RNAi研究TrxR1在肝癌细胞增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的观察不同中医治法对大鼠肝癌TrxR1表达的调控差异,以及TrxR1在人肝癌细胞增殖中的作用。方法将84只雄性Wistar大鼠随机分为正常组和模型组以及实验组,除正常组外均采用DEN诱发大鼠肝癌,实验组分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)TrxR1表达的差异;设计2个人TrxR1基因siRNA靶点,将重组质粒通过脂质体转染入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测转染前后细胞生长增殖情况、Real-time-PCR检测该基因的表达差异。结果芯片结果显示,TrxR1基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,益气健脾治法明显下调其表达;采用MTT法筛选到一个TrxR1基因RNA干扰有效靶序列,脂质体转染144 h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达量明显降低。结论肝癌细胞恶性增殖有赖于TrxR1基因的高表达,益气健脾方药能显著下调该基因表达。     

RNAi研究CK18在肝癌增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌CK18表达的调控差异,以及CK18在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:(1)采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,检测肝癌组织CK18表达的差异;(2)设计2个人CK18基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:(1)芯片结果显示,CK18基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的轻度调控作用,其中健脾益气治法下调作用较明显;(2)采用MTT法筛选到一个CK18基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;(3)实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达已明显降低。结论:肝癌细胞恶性增殖有赖于CK18基因的高表达,目前常用治法对该基因的调控作用有限,因而该基因可望作为肝癌疗效筛选评价指标。     

RNAi检测IFRD1在肝癌增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的：观察不同中医治法对大鼠肝癌干扰素相关发育调节因子1（IFRD1）表达的调控差异,以及IFRD1 在人肝癌细胞增殖中的作用。方法：（1）采用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affymetrix rat 230A GeneChip arrays 检测肝癌组织IFRD1 表达的差异;（2）设计3 个人IFRD1 基因siRNA 靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721 人肝癌细胞株,MTT 法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR 检测该基因的表达差异。结果：（1）芯片结果显示,IFRD1 基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中活血化瘀治法下调作用较明显,对照西药化疗反而具有上调作用;（2）采用MTT 法筛选到1 个IFRD1基因RNA 干扰有效靶序列,转染144h 后细胞的生长增殖得到了明显的抑制（与阴性对照组相比,P<0.01）;（3）实时荧光定量PCR 检测表明,转染72h 后该基因的表达明显降低。结论：SMMC-7721 肝癌细胞恶性增殖有赖于IFRD1 基因的高表达,而中药活血化瘀治法对其具有下调作用。     

3种不同中医治法对大鼠肝脏癌细胞半乳糖凝集素表达的影响

目的 观察3种不同中医治法对大鼠肝癌半乳糖凝集素(GAL-3)表达的调控差异以及GAL-3在人肝癌细胞增殖中的作用,以探讨肝癌治疗的新靶点.方法 将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组(喃氟啶8.33 mg/100g)、清热解毒组(清热解毒方1.5 g/100g)、活血化瘀组(活血化瘀方1.27g/100g)、健脾理气组(健脾理气方1.75g/100g),每组12只,除正常组外,其余各组大鼠采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,各组均给药6周,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)GAL-3的表达.根据人GAL-3基因编码区设计2个siRNA靶点,并构建重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,分为空白组、阴性组、GAL-3 RNAi组,实时定量PCR检测各组GAL-3 mRNA的表达,MTT法检测各组转染后24 h、72h、144h细胞增殖.结果 模型组GAL-3基因表达显著增加,健脾理气组能下调其表达;转染72h后GAL-3 RNAi组GAL-3 mRNA表达量明显降低;转染144h后,GAL-3 RNAi组肝癌细胞的生长增殖得到了明显的抑制(P＜0.01).结论 GAL-3基因在肝癌组织中高表达,健脾理气方能显著下调该基因表达.     

健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞生物学功能的影响

目的:探讨健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、迁移及黏附的影响。方法:体外分离培养大鼠骨髓源内皮祖细胞,设空白对照组、健脾补肾活血方低剂量组(0.35 g/ml)、健脾补肾活血方中剂量组(0.65 g/ml)、健脾补肾活血方高剂量组(1.0 g/ml)。药物干预24 h后,MTT法检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力。结果:与空白对照组比较,不同浓度的健脾补肾活血方以剂量依赖方式显著提高大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖水平,促进细胞迁移,增强细胞的黏附能力,且健脾补肾活血方高剂量组对细胞增殖、迁移及黏附的影响最大。结论:健脾补肾活血方能促进大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移及黏附功能,具有恢复细胞生物学功能的作用。     

中医不同治法对成纤维细胞生长因子在大鼠肝癌中表达的影响

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)在二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌组织中的表达及不同中医治法的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,随机分为正常组、模型组、喃氟啶组、抑癌扶正行气活血法组、清热解毒法组、行气活血法组、健脾扶正法组,应用Affymetrix Rat230A GeneChip及相关技术检测各组肝脏(含肝癌)FGF基因表达的差异。结果:Rat230A芯片中有24个FGFs、3个FGFRs、1个FGFBP,其中肝癌表达增加者15个,减少者13个。FGF13芯片读数(肝癌形成/正常肝脏)为10.8,FGF7芯片读数(正常肝脏/肝癌形成)为13.1。近10年有关FGFs文献857篇,涉及肝癌者仅49篇,仅3个基因(FGF1、FGF2及FGFR3)涉及。结论:FGFs基因在大鼠肝癌中的表达有一定意义,不同治疗方法对其表达水平存在差异。     

HCV核心蛋白对肝癌细胞系SMMC-7721增殖作用的研究

目的探讨HCV核心蛋白对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖作用。方法将空载质粒(对照组)和HCV核心蛋白重组质粒(实验组)分别转染肝癌细胞系SMMC-7721,提取转染后细胞RNA、蛋白质,比较2组细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白表达水平,收集转染细胞上清液,ELLSA检测2组细胞上清液HCV核心蛋白表达差异,采用MTT检测2组细胞增殖率,并采用transwell检测2组细胞侵袭和迁移情况。结果实验组细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白表达水平均明显高于对照组(P均0.05),同时实验组细胞上清液HCV核心蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05);实验组细胞增殖率明显高于对照组(P0.05);实验组细胞侵袭细、迁移细胞数均明显高于对照组(P均0.05)。结论 HCV核心蛋白能够显著提高肝癌细胞系SMMC-7721增殖、侵袭及迁移。     

健脾疏肝活血方对H22肝癌小鼠ICAM-1基因表达的影响

目的:探讨健脾疏肝活血方对H22肝癌小鼠细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因表达的影响。方法:采用细胞接种的方法建立小鼠H22肝癌动物模型,将小鼠分为正常组,模型组,环磷酰胺组,健脾疏肝活血方低、中、高剂量6组,采用RT-PCR方法检测健脾疏肝活血方对肝癌组织ICAM-1基因表达的影响。结果:健脾疏肝活血方高、中剂量组的血清sICAM-1皆降低;与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);健脾疏肝活血方中剂量组下调ICAM-1的基因表达;与模型组比较,具有统计学意义(P<0.01)。结论:健脾疏肝活血方下调ICAM-1的基因表达是治疗肝癌的分子机制之一。     

健脾益气方含药血清下调Vimentin蛋白水平对人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的研究健脾益气方下调Vimentin蛋白水平对肝癌细胞的影响,探讨健脾益气方防治肝癌的机制。方法利用TGF-β1诱导的人肝癌细胞SMMC-7721 EMT模型,采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%、15%、30%浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin、Caspase-3、PARP-1与Caspase-1蛋白表达的影响。结果与空白血清组比较,健脾中、高剂量组健脾益气方含药血清均可以降低肝癌细胞Vimentin和PARP-1蛋白表达量(P0.01),其下调程度与二者的裂解程度,及肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;并升高肝癌细胞Caspase-3、降低Caspase-1蛋白的表达(P0.01)。Vim裂解组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和早期凋亡率在各实验组中均为最高值,其肝癌细胞中各蛋白表达趋势与健脾组一致,但下调或上调程度更明显。Casp抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率在各实验组均为最低值,早期凋亡率在各实验组中也仅高于EMT模型组,两组间差异无统计学意义(P0.05);细胞中Caspase-3蛋白表达下调(P0.01),PARP-1表达上调(P0.01),Vimentin表达差异无统计学意义(P0.05),Vimentin和PARP-1无蛋白裂解片段出现。健脾各剂量组中以中剂量组效果最佳。结论 15%浓度的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的干预效果最佳。健脾益气方可能通过下调人肝癌细胞SMMC-7721中Vimentin蛋白的表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭、并诱导部分肝癌细胞凋亡;导致Vimentin蛋白下调的原因可能在于Caspase-3对它的裂解。此过程中,健脾益气方一方面利用Caspase-3/Vimentin裂解片段形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡,另一方面可能利用Vimentin水平的下调导致NLRP3/Caspase-1炎症信号通路减弱,干预肝癌炎症微环境。     

健脾益肾方对非小细胞肺癌细胞体外增殖凋亡作用的实验研究

目的:探讨健脾益肾方对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞体外增殖凋亡的作用。方法:人NSCLC细胞系A549分为四组:空白对照组(仅加入细胞培养液)、阴性对照组(加入细胞,不进行中药处理)、实验组(加细胞加中药处理)。荧光定量PCR和Western blot分别检测Survivin、Bcl-2和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,阴性对照组细胞在24、48、72 h的吸光度值明显升高,细胞凋亡率下降,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量上调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而健脾益肾方处理的实验组24、48、72 h的吸光度值均显著降低,细胞凋亡率显著上升,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量下调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾益肾方可通过下调Survivin和Bcl-2、上调Caspase-3表达诱导NSCLC细胞凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖,进而抑制NSCLC的发展。     

滋阴益气活血通络法对糖尿病大鼠胰岛功能保护的实验研究

目的:观察滋阴益气活血通络法对糖尿病大鼠血浆胰岛素(FINS)、C肽及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响,探讨其保护胰岛功能的作用机制。方法:将50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、达美康组、中药高剂量组、中药低剂量组5组,链脲佐菌素(STZ)60mg/kg一次性腹腔注射,复制糖尿病大鼠模型。以实验大鼠血浆胰岛素(FINS)、C肽及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)为观察内容,采用达美康做对比观察。结果:滋阴益气活血通络法可以降低血糖(BG)和糖化血清蛋白(GSP),升高血浆胰岛素和C肽水平,与对照组结果相比无统计学意义(P>0.05),对大鼠SOD和MDA的影响则明显优于对照组(P<0.05),大、小剂量组中药对SOD和MDA的影响以大剂量组的疗效占优(P<0.01)。结论:滋阴益气活血通络法可能通过抗氧化而起到保护糖尿病大鼠胰岛B细胞功能的作用。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用

目的:研究与分析抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用.方法:首先培养人肝癌细胞SMMC-7721,然后使用噻唑蓝比色法(MTT比色法)检测抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖能力,使用流式细胞仪检测人肝癌细胞SMMC-7721抑制能力和Bcl-2基因表达水平.结果:通过检测发现...     

mRNA差异显示法比较独角莲作用肝癌细胞SMMC-7721前后的基因表达

目的 :研究独角莲根茎水提取物 (AEoTGE)作用肝癌细胞SMMC-7721后引起的细胞基因表达变化。方法 :利用mRNA差异显示技术 ,以人肝癌细胞系SMMC-7721细胞为研究对象 ,筛选AEoTGE作用后表达改变的基因片段。结果 :经测序和鉴定 ,发现 1个基因在加入AEoTGE后表达上升 ,1个基因表达下降。结论 :mRNA差异显示可以用于中草药对细胞的作用机制研究。     

苦参素与顺铂联合应用诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制

目的:探讨苦参素和顺铂联合应用诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,RT-PCR方法检测fas和caspase-3基因mRNA表达水平。结果:与单药组相比,联合用药对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),并表现明显的协同作用,细胞fas和caspase-3基因mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。结论:苦参碱与顺铂联合应用能明显诱导肝癌SMMC-772 l细胞凋亡并有协同作用,其机制可能与上调细胞fas和caspase-3基因表达有关。     

海绵提取物S1～S3抑制肝癌细胞和肺腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的:用体外培养法研究海绵提取物S1～S3对肝癌7402细胞、肺腺癌GLC-82细胞和胃癌MCG-803细胞增殖的抑制作用.方法:采用MTT法进行研究.结果:海绵提取物S1、S2和S3分别处理肿瘤细胞48 h后,S3呈剂量依赖性抑制肺腺癌GLC-82和肝癌7402细胞增殖,测得IC50分别为2.714 μg/ml和2.598 μg/ml,而对胃癌MCG-803细胞增殖无明显抑制作用;S1和S2对3种肿瘤细胞增殖均无抑制作用.结论:海绵提取物S3对肝癌7402细胞和肺腺癌GLC-82细胞的增殖有抑制作用.     

海藻提取物A1和A2抑制肝癌和肺腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的:用体外培养法研究海藻提取物A1和A2对肝癌740 2细胞、肺腺癌GLC -82细胞和胃癌MCG -80 3细胞生长的抑制作用。方法:采用MTT法进行研究。结果:海藻提取物A1和A2分别处理肿瘤细胞48h后,A1呈剂量依赖性抑制肺腺癌GLC -82和肝癌740 2细胞增殖,测得IC50 分别为2 2 61μg/mL和3 0 0 5 μg/mL ,而对胃癌MCG -80 3细胞增殖无明显抑制作用;A2对3种肿瘤细胞增殖无明显抑制作用。结论:海藻提取物A1对肝癌740 2细胞和肺腺癌GLC -82细胞的增殖有抑制作用。     

复方青龙衣胶囊对胃癌细胞SGC-7901基因芯片表达的影响

目的:研究复方青龙衣胶囊体外对人胃癌细胞SGC-7901基因表达谱的影响,初步探讨其对胃癌细胞抑制作用的机制。方法:设定5个不同药物浓度梯度(0.8×10-3,1×10-3,1.2×10-3,1.4×10-3,1.6×10-3 g·L-1)预处理24 h,采用MTT法测定对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用;以药物半数抑制浓度预处理24 h,全基因芯片技术研究对胃癌基因表达谱的影响,并采用基因集合聚类分析法分析结果。结果:以不同浓度的复方青龙衣处理胃癌细胞SGC-7901 24 h,结果显示该药对肿瘤细胞的生长呈现剂量依赖性的抑制作用,半数抑制浓度为1.27×10-3g·L-1;芯片结果显示:胃癌肿瘤细胞SGC-7901经药物处理后总共筛选出78个差异表达基因,表达上调的基因有23个,表达下调的基因有55个。结论:复方青龙衣胶囊对人胃癌细胞SGC-7901具有显著的抑制作用,并可能通过影响细胞周期基因的表达,使肿瘤细胞停滞于G1/S期发挥抗肿瘤作用。