml／kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液（6.25μg／ml）、普拉固水溶液（0．2mg／m1）及红曲水提液（1．25g／ml、0．625g／ml、0．125g／ml）灌胃。灌骨10天后，制备含药血清；将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中，然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果：经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量（P〈0．01或P〈0．05）、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成，作用随红曲剂量的增加而增加。结论：成功地运用血清药理学的方法，模拟了体内的药理环境；证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

茅苍术道地药材的挥发油组成特征分析

目的 :在个体和总体两个水平上研究南苍术挥发油成分所蕴涵的多样性和特征 ,进而揭示茅苍术道地性的化学本质。方法 :分单株采集 7个居群的 47株南苍术根茎 ,用GC-MS分离鉴定挥发油中的 6个主要成分 ,使用SPSS分析软件进行主成分分析和聚类分析。结果 :聚类分析显示茅苍术挥发油主要组分的含量明显不同于非道地南苍术。其他分析表明 ,与非道地南苍术挥发油相比 ,茅苍术总挥发油含量显著低 (P<0.01) ,其归一化百分含量大于 1%的组分数目显著高 (P<0.01) ,苍术酮加苍术素的含量极其显著高 ,而茅术醇加 β-桉叶醇的含量极其显著低 (P<0.001)。主成分分析表明苍术酮在体现茅苍术道地性特征时具有非常特殊的作用。结论 :茅苍术道地性在挥发油中的表现主要是苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇及苍术素呈现出的一种特定配比关系 ,即 (0.70～2.00)∶(0.04～0.35 )∶(0.09～0.40)∶1。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞增殖作用的研究

目的:探讨健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法:采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙丸提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果:在培养24h后,健骨二仙丸提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论:健骨二仙丸提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

黄瓜子不同提取部位对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的比较黄瓜子不同提取部位对大鼠体外成骨细胞增殖、骨钙素水平及碱性磷酸酶活性的影响。方法采用酶消化法分离大鼠成骨细胞,与黄瓜子不同提取溶剂(石油醚、正丁醇及乙酸乙酯)提取液和大鼠含药血清共同培养。用CCK-8法测定细胞增殖,双抗体夹心酶联免疫法和微量酶标法分别测定细胞骨钙素水平以及细胞碱性磷酸酶活性。结果黄瓜子各提取部位的含药培养液及含药血清对成骨细胞均有一定的增殖作用,其中正丁醇及乙酸乙酯提取部位对成骨细胞骨钙素的合成及碱性磷酸酶活性作用明显。结论结合资料分析,对成骨细胞有增殖作用的有效成分存在于黄瓜子正丁醇提取部位中。     

苍术药材的质量标准研究

目的:完善苍术药材的质量标准。方法:对10批茅苍术与10批北苍术药材,采用显微鉴别法、TLC法进行鉴别;并对其水分、杂质、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、重金属进行测定;采用HPLC法建立苍术药材的高效液相特征图谱及测定苍术素含量。结果:苍术药材粉末的显微鉴别与薄层鉴别特征显著。在高效液相特征图谱中,20批苍术检出4个主要共有特征峰,其相似度为0.93~0.98。苍术药材中苍术素含量测定在0.5~60 mg·L-1范围内具有良好的线性关系(R2=0.999 1,n=13),平均加样回收率茅苍术为97.84%(1.62%),北苍术为98.63%(RSD为0.81%)。结论:本研究优化后的苍术药材质控方法符合中药质量控制的整体性、综合性及可适用性的要求,可用于苍术药材质量的综合评价。     

杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的了解淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,探讨淫羊藿“补肾壮阳,益精健骨”的作用机制.方法体外培养大鼠成骨细胞,在96孔培养板和24孔培养板内分别加入0.2ml和0.4ml的4×105个/ml细胞,并在相应培养基中加入淫羊藿甙,终浓度分别为20μg/L、40μg/L、60μg/L,不加淫羊藿甙者作为对照.培养24h、48h、72h后检测细胞的增殖能力及碱性磷酸酶的活性.在6孔板内放置盖玻片,每孔内加入1×105个细胞,并加入淫羊藿甙(终浓度为20μg/L),继续培养24h、48h,用于I型胶原蛋白免疫组化研究.结果淫羊藿甙对大鼠成骨细胞的增殖无明显的刺激作用,但能促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶和I型胶原蛋白.结论淫羊藿甙可促进成骨细胞的分化,使骨形成增加,起到“健骨”的作用.     

接骨药对体外培养成骨细胞增殖影响的研究

目的：观察接骨药对人成骨细胞增殖的影响。方法：从成人骨髓来源的成骨细胞在含不同浓度接骨药的RPMI1640培养液中培养1、3、5、7天，用细胞计数法和MTT比色法观察接骨药对其增殖的影响，结果：本实验条件下不同浓度的接骨药能促进成骨细胞的增殖，且促进作用与浓度、时间呈正相关。     

骨疏灵对骨质疏松症大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观测具有温阳、益气、活血功效的纯中药制剂“骨疏灵”对细胞数目增殖的影响,并探讨骨疏灵对成骨细胞作用的机制及其量效关系。方法:选用雌性Wistar大鼠随机分为6组,治疗后采用原代细胞培养技术,通过形态学观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)细胞化学染色、细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的测定等方法对培养细胞进行观察。结果:骨粒植入10d后,即见有细胞自骨粒周围长出。氟化钠三个浓度组、骨疏灵高、低两个剂量组,均能使成骨细胞[3H]-TdR掺入值升高,与氟化钠两组和骨松宝组比较,差异均有显著性意义,且效应随浓度的递增而加强。结论:骨疏灵能明显促进成骨细胞的增殖,且其效应有浓度量效关系。     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)六组,按10 ml/kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液(6.25μg/ml)、普拉固水溶液(0.2 mg/ml)及红曲水提液(1.25g/ml、0.625 g/ml、0.125 g/ml)灌胃。灌胃10天后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P<0.01或P<0.05)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成,作用随红曲剂量的增加而增加。结论:成功地运用血清药理学的方法,模拟了体内的药理环境;证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究

目的:观察仙鹿健骨汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞矿化功能及骨形成蛋白(BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wister雌性大鼠48只,随机分为6组,每组8只,分为仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(A、B、C组),α-D3对照组(D组)、模型组(E组)及空白对照组(F组),制备含药血清备用。成骨细胞建立采用新生SD乳鼠5只(24h内颅盖骨)进行体外细胞传代培养,分别采用茜素红染色、免疫组化染色法观察体外培养成骨细胞矿化结节变化及成骨细胞BMP-2表达。结果:B、C组及D组对成骨细胞矿化结节形成的作用均优于E组,并接近于F组水平,但组间比较无明显差异,通过免疫组化染色发现各组均有BMP-2的棕黄色深染,但B、C组阳性细胞比例明显高于其他各组,与E组比较有显著差异。结论:仙鹿健骨汤含药血清能明显增加成骨细胞矿化结节形成数,促进矿化功能,并且提高成骨细胞BMP-2表达水平,这可能是该方防治骨质疏松症的机理之一。     

组培和野生茅苍术药材挥发油成分的比较

目的:对组培茅苍术和野生茅苍术的根茎中所含挥发油的化学成分进行比较,从而初步评价通过组织培养技术所得茅苍术的品质.方法:采用水蒸气提取法提取药材挥发油,利用GC-MS联用技术进行分析.结果:从组培茅苍术和野生茅苍术的根茎中分别鉴定出30个相同的化合物,其中组培茅苍术的根茎中所含的β-桉叶醇、苍术醇、苍术素的相对含量高于野生品.结论:两者的挥发油所含成分没有显著性差异.     

接骨药对体外培养成骨细胞增殖影响的研究

目的观察接骨药对人成骨细胞增殖的影响.方法从成人骨髓来源的成骨细胞在含不同浓度接骨药的RPMI1640培养液中培养1、3、5、7天,用细胞计数法和MTT比色法观察接骨药对其增殖的影响.结果本实验条件下不同浓度的接骨药能促进成骨细胞的增殖,且促进作用与浓度、时间呈正相关.     

酢浆草提取物对成骨细胞增殖及分化的影响

目的:探讨酢浆草水提物对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法:不同质量浓度酢浆草水提物(10,100,200 mg·L-1)作用人成骨肉瘤细胞株SaOS-2后,MTT法测定细胞增殖情况、磷酸对硝基苯酯(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测钙离子(Ca2+)和骨钙素(OTC)的分泌以及用茜素红染色法测定成骨细胞矿化结节数。结果:与空白组比较,酢浆草水提物能明显促进SaOS-2细胞的生长(P<0.01);ALP活性呈时间依赖性增加(P<0.05),以100 mg·L-1剂量组最为显著(P<0.01);增强了细胞分泌Ca2+(P<0.05)和OTC的能力(P<0.01);并且酢浆草中、高剂量组可以明显促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:酢浆草水提物在体外可以促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,提示酢浆草可能具有促进骨形成的能力。