光照对黄芩悬浮细胞内源激素与有效成分相关性的影响

目的 :研究光照对黄芩悬浮细胞内源激素与有效成分相关性的影响。方法:采用HPLC法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷含量,酶联免疫吸附法检测内源激素。 结果: 研究结果表明在光照条件下,伴随着IAA含量的降低,黄芩苷含量也随之降低,两者变化曲线显著相关(r=0.972)。相对较高的IAA含量和相对较低的GAs含量有利于黄芩苷的积累,而绝对的GAs含量在本研究中并没有表现出与黄芩苷有很强的相关性。 结论 :黄芩悬浮细胞有效成分与内源激素绝对含量以及相对含量具有相关性。     

光照对黄芩黄酮类活性成分积累及其相关基因表达的影响

目的:研究光照对黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的积累及相关基因表达的影响。方法:采用HPLC法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,应用半定量RT-PCR的方法对相关基因的表达进行分析。结果:光照对黄芩悬浮细胞中有效成分的积累有显著的促进作用,与黑暗条件相比,细胞生长13 d后黄芩苷含量显著增长了806.1%,黄芩素含量显著增长了42.5%,PAL基因在光照条件下的转录水平高于在黑暗条件,光照条件下UBGAT同黄芩素显著相关(r=-0.995)。结论:光诱导对黄芩悬浮细胞中有效成分的积累有显著的促进作用,光诱导刺激了与有效成分的积累相关基因(PAL,UBGAT)的表达。     

不同浓度的外源激素对黄芩愈伤组织的生物量和黄芩苷含量的影响

目的:探索有利于黄芩愈伤组织的诱导和次生代谢物积累的激素组合.方法:在培养基中添加不同浓度的外源激素,测定愈伤组织的生物量及采用高效液相色谱法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷的含量,流动相为甲醇-水-磷酸(47∶ 53∶0.2),流速1 mL·min-1,检测波长280 nm,室温.结果:采用6-BA 1.5 mg· L-1 +NAA0.5 mg· L-1诱导培养的黄芩愈伤组织中黄芩苷含量较高,达到49.78 mg·g-1,生物量为29.34 g/瓶.结论:通过筛选适宜的外源激素组合可以促进黄芩愈伤组织生物量的提高和次生代谢物黄芩苷的积累.     

柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究

目的探讨柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的适宜培养条件。方法以无菌苗为外植体诱导获得愈伤组织后,对不同种类和不同质量浓度的生长素进行实验,并对光和温度对柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的影响进行了研究。结果柴胡的愈伤组织适宜于在MS NAA4mg/L KT0.2mg/L培养基或MS NAA2mg/L KT0.2mg/L培养基上继代培养。诱导其不定根时宜采用的培养基为MS IBA2mg/L KT0.2mg/L。25℃条件下,黑暗培养既有利于柴胡愈伤组织的生长又有利于其不定根的诱导。结论比较适宜于柴胡愈伤组织生长的生长素为NAA,而有利于不定根诱导的生长素为IBA。温度对愈伤组织的生长影响非常明显,光照是其发根的限制因素。     

外源激素对圆叶牵牛毛状根生长及次生代谢产物积累的影响

目的:探讨不同外源激素对圆叶牵牛毛状根生长及次生代谢产物咖啡酸、咖啡酸乙酯含量的影响。方法:利用增殖倍数法及高效液相色谱法测定毛状根的生长及其咖啡酸、咖啡酸乙酯的含量,从而明确各外源激素对圆叶牵牛毛状根的影响。结果:2,4-D和6-BA不适合圆叶牵牛毛状根的培养。NAA、KT对毛状根有一定的促进作用,NAA最适宜的浓度为0.5mg·L-1,KT最适宜的浓度为1.0mg·L-1～1.5mg·L-1。结论:为圆叶牵牛毛状根大规模培养和调控次生代谢产物机理的研究奠定了基础。     

竹节参离体培养及植株再生

目的:探索竹节参离体培养与植株再生技术及优化培养条件。方法:以竹节参的胚、茎、叶作为外植体,应用正交的方法,筛选出竹节参最佳的愈伤组织诱导和分化培养基。结果:竹节参不同外植体的最优消毒方法分别为,种子消毒采用75%酒精浸泡60 s,0.1%氯化汞浸泡12 min;茎和叶片采用75%酒精浸泡15 s,5%次氯酸钠浸泡5 min。光照条件下愈伤组织诱导的最佳培养基配方是,胚用MS+1.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT;茎用MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT;黑暗条件下,胚为MS+1.0 mg/L NAA+1.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT,茎为MS+1.5 mg/L NAA+1.5mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT,叶为MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT。丛芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3。生根诱导最佳培养基为MS+...     

水分胁迫对黄芩内源激素与有效成分相关性的影响

目的:研究水分胁迫条件对黄芩内源激素与有效成分积累相关性的影响。方法:利用ELISA法测定黄芩根中内源激素(indole-3-acetic acid,IAA;abscisic acid,ABA;gibberellin,GAs;zeatin riboside,ZR)的含量;利用HPLC法测定黄芩苷、黄芩素含量。结果:水分胁迫处理70d,黄芩素含量显著高于对照,ZR与黄芩素含量呈正相关。水分胁迫条件下,GAs/IAA,GAs/ABA和GAs/ZR比值均呈上升趋势,与黄芩素含量变化显著相关。结论:GAs在水分胁迫影响了黄芩有效成份积累的过程中可能发挥了重要的作用。     

三角叶黄连愈伤组织诱导和培养条件的优化

目的:对三角叶黄连愈伤组织的培养条件进行优化,建立三角叶黄连组织培养的技术体系.方法:采用响应面方法( RSM)中的Box-Behnken设计方法优化三角叶黄连愈伤组织增殖的最佳激素配比;考察不同培养基、外植体、温度、光照条件对三角叶黄连愈伤组织诱导的影响.结果:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率最高,为12.67％,最佳培养条件为(15±2)℃,暗培养.2,4-D,KT是影响三角叶黄连愈伤组织形成的主要因素,其次为NAA.结论:三角叶黄连愈伤组织诱导的最适培养基为6,7-V +2,4-D0.5 mg·L-1+KT 2.0 mg·L-1,增殖的最适培养基为6,7-V +2,4-D 4.6 mg·L-1+KT3.8 mg·L-1+NAA2.4 mg·L-1.     

海巴戟天悬浮细胞合成蒽醌类物质的研究

目的研究外源激素、水杨酸、茉莉酸甲酯对海巴戟天悬浮细胞生长及蒽醌类化合物合成的影响。方法建立海巴戟天细胞悬浮培养体系,并向海巴戟天细胞悬浮培养物中添加外源激素、水杨酸和茉莉酸甲酯,测定细胞比生长速率和蒽醌产量。结果外源激素萘乙酸(NAA)、激动素(KT)对海巴戟天悬浮细胞的生长和蒽醌类化合物的合成有显著影响,采用B5培养基时,较佳激素组合为NAA 2 mg/L+KT 0.1 mg/L。在对数生长初期(培养9 d)时,添加200μmol/L水杨酸和50μmol/L茉莉酸甲酯,蒽醌质量浓度分别为588.34 mg/L和595.49 mg/L,比对照分别提高了17.05%和18.47%。结论适宜激素配比结合一定质量浓度的水杨酸和茉莉酸甲酯外源诱导对蒽醌类化合物的合成有促进作用。     

白色紫锥菊不定根诱导及咖啡酸衍生物积累研究

以白色紫锥菊试管苗子叶为外植体,研究了植物生长素2,4-D,IAA,IBA,NAA对不定根诱导以及IBA浓度对液体悬浮培养中不定根的生长及咖啡酸衍生物积累的影响,并进行了生物反应器培养.结果表明,对白色紫锥不定根诱导最适合植物生长素是IBA1.0mg· L-1,不定根诱导数目达到22.5根/培养皿.液体悬浮培养中IBA 1.0 mg·L-1最适合不定根生长及咖啡酸衍生物的积累.白色紫锥菊不定根在5L气升式生物反应器中培养30 d后可获得8.98 g· L-1干重,是三角瓶悬浮培养干重4.38 g·L-1的2.05倍;生物反应器培养的不定根中紫锥菊苷质量分数为14.08 mg·g-1(干重),是栽培根的2.4倍;氯原酸,菊苣酸,总咖啡酸衍生物含量是栽培根的4.0 ～25.6倍.该研究为大量生产紫锥菊药品可提供富含紫锥菊苷等咖啡酸衍生物的高品质生物医学药材.     

黄花蒿发根的生长及部分代谢成分的特征研究

目的:研究黄花蒿发根的生长形态和部分次生代谢物特征。方法:比较发根和未转化根的形态差异,测定生长调节剂如萘乙酸(NAA)和赤霉素(GA3)对根生长的影响,分析了发根和未转化根的部分次生代谢物的含量特征。结果:低浓度NAA(0.01～0.05 mg.L-1)能明显促进发根侧根和次侧根的形成,对未转化根则无显著作用,高浓度NAA(0.1 mg.L-1)抑制发根的生长,而对未转化根的生长起促进作用。未转化根中不含有青蒿素,而在发根中检测到较高含量的青蒿素(0.64 mg.g-1),未转化根中青蒿乙素含量较高(1.24 mg.g-1)。在未转化根和发根中,青蒿黄酮chrysoplenetin含量相当,而发根中另一种黄酮化合物artemitin含量(0.76 mg.g-1)是未转化根的3.5倍。结论:黄花蒿发根具有较独特的生长和次生代谢特征。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

安徽药菊花瓣组织培养技术的研究

目的 :研究安徽药菊花瓣组织培养技术 ,为安徽药菊新品种选育建立最佳条件。方法 :取安徽药菊(滁菊、亳菊、贡菊 )幼蕾花瓣及开放花瓣为外植体 ,按不同方式接种到同种培养基上和按同种方式接种到不同培养基上进行培养 ,诱导其成为完整植株。结果与结论 :所有培养基均能诱导愈伤组织产生 ,但愈伤组织形成和再分化结果有明显差别。愈伤组织诱导花瓣正接优于反接 ,愈伤组织诱导培养基以MS +KT 2mg·L^-1+NAA 0 .2mg·L^-1为宜 ;愈伤分化均以培养基MS +KT 2mg·L^-1+NAA 0 .2mg·L^-1+AgNO3 5mg·L^-1为宜幼蕾花瓣诱导植株再生频率高于开放花瓣 ;所得植株在叶形、及株形等方面发生了变异。     

北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立

以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化。分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基。结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3%~60%,大部分低于20%。在MS+KT 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1培养基上分化率最高,为60%,其次为MS+ ZT 1.0 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1,为58%。另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选。结果显示再生芽在生根培养基MS+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1和1/2 MS+ NAA 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1中均可生根,生根率均为100%。由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系。     

化学修饰型复合汞膜电极测定双黄连口服液中黄芩苷的含量

目的:利用铕离子掺杂普鲁士蓝(europium-doped prussian blue analogue,Eu-PB)化学修饰型复合汞膜电极(GC/Eu-PB/MFE)建立了黄芩苷的测定方法,并探讨了其电化学行为。方法:在BR(pH6.0)支持电解质中,采用差示脉冲伏安法(DPV)和循环伏安法(CV)。结果:GC/Eu-PB/MFE电极与传统玻碳汞膜电极(GC/MFE)相比,同浓度的黄芩苷在GC/Eu-PB/MFE上响应灵敏度高,重复性好。黄芩苷在该电极上表现较强的吸附行为,其还原峰电位为-1.22 V(vs SCE)。还原峰电流与黄芩苷浓度在8.0×10-9～1.0×10-6mol.L-1呈线性关系(r=0.999 2),检测下限为1.2×10?9mol.L-1(S/N=3)。不经预分离直接测定双黄连口服液中黄芩苷的含量,平均回收率为99.83%,平均RSD 2.3%(n=8)。结论:GC/Eu-PB/MFE用于双黄连口服液中黄芩苷含量的测定,检测限低、灵敏、可靠,可用于该制剂的质量控制。     

TDZ和NAA对老鸦瓣不定芽诱导和丛生芽增殖的影响

以老鸦瓣鳞茎芯芽和子茎（芽茎顶端膨大形成的子鳞茎）为外植体,探索噻苯隆（TDZ）和α-萘乙酸（NAA）诱导老鸦瓣外植体直接成芽的方法,建立老鸦瓣器官途径丛生芽组培体系。研究结果表明,芯芽和子茎在MS+ TDZ 2.0 mg·L^-1+NAA 2.0 mg·L^-1和MS+TDZ 2.0 mg·L^-1+NAA 4.0 mg·L^-1培养基中可直接诱导不定芽,芽诱导率分别为72.92%,79.22%;利用子茎不定芽在MS+TDZ 0.2 mg·L^-1+ NAA 0.2 mg·L^-1培养基中可进行丛生芽增殖,增殖系数2.23,形成的芽体健壮,叶色嫩绿;增殖后的丛生芽在含有IBA 1.0 mg·L^-1的MS培养基中即可生根,生根率52.6%,平均3~5条根。利用老鸦瓣芯芽和子茎,筛选出了老鸦瓣芯芽和子茎直接诱导不定芽及丛生芽增殖和生根的最适培养基,建立了器官途径丛生芽组培体系。     

抱茎苦荬菜的组织培养及植株再生

目的:探讨苦荬菜组织培养和植株再生条件。方法:以苦荬菜叶片为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行优化筛选。结果:最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.5 mg.L^-1+6-BA1.5 mg.L^-1+NAA1.0 mg.L^-1+IBA1.5 mg.L^-1+KT1.5 mg.L^-1,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2,4-D 0.2 mg.L^-1+6-BA0.5 mg.L^-1+NAA 0.5 mg.L^-1+IBA 0.5 mg.L^-1+KT0.5 mg.L^-1,不定芽经附加IBA0.1 mg.L-1的1/4 MS培养基生根后移栽成活,获得再生植株。结论:建立了一套有效的苦荬菜组织培养再生体系。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。