青娥丸不同萃取部位对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的 探讨青娥丸不同萃取部位对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响.方法 取新生大鼠颅骨,用改良组织块法消化分离成骨细胞,MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸.酶(AKP)的活性.分离培养大鼠破骨细胞,加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性.结果 复方青娥丸RJ-1,R J-3,J-4,乙醇RJ-5四个萃取部位,OD -2,OD -3,0D -4,全方水煮OD -5四个不同提取物均能促进成骨细胞增殖;RJ-1,J-2两个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性.复方青娥丸石油醚等6个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均降低破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性.与对照组比差异有显著性.结论 复方青娥丸多种部位能促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性.从而维持骨代谢平衡.     

葛根素对大鼠成骨细胞代谢调控机制的实验研究

目的 探讨葛根素对大鼠成骨细胞代谢调控的影响.方法 取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察葛根素对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG,RANKL mRNA表达的影响.结果 葛根素能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 葛根素能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响.     

黄瓜子不同提取部位对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的比较黄瓜子不同提取部位对大鼠体外成骨细胞增殖、骨钙素水平及碱性磷酸酶活性的影响。方法采用酶消化法分离大鼠成骨细胞,与黄瓜子不同提取溶剂(石油醚、正丁醇及乙酸乙酯)提取液和大鼠含药血清共同培养。用CCK-8法测定细胞增殖,双抗体夹心酶联免疫法和微量酶标法分别测定细胞骨钙素水平以及细胞碱性磷酸酶活性。结果黄瓜子各提取部位的含药培养液及含药血清对成骨细胞均有一定的增殖作用,其中正丁醇及乙酸乙酯提取部位对成骨细胞骨钙素的合成及碱性磷酸酶活性作用明显。结论结合资料分析,对成骨细胞有增殖作用的有效成分存在于黄瓜子正丁醇提取部位中。     

葛根素对成骨细胞生物学作用的实验研究

目的:观察葛根素对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察葛根素对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的影响。结果:葛根素具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成数量的作用(P<0.01或P<0.05)。结论:葛根素具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

葛根素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨葛根素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,葛根素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:葛根素在1×10-4mol/L~1×10-8mol/L浓度范围内24h,48h促进成骨细胞增殖,在1×10-6mol/L~1×10-8mol/L范围内48h及1×10-8mol/L72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:葛根素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

续断“发汗”前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞增殖的影响

目的探讨续断"发汗"前后水煎液及含药血清对人成骨样MG-63细胞、成骨细胞增殖的影响。方法将人成骨样MG-63细胞、幼鼠成骨细胞分别与续断"发汗"前后水煎液及大鼠含药血清共同培养。MTT法检测细胞增殖,硝基苯磷酸盐法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果续断水煎液和含药血清均能显著促进MG-63细胞和成骨细胞增殖(P0.01),并能显著提高成骨细胞的ALP活性(P0.01),且相同剂量未"发汗"组作用普遍优于或非劣于"发汗"组。结论结合前期成分研究,推断续断"发汗"前后成分的改变影响了其促进细胞增殖和分化的作用,为其进一步研究奠定基础。     

补肾活血方对成骨细胞增殖等生物学特性影响的实验研究

目的:观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察补肾活血方对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化结节形成的影响.结果:补肾活血方具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的数量的作用(P＜0.01或P＜0.05).结论:补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化作用.     

补肾强督治偻方可改善地塞米松对大鼠成骨细胞的骨破坏作用

目的:研究补肾强督治偻汤方对体外培养大鼠成骨细胞的作用。方法:以地塞米松为诱导剂,使用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色法观察补肾强督治偻汤复方影响体外培养大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶表达及矿化结节形成的作用。结果:与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组(10~(-8)g/ml、2×10~(-8)g/ml、4×10~(-8)g/ml、8×10~(-8)g/ml)能促进大鼠成骨细胞的增殖表达,24h~48h时明显。与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组可以提高大鼠成骨细胞的碱性磷酸酶活性,第7天时,地塞米松+补肾强督治偻汤组(4×10~(-8)g/ml)有显著差异;第14天时,地塞米松+补肾强督治偻汤组(4×10~(-8)g/ml)有统计学意义。与地塞米松组相比,地塞米松+补肾强督治偻汤组(10~(-8)g/ml、2×10~(-8)g/ml、4×10~(-8)g/ml、8×10~(-8)g/ml)及补肾强督治偻汤组(10~(-8)g/ml、2×10~(-8)g/ml、4×10~(-8)g/ml、8×10~(-8)g/ml)均可以显著提高大鼠成骨细胞矿化结节形成的数量。结论:补肾强督治偻汤方有助于刺激体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化成熟,可有效保护地塞米松对大鼠成骨细胞的骨破坏。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:成骨细胞在10%的血清中培养7天时,用分光光度计测定ALP活性,发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性,骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128.1%和129.1%.结论:中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性.     

淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究

目的：探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG mRNA,RANKL mRNA表达的影响。结果:淫羊藿总黄酮能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:淫羊藿总黄酮能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响。     

湖北海棠总黄酮对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的：探讨湖北海棠总黄酮及其主要成分根皮苷对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响。方法：取新生大鼠颅骨,用改良组织块消化法分离成骨细胞。MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶（AKP）的活性。分离培养大鼠破骨细胞。加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）活性,检查骨吸收陷窝变化。结果：湖北海棠总黄酮能明显促进成骨细胞增殖;提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性。湖北海棠主要成分根皮苷能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性;降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性,减少骨吸收陷窝数目,与对照组比较差异有统计学意义。结论：湖北海棠总黄酮能促进成骨细胞的增殖和分化,其主要成分根皮苷能促进成骨细胞的分化,抑制破骨细胞的活性和嗜骨活性。     

蛋白免疫印迹杂交法研究葛根素对于促进成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响

目的:通过蛋白免疫印迹杂交法(Western blot法)、MTT法探讨葛根素通过OPG/RANKL蛋白对于促进成骨细胞增殖、分化机制的研究.方法:通过原代细胞培养:取新生24h的SD大鼠头盖骨,使用0.1％Ⅱ型胶原酶消化法分离出成骨细胞,使用碱性磷酸酶法鉴定成骨细胞,用MTT法确定葛根素对于促进成骨细胞增殖的最佳浓度和时间,取第四代的成骨细胞进行实验,实验分成4个组:其中对照组为10％ DMEM(low glucose),其它3组浓度分别为1 mg/mL,0.1 mg/mL和0.01 mg/mL的葛根素处理组.24h后,通过Western blot方法检测OPG/RANKL蛋白的表达.结果:通过碱性磷酸酶法、MTT法,可以鉴定不同浓度葛根素处理的成骨细胞中碱性磷酸酶活性均有增高.不同浓度的葛根素处理液均可以提高OPG/RANKL蛋白的表达,其中OPG、RANKL分别与对照组比较,具有统计学差异(P＜0.05).结论:葛根素可以通过OPG/RANKL系统促进成骨细胞的增殖和分化.     

阿胶强骨口服液含药血清对大鼠成骨细胞的影响

目的:探讨喂饲阿胶强骨口服液大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法:在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的阿胶强骨口服液血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果:阿胶强骨口服液血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论:阿胶强骨口服液血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法:不同浓度的人参皂苷Rb1作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测药物对成骨细胞增殖功能的影响,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA,分析药物对破骨细胞分化的影响。结果:人参皂苷Rb1(1.12×10-9-1.12×10-5mol/L)作用于体外培养的大鼠成骨细胞3d时,1.12×10-8-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);1.12×10-7-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-9-1.12×10-8mol/L人参皂苷Rb1可显著上调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-7-1.12×10-5mol/L人参皂苷Rb1可显著下调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,促进破骨细胞的分化(P0.01)。结论:人参皂苷Rb1对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

金雀异黄酮对体外培养成骨细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究金雀异黄酮(genistein,Ge)对缺氧培养条件下成骨细胞增殖、细胞周期、凋亡和成骨分化等的影响。方法:采用酶消化法分离培养SD大鼠颅骨成骨细胞并用三气培养箱建立缺氧模型。将细胞分为常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组进一步分为Ge-6组、Ge-5组及Ge-4组,分别加入1×10-6,1×10-5,1×10-4mol.L-1金雀异黄酮。于缺氧处理36 h后分析各组的细胞存活率、乳酸脱氢酶漏出率、细胞凋亡率、细胞周期等,并用Real time RT-PCR法检测HIF-1α,Bcl-2及Caspase-3的基因表达情况。缺氧处理48 h后检测碱性磷酸酶活性、钙化结节数量和面积等成骨分化指标。结果:与缺氧对照组比较,金雀异黄酮可显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶漏出率,减少细胞凋亡并提高G1期细胞百分比,提高HIF-1α和Bcl-2 mRNA的表达水平,抑制Caspase-3 mRNA的表达水平,对碱性磷酸酶活性和钙化结节数量与面积等也有显著提高作用,并都呈现出剂量依赖性特点。结论:金雀异黄酮对成骨细胞缺氧损伤具有明显保护作用。     

补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的补骨脂提取物,检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量,并用MTT法检测细胞增殖。结果补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及其增殖,最佳浓度为2.0×10-3mg/mL。结论补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均可促进成骨细胞分化、增殖。     

大豆甙元对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法 :用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用动力学法测定细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果 :大豆甙元在 1× 10 3 mol/L范围内 48h和 72h ,1× 10 5mol/L 96h及 1× 10 7mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论 :大豆甙元体外能提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞增殖与分化功能的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法:采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%三种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖与分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析;细胞分化并于培养第4、8、12、16天检测碱性磷酸酶活性(组织化学法)、Ⅰ-型胶原(Co-l)的表达(免疫组化法)和矿化结节(组织化学法)。结果:2.5%和5%SRAT表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、矿化结节数和Ⅰ-型胶原表达。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

续断“发汗”前后HPLC指纹图谱与细胞增殖分化药效的谱效关系研究

目的研究续断"发汗"前后水煎液HPLC指纹图谱与促进大鼠成骨细胞、人成骨样MG-63细胞增殖药效的谱效关系,寻找续断发汗前后发挥药效的物质基础,为明确"发汗"对药效的影响提供依据。方法采用DAD检测器建立续断"发汗"前后水煎液的HPLC指纹图谱,采用灰色关联度分析法建立其谱效关系。结果 14和4号峰代表的化学成分与成骨细胞的增殖分化及MG-63细胞的增殖都具有较高的关联度,关联度均在0.7以上。与成骨细胞增殖、MG-63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性3个药效指标关联度排序比较靠前的特征峰有14、4、6、16、13、11、5号峰。结合前期研究推断,这些峰可能为川续断皂苷VI、绿原酸、马钱苷、川续断皂苷IV同分异构体、川续断皂苷X、异绿原酸C、咖啡酸。结论川续断皂苷VI、绿原酸、马钱苷、川续断皂苷IV同分异构体、川续断皂苷X、异绿原酸C、咖啡酸可能是续断"发汗"前后影响细胞增殖分化作用的主要物质基础,进而影响其药效。     

活血化瘀汤影响成骨细胞功能的实验研究

目的:观察活血化瘀汤对大鼠体外培养成骨细胞的影响.方法:在新生SD大鼠颅骨的次代成骨细胞培养液中加入一定浓度(100～5000ug/ml)的活血化瘀汤提取液,分别用噻唑盐比色试验法观察其增殖功能、氨基安替比林法观察其分化功能和茜素红染色法观察其矿化功能.结果:活血化瘀汤提取液在一定浓度内能够剂量依赖性地刺激成骨细胞数量的增加以及提高碱性磷酸酶活性而对成骨细胞的矿化功能影响不显著.结论:活血化瘀汤能促进成骨细胞早期增殖及分化从而促进骨折愈合.提示活血化瘀法在临床治疗骨折的重要性.